检索结果-南通市图书馆

SARS冠状病毒核衣壳(N)蛋白不同区域的原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2005年第2期21卷 81-87页

作者：林鉴葛胜祥王颖彬罗文新吴婷李少伟程通张军夏宁邵福建省医学分子病毒学研究中心

利用大肠杆菌表达系统对SARS冠状病毒的核衣壳(N)蛋白全长及N末端或/和C末端缺失突变体进行了表达,共表达了39个重组蛋白,表达量在15%～30%之间。分别利用电洗脱或金属鳌合介质纯化重组蛋白,用蛋白印迹实验检测纯化蛋白对SARS病人恢复... 详细信息

利用大肠杆菌表达系统对SARS冠状病毒的核衣壳(N)蛋白全长及N末端或/和C末端缺失突变体进行了表达,共表达了39个重组蛋白,表达量在15%～30%之间。分别利用电洗脱或金属鳌合介质纯化重组蛋白,用蛋白印迹实验检测纯化蛋白对SARS病人恢复期血清的反应性,结果发现全长N蛋白活性最好,其余的末端缺失蛋白均无法达到同一活性水平。由此说明N蛋白的完整性对于其优势表位的充分暴露是必要的。

关键词：重组蛋白 SARS冠状病毒 SARS病人 N蛋白表位实验检测恢复期核衣壳利用缺失突变体

猪传染性胃肠炎病毒核衣壳N蛋白基因的克隆与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科技 2002年第1期32卷 8-11页

作者：唐丽杰师东方李一经王荣军东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

根据文献已发表的猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)cDNA基因序列 ,设计和合成 1对引物 ,以TGEVTH 98强毒株基因组mRNA为模板 ,通过RTPCR技术扩增其N基因 ;将RTPCR产物按正确的阅读框架 (ORF)定向克隆到载体pProEXHTb上 ,重组质粒PHN转化进大... 详细信息

根据文献已发表的猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)cDNA基因序列 ,设计和合成 1对引物 ,以TGEVTH 98强毒株基因组mRNA为模板 ,通过RTPCR技术扩增其N基因 ;将RTPCR产物按正确的阅读框架 (ORF)定向克隆到载体pProEXHTb上 ,重组质粒PHN转化进大肠埃希氏菌DH5α株 ,通过酶切分析及序列测定表明已成功获得了TGEVN基因的无性繁殖体系。TH 98强毒株的N基因与Purdue 115株、FS772 / 70株、TO14株、96193 3株及TFⅠ株的核苷酸序列的同源性分别为 99%、97%、97%、95 %和 96% ,氨基酸序列的同源性分别为 99%、97%、98%、96%和 97%。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 N基因克隆鉴定核衣壳

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

一种简便提纯白斑综合症病毒核衣壳的方法

中山大学学报（自然科学版） 2002年第2期41卷 123-124页

作者：李方苗素英王莉贞何建国中山大学生命科学学院∥生物防治国家重点实验室广东广州510275

通过人工感染 ,获得具典型白斑综合症的病虾 ,取病虾的鳃和胃组织冰浴匀浆 ,通过 3次冷冻差速离心 ,获得大量较纯的病毒核衣壳 ,其大小为 (5 8～ 75 )nm× (36 0～ 42 0 )nm。

关键词：白斑综合症病毒核衣壳提纯方法虾病毒冷冻差速离心人工感染对虾养殖

猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2002年第6期33卷 611-614页

作者：唐丽杰李一经贾永清王君伟刘宝全东北农业大学动物医学院哈尔滨150030

以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 ... 详细信息

以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,PHN基因融合蛋白获得了表达 ;经SDS -PAGE ,Western blot试验 ,确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的 47kD。试验结果证明。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒核衣壳克隆蛋白基因基因表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

水痘一带状疱疹病毒分离株核衣壳的形态特征

中国病毒学 1993年第1期8卷 39-44页

作者：王志玉王桂亭韩世杰王少军宋伟涛谢慰杖山东医科大学病毒研究室济南250012 山东省卫生防疫站电镜室济南250014

本文用超薄切片电镜技术对水痘一带状疱疹病毒(VZV)分离株J_1的核衣壳进行了形态学研究。结果表明,在病毒感染后5小时即可观察到细胞核内大量的病毒核心相关颗粒和少量核衣壳。在细胞核内和细胞浆内均可见到病毒基质或毒浆结构。VZVJ_1... 详细信息

本文用超薄切片电镜技术对水痘一带状疱疹病毒(VZV)分离株J_1的核衣壳进行了形态学研究。结果表明,在病毒感染后5小时即可观察到细胞核内大量的病毒核心相关颗粒和少量核衣壳。在细胞核内和细胞浆内均可见到病毒基质或毒浆结构。VZVJ_1株具有三种类型的核衣壳,命名为A型、B型、C型核衣壳。A型具有电子致密核心,B型的核心呈颗粒状,C型具有电子透明核心。三种核衣壳大小一致,直径75—100nm,核心为35—55nm。将VZV的核衣壳与疱疹病毒科其它成员作了比较分析,并对各种核衣壳在病毒成熟过程中的作用进行了探讨。

关键词：水痘-带状疱疹病毒核衣壳形态学

正番茄斑萎病毒属病毒微型复制子体系构建及核衣壳N蛋白寄主互作因子功能探析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

正番茄斑萎病毒属病毒微型复制子体系构建及核衣壳N蛋白寄主互作...

作者：陈明龙南京农业大学

学位级别：硕士

正番茄斑萎病毒属（Orthotospovirus）病毒寄主范围广,在经济作物、园艺作物上造成严重的危害,其代表种番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）被列为国际上危害最严重的十大植物病毒之一。正番茄斑萎病毒属病毒有30多种病毒,... 详细信息

正番茄斑萎病毒属（Orthotospovirus）病毒寄主范围广,在经济作物、园艺作物上造成严重的危害,其代表种番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）被列为国际上危害最严重的十大植物病毒之一。正番茄斑萎病毒属病毒有30多种病毒,依据病毒核衣壳（Nucleocapsid,N）的氨基酸序列同源性和病毒地理分布的不同,该属病毒进一步被分为美洲型和欧亚型两个分支。目前,我国报道该属中危害严重的的美洲型病毒有TSWV、凤仙花坏死斑病毒（Impatiens necrotic spot virus,INSV）,欧亚型病毒有西瓜银色斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMo V）、马蹄莲褪绿斑点病毒（Calla lily chlorotic spot virus,CCSV）、辣椒褪绿病毒（Capiscum chlorosis virus,Ca CV）和番茄环纹斑点病毒（Tomato zonate spot virus,TZSV）。反向遗传学体系的缺乏,严重限制了Orthotospovirus病毒的复制、转录、移动等机制的深入研究。实验室目前建立了美洲型病毒TSWV的反向遗传学体系,该属中的其它多种病毒的反向遗传学体系都有待进一步建立。美洲型和欧亚型病毒之间的复制酶（RNA dependent RNA polymerase,RdRp）、核衣壳N和移动蛋白NSm是否能够相互支持不同病毒类群的基因组的复制、转录和移动尚不清楚。核衣壳N与哪些寄主蛋白互作且调控病毒的侵染还有待研究。针对这些重要科学问题,本文从以下4个方面展开了研究:1.4种正番茄斑萎病毒属病毒的微型复制子反向遗传学体系构建根据病毒地理型的分布,TSWV和INSV属于美洲型分支,而WSMo V、Ca CV、TZSV和CCSV属于欧亚型分支。为了建立不同病毒类群的微型复制子体系,本研究选取TSWV和INSV作为美洲型分支的代表,选取CCSV、Ca CV、TZSV和WSMo V作为欧亚型分支的代表。实验室前期已经成功构建了TSWV微型复制子体系,在此基础上,进一步对INSV的微型复制子进行了构建。首先将复制酶RdRp的密码子和内含子进行序列优化后合成RdRp,使其在植物中成功表达。然后将美洲型病毒INSV S基因组插入植物双元表达载体p CB301,用报告基因e GFP替换N,获得微型复制子报告载体SR。SR、核衣壳N、复制酶RdRp和病毒RNA沉默抑制子（Viral suppressor of RNA silencing,VSR）共同浸润烟草,成功建立了美洲型INSV S基因组微型复制子体系。根据INSV微型复制子体系的构建策略,采用实验室已有的优化型RdRp,也成功建立了欧亚型病毒Ca CV、TZSV和WSMo V的S或M基因组微型复制子体系。2.美洲型和欧亚型Orthotospovirus编码的复制酶RdRp、核衣壳N和微型基因组复制子交互识别机制研究基于已建立的Orthotospovirus微型复制子体系,进一步探究了美洲型和欧亚型病毒核衣壳N和复制酶RdRp在支持不同类群病毒微型复制子兼容特性的问题。将属于美洲型分支的TSWV和INSV与属于欧亚型分支的Ca CV、TZSV和CCSV微型复制子以不同组合浸润本氏烟,结果表明:RdRp和N同属于美洲型或欧亚型病毒时,RdRp与N共表达可以高效支持同一分支的病毒微型复制子体系工作;RdRp和N同属于美洲型病毒TSWV或欧亚型病毒CCSV时,RdRp与N共表达可以低效支持其它分支的微型复制子体系工作。通过对不同类群的病毒微型复制子体系探究,推测不同地理型的Orthotospovirus也会发生基因重排,为该类病毒病害的防控提供了重要的理论依据。3.美洲型和欧亚型Orthotospovirus编码的移动蛋白与微型基因组复制子的交互识别和胞间移动机制研究基于现有的Orthotospovirus病毒反向遗传学体系,进一步探究了美洲型和欧亚型病毒编码的移动蛋白NSm对两大地理亚群病毒微型复制子胞间移动的调控作用,取得如下发现:TSWV、INSV、Ca CV、TZSV、CCSV为代表的负链RNA病毒编码的移动蛋白（Movement protein,MP）能够互补黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）为代表的正义链RNA病毒移动缺陷型报告体系,另一种分节段的植物负链RNA病毒—水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）编码的MP,也能互补CMV移动缺陷型报告体系,表明上述MPs均能支持CMV发生胞间运动;Orthotospovirus编码的NSm均可促进TSWV或CCSV微型复制子报告基因e GFP的胞间移动,且移动效率与属内病毒

关键词：正番茄斑萎病毒属核衣壳复制酶移动蛋白病毒-植物互作

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

一种乙肝病毒类核衣壳快速检测体系

一种乙肝病毒类核衣壳快速检测体系

作者：李治颖重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:以乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核衣壳为靶点的药物筛选,目前尚缺乏简便有效的筛选细胞模型。直接检测核衣壳的方法中相对简便可靠的是非变性琼脂糖凝胶电泳(Native agarose gel electrophoresis,NAGE)。对于药物筛选而言,... 详细信息

目的:以乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核衣壳为靶点的药物筛选,目前尚缺乏简便有效的筛选细胞模型。直接检测核衣壳的方法中相对简便可靠的是非变性琼脂糖凝胶电泳(Native agarose gel electrophoresis,NAGE)。对于药物筛选而言,NAGE存在通量低和操作繁琐的问题。针对这些问题,设计构建一种新的类核衣壳快速检测体系。方法:将近红外荧光蛋白(Near-Infrared fluorescent protein,NIRFP)通过长的柔性接头融合到乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus core protein,HBc)上,转染细胞并检测红外荧光蛋白表达以及类核衣壳结构形成情况;制备重组慢病毒,构建四环素调控转录因子稳定表达细胞系293tTA,并以此细胞为基础,构建miRFP709-HBc稳定表达细胞系并筛选单克隆;用已知具有抑制HBV核衣壳形成的药物Bay 41-4109和Arbidol处理细胞,检测类核衣壳的变化,以测试该细胞模型用于药物筛选的可行性。结果:(1)两种近红外荧光蛋白与HBc融合表达时,miRFP709-HBc的信号强度显著高于IMRFP-HBc,且miRFP709-HBc能形成可被检测到的类核衣壳结构。(2)成功构建了四环素调控转录因子稳定表达细胞系293tTA,并以此为基础成功构建了四环素调控表达的miRFP709-HBc稳定细胞系293miRFP709-HBc。(3)Bay 41-4109和Arbidol处理293miRFP709-HBc细胞后,均能检测到类核衣壳结构的剂量依赖性变化。结论:成功构建了一种新的乙肝病毒类核衣壳检测体系,本体系较传统方法节省时间20h,完全省去转印和免疫杂交步骤,且无需任何抗体及转印、杂交相关试剂,适于作为靶向HBV核衣壳形成药物的第二轮筛选模型。本系统还可作为一种独立的筛选模型,直接用于筛选干扰核衣壳形成的化合物。由于其直观性,除了可以筛选那些导致核衣壳形成量变化的化合物以外,还可以筛选仅导致核衣壳构型改变(迁移速率改变)的化合物。

关键词：乙肝病毒核心蛋白核衣壳近红外荧光蛋白检测方法

以乙肝病毒核衣壳为靶标的二氢嘧啶类化合物及其作用机制研究进展

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药物化学杂志 2013年第6期23卷 493-498页

作者：杨秀岩赵国明李松沈阳药科大学制药工程学院辽宁沈阳110016 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

核衣壳是乙肝病毒(HBV)的核心结构,在HBV复制感染中起到了重要作用。以核衣壳为靶标的二氢嘧啶类化合物(HAPs)是一类全新结构的高活性HBV抑制剂,有望成为一种新型的乙型肝炎治疗药物。本文就HAPs类化合物的结构特点及其抗乙肝作用机制... 详细信息

核衣壳是乙肝病毒(HBV)的核心结构,在HBV复制感染中起到了重要作用。以核衣壳为靶标的二氢嘧啶类化合物(HAPs)是一类全新结构的高活性HBV抑制剂,有望成为一种新型的乙型肝炎治疗药物。本文就HAPs类化合物的结构特点及其抗乙肝作用机制的研究进展进行综述。

关键词：乙型肝炎病毒杂环二氢嘧啶类化合物核衣壳作用机制

以核衣壳为靶点的抗乙型肝炎病毒药物研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

国外医学（药学分册） 2006年第6期33卷 432-435页

作者：赵国明夏广强朱学军王莉莉李松军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致肝癌和肝硬化的主要原因,HBV的流行严重危害人民健康,对社会经济发展具有不容忽视的制约作用。目前用于治疗HBV感染的药物主要为干扰素和核苷类DNA聚合酶抑制剂,但干扰素的低应答率,核苷类药物的耐药性及停... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致肝癌和肝硬化的主要原因,HBV的流行严重危害人民健康,对社会经济发展具有不容忽视的制约作用。目前用于治疗HBV感染的药物主要为干扰素和核苷类DNA聚合酶抑制剂,但干扰素的低应答率,核苷类药物的耐药性及停药后反弹的问题一直没有得到很好的解决。因此,寻找具有新作用机制的抗HBV药物一直受到人们的重视。本文对以核衣壳为靶点的新型抗HBV药物的研究进行了综述,这种新作用机制药物的发现对于延缓甚至阻止耐药病毒株的出现具有特殊的意义。

关键词：乙型肝炎病毒核衣壳抗乙型肝炎病毒药物