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游离dna检测在结核性胸膜炎中的诊断价值

中国热带医学 2024年第2期24卷 162-165,195页

作者：程亮华少鹏姜艳平贾秀杰胡小芳赵新国无锡市第五人民医院结核科江苏无锡214005

目的评价结核分枝杆菌游离核酸检测技术(cell-free Myobacterium tuberculosis dna test,CF-TB)在结核性胸膜炎中的诊断价值。方法对2022年无锡市第五人民医院住院的71例结核性胸膜炎患者和35例非结核性胸膜炎患者的相关检测数据分析,... 详细信息

目的评价结核分枝杆菌游离核酸检测技术(cell-free Myobacterium tuberculosis dna test,CF-TB)在结核性胸膜炎中的诊断价值。方法对2022年无锡市第五人民医院住院的71例结核性胸膜炎患者和35例非结核性胸膜炎患者的相关检测数据分析,将胸腔积液样本行结核分枝杆菌培养、结核分枝杆菌及利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert Mycobacterium tuberculosis/rifampicin resistance,GeneXpert MTB/RIF)、CF-TB和腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)检测,血样本行结核感染T细胞斑点试验(T-cell spotting test,T-SPOT.TB)检测,应用受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC)取胸水CF-TB最佳临界值,并比较CF-TB与其他检测方法的诊断性能。使用SPSS 22.0软件进行数据分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果通过ROC曲线分析发现胸水CF-TB诊断结核性胸膜炎的最佳Ct值为38.489,其灵敏度、特异度分别为91.5%和97.1%,而T-SPOT.TB与胸水ADA诊断结核性胸膜炎的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度分别为86.0%、71.4%、86.0%、71.4%、81.1%和55.0%、91.4%、92.9%、50.8%、67.0%,均低于CF-TB的诊断效能。此外,胸水CF-TB诊断结核性胸膜炎的特异度(97.1%)低于GeneXpert MTB/RIF(100.0%)和结核分枝杆菌培养(100.0%),差异无统计学意义,但其灵敏度(91.5%)高于GeneXpert MTB/RIF(19.7%)和结核分枝杆菌培养(28.2%),差异有统计学意义(P<0.001)。结论CF-TB与传统的结核性胸膜炎诊断金标准相比,其灵敏度更高,且特异度优于结核免疫学检查法,因此,CF-TB可以与其他传统检测方法互补,用于结核性胸膜炎的辅助诊断。

关键词：结核性胸膜炎游离dna 诊断

游离dna甲基化在非肿瘤性疾病中的应用研究进展

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国际检验医学杂志 2024年第5期45卷 635-640页

作者：魏丽荣(综述) 杜玉珍(审校) 上海交通大学医学院附属第六人民医院检验科上海201306

游离dna已成为新兴的、非侵入性的重要临床样本类型,游离dna甲基化具有组织特异性,可以反映来源细胞的dna甲基化状态,在临床疾病诊疗中可能成为重要的潜在标志物。该文旨在综述近年常用的游离dna甲基化检测技术,以及游离dna甲基化在神... 详细信息

游离dna已成为新兴的、非侵入性的重要临床样本类型,游离dna甲基化具有组织特异性,可以反映来源细胞的dna甲基化状态,在临床疾病诊疗中可能成为重要的潜在标志物。该文旨在综述近年常用的游离dna甲基化检测技术,以及游离dna甲基化在神经退行性疾病、精神性疾病、心血管疾病、糖尿病和出生缺陷等非肿瘤疾病中的应用研究进展。

关键词：游离dna 甲基化液态活检非肿瘤性疾病

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游离dna在肝脏疾病中的应用进展

疑难病杂志 2024年第6期23卷 756-759页

作者：何粤川帕成周何玲华(综述) 陈刚(审校) 云南省昆明市第一人民医院/昆明医科大学附属甘美医院肝胆胰外科 650011

体液活检与传统侵入性检查相比具有许多独特的优势,尤其在产前诊断、器官移植后免疫排异反应、肿瘤早期诊断和肝脏疾病诊疗方面展现出巨大潜力。在肝脏疾病领域,游离dna参与机体内在的炎性反应和凝血过程。基于表观遗传学的研究,游离DN... 详细信息

体液活检与传统侵入性检查相比具有许多独特的优势,尤其在产前诊断、器官移植后免疫排异反应、肿瘤早期诊断和肝脏疾病诊疗方面展现出巨大潜力。在肝脏疾病领域,游离dna参与机体内在的炎性反应和凝血过程。基于表观遗传学的研究,游离dna片段的甲基化分析对肝脏恶性肿瘤的早期诊断和治疗大有帮助。在器官移植后,游离dna有望成为监测免疫排异反应的重要标志物,为关于免疫排异反应机制的研究提供了新角度。文章对游离dna的来源、提取方法、检测方法,以及其在肝移植、肝癌、肝衰竭等疾病中的研究应用进展进行综述。

关键词：游离dna 肝癌肝移植炎性反应

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中西医结合肝病杂志 2024年第3期34卷 199-201,206页

作者：邹旭晨石春霞张丹眉郭金龚作炯武汉大学人民医院感染科湖北武汉430061

目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、游离dna(cf-dna)水平变化,并分析MIF、cf-dna在肝衰竭中的作用。方法:选取HBV相关ACLF患者60例(肝衰竭组),体检健康者30例(对照组),收集临床资... 详细信息

目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、游离dna(cf-dna)水平变化,并分析MIF、cf-dna在肝衰竭中的作用。方法:选取HBV相关ACLF患者60例(肝衰竭组),体检健康者30例(对照组),收集临床资料,试剂盒检测各组患者血清MIF、cf-dna水平,Pearson相关或Spearman秩相关分析法分析MIF、cf-dna与临床炎症指标的相关性。结果:与对照组相比,肝衰竭组患者血清MIF和cf-dna水平升高(Pdna(r=0.482)、降钙素原(PCT)(r=0.566)、超敏C反应蛋白(r=0.285)呈正相关(Pdna与PCT(r=0.526)、超敏C反应蛋白(r=0.336)呈正相关(Pdna水平升高,MIF和cf-dna在肝衰竭炎症过程中发挥重要作用。

关键词：肝功能衰竭巨噬细胞移动抑制因子游离dna 炎症指标

尿游离dna的液体活检有望成为泌尿系疾病诊治的重要方向

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现代泌尿外科杂志 2024年第4期29卷 379-382页

作者：刘雨婷李伟霞谢梦晨郭洋洋王昕南京中医药大学附属医院江苏省中医院内分泌科江苏南京210029 南京中医药大学第一临床医学院江苏南京210029

尿液由泌尿系统直接产生,其中的游离dna(cfdna)携带了来源于泌尿系的基因组dna,并且尿液样本具有非侵入性、数量不受限及获取方便等优点,因此尿cfdna是诊治泌尿系疾病的一种很有潜力的生物标志物,对尿cfdna进行液体活检在泌尿系疾病的... 详细信息

尿液由泌尿系统直接产生,其中的游离dna(cfdna)携带了来源于泌尿系的基因组dna,并且尿液样本具有非侵入性、数量不受限及获取方便等优点,因此尿cfdna是诊治泌尿系疾病的一种很有潜力的生物标志物,对尿cfdna进行液体活检在泌尿系疾病的诊治中具有重要的临床应用价值。本文就尿cfdna在泌尿系疾病临床诊治中的应用研究作一综述。

关键词：尿液游离dna 泌尿系疾病生物标志物液体活检

一种模拟游离dna阳性质控品的制备方法及表征

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计量学报 2023年第3期44卷 361-367页

作者：方艳王霞董莲华杨靖亚上海海洋大学食品学院上海201306 中国计量科学研究院前沿中心北京100029

通过优化一种新型的机理未明确的类酶解作用体系(reaction system, RS),直接作用带有KRAS G12C,KRAS G12D,EGFR L858R和EGFR T790M突变的肿瘤细胞系SW1573,SNU-C2B和NCI-H1975,通过对RS体系作用时间及作用的细胞数量的优化,可以裂解细... 详细信息

通过优化一种新型的机理未明确的类酶解作用体系(reaction system, RS),直接作用带有KRAS G12C,KRAS G12D,EGFR L858R和EGFR T790M突变的肿瘤细胞系SW1573,SNU-C2B和NCI-H1975,通过对RS体系作用时间及作用的细胞数量的优化,可以裂解细胞基因组dna制备得到一种可以高度模拟人体血浆游离dna(cfdna)阳性质控品。经芯片电泳检测获得的模拟cfdna片段长度集中于(166±16) BP,与正常人体血浆cfdna大小一致;通过微滴数字PCR检测显示RS制备的dna片段和gdna在目标突变位点处具有一致的突变丰度。表明经RS体系制备得到的dna片段可以作为一种cfdna的阳性质控品。

关键词：计量学游离dna 阳性质控品模拟cfdna 突变丰度数字PCR

游离dna作为对乙酰氨基酚诱导肝损伤的生物标志物及治疗靶点的研究

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游离DNA作为对乙酰氨基酚诱导肝损伤的生物标志物及治疗靶点的研究

作者：陈佩瑜华南理工大学

学位级别：硕士

对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)的过量服用是药物性肝损伤和急性肝衰竭的主要原因之一,临床上APAP诱导肝损伤(Acetaminophen-induced liver injury,AILI)具有发病迅速、干预难度大等特点。唯一批准的药物N-乙酰-L半胱氨酸(N-acetyl-L... 详细信息

对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)的过量服用是药物性肝损伤和急性肝衰竭的主要原因之一,临床上APAP诱导肝损伤(Acetaminophen-induced liver injury,AILI)具有发病迅速、干预难度大等特点。唯一批准的药物N-乙酰-L半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抗氧化是AILI早期的主要治疗方法,但其治疗时间窗窄,延迟给药疗效欠佳。传统的APAP血药浓度、ALT和AST等生物标志物的应用仍面临依赖对APAP摄入时间的精准把控、早期诊断灵敏度不足和预测预后难度大等挑战。因此,挖掘潜在的AILI生物标志物和治疗靶点具有重要的临床意义。时间轴贯穿AILI发生和发展的全过程,无论是在患者临床特征还是治疗策略都具有明显的时间依赖性。在AILI的“代谢-损伤-炎症-修复”过程中,损伤和炎症至关重要,但两者的相互作用关系尚未被完全阐明。游离dna(Cell-free dna,cf dna)作为损伤相关分子模式(Damage-associated molecular patterns,DAMPs)的重要组成,在细胞应激或损伤的情况下被释放到胞外,通过模式识别受体激活免疫细胞,触发炎症反应,作为重要桥梁介导了损伤和炎症的恶性循环和级联放大。虽然已有研究初步证实了cf dna在AILI诊断和治疗中的应用潜力,但cf dna在AILI中的时间变化模式及其与损伤和炎症的作用关系尚不清楚,且cf dna作为AILI的生物标志物和治疗靶点的潜力还需进一步证实。为此,本论文提出两个关键科学问题:(1)cf dna在损伤和炎症互作中的时间变化规律能否用于指导AILI的诊断和预测?(2)干预cf dna能否联合NAC,通过降低损伤和炎症实现AILI的综合治疗?紧绕上述问题,本论文开展了如下研究:(1)cf dna在AILI中的时间变化模式和作用研究通过检测AILI小鼠不同时间点损伤、炎症相关指标以及DAMPs的变化,证实了血清cf dna的时间变化模式与肝脏坏死面积、血清ALT、AST和TNF-α等损伤和炎症指标的变化规律高度相关。通过流式细胞术证实了AILI小鼠外周血和肝脏中的中性粒细胞占比迅速上升,且外周血中的单核-巨噬细胞趋化至肝脏后经历从促炎向促修复的表型转换。通过cf dna与中性粒细胞或巨噬细胞的双向清除实验,证实了中性粒细胞在AILI中发挥重要作用。(2)cf dna作为AILI生物标志物的潜力研究通过检测健康人群、药物性肝损伤和酒精性肝病患者的血浆cf dna水平,发现了高水平的cf dna在肝损伤患者中的潜在临床应用价值。通过检测不同程度AILI小鼠的肝脏坏死面积、血清ALT和cf dna水平,证实了cf dna水平可用于评估AILI的严重程度。通过检测致死性重度AILI小鼠血清ALT和cf dna水平并观察96 h死亡率,证实了血清cf dna预测AILI小鼠死亡风险的能力与ALT相当,且两者联合的预测能力优于单一ALT。(3)dnaseⅠ联合NAC干预AILI的疗效研究在证实dnaseⅠ对AILI小鼠的治疗效果的基础上,联合给予dnaseⅠ和NAC可有效提高重度AILI小鼠的存活率,降低肝脏坏死、肝细胞凋亡、血清生化指标、氧化损伤、炎症因子以及DAMPs等损伤和炎症相关指标,且未见明显系统性毒副作用;证实了以cf dna为靶点的治疗策略可显著提高AILI小鼠的存活率,减轻肝损伤和炎症,且联合NAC的综合治疗策略表现出更好的治疗效果。(4)AILI联合治疗策略的抗炎抗氧化机制探索通过流式细胞术证实了dnaseⅠ联合NAC可有效降低小鼠外周血中性粒细胞和单核细胞的比例,抑制肝脏中性粒细胞浸润和Kupffer细胞流失,促进巨噬细胞从促炎向促修复的表型转换。通过肝脏转录组学测序和免疫组化证实了dnaseⅠ联合NAC可调控AILI小鼠肝脏炎症和氧化应激相关的信号通路及其下游基因的表达。通过检测治疗后AILI小鼠肝脏和中性粒细胞TLR9表达以及体外HEK-Blue TLR9报告细胞的活化情况,证实了dnaseⅠ联合NAC可有效抑制TLR9的表达和活化,减轻AILI的损伤和炎症。综上,本论文揭示了cf dna在AILI损伤和炎症互作过程中的时间变化模式和作用,为cf dna在AILI中的应用提供了理论支撑;证实了cf dna联合ALT在预测AILI小鼠死亡风险中的优势,为AILI的精准诊断和预后提供了的生物标志物和新模式;发展了以cf dna为核心靶点的dnaseⅠ联合NAC策略,通过抗炎和抗氧化途径综合治疗AILI,为AILI的高效安全治疗提供了靶标和新范式。

关键词：游离dna 对乙酰氨基酚肝损伤炎症氧化应激

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尿游离dna在膀胱癌诊治中应用的研究进展

中华泌尿外科杂志 2022年第6期43卷 469-472页

作者：李金泽曹德宏黄引林天海熊巧谭大清艾建忠柳良仁魏强四川大学华西医院泌尿外科成都610041

膀胱癌是泌尿系统常见的癌症,目前的诊治方法尚不令人满意。尿液中的游离dna能够提供关于癌症的全面而重要的信息,因为它携带了来自细胞的遗传信息,这些信息直接流入尿液并从循环中运输。膀胱癌患者的尿游离dna中携带有肿瘤疾病信息,提... 详细信息

膀胱癌是泌尿系统常见的癌症,目前的诊治方法尚不令人满意。尿液中的游离dna能够提供关于癌症的全面而重要的信息,因为它携带了来自细胞的遗传信息,这些信息直接流入尿液并从循环中运输。膀胱癌患者的尿游离dna中携带有肿瘤疾病信息,提示其具有检测、监测以及预测膀胱癌患者的能力。尿游离dna分析弥补了当前检测技术的不足并加强了诊断和检测能力,在转化为临床实践方面具有非常广阔的前景。本文就尿游离dna在膀胱癌临床诊治中的应用研究作一综述。

关键词：膀胱肿瘤膀胱癌游离dna 诊断预后生物标志物

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基于胎儿游离dna的无创产前筛查新进展

实用妇产科杂志 2023年第3期39卷 161-164页

作者：周宣佑徐晨明复旦大学附属妇产科医院妇产科遗传中心、复旦大学生殖与发育研究院上海200001

无创产前检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)由于规避了有创操作的潜在流产风险,且检测准确性高,一经出现就迅速在世界范围内得到广泛应用,并深刻改变了当前产前诊断的临床实践。新一代测序技术、游离dna(cell-free dna,cfdna)... 详细信息

无创产前检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)由于规避了有创操作的潜在流产风险,且检测准确性高,一经出现就迅速在世界范围内得到广泛应用,并深刻改变了当前产前诊断的临床实践。新一代测序技术、游离dna(cell-free dna,cfdna)富集扩增技术的快速发展以及新型生物信息算法的诞生进一步提高了NIPT的性能,NIPT的检测范围从常见的染色体非整倍体扩展到全基因组范围的染色体非整倍体。

关键词：游离dna 染色体非整倍体新一代测序技术无创产前检测产前诊断临床实践扩增技术检测范围