检索结果-南通市图书馆

热带医学杂志 2016年第9期16卷 1089-1091,1095,F0004页

作者：马瑞雪程林峰马铁军王敬增应旗康张晓晓刘蓉蓉王芳张芳琳吴兴安第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710032

目的通过检测汉滩病毒(HTNV)76-118株感染SCID小鼠组织中的特异性病毒抗原、核酸的分布以及病理学变化,以建立汉滩病毒感染动物的评价体系。方法取汉滩病毒76-118株病毒液通过肌肉注射接种SCID小鼠,接种3 d后,取小鼠的心、肝、脾、肺、... 详细信息

目的通过检测汉滩病毒(HTNV)76-118株感染SCID小鼠组织中的特异性病毒抗原、核酸的分布以及病理学变化,以建立汉滩病毒感染动物的评价体系。方法取汉滩病毒76-118株病毒液通过肌肉注射接种SCID小鼠,接种3 d后,取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织,并分别利用ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原;利用q RT-PCR法检测各组织中的病毒RNA;利用HE染色法检测各组织中的病理学变化。结果SCID小鼠感染汉滩病毒后,用夹心ELISA法可在其心、肝、脾、肺、肾组织中检测到HTNV特异性抗原,平均P/N值分别为2.33、7.41、8.13、7.40、2.89,其中脾病毒抗原含量最高;以q RT-PCR法检测小鼠各脏器组织中的HTNV核酸,在实验组小鼠的心、肝、脾、肺、肾中均可检测到病毒核酸,与对照组相比,其相对量分别达到2^(2.11)、2^(6.23)、2^(8.21)、2^(5.26)、2^(3.79)倍,其中脾病毒核酸含量最多;HE染色法可见肝、脾、肺中伴有显著的病理学变化。结论成功检测了汉滩病毒感染SCID小鼠后组织中特异性抗原、核酸的分布以及病理学变化,从而为建立汉滩病毒感染动物的评价体系提供一种参考。

关键词：汉滩病毒 SCID小鼠抗原病理学变化

汉滩病毒感染诱导血管内皮细胞多糖包被损伤及其机制初步研究

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传染病信息 2021年第1期34卷 39-43,49页

作者：杜虹王晓艳李璟姜泓申焕君王平忠空军军医大学第二附属医院传染科西安710038

目的探讨汉滩病毒(hantaan virus,HTNV)感染血管内皮细胞致多糖包被(glycocalyx,GCX)损伤的分子机制。方法利用HTNV感染人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),在感染不同时间段,ELISA检测细胞上清中GCX组分(硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、透明质酸、可溶性CD138和磷酯酰肌醇聚糖),实时定量PCR和Western blot检测蛋白聚糖中核心蛋白(CD138、磷酯酰肌醇聚糖和CD44)及相关分解酶(乙酰肝素酶、中性粒细胞弹性蛋白酶和透明质酸酶)的表达,间接免疫荧光检测糖蛋白的分布情况,跨内皮电阻检测细胞通透性变化。结果HTNV感染HUVECs后,随着感染时间的延长,释放至细胞上清液中的粘多糖成分(硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、透明质酸)逐渐增多。与其相连的核心蛋白在细胞中表达亦逐渐增多,其中CD138和磷酯酰肌醇聚糖mRNA的表达水平上升,在48 h和72 h分别上调3.68倍和2.47倍(P均<0.05),蛋白表达水平也出现上升。免疫荧光检测结果显示HTNV感染后细胞上糖蛋白表达减少。同时,乙酰肝素酶和中性粒细胞弹性蛋白酶mRNA表达水平出现上升,在48 h和24 h分别上调2.23倍和2.76倍(P均<0.05)。跨内皮电阻检测结果显示,弹性蛋白酶抑制剂(1μM)预处理后跨内皮电阻值上升。结论HTNV感染可能引起血管内皮细胞GCX损伤,通过上调或活化某些脱落酶,酶解GCX,致屏障结构破坏和通透性增加,为阐明HTNV感染致血管内皮损伤的分子机制提供了重要资料。

关键词：汉滩病毒人脐静脉血管内皮细胞多糖包被通透性

汉滩病毒嵌合基因G150.7重组腺病毒免疫学特性研究

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科学技术与工程 2008年第8期8卷 2180-2182,2201页

作者：于澜张芳琳刘勇白文涛吴兴安史梦远胡刚王海涛徐志凯第四军医大学微生物学教研室西安710032

对本室已构建的汉滩病毒糖蛋白(GP)和核蛋白(NP)的嵌合基因G1S0.7重组腺病毒的免疫学特性进行研究。将汉滩病毒含有G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒直接免疫Balb/c小鼠,用ELISA、微量细胞培养中和实验及淋巴细胞增殖实验检测小鼠的免疫应答... 详细信息

对本室已构建的汉滩病毒糖蛋白(GP)和核蛋白(NP)的嵌合基因G1S0.7重组腺病毒的免疫学特性进行研究。将汉滩病毒含有G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒直接免疫Balb/c小鼠,用ELISA、微量细胞培养中和实验及淋巴细胞增殖实验检测小鼠的免疫应答效果。用该重组腺病毒免疫的小鼠,可诱导产生抗汉滩病毒NP及GP特异性的抗体,抗体效价分别为1∶320及1∶40。同时重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体和明确的淋巴细胞增殖反应。说明所构建的汉滩病毒嵌合基因G150.7重组腺病毒,可同时刺激机体产生特异性的抗汉滩病毒体液免疫应答及细胞免疫应答。

关键词：汉滩病毒嵌合基因重组腺病毒免疫

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汉滩病毒包膜糖蛋白假病毒的构建及特性研究

转化医学电子杂志 2016年第4期3卷 1-5页

作者：钟研李金林陈良君杨占秋武汉大学医学病毒学研究所病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

目的：研究汉滩病毒包膜糖蛋白与宿主细胞作用的分子机制,构建含有汉滩病毒（HTNV）标准株76-118株包膜糖蛋白的假病毒,并对其进行检测.方法：将表达汉滩病毒包膜糖蛋白的质粒和以VSVΔG为骨架的假病毒颗粒,与293T细胞共转染,构建汉滩... 详细信息

目的：研究汉滩病毒包膜糖蛋白与宿主细胞作用的分子机制,构建含有汉滩病毒（HTNV）标准株76-118株包膜糖蛋白的假病毒,并对其进行检测.方法：将表达汉滩病毒包膜糖蛋白的质粒和以VSVΔG为骨架的假病毒颗粒,与293T细胞共转染,构建汉滩病毒的假病毒,用中和实验,受体抑制实验,免疫共沉淀和Western Blot对其抗原性、中和反应、受体作用等进行检测.结果：汉滩病毒假病毒与活病毒有相似的抗原特性,汉滩病毒假病毒可以模拟活病毒进入细胞的方式,其糖蛋白是以二聚体形式存在的.结论：成功构建含有汉滩病毒标准株包膜糖蛋白的假病毒,它与活病毒的抗原特性和受体作用的方式相似,这为进一步研究汉滩病毒包膜糖蛋白与宿主细胞作用的分子机制提供了很好的工具.

关键词：汉滩病毒包膜糖蛋白假病毒水泡性口炎病毒

汉滩病毒膜蛋白重组腺病毒的构建表达及免疫效果研究

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生物技术通讯 2004年第1期15卷 40-42,50页

作者：罗保君张强董京芳丁美刘树玲杭长寿李银太周育森军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

探讨利用腺病毒载体作为汉滩病毒基因工程疫苗载体的可行性。通过PCR扩增,得到完整的汉滩病毒76-118株M片段编码区,将该片段克隆入质粒pAdTrackCMV的CMV启动子下游,得到阳性克隆pAdTrackCMV-M。PmeI线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAd... 详细信息

探讨利用腺病毒载体作为汉滩病毒基因工程疫苗载体的可行性。通过PCR扩增,得到完整的汉滩病毒76-118株M片段编码区,将该片段克隆入质粒pAdTrackCMV的CMV启动子下游,得到阳性克隆pAdTrackCMV-M。PmeI线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,经同源重组后得到重组病毒pAdEasy-M。pAdEasy-M经PacI线性化后,脂质体介导转染293细胞,经Western-blot检测表明,G1、G2基因在293细胞中得到表达。重组病毒免疫BALB/c小鼠,产生了具有一定中和活性的抗体。该研究为进一步研制以腺病毒为活载体的工程疫苗奠定了基础。

关键词：汉滩病毒 M片段重组腺病毒表达

汉滩病毒Z10株G1糖蛋白编码区克隆及序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第3期20卷 218-221页

作者：梁伟峰马亦林赵年丰朱智勇陈亚岗马伟杭徐晓浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所浙江省卫生防疫站美国三藩市加利福尼亚大学

目的　汉滩病毒浙 10 (Z10 )株G1糖蛋白编码区的克隆、核苷酸序列分析 ,提供我国应用最为广泛的肾综合征出血热 (HFRS)疫苗株序列资料。方法　反转录PCR法扩增G1基因片段 ,克隆入pGEM T载体 ,双脱氧链终止法测定核苷酸序列。结果　测定 ... 详细信息

目的　汉滩病毒浙 10 (Z10 )株G1糖蛋白编码区的克隆、核苷酸序列分析 ,提供我国应用最为广泛的肾综合征出血热 (HFRS)疫苗株序列资料。方法　反转录PCR法扩增G1基因片段 ,克隆入pGEM T载体 ,双脱氧链终止法测定核苷酸序列。结果　测定 144 9个核苷酸 ,可编码 483个氨基酸。与Ⅰ型 76 118、Lee、Hojo株比较核苷酸同源性分别为 87%、86 %、86 % ,与Ⅱ型R2 2株同源性为6 7%。比较氨基酸序列Z10株与Ⅰ型、Ⅱ型病毒的同源性分别为 (94～ 95 ) % ,(77～ 80 ) %。Z10与 76 118G1编码的氨基酸变异多发生于N′端 ,最大的变异区是第 84～ 93位氨基酸的 10个连续变异。结论Z10株病毒和其它汉滩病毒在核苷酸序列虽有较大差异 ,但在氨基酸水平上的同源性仍较高 ,可能是Z10株沙鼠肾疫苗具有较好免疫保护作用的原因。

关键词：汉滩病毒序列分析 G1糖蛋白编码区克隆

汉滩病毒S基因0.7kb片段与M基因G2片段不同拼接方式嵌合基因原核表达产物的初步比较

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科学技术与工程 2002年第5期2卷 21-25页

作者：张芳琳徐志凯罗雯阎岩吴兴安刘勇白文涛胡刚王海涛第四军医大学微生物学教研室西安710032

比较汉滩病毒S、M基因部分片段的嵌合基因不同拼接方式表达产物的活性。构建了嵌合基因原核表达载体pGEX-4T-1-S0.7G2,并与已构建的pGEX-4T-1-G2S0.7的诱导表达产物进行了比较。结果表明,融合蛋白同时保持亲本蛋白的结合活性,且前者表... 详细信息

比较汉滩病毒S、M基因部分片段的嵌合基因不同拼接方式表达产物的活性。构建了嵌合基因原核表达载体pGEX-4T-1-S0.7G2,并与已构建的pGEX-4T-1-G2S0.7的诱导表达产物进行了比较。结果表明,融合蛋白同时保持亲本蛋白的结合活性,且前者表达产物的结合活性始终比后者低。研究表明,嵌合基因的不同拼接方式对融合蛋白的活性可能有一定的影响。

关键词：汉滩病毒 S基因 0.7kb片段 M基因 G2片段接接方式基因表达肾综合征出血热嵌合基因原核表达产物

汉滩病毒感染血管内皮细胞后上调HLAI类分子的表达

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现代生物医学进展 2010年第1期10卷 37-39页

作者：于海涛白雪帆南雪平张野李彧蒋伟刘博丁艳荣姜泓张颖王平忠第四军医大学唐都医院全军感染病中心陕西西安710038

目的:观察汉滩病毒感染血管内皮细胞(EVC304)前后,HLA-I类分子中HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5表达上的差异。方法:以汉滩病毒76-118株感染EVC304细胞作为实验组,以无任何刺激的EVC304细胞作为阴性对照组。6h后用RT-PCR的方法对HLA-A... 详细信息

目的:观察汉滩病毒感染血管内皮细胞(EVC304)前后,HLA-I类分子中HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5表达上的差异。方法:以汉滩病毒76-118株感染EVC304细胞作为实验组,以无任何刺激的EVC304细胞作为阴性对照组。6h后用RT-PCR的方法对HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5的mRNA进行反转录和基因片段的扩增,在mRNA水平上检测其表达差异。结果:在HTNV感染以后,EVC304细胞中HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5mRNA表达均呈升高现象,其中HLA-A、HLA-B和HLA-Cw5的mRNA表达与未感染细胞相比明显升高。结论:HTNV感染血管内皮细胞后,可以诱导HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5的表达升高,从而诱发机体特异性免疫应答,导致免疫损伤的发生。这或许是肾综合症出血热的发病机制之一。

关键词：汉滩病毒 HLAI HLA-A HLA-B HLA-Cw3 HLA-Cw5

汉滩病毒76-118株、汉城病毒L99株核衣壳蛋白及其羧基端多肽原核表达载体的构建与鉴定

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汉滩病毒76-118株、汉城病毒L99株核衣壳蛋白及其羧基端多肽原核...