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中华微生物学和免疫学杂志 1991年第2期11卷 125-127页

作者：陆学东 Dett.,G

梅毒螺旋体Tp0751重组蛋白诱导人单核细胞表达前炎症细胞因子的研究

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中国科学（C辑） 2010年第1期40卷 48-54页

作者：刘双全汪世平吴移谋赵飞骏曾铁兵张跃军张秋桂高冬梅中南大学湘雅医学院寄生虫系长沙410078 南华大学附属第一医院检验科衡阳421001 南华大学病原生物学研究所衡阳421001

炎症和持续的获得性免疫应答被认为是造成梅毒螺旋体感染后机体病理损伤的主要原因.Tp膜蛋白是介导炎症反应的主要成分,可能为Tp的主要致病因子.因此对Tp膜蛋白的研究是认识其对宿主的致病性和进行致病机制研究的关键.目前国内外类似研... 详细信息

炎症和持续的获得性免疫应答被认为是造成梅毒螺旋体感染后机体病理损伤的主要原因.Tp膜蛋白是介导炎症反应的主要成分,可能为Tp的主要致病因子.因此对Tp膜蛋白的研究是认识其对宿主的致病性和进行致病机制研究的关键.目前国内外类似研究甚少.因此有必要进行Tp膜蛋白的致病性研究.本研究旨在探讨Tp0751重组蛋白潜在的前炎症活性.结果表明,Tp0751重组蛋白可以时间和剂量依赖方式诱导THP-1细胞表达CKs(IL-1β,TNF-α和IL-6).进一步研究表明,Tp0751重组蛋白可以激活NF-κB的表达;TLR2抗体、CD14抗体、MAPKs/p38特异性抑制剂SB203580和NF-κB抑制剂PDTC均可明显抑制NF-κB的激活和CKs的表达.初步结果证实,Tp0751重组蛋白可通过TLR2和CD14途径激活MAPKs/p38和NF-κB诱导THP-1表达CKs,其可能是Tp的一个重要的致病因子.

关键词：梅毒螺旋体 Tp0751 核因子κB 前炎症细胞因子

梅毒螺旋体硫氧还蛋白的原核表达、纯化及抗氧化活性分析

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基因组学与应用生物学 2018年第1期37卷 280-285页

作者：李冉辉杨杰陈飞胡楚晖赵飞骏南华大学病原生物学研究所特殊病原体放空湖南省重点实验室衡阳421001 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心衡阳421001 南华大学医学院卓越医师班衡阳421001

本研究利用生物信息学方法预测梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）Trx蛋白的生物学性质。Trx蛋白无信号肽,定位在细胞质。二级结构无规卷曲占41.9%,β片层为55%,使用枯草芽胞杆菌Trx蛋白结构（PDB：2gzz.1.A）进行同源建模,获得Trx蛋... 详细信息

本研究利用生物信息学方法预测梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）Trx蛋白的生物学性质。Trx蛋白无信号肽,定位在细胞质。二级结构无规卷曲占41.9%,β片层为55%,使用枯草芽胞杆菌Trx蛋白结构（PDB：2gzz.1.A）进行同源建模,获得Trx蛋白三级结构。根据TpTrx基因序列设计引物,以TpDNA为模板,PCR扩增得到大小为318 bp的Trx基因,然后将其连接到pET30a构建重组质粒pET30-Trx,将该重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,得到重组菌大肠杆菌。利用IPTG诱导目的蛋白表达,该质粒编码的重组Trx蛋白分子量约为16 kDa。使用Ni^（2＋）亲和层析纯化获得重组Trx蛋白,发现Trx蛋白具有二硫键还原酶活性。利用菌落计数法观察重组大肠杆菌在H_2O_2胁迫下的存活率,发现能表达Trx蛋白的大肠杆菌存活率高于对照。本研究利用生物信息学方法分析了TpTrx蛋白的性质,并发现它具有抗氧化功能,本研究为解析Tp的抗氧化机制提供实验依据。

关键词：梅毒螺旋体生物信息学硫氧还蛋白基因克隆

梅毒螺旋体TprF蛋白B细胞表位的预测与鉴定

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中国人兽共患病学报 2015年第10期31卷 919-922页

作者：曹龙古凌晖蔡恒玲赵飞骏欧阳丹明陈苏芳吴移谋曾铁兵南华大学医学院病原生物学研究所衡阳421001 湘南学院预防医学与医学检验系郴州423000 南华大学医学院肿瘤研究所衡阳421001

目的预测和鉴定梅毒螺旋体(Tp)膜蛋白TprF氨基端保守区(TprFN)的优势B细胞表位,为深入研究梅毒多价表位疫苗提供依据。方法从GenBank获取TprFN的氨基酸序列,采用Mobyle、ABCpred和IEDB在线软件综合分析预测TprFN的B细胞表位并人工合成多... 详细信息

目的预测和鉴定梅毒螺旋体(Tp)膜蛋白TprF氨基端保守区(TprFN)的优势B细胞表位,为深入研究梅毒多价表位疫苗提供依据。方法从GenBank获取TprFN的氨基酸序列,采用Mobyle、ABCpred和IEDB在线软件综合分析预测TprFN的B细胞表位并人工合成多肽;表达重组蛋白TprFN并经Western blot鉴定后免疫兔,获取血清并测定抗体效价;以TprFN免疫兔血清、梅毒患者血清(设正常人血清和正常兔血清为阴性对照),间接ELISA测定预测的7条人工合成的B细胞表位多肽的免疫反应性和特异性。结果软件综合预测TprFN的P1(43-62AA)、P2(57-71AA)、P3(81-88AA)、P4(89-103AA)、P5(125-138AA)、P6(231-251AA)、P7(268-279AA)可能为B细胞表位;表达一可溶性蛋白,WB鉴定为目的蛋白,其免疫抗体效价为1∶12 800以上;ELISA结果显示,预测表位P1、P3与TprFN免疫兔血清及梅毒患者血清均呈阳性反应,而与对照血清均不反应。结论 P1、P3为TprF潜在的优势B细胞表位。

关键词：梅毒螺旋体 TpF B细胞表位

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梅毒螺旋体黏附素的研究进展

中国病原生物学杂志 2021年第7期16卷 859-862,865页

作者：曾铁兵陈德军何宇星徐青峰赵飞骏万佳尹浩泉曹龙古南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001 南岳生物制药有限公司南华大学衡阳医学院湘南学院医学影像与检验学院

梅毒是梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)感染所致的一种多阶段慢性性传播疾病。Tp外膜蛋白十分稀少,外膜缺乏内毒素,也不产生明显的毒力因子,但具有强大的组织侵袭力,这种侵袭力与其菌体表层的黏附素密切相关。黏附素不但介导Tp菌体... 详细信息

梅毒是梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)感染所致的一种多阶段慢性性传播疾病。Tp外膜蛋白十分稀少,外膜缺乏内毒素,也不产生明显的毒力因子,但具有强大的组织侵袭力,这种侵袭力与其菌体表层的黏附素密切相关。黏附素不但介导Tp菌体对组织细胞和(或)细胞外基质(ECM)的黏附,参与Tp的侵入和定植,某些黏附素还具有降解ECM成分的蛋白酶活性,有助于Tp向远端组织器官播散。Tp黏附素大多为膜脂蛋白,免疫原性强,有潜在的免疫诊断价值。此外,抗黏附感染是梅毒疫苗研发的主要方向之一。本文对已发现的重要Tp黏附素的结构、致病作用、免疫保护性和潜在诊断价值方面的研究进行了综述。

关键词：梅毒螺旋体黏附素致病性疫苗血清学诊断综述

梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达、纯化及其在临床诊断中的初步应用

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临床检验杂志 2009年第4期27卷 252-255页

作者：肖勇健伍宁刘双全赵飞俊吴移谋南华大学附属第二医院检验科湖南衡阳421001 南华大学病原生物学研究所湖南衡阳421001 南华大学附属第一医院检验科湖南衡阳421001

目的克隆、表达及纯化梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp 0319,并建立间接ELISA方法,探讨其在梅毒血清学诊断中的价值。方法构建重组质粒PQE32/Tp 0319,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和western blot鉴定表达结果;Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,间接ELIS... 详细信息

目的克隆、表达及纯化梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp 0319,并建立间接ELISA方法,探讨其在梅毒血清学诊断中的价值。方法构建重组质粒PQE32/Tp 0319,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和western blot鉴定表达结果;Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,间接ELISA检测梅毒患者血清中特异性IgG抗体。结果成功构建了PQE32/Tp 0319重组质粒;经SDS-PAGE检测,诱导产物显示有一条相对分子质量约为30 000的特异蛋白质条带,western blot分析证明其只与人抗Tp IgG发生特异性反应;将Tp 0139用于间接ELISA检测抗Tp抗体阴、阳性参比血清,特异性和敏感性均为100%;检测梅毒患者和健康献血者血清各150份,结果与TPPA法符合率为95.3%。结论制备的Tp 0319重组蛋白有较好的免疫反应性,可望用于临床梅毒血清学诊断。

关键词：梅毒螺旋体重组蛋白血清学试验间接ELISA

梅毒螺旋体37000内鞭毛蛋白基因的扩增、克隆及鉴定

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中华皮肤科杂志 2000年第3期33卷 177-178页

作者：熊礼宽周华宁波深圳市慢性病防治院性病防治中心广东518020 中山医科大学免疫教研室

多数细菌的鞭毛是由单一多肽组成的多聚体,但与此相反,梅毒螺旋体(TP)的内鞭毛不在菌体表面,是由多肽排列于外鞘和中央核内,TP鞭毛的特殊解剖位置,使其不应是完整菌体最先识别的抗原,而事实则相反,鞭毛蛋白是人类感染TP后最先产生IgM和... 详细信息

多数细菌的鞭毛是由单一多肽组成的多聚体,但与此相反,梅毒螺旋体(TP)的内鞭毛不在菌体表面,是由多肽排列于外鞘和中央核内,TP鞭毛的特殊解剖位置,使其不应是完整菌体最先识别的抗原,而事实则相反,鞭毛蛋白是人类感染TP后最先产生IgM和IgG抗体的抗原,可能是因其可借助于某种方式穿过外膜,暴露于菌体表面 [1].尽管该基因序列已清楚,但尚未在大肠杆菌中成功表达 [2].37000鞭毛蛋白抗原有很强的免疫原性,家兔感染1周内即可产生特异性抗体.因此,检测37000鞭毛蛋白抗体临床上可能颇有实用价值,但如何获得大量的抗原,首先必需成功克隆,然后进行高效表达.

关键词：梅毒梅毒螺旋体鞭毛蛋白基因克隆基因扩增

梅毒螺旋体粘附于人脑微血管内皮细胞的实验研究

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中华皮肤科杂志 2015年第11期48卷 770-773页

作者：吴凡张瑞丽张津萍王千秋中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所性病临床防治室南京210042 中国医学科学院北京协和医学院性病科南京210042 无锡市第二人民医院皮肤科

目的观察梅毒螺旋体对人脑微血管内皮细胞（HBMEC）的粘附。方法将HBMEC接种于24孔板玻片中，加入1.6 × 10^7条/ml的梅毒螺旋体悬液混合培养，分别于培养0.5、2、4 h，运用扫描电镜检查梅毒螺旋体与HBMEC的粘附方式；加不同密度（4 ... 详细信息

目的观察梅毒螺旋体对人脑微血管内皮细胞（HBMEC）的粘附。方法将HBMEC接种于24孔板玻片中，加入1.6 × 10^7条/ml的梅毒螺旋体悬液混合培养，分别于培养0.5、2、4 h，运用扫描电镜检查梅毒螺旋体与HBMEC的粘附方式；加不同密度（4 × 10^6条/ml、8 × 10^6条/ml、1.6 × 10^7/条ml）梅毒螺旋体悬液混合培养，于不同的时间点（2、4、6、16 h）运用暗视野显微镜检查计数单个HBMEC上粘附的梅毒螺旋体数量。采用重复测量资料的方差分析对实验数据进行分析。结果扫描电镜结果显示，梅毒螺旋体与HBMEC粘附时表现为集中粘附于HBMEC膜表面的某一区域，且在粘附的部位两者发生部分融合。加入不同浓度的梅毒螺旋体悬液与HBMEC混合培养后，不同时间点细胞上粘附的梅毒螺旋体数目差异有统计学意义（F = 387.72，P 〈 0.001），单个细胞上的梅毒螺旋体数量随着混合培养时间的延长而逐渐增多，6 h时达到高峰，然后呈下降趋势，在16 h时为最低。在各观察时间点，不同密度组细胞上粘附的梅毒螺旋体数目差异也有统计学意义（F = 593.23，P 〈 0.001），时间与密度存在交互作用（F = 98.74，P 〈 0.001）。结论梅毒螺旋体可以粘附于体外培养的HBMEC，部分梅毒螺旋体可能通过末端与HBMEC膜溶解粘附于细胞表面。

关键词：脑微血管内皮细胞梅毒螺旋体粘附实验研究混合培养螺旋体数重复测量资料扫描电镜

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梅毒螺旋体基因序列及其意义

中华皮肤科杂志 2004年第10期37卷 618-620页

作者：吴勤学王洪生王群中国医学科院中国协和医科大学皮肤病研究所南京2100042 广东省人民医院皮肤科

长期以来,梅毒的病原体--苍白螺旋体(Treponema pallidum,TP)由于在体外不能人工培养,故在实验室难以对其进行研究.迄今尚无最好的诊断、鉴别诊断方法以及征服该病的疫苗.现代基因研究将最终揭示它的秘密,为研究征服梅毒的方法打下基础.... 详细信息

长期以来,梅毒的病原体--苍白螺旋体(Treponema pallidum,TP)由于在体外不能人工培养,故在实验室难以对其进行研究.迄今尚无最好的诊断、鉴别诊断方法以及征服该病的疫苗.现代基因研究将最终揭示它的秘密,为研究征服梅毒的方法打下基础.Norris等揭示了梅毒螺旋体基因序列,现将Norris等当代基因研究的结果和相关材料做扼要介绍[1]。

关键词：梅毒螺旋体基因序列诊断苍白螺旋体基因研究体外病原体人工培养

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梅毒螺旋体的巢式PCR检测与基因分型

中华皮肤科杂志 2005年第9期38卷 546-548页

作者：郑和平欧志英胡玉山黄进梅李美玲吴兴中曾维英潘慧清广东省皮肤性病防治中心广州510500 中山大学医学院

目的探讨广州地区梅毒螺旋体基因型分布,确定其分子流行病学特点。方法收集2002-2004年间连续就诊的疑似梅毒患者的生殖器溃疡标本,用暗视野显微镜和巢式PCR检测梅毒螺旋体,阳性者进行巢式PCR扩增酸性重复蛋白基因(arp)和苍白螺旋体重... 详细信息

目的探讨广州地区梅毒螺旋体基因型分布,确定其分子流行病学特点。方法收集2002-2004年间连续就诊的疑似梅毒患者的生殖器溃疡标本,用暗视野显微镜和巢式PCR检测梅毒螺旋体,阳性者进行巢式PCR扩增酸性重复蛋白基因(arp)和苍白螺旋体重复基因族(tpr),凝胶电泳分析arp基因重复序列个数和tpr基因的MseⅠ酶切片段多态性。根据Pillay标准基因分型。结果共检测62例疑似硬下疳病例,33例(53．2％)暗视野镜检发现梅毒螺旋体；54例PCR检测阳性,阳性率为87.1％。47例arp基因分型以14型为主(36例占76.6％),49例tpr基因分型以d型为主(39例占79.6％),47例双重基因分型发现7个基因型,依次为14 d 31例占66.0％,13 d 5例占10.6％,14 b 4例占8.5％,12 b 3例占6.4％,12 d 2例占4.3％。15 d和14 i各1例占2.2％。结论巢式PCR法检测梅毒螺旋体具有较高的敏感性,广州地区梅毒螺旋体基因型以14 d型为优势型。梅毒的早期诊断和基因分型对于梅毒的防治有重要意义。

关键词：梅毒密螺旋体苍白基因型巢式PCR检测梅毒螺旋体基因分型暗视野显微镜基因型分布巢式PCR扩增