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新丰毒蛋白——一种新的具有活性小A链的核糖体失活蛋白(英文)

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生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 531-532页

作者：侯法健刘仁水刘望夷中国科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

辛纳毒蛋白是从香樟种子中分离的一种Ⅱ核糖体失活蛋白 .最近 ,从香樟种子中还分离到另一种微型双链核糖体失活蛋白 ,命名为新丰毒蛋白 .还原的新丰毒蛋白表现出与还原的辛纳毒蛋白同样的RNAN 糖苷酶和体外对抑制蛋白质翻译的活力 .新... 详细信息

辛纳毒蛋白是从香樟种子中分离的一种Ⅱ核糖体失活蛋白 .最近 ,从香樟种子中还分离到另一种微型双链核糖体失活蛋白 ,命名为新丰毒蛋白 .还原的新丰毒蛋白表现出与还原的辛纳毒蛋白同样的RNAN 糖苷酶和体外对抑制蛋白质翻译的活力 .新丰毒蛋白的B链与辛纳毒蛋白的B链具有同样的分子质量和相同的N端 10个氨基酸序列 .它的A链N端 10个氨基酸序列也与辛纳毒蛋白的A链完全一致 ,并且C端与辛纳毒蛋白的A链一样具有半胱氨酸 ,但是它的分子质量却只有辛纳毒蛋白A链的一半 .RT PCR和RNA印迹结果表明体内不存在新丰毒蛋白的mRNA .推测新丰毒蛋白是从辛纳毒蛋白通过蛋白质剪接而产生的。

关键词：新丰毒蛋白活性小A链核糖体失活蛋白蛋白质剪接

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单链核糖体失活蛋白的核糖核酸酶活性

生物化学与生物物理进展 1996年第5期23卷 453-456页

作者：陈红华陵王悦颜茂恭董贻诚余明琨姚启智中国科学院生物物理研究所中国科学技术大学研究生院

以芹菜４．５ＳＲＮＡ为底物，在ｐＨ５．０的条件下，５种纯核糖体失活蛋白：天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白均显示出核糖核酸酶活性，放射自显影图显示出它们对ＲＮＡ分子中的各种碱基具有不同的... 详细信息

以芹菜４．５ＳＲＮＡ为底物，在ｐＨ５．０的条件下，５种纯核糖体失活蛋白：天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白均显示出核糖核酸酶活性，放射自显影图显示出它们对ＲＮＡ分子中的各种碱基具有不同的敏感性．

关键词：核糖体失活蛋白核糖核酸酶活性

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纳米颗粒探针检测核糖体失活蛋白

分析化学 2010年第5期38卷 627-631页

作者：全灿刘军中国计量科学研究院化学分析所

建立了纳米颗粒探针检测核糖体失活蛋白的方法。以聚苯乙烯纳米颗粒为载体并进行表面修饰,在其表面固定特异性蓖麻毒单抗并作为探针,用于蓖麻毒蛋白的检测。采用场流分离技术对纳米颗粒探针进行准确表征,并利用扫描电镜比较聚苯乙烯纳... 详细信息

建立了纳米颗粒探针检测核糖体失活蛋白的方法。以聚苯乙烯纳米颗粒为载体并进行表面修饰,在其表面固定特异性蓖麻毒单抗并作为探针,用于蓖麻毒蛋白的检测。采用场流分离技术对纳米颗粒探针进行准确表征,并利用扫描电镜比较聚苯乙烯纳米颗粒的形貌变化。结果表明:通过扫描电镜图片能够观察到聚苯乙烯纳米颗粒表面结合的蛋白,此纳米颗粒探针能够与蓖麻毒蛋白等核糖体失活蛋白的特异性结合,应用于目标蛋白的检测。

关键词：纳米颗粒探针蓖麻毒素核糖体失活蛋白场流分离扫描电镜聚苯乙烯

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侧柏籽核糖体失活蛋白的分离及作用机制研究

浙江大学学报（工学版） 2005年第3期39卷 423-426页

作者：斯越秀刘望夷钱凯先浙江大学生命科学院浙江杭州310027 中国科学院上海生化与细胞生物学研究所上海200031

提出了从裸子植物侧柏中分离纯化核糖体失活蛋白的制备和检测方法.通过盐溶液抽提、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析、阳离子交换层析等步骤制备了该蛋白.该蛋白的检测方法是把这种蛋白作用于大鼠 80S肝核糖体后, 不经过酸性苯胺处理,... 详细信息

提出了从裸子植物侧柏中分离纯化核糖体失活蛋白的制备和检测方法.通过盐溶液抽提、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析、阳离子交换层析等步骤制备了该蛋白.该蛋白的检测方法是把这种蛋白作用于大鼠 80S肝核糖体后, 不经过酸性苯胺处理,直接进行聚丙烯酰胺的尿素变性胶电泳.在电泳图上得到 400 bp左右的特征性核酸条带.分析结果表明,该蛋白为一种新的核糖酶型的核糖体失活蛋白,阐明了侧柏核糖体失活蛋白失活核糖体的分子机制.

关键词： RNA水解酶核糖体失活蛋白侧柏分离纯化

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核糖体失活蛋白及其抗病毒转基因研究

安徽农业科学 2007年第35期35卷 11416-11417,11419页

作者：徐翠莲胡文明塔里木大学植物科技学院

综述了几种常见核糖体失活蛋白在植物抗病毒基因工程中的研究,并对核糖体失活蛋白的发展前景进行了展望。

关键词：核糖体失活蛋白商陆抗病毒蛋白天花粉蛋白玉米核糖体失活蛋白抗病毒研究

核糖体失活蛋白的酶学活性及生理功能研究进展

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生物学教学 2004年第3期29卷 3-4页

作者：王小娟华东师范大学生命科学学院上海200062

核糖体失活蛋白是一类植物毒蛋白。近年来,这类蛋白的酶学活性及生理功能不断被揭示,本文对其中一些主要的酶学活性及生理功能作了概述。

关键词：核糖体失活蛋白酶学活性生理功能植物毒蛋白

核糖体失活蛋白类凝集素TBL抑制HCT116细胞增殖的研究

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核糖体失活蛋白类凝集素TBL抑制HCT116细胞增殖的研究

作者：吕彦山西大学

学位级别：硕士

凝集素是一种能与单糖或多糖可逆性结合的蛋白质或糖蛋白的总称,通常含有一个或多个非催化性结构域。它们在自然界中分布十分广泛。其中Ⅱ型核糖体失活蛋白类凝集素由A,B两条链组成,A链具有核糖体失活蛋白活性,B链具有凝集活性。核糖体... 详细信息

凝集素是一种能与单糖或多糖可逆性结合的蛋白质或糖蛋白的总称,通常含有一个或多个非催化性结构域。它们在自然界中分布十分广泛。其中Ⅱ型核糖体失活蛋白类凝集素由A,B两条链组成,A链具有核糖体失活蛋白活性,B链具有凝集活性。核糖体失活蛋白可通过专一性地水解真核生物核糖体28S rRNA第4324位上的A碱基与核糖间的N-糖苷键进而抑制蛋白的合成。课题组前期研究获得的苦荞麦凝集素(Tartary Buckwheat Lectin,TBL)属于一种Ⅱ型核糖体失活蛋白。但其生物学功能和酶学活性有待深入了解。本研究构建了一种包含A4324位点的双荧光素酶质粒psiCHECKTM-2-F28RNA,用具有N-糖苷酶(EC 3.***.2.22)活性的苦荞麦凝集素与psiCHECKTM-2-F28RNA进行体外孵育,琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示TBL可以将质粒由超螺旋型切割为缺刻型。将psiCHECKTM-2-F28RNA转染HCT116细胞,发现海肾荧光/萤火虫荧光比值也明显降低,表明构建的该质粒可以用于检测核糖体失活蛋白对细胞的毒性作用。当将psiCHECKTM-2-F28RNA中的GAGA序列分别突变后进行同样实验,确定该质粒中的GAGA为核糖体失活蛋白的识别位点。进一步构建包含GAGA特征序列的Wnt1-3’UTR区的质粒psiCHECKTM-2-Wnt1-3’UTR,实验也发现,在胞外和胞内TBL与psiCHECKTM-2-Wnt1-3’UTR都具有相互作用,表明细胞内具有GAGA序列的mRNA也可能成为核糖体失活蛋白的靶点。同时,本实验还提取了多种食源性作物中的蛋白质,分别与psiCHECKTM-2-F28RNA相互作用,结果显示该质粒能快速地检测筛选不同生物体内的核糖体失活蛋白。可用于核糖体失活蛋白的快速筛选和酶活性鉴定。为了进一步研究TBL的生物学功能,拓展其在抗肿瘤方面的应用,我们制备了TBL的多克隆抗体。通过离子交换色谱和分子筛层析等方法提取纯化及浓缩获得浓度大约为2mg/mL的目的蛋白TBL。采用纯化的TBL对大鼠进行3次免疫,30天后获得抗TBL的多克隆抗体,经过ELISA测定效价,1、2、3号大鼠血清效价达到 1:2560000(P/N>2.1),4、5 号大鼠效价达到 1:5120000(P/N>2.1),TBL 的多克隆抗体的成功制备为后续研究奠定了基础。前期通过MTT实验对TBL抑制细胞增殖作用的测定发现TBL对肠癌细胞HCT116的增殖产生十分显著的抑制效果,而对Hep G2细胞影响相对较小,对正常细胞FHC几乎没有影响。之后的研究证明,这种现象可能与Galectin-3的表达有关。Galectin-3是Galectin家族的成员之一,在肿瘤的转移浸润等生理以及病理过程中起重要作用。本研究通过免疫荧光观察发现Galectin-3在肠癌细胞HCT116中较肝癌细胞Hep G2及正常肠细胞FHC表达量高且分布于细胞膜表面。而同等条件下TBL处理上述三株细胞后,TBL能在HCT116细胞膜表面大量分布,在其他两株细胞膜分布不甚明显。Western blot分析证明,TBL与Galectin-3在细胞膜表面存在某种竞争关系,TBL通过竞争结合细胞膜表面Galectin-3识别的受体,导致细胞膜表面的Galectin-3结合量大大减少,降低了细胞的浸润性。同时,细胞膜表面受体招募了大量的TBL,使得细胞表面TBL大量聚集而增加了 TBL进入胞内的几率与浓度。依据这些实验结果,我们推测,胞质中的TBL可能通过其核糖体失活蛋白的功能,对胞内RNA进行切割破坏,导致细胞翻译过程受阻,进而引起细胞死亡。凝集素由于其特有的生物学功能性质及可能的细胞毒性,近年来已成为医药和生物学领域的研究热点,我们首次从蓼科植物苦荞麦中获得一种兼具核糖体失活蛋白活性的凝集素,对其可能的抗肿瘤活性进行了初步研究,有关TBL对RNA的切割功能及影响蛋白质的翻译,导致细胞死亡的作用方式及机理有待深入研究。

关键词：苦荞麦凝集素核糖体失活蛋白 28SrRNA GAGA特征序列 Galectin-3

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苦瓜核糖体失活蛋白生物活性与功能研究进展

食品科学 2016年第13期37卷 226-231页

作者：杨谷良李士明王书珍黄冈师范学院生命科学学院湖北黄冈438000

核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins,RIPs)是一类能够脱去真核细胞28S r RNA内SRL区域的A4342,从而破坏延伸因子与核糖体的结合,将蛋白质的生物合成抑制在延伸阶段的蛋白质家族。RIPs有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,苦瓜中已发现的α-苦瓜... 详细信息

核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins,RIPs)是一类能够脱去真核细胞28S r RNA内SRL区域的A4342,从而破坏延伸因子与核糖体的结合,将蛋白质的生物合成抑制在延伸阶段的蛋白质家族。RIPs有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,苦瓜中已发现的α-苦瓜素、β-苦瓜素、γ-苦瓜素、δ-苦瓜素、ε-苦瓜素、MAP30等,均属于Ⅰ型RIPs。这些RIPs具有抗病毒、抗菌、抗虫害、抑制肿瘤细胞生长等生物学活性,受到了人们的广泛关注。本文从RIPs的分类、生物学活性、功能与应用等方面,对苦瓜中的RIPs进行了综述。

关键词：苦瓜核糖体失活蛋白分类生物活性功能

栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白——Strichokirin的纯化和部分性质

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 495-498页

作者：邰宁文李丰李臻庄大桓张祖传中国科学院上海生物化学研究所!上海200031 中国农业科学院蚕业研究所!镇江212018

通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、SephacrylS 10 0凝胶过滤和FPLCMono S离子交换层析等步骤 ,从栝楼种子中分离到一种核糖体失活蛋白———S trichokirin ,经 15 %SDS PAGE测定分子量为 8kD左右 ,13.5 %聚丙烯酰胺凝胶酸性... 详细信息

通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、SephacrylS 10 0凝胶过滤和FPLCMono S离子交换层析等步骤 ,从栝楼种子中分离到一种核糖体失活蛋白———S trichokirin ,经 15 %SDS PAGE测定分子量为 8kD左右 ,13.5 %聚丙烯酰胺凝胶酸性电泳结果显示其等电点在 pH 9.5左右。通过对大鼠肝核糖体作用的研究 ,表明S tri chokirin属于RNAN 糖苷酶催化型的核糖体失活蛋白 ,对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 1.15× 10 -10 mol/L。

关键词：核糖体失活蛋白 Strichokirin RNA N-糖苷酶