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周期性水动力法提高砾岩油藏原油采收率的机理

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新疆石油地质 1996年第2期17卷 156-162页

作者：杨学文新疆石油管理局百口泉采油厂

对于非均质程度很高的砾岩油层，采用周期性注水方式可以大幅度地提高原油采收率。周期性脉冲式注水可以在地层中造成不稳定压力状态，在薄含水层中造成剩余压力。借助于毛细管力可以使含油薄层的含水饱和度提高，增加水淹层的含油饱和... 详细信息

对于非均质程度很高的砾岩油层，采用周期性注水方式可以大幅度地提高原油采收率。周期性脉冲式注水可以在地层中造成不稳定压力状态，在薄含水层中造成剩余压力。借助于毛细管力可以使含油薄层的含水饱和度提高，增加水淹层的含油饱和度。根据砾岩油藏具有高渗透主力油层连片集中分布的特点，可将已有的面积注水井网按高渗透层的主体延伸方向，组合为排状注水井网，然后针对地下不同情况实施定向、轮向周期性水动力注水。采取这种注水方式可以进一步扩大注水波及系数，提高原油采收率。

关键词：砾岩油气藏注水水动力法原油采收率

NIRF可抑制乙型肝炎病毒在水动力法转染HBV小鼠模型中的复制及表达

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生命科学研究 2013年第1期17卷 63-67,72页

作者：胡斌周丹琳宣艳艳段昌柱重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室中国重庆400016 重庆医科大学临床检验诊断中心教育部重点实验室中国重庆400016

目前对NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)的研究正朝着细胞癌变进程以及表观遗传学的方向发展,但在体内NIRF对乙型肝炎病毒(HBV)的复制及表达的影响,目前尚不明确.通过高压水动力法转染HBV小鼠模型,不同时间点收集血液和肝... 详细信息

目前对NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)的研究正朝着细胞癌变进程以及表观遗传学的方向发展,但在体内NIRF对乙型肝炎病毒(HBV)的复制及表达的影响,目前尚不明确.通过高压水动力法转染HBV小鼠模型,不同时间点收集血液和肝组织标本,荧光定量PCR检测血清及肝组织中病毒载量,WesternBlot检测肝组织HBc(hepatitis B virus core protein)表达,ELISA检测血清HBeAg表达,并通过免疫组化染色检测HBsAg、HBcAg在肝组织中的定位及表达.小鼠转染pAAV-HBV1.3和NIRF以后,血清及肝组织病毒载量降低(n=3,P水动力法转染HBV小鼠模型中NIRF对HBV的复制及表达起到抑制作用,期待能为后续的HBV致病机理及治疗药物的研究与开发提供支持与帮助.

关键词： NIRF 乙型肝炎病毒水动力法动物模型

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前苏联水动力法提高采收率现状

大庆石油地质与开发 1993年第2期12卷 74-74,65页

作者：李殿文

80年代前苏联基本保持年产原油6×10~8t水平,这是加强勘探不断增加后备储量,努力延长油田稳产期和提高采收率(EOR)的结果。在1989年6.05×10~8t总产油量中应用EOR方法共增产油5700×10~4t。

关键词：水动力法采收率油田产量

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井下水仓水动力法污水净化研究与应用

内蒙古煤炭经济 2019年第16期 190-191页

作者：袁保玺洛阳龙门煤业有限公司龙门煤矿

本文笔者就井下水仓水动力法污水净化及绿色利用技术进行了简单的阐述,使得对满足水仓有效容积进行了较大的提高,希望对以后绿色矿山发展有所帮助。

关键词：水动力法污水净化

应用慢病毒载体携带HBV基因组DNA制备乙型肝炎病毒感染小鼠模型的影响因素分析

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病毒学报 2017年第5期33卷 668-675页

作者：王文揣侠谭心怡邓瑶谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学重点实验室北京102206 河北医科大学病原生物学教研室石家庄050017 北京大学医学部基础医学院北京100191

应用慢病毒载体构建不同HBV转导质粒,通过高压水动力法尾静脉注射小鼠,比较不同HBV转导质粒、剂量(5μg和10μg)、小鼠品系(Balb/c和C57BL/6)及鼠龄(6周龄和18周龄)对建立HBV感染模型的影响。不同的时间点尾静脉采血,ELISA检测血清HBsAg... 详细信息

应用慢病毒载体构建不同HBV转导质粒,通过高压水动力法尾静脉注射小鼠,比较不同HBV转导质粒、剂量(5μg和10μg)、小鼠品系(Balb/c和C57BL/6)及鼠龄(6周龄和18周龄)对建立HBV感染模型的影响。不同的时间点尾静脉采血,ELISA检测血清HBsAg、HBeAg的表达水平及动力变化,Real-time PCR检测血清及肝组织病毒载量;免疫组织化学法检测肝组织HBcAg的定位与表达。1.3倍HBV基因组慢病毒载体转导质粒(pCSHBV1.3)优于1.1倍与1.2倍HBV基因组转导质粒(pCS-HBV1.1or pCS-HBV1.2);pCS-HBV1.3注射Balb/c小鼠后抗原表达维持时间短,抗体出现早;pCS-HBV1.3注射C57BL/6小鼠后,HBsAg、HBeAg抗原表达及血清HBV DNA水平维持时间长;且注射5μg质粒相对于10μg质粒注射小鼠后抗原表达维持时间更长;而6周龄和18周龄小鼠血清均可在较长时间内检测到HBsAg、HBeAg及HBV DNA的表达,但在注射后35周内,前者的表达量均高于后者;所有注射质粒的小鼠肝组织中均可检测到HBcAg的表达,且在血清HBV感染标志转阴时均可检测到肝内HBV DNA的存在。注射质粒的HBV基因组长度、剂量以及宿主的遗传背景均对建立乙肝成体转基因小鼠模型有影响,且发现以5μg含1.3倍HBV基因组的转导质粒pCS-HBV1.3注射6周龄C57BL/6小鼠,HBV抗原表达和HBV DNA水平维持时间长,更适合建立HBV持续感染模型。

关键词：乙型肝炎病毒(HBV) 基因组水动力法持续感染动物模型

利用乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA构建慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型

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四川动物 2015年第2期34卷 200-207页

作者：严磊赵婷婷王会娟李小松黄爱龙谭毅赖国旗重庆医科大学实验动物中心重庆400016 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收... 详细信息

目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收集不同时间点的血清和肝组织。利用放射免疫法检测血清样本中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBV DNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBsAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;使用SPSS 17.0对数据进行统计学分析。结果实验组HBsAg和HBeAg表达均呈现4个上升-下降曲线:HBsAg峰值分别出现在第3天、第3周、第7周和第9周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第1周、第4周和第10周。对照组HBsAg和HBeAg表达分别呈现2个或3个明显的峰:HBsAg峰值分别出现在第3天和第8周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第3周和第10周。空白组未检测出HBsAg和HBeAg。实验组HBV DNA拷贝数高于对照组的拷贝数(P水动力法向C57BL/6小鼠体内转入HBV cccDNA,成功建立了慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型,与对照组比较,新建立的小鼠乙肝模型具有更高的HBV表达,动物模型为研究乙型肝炎病毒HBV cccDNA的感染及其引起肝损伤的机制奠定了基础。

关键词：乙型肝炎病毒 HBV共价闭合环状DNA 水动力法小鼠模型

复制型HBV小鼠模型建立及可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠制备

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复制型HBV小鼠模型建立及可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠制...

作者：郭燕菊中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

目的 1、构建及鉴定水动力法转染HBV小鼠模型,探讨该模型在HBV疫苗评价中的应用。 2、制备可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠,为人肝嵌合体小鼠模型的建立奠定基础。方法 1、复制型HBV小鼠模型的建立及其在疫苗评价中的应用 (1) pAA... 详细信息

目的 1、构建及鉴定水动力法转染HBV小鼠模型,探讨该模型在HBV疫苗评价中的应用。 2、制备可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠,为人肝嵌合体小鼠模型的建立奠定基础。方法 1、复制型HBV小鼠模型的建立及其在疫苗评价中的应用 (1) pAAV-HBV1.3质粒的鉴定:含腺相关病毒倒转末端重复序列元件与包含1.3个拷贝HBV基因组(ayw亚型)的HBV表达质粒pAAV-HBV1.3(由中国疾控中心病毒病所谭文杰教授惠赠),酶切鉴定并将该质粒转染Huh7肝癌细胞系,ELISA方法检测HBsAg、HBeAg的分泌表达水平。 (2)水动力法HBV小鼠模型的构建:将pAAV-HBV1.3质粒经高压水动力法尾静脉注射C57BL/6小鼠,分别于注射后10天、30天、60天采集血液和肝组织标本,ELISA检测血清HBsAg、HBeAg表达;Real-Time PCR检测血清及肝组织病毒载量;HE染色、免疫组化染色检测肝组织病理学改变及病毒抗原在肝组织中的定位及表达。 (3)水动力法HBV小鼠模型的优化:采用免疫抑制剂地塞米松注射液(DEX)腹腔注射小鼠,0.2ml/只/次(50mg/Kg)隔日一次连续3次,建立免疫功能抑制小鼠模型,在此基础上制备乙肝病毒转染小鼠模型,于注射后每周采集尾静脉血,进行血清HBsAg、HBeAg检测及病毒载量检测。 (4)水动力法转染HBV小鼠模型的鉴定:利用HBV商品化疫苗(商品名:安在时,成分:HBsAg)免疫小鼠,2μg/只,14天1次,共2次,生理盐水为对照,200μl/只;第2次加强免疫14天后用水动力法转染pAAV-HBV1.3,进行免疫保护性实验,在不同时间点采集尾静脉血,ELISA检测血清HBsAg、HBeAg,Real-Time PCR检测血清病毒载量。 (5)水动力法转染HBV小鼠模型在疫苗评价中的应用:用重组腺病毒(AdS)免疫C57BL/6小鼠,同时设置安在时疫苗(商品化疫苗)及生理盐水为对照。分别于首次免疫前及每次免疫后10天采集尾静脉血,ELISA检测血清HBsAb,最后1次免疫14天后尾静脉水动力法注射pAAV-HBV1.3质粒溶液1.6m(l20μg/只),于不同时间点采集尾静脉血,ELISA检测血清HBsAg、HBeAg,Real-Time PCR检测血清病毒载量。 2、可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠的制备 (1) pTet-on-Albumin转基因小鼠的制备:构建及鉴定含血清白蛋白增强子和启动子序列的pTet-on-Albumin载体,在细胞水平验证Albumin启动子转录活性,通过将pTet-on-Albumin载体显微注射B6/CBA杂合一代受精卵原核细胞的方法获得转基因首建鼠,然后与野生型C57BL/6杂交,PCR筛选转基因阳性小鼠,RT-PCR、Western blot鉴定rtTA mRNA及蛋白表达。 (2) pTRE2-uPA转基因小鼠的制备:构建及鉴定含小鼠uPA基因的pTRE2- uPA载体,与pTet-on质粒共转Huh7细胞系,细胞水平鉴定uPA的表达及其生物活性;通过将pTRE2-uPA载体显微注射B6/CBA杂合一代受精卵原核细胞的方法获得转基因首建鼠,与野生型C57BL/6杂交,PCR筛选转基因阳性小鼠。 (3)可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠的制备:将已获得稳定的且在小鼠肝细胞特异性表达Albumin-rtTA的转基因小鼠与TRE2-uPA转基因小鼠杂交,子代鼠Dox诱导,诱导12周后处死小鼠,取血清和肝组织进行ALT和肝组织uPA表达及病理学检测,获得可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠。结果 1、复制型HBV小鼠模型的建立及其在疫苗评价中的应用 (1) pAAV-HBV1.3质粒的鉴定结果:将包含1.3倍全长HBV基因组的质粒pAAV-HBV1.3酶切分析与预期结果相符,pAAV-HBV1.3脂质体转染Huh7细胞72h后收集细胞培养上清,ELISA方法检测HBsAg、HBeAg均为阳性,OD值分别为0.309及1.279,对照(未转染的Huh7细胞培养上清)均为阴性。 (2)水动力法HBV小鼠模型的鉴定结果:C57BL/6小鼠尾静脉水动力法注射pAAV-HBV1.3,10天时通过ELISA方法检测小鼠血清HBsAg、HBeAg,结果均为阳性,感染率为100%;30天、60天时血清HBsAg、HBeAg ELISA检测结果均为阴性。Real-Time PCR检测小鼠血清及肝组织病毒载量,结果显示,注射质粒10天、30天及60天时实验组小鼠血清及肝组织病毒载量明显高于对照组,且在10天时达高峰,以后随时间延长,血清及肝组织中病毒载量降低。免疫组化染色可见,10天时注射pAAV-HBV1.3小鼠肝组织均存在HBsAg、HBcA

关键词：水动力法乙型肝炎病毒动物模型转基因小鼠尿激酶原激活剂

复制型乙型肝炎病毒载体表达病毒白细胞介素10建立小鼠感染模型

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复制型乙型肝炎病毒载体表达病毒白细胞介素10建立小鼠感染模型

作者：夏欢河北医科大学

学位级别：硕士

自从1963年Blumberg发现澳大利亚抗原以来,乙型肝炎病毒(HBV)感染一直是严重威胁人类健康的原因之一。慢性HBV感染所引起的慢性乙型病毒性肝炎及其相关疾病(如肝衰竭、肝硬化、肝癌等)是严重危害人类健康的疾病。目前尚无可靠的HBV动物... 详细信息

自从1963年Blumberg发现澳大利亚抗原以来,乙型肝炎病毒(HBV)感染一直是严重威胁人类健康的原因之一。慢性HBV感染所引起的慢性乙型病毒性肝炎及其相关疾病(如肝衰竭、肝硬化、肝癌等)是严重危害人类健康的疾病。目前尚无可靠的HBV动物模型,严重阻碍了HBV相关基础和临床研究。因此,建立易获取、经济适用、生物学背景清晰的小动物HBV感染模型尤为重要。小鼠是医学研究领域常用的实验动物,但是,乙肝病毒的种属特异性使得正常情况下HBV不能感染小鼠。HBV转基因小鼠模型、人鼠嵌合小鼠HBV模型目前己经在一定范围内得到应用,但是这些模型的制备技术要求较高、制备难度大、免疫缺陷和肝细胞来源困难等因素也限制了其应用。水动力学方法建立的HBV转染小鼠模型为HBV相关研究提供了很好的动物模型,该模型制备具有经济实用、简单易行等优点,尤其适用于HBV感染免疫发病机制、机体免疫调节、抗病毒药物筛选等方面的研究。多种病毒通过发展各自的策略逃避宿主免疫,从而形成宿主的慢性感染。很多病毒的基因产物可以减轻宿主的免疫反应,避免免疫监视与免疫清除,为病毒的持续存在提供良好的环境,从而成功地感染具有健全免疫系统的机体,实现与宿主共存。人疱疹病毒中的人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)和EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)都可以编码病毒白细胞介素10(interleukin10,IL-10)类似物,这些IL-10类似物主要是抑制局部的免疫反应,以增强病毒复制、播散并持续存在。本研究拟借用人巨细胞病毒和EB病毒的生存策略,通过制备表达人巨细胞病毒白细胞介素10(Human Cytomegalovirus interleukin10,cmvIL-10)、EB病毒白细胞介素10(Epstein-Barr virus interleukin10,ebvIL-10)的复制型HBV载体,用水动力学的方法探讨建立小鼠HBV慢性感染模型的可行性。第一部分表达cmvIL-10、ebvIL-10的复制型HBV载体的构建目的:把HBV改造为表达cmvIL-10、ebvIL-10的复制型HBV载体,分析其分子生物学特性及对小鼠免疫功能是否有抑制作用。方法:1应用基因重组技术,构建了如下2个质粒:pCH-cmvIL-10、pCH-ebvIL-10。以表达野生型HBV的质粒pCH-3093为母质粒,插入外源基因cmvIL-10和ebvIL-10,构建表达人巨细胞病毒白细胞介素10(cmvIL-10)的质粒pCH-cmvIL-10、表达EB病毒白细胞介素10(ebvIL-10)的质粒pCH-ebvIL-10。2复制型HBV载体分子生物学特性的观察:上述重组型HBV质粒以表达野生型HBV的质粒pCH-3093为对照,分别转染至Hep G2细胞中,提取细胞培养液和细胞裂解液中的DNA,Southern blot检测HBV的复制能力,Northern blot检测HBV m RNA表达的变化。Native western blot检测HBV核心蛋白的表达。3两种病毒IL-10对小鼠免疫功能的抑制活性检测pCH-cmvIL-10、pCH-ebvIL-10和pCH-3093(对照)分别转染293细胞,收集含IL-10的细胞培养上清液。分离小鼠外周血单核细胞,给予LPS刺激,同时给予含有病毒IL-10的细胞培养上清液处理,应用实时定量RT-PCR检测单核细胞内MHC-II m RNA和TNF-αm RNA的表达,以观察两种病毒IL-10对小鼠免疫功能的抑制作用。结果:1本研究将HBV的P和C基因重叠区域分开,通过插入外源基因cmvIL-10、ebvIL-10,利用2个IRES序列,成功构建了表达cmvIL-10和ebvIL-10的复制型HBV载体质粒pCH-cmvIL-10、pCH-ebvIL-10,经酶切及测序鉴定,与理论设计相同。2为观察构建的2种HBV载体的复制能力,通过Southern blot检测,发现此两个质粒复制能力与野生型HBV相比,略有下降。3为观察2种HBV载体mRNA表达水平变化,通过Northern blot检测,发现两种HBV载体由于外源基因的插入,pg RNA电泳较野生型HBV稍慢,sg RNA与野生型HBV一致。4为观察两种HBV载体是否对HBV核心蛋白有影响,通过Native western blot检测,证实所构建的上述HBV载体对核心蛋白表达无影响,与野生型HBV一致。5为观察两种病毒IL-10对小鼠免疫功能的抑制活性,通过实时定量RT-PCR检测发现,小鼠单核细胞内MHCII m RNA和TNF-αm RNA的表达与对照组相比有不同程度的下降,表明两种病毒IL-10在细胞水平对小鼠免疫功能的有抑制作用。结论:

关键词： cmvIL-10 ebvIL-10 HBV感染小鼠动物模型水动力法

叶下珠提取物对急性乙型肝炎小鼠乙型肝炎病毒复制及其抗原表达的影响

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中国中医药信息杂志 2014年第12期21卷 51-54页

作者：吴莹雷宇王媛媛李姝玉禄颖王旭丹北京中医药大学基础医学院医学病原系北京100029 重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010

目的观察叶下珠提取物在小鼠急性乙型肝炎病毒(HBV)感染模型中对HBV复制及其抗原表达的影响。方法 C57b/6小鼠尾静脉注射1.3倍HBV真核表达质粒(p HBV1.3),20μg/只,建立小鼠急性HBV感染模型。实验小鼠随机分为正常组、病毒组及中药高、... 详细信息

目的观察叶下珠提取物在小鼠急性乙型肝炎病毒(HBV)感染模型中对HBV复制及其抗原表达的影响。方法 C57b/6小鼠尾静脉注射1.3倍HBV真核表达质粒(p HBV1.3),20μg/只,建立小鼠急性HBV感染模型。实验小鼠随机分为正常组、病毒组及中药高、中、低剂量组,感染后第1日起,给药组分别给予相应剂量药物灌胃,连续3 d。感染后第4日,化学发光法检测血清乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎e抗原(HBe Ag)水平,PCR检测血清HBV-DNA含量;免疫组化法检测肝组织乙型肝炎核心抗原(HBc Ag)、HBs Ag表达。结果中药各剂量组均能明显降低感染小鼠血清中HBs Ag、HBe Ag含量,与病毒组比较差异有统计学意义(P0.05);中药高剂量组明显抑制了肝组织了HBc Ag及HBs Ag的表达(P<0.05)。结论叶下珠提取物明显抑制小鼠急性HBV感染模型小鼠HBV的复制与表达,具有直接抗病毒作用。

关键词：叶下珠提取物乙型肝炎病毒复制表达水动力法小鼠