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浙贝母干腐病病原真菌分子鉴定

农业生物技术学报 2023年第9期31卷 1989-1998页

作者：张羽加李吉二温思思徐云飞赵伟春浙江中医药大学生命科学学院

道地药材浙贝母(Fritillaria thunbergii)是浙江省金华市、丽水市等地重要的经济作物之一。近年来真菌性病害频发，其中干腐病发病严重，影响浙贝母产量和质量。本研究采用病组织分离法在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar, ... 详细信息

道地药材浙贝母(Fritillaria thunbergii)是浙江省金华市、丽水市等地重要的经济作物之一。近年来真菌性病害频发，其中干腐病发病严重，影响浙贝母产量和质量。本研究采用病组织分离法在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar, PDA)上分离纯化浙贝母干腐病病原真菌；采用菌落形态、菌丝及孢子形态观察法初步鉴定病原真菌；分别用核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)、翻译延伸因子基因(translation elongation factor 1 alpha, TEF-1α)、RNA聚合酶Ⅱ亚基(the second largest subunit of the nuclear RNA polymerase enzyme Ⅱ, RPB2)、热激蛋白60(heat shock protein, HSP60)、3-磷酸甘油脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, G3PDH)和茄病镰刀菌特异性序列(ITS-specific fragment of Fusarium solani, SOL)等6个基因的序列对病原真菌基因组DNA进行PCR扩增并测序，在GenBank中进行同源性比对并构建系统发育树，确定菌种种类。采用有创菌饼法和无创菌饼法检测真菌的致病性。结果表明，从浙贝母干腐病病株中分离得到14株真菌分离物，通过PCR扩增和测序分析，最终鉴定出4种病原真菌；通过构建发育树以及致病性实验证明了致病菌分别为茄病镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)、变红镰刀菌(F. incarnatum)和木贼镰刀菌(F. equiseti)。本研究明确了浙贝母干腐病致病菌亦可为变红镰刀菌和木贼镰刀菌，并经PCR扩增获得了变红镰刀菌(MN386064)和木贼镰刀菌(MN386065)的G3PDH基因的部分序列，丰富了2种镰刀菌的基因序列，同时也为后续相关研究提供比对基础。

关键词：浙贝母干腐病病原真菌分子鉴定

浙贝母ACO基因克隆、表达及生物信息学分析

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分子植物育种 2023年第10期21卷 3229-3236页

作者：丁楚蔚李梓铭陈志范小平金泽兰江建铭王志安王忠华浙江万里学院生物技术研究所宁波315100 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021 浙江省中药研究所杭州310023

本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆出浙贝母1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(1-aminocyclo-propane-1-carboxylateoxidase,ACO)基因全长,对该基因进行生物信息学分析,并以‘浙贝3号’浙贝母花败期根、茎、叶及幼苗期至成熟期鳞茎为材料,采用RT-... 详细信息

本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆出浙贝母1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(1-aminocyclo-propane-1-carboxylateoxidase,ACO)基因全长,对该基因进行生物信息学分析,并以‘浙贝3号’浙贝母花败期根、茎、叶及幼苗期至成熟期鳞茎为材料,采用RT-qPCR测定ACO基因在浙贝母中的时空表达。成功克隆得到的序列全长1185 bp,开放阅读框为951 bp,编码317个氨基酸;浙贝母ACO氨基酸序列与同属百合科的麝香百合相似性最高,为95.21%。浙贝母不同部位ACO基因表达量依次为茎>根>叶>鳞茎,在鳞茎发育过程中ACO基因表达量逐渐增高,并在成熟期达到最高,比幼苗期提高了193.2%。

关键词：浙贝母 ACO基因克隆荧光表达鳞茎

不同温度对离土浙贝母贮藏品质及酶活性的影响

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食品工业科技 2024年第3期45卷 302-309页

作者：林旭东董翼飞凌建刚朱麟宁波市农科院农产品加工研究所浙江宁波315000 国家蔬菜加工技术研发专业中心浙江宁波315000 宁波市农产品保鲜工程重点实验室浙江宁波315000 沈阳农业大学食品学院辽宁沈阳110866

为了探讨不同贮藏温度对离土浙贝母贮藏品质以及酶活性的影响,以浙贝母为试材,将浙贝母分别置于0、5、10和20℃四个温度下贮藏90 d,研究浙贝母在不同贮藏温度下的失重、感官品质、色泽、硬度、总多糖、生物碱、丙二醛(malondialdehyde,M... 详细信息

为了探讨不同贮藏温度对离土浙贝母贮藏品质以及酶活性的影响,以浙贝母为试材,将浙贝母分别置于0、5、10和20℃四个温度下贮藏90 d,研究浙贝母在不同贮藏温度下的失重、感官品质、色泽、硬度、总多糖、生物碱、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)、过氧化物酶(peroxidase,POD)以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的变化。结果表明:贮藏90 d,0℃贮藏的浙贝母失重率仅为7.17%,显著低于5、10和20℃(9.92%、19.77%和30.28%)(P浙贝母的色泽、硬度、总多糖含量以及总生物碱含量;与5、10和20℃相比,0℃贮藏有效抑制了MDA含量上升,延缓了浙贝母鳞茎的衰老进程;同时0℃贮藏有效抑制了多酚氧化酶和过氧化物酶活力,而且有利于SOD维持较高的活性。与5、10和20℃相比,0℃贮藏的浙贝母品质保持得最好。本研究为浙贝母离土贮藏提供了方法参考及理论依据。

关键词：浙贝母贮藏温度保鲜贮藏特性酶活性

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浙贝母的本草考证及产地变迁

中华中医药杂志 2022年第9期37卷 5142-5146页

作者：孙贝贝杜伟锋康显杰汤璐璐王俪桦陈立兵葛卫红李昌煜浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江中医药大学中药炮制技术研究中心杭州311401 浙江中医药大学中药饮片有限公司杭州311400 浙江中医药大学中医药科学院杭州310053

通过从名称、基源等方面对贝母进行本草考证,比较区分各类贝母,确定浙贝母的基源特征,并整理浙贝母的历代产地变迁情况,以期能够正本究源,为其合理开发利用提供参考。查阅历代本草文献,对贝母信息进行梳理及考证。历史上对贝母的认识较... 详细信息

通过从名称、基源等方面对贝母进行本草考证,比较区分各类贝母,确定浙贝母的基源特征,并整理浙贝母的历代产地变迁情况,以期能够正本究源,为其合理开发利用提供参考。查阅历代本草文献,对贝母信息进行梳理及考证。历史上对贝母的认识较为模糊,统称“贝母”,明代开始有“南”“西”之分,不久又分“川贝母”“浙贝母”,清代对其性味、功效等差异更为清晰,临床上主要以这两种贝母为主要药用品种。文章对贝母的基源品种、名称演变等进行本草考证,梳理浙贝母的历史记载,并说明了浙贝母的产地变迁情况,为进一步开发利用浙贝母资源提供了一定的依据。

关键词：贝母浙贝母品种本草考证产地变迁

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湖北贝母与浙贝母的成分及理化性质对比分析

食品工业科技 2023年第3期44卷 49-55页

作者：卢琪薛淑静杨德李露湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所湖北武汉430064

本文综合对比了同产区同生长周期湖北贝母与浙贝母的总酚、总黄酮、游离氨基酸、微量元素、核苷与核碱基等成分组成及其抗氧化性能、溶解度、溶胀度和糊化特性等理化性质。与湖北贝母相比,浙贝母成熟鳞茎具有较优的抗氧化活性及较高的... 详细信息

本文综合对比了同产区同生长周期湖北贝母与浙贝母的总酚、总黄酮、游离氨基酸、微量元素、核苷与核碱基等成分组成及其抗氧化性能、溶解度、溶胀度和糊化特性等理化性质。与湖北贝母相比,浙贝母成熟鳞茎具有较优的抗氧化活性及较高的总酚、总黄酮、DPPH值、FRAP值和ABTS值。另一方面,湖北贝母成熟鳞茎中的核苷、核碱基以及氨基酸总含量显著高于浙贝母(P贝母成熟鳞茎对人体必需微量元素的累积能力显著优于浙贝母(P浙贝母鳞茎粉末具有较低的T_(0)、T_(p)、T_(c)值和较高相变焓值ΔH,结合其高直链淀粉含量,推测浙贝母成熟鳞茎淀粉分子双螺旋结构比湖北贝母更加紧密有序。总之,湖北贝母与浙贝母成熟鳞茎的成分含量和理化性质之间存在较大差异,本研究可为贝母在功能食品中的加工应用提供参考。

关键词：湖北贝母浙贝母成分含量理化性质对比分析

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浙贝母配方颗粒的质量比较

华西药学杂志 2023年第2期38卷 185-190页

作者：赵明方唐瑞李亚飞葛卫红杜伟锋浙江中医药大学药学院浙江杭州311402 浙江中医药大学中药炮制技术研究中心浙江杭州311401 浙江中医药大学中药饮片有限公司浙江杭州311401

目的分析并评价不同厂家浙贝母配方颗粒的质量。方法收集10批不同厂家浙贝母配方颗粒样品,1批浙贝母饮片,根据2020年版《中国药典》中收载的颗粒剂质量检测方法,结合浙贝母饮片检测指标对11批样品进行质量比较分析,比较不同厂家浙贝母... 详细信息

目的分析并评价不同厂家浙贝母配方颗粒的质量。方法收集10批不同厂家浙贝母配方颗粒样品,1批浙贝母饮片,根据2020年版《中国药典》中收载的颗粒剂质量检测方法,结合浙贝母饮片检测指标对11批样品进行质量比较分析,比较不同厂家浙贝母配方颗粒的粒度、干燥失重、溶化性、浸出物、贝母素甲和贝母素乙含量等指标,建立不同厂家浙贝母配方颗粒的指纹图谱及相似度评价,采用PCA、OPLS-DA分析不同厂家浙贝母配方颗粒差异性。结果不同厂家浙贝母配方颗粒的质量存在较大差异,各批次样品粒度检查、薄层色谱鉴别、浸出物测定均符合药典规定标准,干燥失重检查均符不合药典规定,H样品的溶化性最优。综合各项指标分析可知:E样品总体质量分析结果相对较好,溶化性、粒度、总灰分、浸出物等各项指标均符合药典规定,且贝母素甲、贝母素乙的含量较高。结论不同厂家浙贝母配方颗粒的质量差异较大,有必要统一规范浙贝母配方颗粒的制备工艺。

关键词：浙贝母配方颗粒粒度干燥失重溶化性浸出物贝母素甲贝母素乙

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浙贝母新品种“浙贝3号”的选育与品种特性

中国中药杂志 2019年第3期44卷 448-453页

作者：江建铭俞信光王文静王忠华邵将炜王志安浙江省中药研究所有限公司浙江杭州310023 浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室浙江杭州310023 浙江万里学院浙江宁波315100 杭州师范大学浙江杭州311121 宁波市海曙富农浙贝母专业合作社浙江宁波315000

采用系统选育方法从浙贝母地方种多籽贝母变异株中优选、培育出新品种"浙贝3号(浙认药2018002)",2012—2016年连续开展该品种的特性考评、抗病性鉴定、小区品比和区域试验研究。结果表明,"浙贝3号"出苗早、枯苗迟,出苗后平均生育期100 ... 详细信息

采用系统选育方法从浙贝母地方种多籽贝母变异株中优选、培育出新品种"浙贝3号(浙认药2018002)",2012—2016年连续开展该品种的特性考评、抗病性鉴定、小区品比和区域试验研究。结果表明,"浙贝3号"出苗早、枯苗迟,出苗后平均生育期100 d左右,比对照"浙贝1号"和"浙贝2号"分别增加6,12 d;平均产量为5 095.5 kg·hm^(-2),比对照分别增产14.42%,17.71%;鳞茎增殖率平均为261.2%,比对照分别提高37.46%,31.58%,其鳞茎繁殖系数约为1∶2.6;贝母素甲乙总量平均为0.172 2%,比对照分别提高4.49%,29.47%;抗病性鉴定显示其对鳞茎干(软)腐病表现为抗病,优于对照。"浙贝3号"性状表现稳定、丰产性好、品质优、抗病性较强、繁殖系数适中,适宜在浙江省浙贝母产区种植。

关键词：系统选育浙贝母 “浙贝3号” 品种特性

浙贝母(Fritillaria thunbergii)高效多倍体创制

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分子植物育种 2023年

作者：丁楚蔚汪一婷王忠华吕永平牟豪杰李海营周迪江陈剑平陈志宁波大学中国乡村政策与实践研究院浙江万里学院生物与环境学院浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

研究对浙贝母(Fritillaria thunbergii)快繁体系建立及利用秋水仙素加倍诱导关键环节进行探索，建立基于秋水仙素诱导多倍体的技术体系。结果表明，以鳞茎为外植体，75%乙醇3 min+2%有效氯浓度的次氯酸钠溶液10 min组合的消毒效果较好... 详细信息

研究对浙贝母(Fritillaria thunbergii)快繁体系建立及利用秋水仙素加倍诱导关键环节进行探索，建立基于秋水仙素诱导多倍体的技术体系。结果表明，以鳞茎为外植体，75%乙醇3 min+2%有效氯浓度的次氯酸钠溶液10 min组合的消毒效果较好，外植体成活率为80.68%；浙贝母无菌苗叶柄较叶片及鳞茎更适合作为多倍体诱导再生体系起始材料，叶柄不定芽诱导的最适培养基为MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA，不定芽诱导率为89.18%，增殖系数为5.21；最适生根培养基为MS+0.05 mg/L NAA，生根率为97%；秋水仙素与植物材料混合培养方式诱导多倍体效果优于利用秋水仙素浸泡后培养方式，在秋水仙素浓度为50 mg/L、混合培养3 d的处理下获得的四倍体诱变率最高，为31.67%；经鉴定，本研究获得浙贝母四倍体的染色体条数为48条，为正常浙贝母染色体数目的2倍。

关键词：秋水仙素浙贝母快繁多倍体

基于改进YOLOv7-tiny算法的浙贝母切片角度识别

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 183-191页

作者：乐星辰杜伟锋路胜利开国银浙江科技大学生物与化学工程学院杭州310023 浙江中医药大学药学院浙江省药食植物活性成分与健康国际科技合作基地浙江省中药资源创新与转化中医药重点实验室杭州310053

目的:基于改进的YOLOv7-tiny算法实现浙贝母切片角度的自动识别。方法:通过数据增广构建16000张包含不同角度浙贝母的图像数据集。对YOLOv7-tiny算法进行改进,将普通卷积替换为鬼影卷积(GhostConv),优选添加坐标注意力机制(CA),将部分... 详细信息

目的:基于改进的YOLOv7-tiny算法实现浙贝母切片角度的自动识别。方法:通过数据增广构建16000张包含不同角度浙贝母的图像数据集。对YOLOv7-tiny算法进行改进,将普通卷积替换为鬼影卷积(GhostConv),优选添加坐标注意力机制(CA),将部分激活函数替换为计算量更小的HardSwish函数,在损失函数中添加角度识别误差的惩罚项,并针对同一目标有多个识别结果的现象修改非极大值抑制(NMS)策略。为验证不同改进点对算法模型优化的有效性,对所有的改进点进行消融实验,通过对比在原模型或增加了已验证有效性的改进点的模型基础上增加某改进点前后的预测结果,以评价指标的改善,证明该改进点的有效性。结果:改进的浙贝母切片角度识别算法所需参数量约为原算法的55.4%,计算量约为原算法的59.4%,交并比(IoU)为0.5时的平均精度均值(mAP@0.5)上升了12.2%,识别角度的平均绝对误差(MAE)为5.02°,较原始算法降低了4.58°,在本研究实验环境中,单张图片平均识别时间可达8.7 ms,远快于人类平均反应时间。结论:该研究使用改进YOLOv7-tiny算法实现了浙贝母切片角度的识别,且较原模型更轻量,识别准确度更高,为稳定、准确的浙贝母切片自动化提供了新方法,同时为其他中药的自动化炮制提供了一定的参考。

关键词：浙贝母炮制自动化智能制造切片工艺注意力机制深度卷积网络目标检测模型轻量化