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梅毒螺旋体蛋白Tp0768经ER应激和NF-κB/HIF-1α途径增强内皮细胞的促迁移黏附作用

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梅毒螺旋体蛋白Tp0768经ER应激和NF-κB/HIF-1α途径增强内皮细胞...

作者：周湘萍南华大学

学位级别：硕士

目的:本研究以人脐静脉血管内皮细胞为靶细胞,探讨重组梅毒螺旋体脂蛋白Tp0768对血管内皮细胞吸引THP-1细胞向其迁移黏附过程中的作用机制,并筛选Tp0768发挥促迁移黏附作用的关键信号通路,为揭示梅毒螺旋体的致病机制和治疗靶点提供新... 详细信息

目的:本研究以人脐静脉血管内皮细胞为靶细胞,探讨重组梅毒螺旋体脂蛋白Tp0768对血管内皮细胞吸引THP-1细胞向其迁移黏附过程中的作用机制,并筛选Tp0768发挥促迁移黏附作用的关键信号通路,为揭示梅毒螺旋体的致病机制和治疗靶点提供新思路。方法:1.用Tp0768刺激人脐静脉血管内皮细胞后,CCK8检测内皮细胞的活性;qRT-PCR检测ICAM-1、MCP-1和IL-8的mRNA水平;ELISA方法检测细胞因子ICAM-1、MCP-1和IL-8的含量;Western Blot检测ICAM-1蛋白表达水平;Transwell实验检测THP-1细胞对内皮细胞培液上清的迁移率;黏附实验检测THP-1细胞对内皮细胞的黏附程度。***0768刺激内皮细胞后,透射电子显微镜检查内质网细微结构的变化;Western Blot检测ER应激标志物PERK、IRE1α和ATF6蛋白水平;细胞免疫荧光、Western Blot检测分别检测NF-kB P65核易位程度和P65的蛋白的表达量;Western Blot检测HIF-1α蛋白的表达水平,qRT-PCR检测HIF-1αmRNA水平。3.检测ER应激与NF-kB通路、HIF-1α通路之间的上下游关系,用ER应激抑制剂4-PBA、PERK通路抑制剂GSK、IRE1α通路抑制剂STF、NF-kB通路抑制剂PDTC分别预处理细胞后,qRT-PCR检测ICAM-1、MCP-1和IL-8的mRNA表达水平;Transwell实验检测THP-1细胞对内皮细胞培液上清的迁移率,黏附实验检测THP-1细胞对内皮细胞的黏附程度。4.质粒转染法敲低内皮细胞HIF-1α,Tp0768刺激细胞后,qRT-PCR检测阴/阳性对照组与敲低组内皮细胞ICAM-1、MCP-1和IL-8的mRNA表达水平;黏附实验检测THP-1细胞对内皮细胞的黏附程度。结果:***0768能以剂量和时间依赖性方式上调血管内皮细胞ICAM-1、MCP-1和IL-8 mRNA的表达量,促进THP-1细胞对血管内皮细胞迁移和黏附。***0768可引起内皮细胞内质网变形、内质网网腔扩大并形成空泡,PERK、IRE1α和ATF6的蛋白表达量增加;ER应激抑制剂4-PBA、PERK抑制剂GSK、IRE1α抑制剂STF分别预处理细胞后明显下调Tp0768诱导的ICAM-1、MCP-1和IL-8 mRNA水平(P体预处理细胞后,可显著降低THP-1细胞对血管内皮细胞培养液上清的迁移率;抗-ICAM-1中和抗体预处理细胞后,可显著降低THP-1对血管内皮细胞的黏附率。结论:***0768通过ER应激和NF-κB/HIF-1α途径促进内皮细胞产生促迁移黏附因子ICAM-1、MCP-1和IL-8。***-1细胞对内皮细胞的迁移和黏附作用,是由Tp0768诱导内皮细胞分泌MCP-1和ICAM-1介导的。***0768对内皮细胞的促迁移黏附作用是由ER应激的PERK和IRE-1α途径通过NF-κB介导的,其中还涉及到下游通路HIF-1α的激活。

关键词：梅毒螺旋体迁移黏附 Tp0768 ER应激 NF-κB HIF-1α

梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

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梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

作者：刘双全南华大学

学位级别：硕士

目的:构建含梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Tp0453的优势表位(28-288aa)基因的重组表达体,在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用价值和其... 详细信息

目的:构建含梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Tp0453的优势表位(28-288aa)基因的重组表达体,在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用价值和其生物学功能提供实验依据。方法:通过生物信息学分析,筛选并挑选Tp0453基因优势抗原表位,以Tp Nichols株基因组DNA为模板,高保真聚合酶链反应扩增目的片断, 将其亚克隆进原核表达载体pQE32中、构建重组质粒pQE32/Tp0453,然后转化至表达宿主菌M15中进行诱导表达,利用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定表达产物:Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行稀释透析复性,BCA法测定纯化蛋白浓度。用纯化的Tp0453重组蛋白包被微孔板,建立间接ELISA方法,检测梅毒参比血清和临床梅毒患者血清,同时与TPPA法进行比较,根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况,评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值。同时用纯化的Tp0453重组蛋白免疫新西兰兔,间接ELISA方法检测免疫兔血清中Tp0453多克隆抗体的效价,对Tp0453重组蛋白的免疫原性进行分析。结果:软件分析Tp0453基因的抗原表位选择了Tp0453基因的86-849bp位碱基序列为目的表位(片段长度为764bp,编码255个氨基酸);PCR扩增得到以大小约为800bp的目的片断;构建的重组质粒经酶切鉴定和测序鉴定证明其中插入片断为Tp0453目的基因,测序结果与Genbank上登录序列完全一致

关键词：梅毒螺旋体重组蛋白蛋白纯化 Tp0453 免疫活性

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梅毒螺旋体血清学筛查和确诊试验的临床应用

检验医学 2007年第6期22卷 681-683页

作者：丁双双沈霞上海交通大学医学院苏州九龙医院检验科江苏苏州215021

目的探讨2种梅毒螺旋体血清学试验同时用于梅毒螺旋体感染的筛检和确诊的重要性和必要性。方法快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)及梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)。结果对我院6 528名输血前筛查及皮肤科患者的血清样本同时作RPR和TPPA检... 详细信息

目的探讨2种梅毒螺旋体血清学试验同时用于梅毒螺旋体感染的筛检和确诊的重要性和必要性。方法快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)及梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)。结果对我院6 528名输血前筛查及皮肤科患者的血清样本同时作RPR和TPPA检测,阳性者再进一步检测其滴度。RPR阳性率为1.29%,TPPA阳性率为1.90%;2种方法同时阳性率为1.15%。结论为早期确诊梅毒螺旋体感染并阻断其传播途经,对输血前筛查及疑似梅毒螺旋体感染患者应采用RPR和TPPA2种方法同时进行检测。

关键词：梅毒螺旋体抗体快速血浆反应素环状卡片试验梅毒螺旋体明胶凝集试验

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梅毒螺旋体Tp0821重组蛋白的细胞毒性

广东医学 2013年第21期34卷 3243-3245页

作者：伍宁何军胡立平李保平湖南省衡阳市第一人民医院检验科 421000 南华大学附属南华医院检验科湖南衡阳421000

目的初步研究梅毒螺旋体膜脂蛋白Tp0821重组蛋白的细胞毒性。方法构建重组质粒pQE32/Tp0821并诱导表达其相应蛋白;THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞,将不同浓度(1、10、20μg/mL)的Tp0821重组蛋白分别刺激巨噬细胞,24 h后收集细胞及细胞上... 详细信息

目的初步研究梅毒螺旋体膜脂蛋白Tp0821重组蛋白的细胞毒性。方法构建重组质粒pQE32/Tp0821并诱导表达其相应蛋白;THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞,将不同浓度(1、10、20μg/mL)的Tp0821重组蛋白分别刺激巨噬细胞,24 h后收集细胞及细胞上清液,检测其LDH漏出率和NO释放量。同时设置相同浓度梯度的6-His-Tag蛋白为对照组和仅加入培养基为空白组。结果成功构建pQE32/Tp0821重组质粒,诱导表达和纯化出Tp0821重组蛋白;巨噬细胞经Tp0821重组蛋白刺激后,其LDH漏出率和NO释放量的升高与蛋白浓度呈剂量依赖性,明显高于同浓度的对照组,其差异有统计学意义(P0.05)。结论 Tp0821重组蛋白对巨噬细胞具有一定的毒性作用。

关键词：梅毒螺旋体重组蛋白细胞毒性

二期梅毒皮疹中梅毒螺旋体基因检测和浸润细胞研究(英文)

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北京大学学报（医学版） 2003年第5期35卷 485-487页

作者：李文海张建中北京大学人民医院皮肤科北京100044

目的 :探讨二期梅毒皮疹的形成机制和细胞免疫在梅毒皮疹形成中的作用。方法 :用巢式PCR方法对2 4例 10 %甲醛溶液固定、石蜡包埋的二期梅毒疹标本进行了梅毒螺旋体DNA检测 ;用免疫组化方法对二期梅毒皮损中的浸润细胞进行检测。结果 :... 详细信息

目的 :探讨二期梅毒皮疹的形成机制和细胞免疫在梅毒皮疹形成中的作用。方法 :用巢式PCR方法对2 4例 10 %甲醛溶液固定、石蜡包埋的二期梅毒疹标本进行了梅毒螺旋体DNA检测 ;用免疫组化方法对二期梅毒皮损中的浸润细胞进行检测。结果 :2 4份二期梅毒疹标本中 10例 (4 5 .8% )检出了梅毒螺旋体DNA ,所有标本银染色未发现苍白螺旋体 (TP)。二期梅毒皮损浸润细胞中CD4 5RO(+)T细胞 10 0 %阳性 ,6 8.2 %有CD6 8(+)巨噬细胞 ,此外还有少量CD2 0 (+)B淋巴细胞和CD5 7(+)NK细胞。结论 :二期梅毒疹的形成原因可能为螺旋体感染皮肤局部所致 ;二期梅毒疹皮损中浸润细胞主要为T淋巴细胞和巨噬细胞。

关键词：二期梅毒皮疹梅毒螺旋体基因检测浸润细胞病因学细胞免疫

斑点金免疫渗滤试验同步检测抗梅毒螺旋体IgM和IgG抗体的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第7期27卷 660-663页

作者：颜丹李燎陈德宇钟桂书钟建泉泸州医学院附属医院皮肤性病科 646000 泸州医学院附属医院检验科 646000

目的探求一种可用于梅毒诊断及疗效考核的简便、快速、可靠的方法。方法建立检测抗梅毒螺旋体抗体的斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),平行检测梅毒患者血清中IgM和IgG抗体,对患者在治疗前和治疗后血清中特异抗体水平的动态变化进行研究;以梅... 详细信息

目的探求一种可用于梅毒诊断及疗效考核的简便、快速、可靠的方法。方法建立检测抗梅毒螺旋体抗体的斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),平行检测梅毒患者血清中IgM和IgG抗体,对患者在治疗前和治疗后血清中特异抗体水平的动态变化进行研究;以梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)法为金标准,对临床上疑为梅毒患者的360份血清进行TPHA法和DIGFA法检测对比。结果用DIGFA法对已确诊为Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期梅毒患者治疗前血清中特异IgM抗体的检出率分别为82.61% (38/46)、100.00%(24/24)和77.78%(14/18);IgG抗体的检出率分别为60.87%(28/46)、91.67%(22/24)和88.89%(16/18);在Ⅰ期梅毒患者血清中特异IgM抗体的阳性率高于IgG抗体(P梅毒患者血清中,两类抗体的阳性率均较高,且差异无统计学意义(P均>0.05)。58例两类抗体均阳性的梅毒患者经有效药物治疗后3个月、6个月、1年、1.5年、2年连续采血,经DIGFA检测连续观察的结果表明,IgM抗体出现较早,阴转较为明显和迅速,治疗后3个月的阴转率就达31.03%(18/ 58),1年的阴转率可达93.10%(54/58);而IgG抗体出现较晚,阴转缓慢,治疗后1年的阴转率仅为34.48%(20/54)。结论DIGFA是检测抗梅毒螺旋体抗体的有效方法,早期梅毒的诊断和疗效考核可检测IgM抗体,而IgG抗体的检测则主要用于回忆性诊断,不适用于判断是否治愈或再感染。

关键词：斑点金免疫渗滤试验梅毒螺旋体特异抗体

梅毒螺旋体介导TLR2激活PI3K/Akt/mTOR通路阻断人小胶质细胞的自噬流

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梅毒螺旋体介导TLR2激活PI3K/Akt/mTOR通路阻断人小胶质细胞的自...

作者：吴凯璇厦门大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)侵入中枢神经系统导致神经梅毒的发生,神经梅毒发病率高且极易误诊,临床症状严重,其致病机制有待进一步研究。小胶质细胞是驻留在中枢神经系统的吞噬细胞,在应对病原微生物感染中发挥... 详细信息

研究背景和目的:梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)侵入中枢神经系统导致神经梅毒的发生,神经梅毒发病率高且极易误诊,临床症状严重,其致病机制有待进一步研究。小胶质细胞是驻留在中枢神经系统的吞噬细胞,在应对病原微生物感染中发挥重要作用。自噬是真核生物中依赖溶酶体的一种分解代谢过程,它可以由多种免疫和炎症信号通过Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs)等模式识别受体诱导产生。但自噬在Tp感染中扮演的角色及作用机制仍不明确。本研究拟探讨Tp对人小胶质细胞(Human microglia cells,HMC3)自噬流的影响及其调控机制,为进一步探究神经梅毒的致病机制奠定基础。研究方法:以HMC3为研究对象,首先将感染复数(Multiplicity of infection,MOI)为 10:1、50:1、100:1、150:1 的Tp与HMC3 共培养 24 小时,采用 Western blotting检测自噬蛋白LC3及TLR2的相对蛋白表达量变化;将MOI为50:1的Tp与HMC3分别孵育0小时、3小时、6小时、12小时、24小时,采用Western blotting分析自噬蛋白LC3、Beclinl、P62、Lamp2随时间的变化情况;将Tp与HMC3分别孵育0小时、1小时、2小时、12小时、24小时,采用Western blotting分析TLR2蛋白表达随时间的变化情况;通过细胞转染技术,将pmCherry-EGFP-LC3B串联荧光质粒转染至HMC3中,利用荧光共聚焦显微镜观察Tp与HMC3共培养24h后溶酶体标记蛋白Lamp2和自噬流的变化;利用Western blotting检测PI3K/Akt/mTOR信号通路活化情况;使用TLR2抑制剂、PI3K/Akt抑制剂和mTOR抑制剂探讨Tp促进TLR2表达,活化PI3K/Akt/mTOR信号通路对HMC3溶酶体及自噬流的影响。研究结果:不同浓度Tp刺激HMC3 24小时,自噬蛋白LC3II和TLR2蛋白表达随着Tp浓度增高而升高,在MOI 150:1时达到最高;Tp(MOI 50:1)与HMC3共培养不同时间,自噬蛋白LC3Ⅱ、Beclinl、P62和TLR2蛋白表达随刺激时间的增加而升高,在24小时达到最高;Western blotting和免疫荧光结果显示Tp(MOI 50:1)可抑制溶酶体标记蛋白Lamp2表达,且呈现出时间依赖性,在24小时到达最低;设置Tp刺激HMC3为实验组,雷帕霉素(Rapamycin,RAP)作用HMC3为阴性对照组,巴弗罗霉素Al(Bafilomycin Al,BAF)作用HMC3为阳性对照组,PBS作用HMC3为空白对照组。将pmCherry-EGFP-LC3B串联荧光质粒转染至HMC3中发现,Tp刺激HMC3组与阳性对照组结果一致,Tp导致HMC3中代表自噬小体的黄色荧光斑点显著增加而代表自噬溶酶体的红色荧光斑点显著降低,HMC3发生自噬流阻断;Western blotting结果显示Tp可活化PI3K/Akt/mTOR信号通路;用TLR2、PI3K、Akt、mTOR抑制剂干预处理,显著逆转Tp诱导的HMC3溶酶体标记蛋白Lamp2减少及自噬流阻断。结论:Tp通过促进TLR2表达,活化PI3K/Akt/mTOR信号通路,降低溶酶体标记蛋白Lamp2表达量,导致自噬溶酶体形成减少自噬流阻断,并伴随自噬蛋白LC3 Ⅱ呈时间、浓度依赖性增高以及自噬蛋白Beclin1和P62呈时间依赖性增高。

关键词：梅毒螺旋体溶酶体自噬流 TLR2 mTOR

梅毒螺旋体TpF-1蛋白经ERS/PI3K/AKT和ROS/NF-κB途径上调IL-6、IL-8促进内皮细胞成管

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梅毒螺旋体TpF-1蛋白经ERS/PI3K/AKT和ROS/NF-κB途径上调IL-6、I...

作者：蔡佳伦南华大学

学位级别：硕士

目的本研究以人脐静脉血管内皮细胞为靶细胞,研究梅毒螺旋体重组蛋白Tp F-1在促进血管生成中的作用,并进一步探讨ERS/PI3K/AKT和ROS/NF-κB信号通路在Tp F-1促血管生成中的作用机制,为研究梅毒螺旋体感染引起的血管生成和血管炎症奠定... 详细信息

目的本研究以人脐静脉血管内皮细胞为靶细胞,研究梅毒螺旋体重组蛋白Tp F-1在促进血管生成中的作用,并进一步探讨ERS/PI3K/AKT和ROS/NF-κB信号通路在Tp F-1促血管生成中的作用机制,为研究梅毒螺旋体感染引起的血管生成和血管炎症奠定基础。实验方法1.通过体外血管形成实验检测不同浓度TPF-1刺激内皮细胞各组细胞形成血管的能力;采用CCK-8法检测内皮细胞的增殖和存活能力;2.采用RT-q PCR实验和ELISA实验检测各组内皮细胞IL-6、IL-8的表达水平;3.采用透射电子显微镜观察细胞内内质网结构的改变,Western Blot实验检测各组细胞ERS、PI3K/AKT通路相关蛋白的表达情况;通过免疫荧光实验检测内皮细胞在Tp F-1刺激下发生核转位的情况,Western blot检测NF-κB信号通路P-65蛋白的变化;4.在加入TPF-1蛋白处理后的内皮细胞上清中加入ERS、PI3K/AKT、ROS、NF-κB抑制剂(4-PBA、GSK2656157、STF-083010、LY294002、NAC),通过Western Blot实验检测抑制剂处理组细胞通路相关蛋白的表达情况;通过流式细胞仪检测内皮细胞ROS的表达情况;通过CCK-8实验进一步观察ERS、PI3K、ROS相关抑制剂的加入是否会对TPF-1刺激后的HUVEC细胞活性产生影响;5.通过Transwell实验和内皮细胞成管实验观察ERS、PI3K/AKT、ROS相关抑制剂的加入是否会对Tp F-1处理后的HUVEC成管能力和迁移能力产生影响。结果*** F-1刺激HUVEC浓度分别为0、1.5、3、6、12(μg/m L),刺激18h后发现Tp F-1刺激浓度为6(μg/m L)时开始促进HUVEC的血管生成,而在Tp F-1的浓度达到12(μg/m L)时诱导血管生成的现象最明显;CCK-8结果显示随着Tp F-1蛋白浓度的增加,HUVEC的细胞活性也逐渐增高,且具有统计学意义;2.不同浓度的Tp F-1刺激HUVEC后细胞因子IL-6、IL-8的表达量以剂量依赖性方式增加,而VEGF的表达量改变不显著;3.通过透射电子显微镜观察发现,加入Tp F-1刺激组的细胞内质网结构明显肿胀且内质网结构发生断裂,Western Blot结果也显示Tp F-1刺激HUVEC后内质网应激相关蛋白明显上调,且具有剂量依赖性;4.通过加入ERS、PI3K/AKT抑制剂(4-PBA、GSK2656157、STF-083010、LY294002)后观察到ERS和PI3K通路相关蛋白得到了明显的抑制作用且ERS通路可抑制下游PI3K/AKT通路相关蛋白的表达,且均抑制了IL-6、IL-8的表达;5.通过体外成管实验显示,加入ERS和NAC抑制剂后血管生成能力明显降低;***-8结果显示与未加抑制剂的细胞相比,加入ERS、ROS、PI3K抑制剂处理后的细胞细胞活性明显降低,但相对于PBS处理组细胞的活性变化无统计学意义;7.免疫荧光结果显示TpF-1蛋白处理后的细胞发生了核转位的情况,且Western Blot结果显示NF-κB相关蛋白,相较未加蛋白刺激组表达明显增高。结论*** F-1可以促进内皮细胞分泌IL-6、IL-8诱导血管生成。*** F-1可通过ERS/PI3K/AKT途径促进内皮细胞管形成。*** F-1可通过和ROS/NF-κB途径诱导内皮细胞管形成。

关键词：血管生成梅毒螺旋体 TpF-1 内质网应激氧化应激

梅毒螺旋体诱导MMP/TIMP失衡促进单核细胞迁移和侵袭

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梅毒螺旋体诱导MMP/TIMP失衡促进单核细胞迁移和侵袭

作者：林淑雯厦门大学

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目的:梅毒螺旋体（Treponema pallidum,***）作为一种微生物,侵染人体后引起的长期、多脏器病变称为梅毒,其发病机制尚不明晰。在梅毒患者的皮损中,单核细胞的浸润有助于梅毒螺旋体的清除。细胞外基质是细胞的支架,免疫细胞（尤其是单... 详细信息

目的:梅毒螺旋体（Treponema pallidum,***）作为一种微生物,侵染人体后引起的长期、多脏器病变称为梅毒,其发病机制尚不明晰。在梅毒患者的皮损中,单核细胞的浸润有助于梅毒螺旋体的清除。细胞外基质是细胞的支架,免疫细胞（尤其是单核细胞）向炎症部位的趋化受到包括基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）在内等众多因素的影响;组织金属蛋白酶抑制物（Tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs）也参与其中。本研究探讨 ***通过诱导急性人白血病单核细胞（THP-1）分泌MMPs和TIMPs,影响MMP/TIMP平衡的分子机制,阐明***诱导MMP/TIMP失衡是促进单核细胞迁移和侵袭的重要因素。方法:以THP-1细胞作为研究对象,首先用感染复数（Multiplicity of infection,MOI）为100的***刺激THP-1细胞24小时后,蛋白芯片检测上清MMPs和TIMPs的表达情况。其次,以不同浓度***（MOI分别为25、50、75和100）和多个时间段（0、6、12、24、36 和 48 小时）***（MOI 100）刺激 THP-1 细胞,RT-PCR 检测 MMP-1、MMP-9、TIMP-1 及 TIMP-2 基因转录水平的改变,ELISA用于检测上清蛋白浓度。细胞体系上清MMP-1、MMP-9、TIMP-1 及 TIMP-2 的蛋白含量用于计算 MMP-1/TIMP-1、MMP-1/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1以及MMP-9/TIMP-2的比值,判断MMP/TIMP平衡情况。此外,Western blot和免疫荧光染色用于检测信号通路活化情况,有丝分裂原激活蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路抑制物（10 μmol/L U0126、10 μmol/L PD98059、20 μmol/L SP600125 和 10 μmol/L SB203580）用于探究 ***活化THP-1细胞MAPK信号通路对MMP/TIMP平衡的影响;核因子κB（Nuclear factor κB,NF-κB）信号抑制物（10 μmol/L BAY 11-7082 和 100 μmol/L PDTC）用于探究***活化THP-1细胞NF-κB信号通路对MMP/TIMP平衡的影响。最后,体外细胞迁移和侵袭试验用于探究***诱导MMP/TIMP失衡对THP-1细胞迁移和侵袭的影响。结果:***（MOI 100）刺激THP-1细胞后培养体系上清中MMP-1、MMP-9、TIMP-1以及TIMP-2蛋白有表达,随着***浓度增高,THP-1细胞表达的MMP-1、MMP-9 mRNA随之增高,同时分泌到上清的蛋白也明显增加。***（MOI 100）刺激 THP-1 细胞后 MMP-1、MMP-9、TIMP-1 的蛋白分泌水平随时间持续增高,在48小时达到最高;而TIMP-2蛋白的表达随时间不断降低,48小时到达最低。***刺激细胞后,细胞培养体系上清中MMP-l/TIMP-1、MMP-1/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1 以及 MMP-9/TIMP-2 的比值明显增大。Western blot和免疫荧光染色结果发现***能通过活化THP-1细胞MAPK和NF-κB信号通路,改变MMP-1、MMP-9以及TIMP-1蛋白的分泌量,进而改变细胞体系上清中MMP/TIMP的平衡。THP-1细胞受不同浓度***刺激后的上清能显著增加迁移和侵袭的THP-1细胞数,MAPK和NF-κB信号通路抑制剂作用后能明显抑制THP-1细胞迁移和侵袭的细胞数。结论:***通过活化THP-1细胞MAPK和NF-κB信号通路改变MMP-1、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的分泌量,细胞体系上清中MMP-1/TIMP-1、MMP-1/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1 以及 MMP-9/TIMP-2 的比值增加导致MMP/TIMP失衡,促进了 THP-1细胞迁移和侵袭。

关键词：梅毒螺旋体单核细胞基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制剂迁移侵袭