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核桃黑斑病拮抗放线菌WMF106的筛选、鉴定及防效

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微生物学通报 2021年第10期48卷 3621-3631页

作者：瞿佳门欣陈锐孙晓宇赵玲侠宁硕瀛陕西省微生物研究所陕西西安710043 陕西省动物研究所陕西西安710032

【背景】核桃黑斑病是由2种病原菌引起的细菌性病害,目前缺乏有效的生物防治方法。【目的】从核桃树根际土壤中筛选对核桃黑斑病病原菌具有拮抗效果的放线菌菌株,为该病害生防菌剂的开发提供基础。【方法】采用稀释涂布法分离放线菌,并... 详细信息

【背景】核桃黑斑病是由2种病原菌引起的细菌性病害,目前缺乏有效的生物防治方法。【目的】从核桃树根际土壤中筛选对核桃黑斑病病原菌具有拮抗效果的放线菌菌株,为该病害生防菌剂的开发提供基础。【方法】采用稀释涂布法分离放线菌,并以病原菌野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv. campestris)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)作为指示菌,利用平板对峙法和改良牛津杯法筛选具有高拮抗活性的菌株,通过形态学特征、生理生化特性和16SrRNA基因序列分析确定其分类地位,并测定其无菌发酵液的抗菌谱和室内防效。【结果】筛选到一株对野油菜黄单胞菌和成团泛菌均有较强拮抗作用的放线菌菌株WMF106,该菌株对2种病原菌的抑菌圈直径分别为2.38 cm和1.82 cm,无菌发酵液对2种病原菌的抑菌圈直径分别为1.75 cm和1.55 cm。根据菌株形态学、生理生化特性及16SrRNA基因序列分析,将菌株WMF106鉴定为暗蓝色链霉菌(Streptomyces caeruleatus)。该菌株对尖孢镰刀菌、腐皮镰孢菌、辣椒刺盘孢菌、灰葡萄孢菌、胶孢炭疽菌5种植物病原菌及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉5种指示菌均有抑制作用,抗菌性能广谱高效,其无菌发酵液原液对离体叶片上由野油菜黄单胞菌和成团泛菌造成的核桃黑斑病防效分别为77.44%和58.33%。【结论】菌株WMF106可作为防治核桃黑斑病的生防材料,具有良好的开发价值和应用前景。

关键词：核桃黑斑病拮抗放线菌鉴定防效

核桃黑斑病拮抗放线菌WMF106发酵条件优化和抑菌物质稳定性

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微生物学通报 2022年第1期49卷 88-100页

作者：瞿佳孙晓宇陈锐门欣赵玲侠宁硕瀛陕西省微生物研究所陕西西安710043 陕西省动物研究所陕西西安710032

【背景】暗蓝色链霉菌WMF106对核桃黑斑病病原菌野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris ***)有较好的抑制作用,优化其发酵培养基与发酵条件将为核桃黑斑病生防菌剂的制备与应用提供参考。【目的】优化核桃黑斑病生防菌株WMF106的发酵条... 详细信息

【背景】暗蓝色链霉菌WMF106对核桃黑斑病病原菌野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris ***)有较好的抑制作用,优化其发酵培养基与发酵条件将为核桃黑斑病生防菌剂的制备与应用提供参考。【目的】优化核桃黑斑病生防菌株WMF106的发酵条件,测定其抑菌物质稳定性,并通过田间防效测定验证防治效果,为后期规模化发酵以及菌剂的开发奠定基础。【方法】采用单因素和正交试验优化菌株WMF106的发酵培养基和发酵条件,观察pH、温度、光照、储藏温度对抑菌物质稳定性的影响,了解抑菌物质的极性,测定发酵液的田间防效。【结果】优化的最佳培养基为酵母浸粉2.0 g/L、燕麦20.0 g/L、NaCl 0.5 g/L、K_(2)HPO_(4)0.5 g/L、Mg SO_(4)·7H_(2)O 0.5 g/L。发酵条件为起始pH 6.0、接种量8%、装液量150 mL/500 mL、发酵时间9 d、发酵温度28℃、转速180 r/min时,抑菌物质活性最强。抑菌物质耐碱但对酸性环境敏感,具有较好的热、光及储藏温度稳定性,经乙酸乙酯萃取可获得最多的抑菌物质。施药后对叶片和果实的防效分别超过65.33%和61.21%。【结论】确定了菌株WMF106的最佳发酵培养基和发酵条件,抑菌物质有较好的稳定性及田间防治效果,应用开发前景广阔。

关键词：核桃黑斑病拮抗放线菌发酵优化抑菌物质

核桃黑斑病生防链霉菌YNF36的鉴定及其抑菌活性测定

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微生物学通报 2022年第11期49卷 4727-4739页

作者：瞿佳孙晓宇赵玲侠门欣陈锐宁硕瀛陕西省微生物研究所陕西西安710043 陕西省动物研究所陕西西安710032

【背景】由野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)侵染引起的核桃黑斑病是一种严重的细菌性病害,给核桃产业带来了极大损失。【目的】从根际土壤中筛选出对核桃黑斑病病原菌野油菜黄单胞菌和成团泛菌... 详细信息

【背景】由野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)侵染引起的核桃黑斑病是一种严重的细菌性病害,给核桃产业带来了极大损失。【目的】从根际土壤中筛选出对核桃黑斑病病原菌野油菜黄单胞菌和成团泛菌均具有拮抗效果的放线菌菌株,可作为创制生防菌剂的出发菌株。【方法】采用稀释涂布法、平板对峙法和改良牛津杯法筛选拮抗菌株,通过形态学特征、生理生化特性和16SrRNA基因序列分析进行鉴定,测定无菌发酵液抗菌谱,离体叶片试验验证其对核桃黑斑病的防治效果。【结果】筛选到一株对2种病原菌均有较强拮抗作用的放线菌菌株YNF36。经形态学特征观察、生理生化特性试验及16S rRNA基因序列分析,将菌株YNF36鉴定为沙场链霉菌(Streptomyces arenae)。该菌株在SYP培养基上产量最高,抑菌活性最强,其无菌发酵液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、蜡样芽孢杆菌这7种指示菌,以及链格孢菌、黑腐皮壳菌、胶孢炭疽菌、灰葡萄孢菌、黄褐孢霉菌、辣椒刺盘孢菌、腐皮镰孢菌这7种植物病原菌均有抑制作用,抗菌谱广。发酵液原液对离体叶片上的由野油菜黄单胞菌和成团泛菌造成的核桃黑斑病防效分别为75.69%和62.39%。【结论】沙场链霉菌YNF36补充了一种防治核桃黑斑病的生防材料,具有良好的开发价值和应用前景。

关键词：核桃黑斑病拮抗放线菌筛选鉴定防效

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核桃黑斑病发生规律及防控技术研究进展

北方园艺 2021年第20期 143-149页

作者：怀婷婷刘春晓苗庆选武明雅马海林司东霞聊城大学农学院山东聊城252059 山东省林业科学研究院资源与环境研究所山东济南250014

核桃是世界上重要的坚果果树和木本油料树种,其果实具有较高的营养价值,有坚果界的"长寿果"之称。核桃黑斑病属于高度危险的林业有害生物种类,在我国核桃主要产区均有不同程度的发生,严重影响我国核桃的生长发育、产量和品质。该文将核... 详细信息

核桃是世界上重要的坚果果树和木本油料树种,其果实具有较高的营养价值,有坚果界的"长寿果"之称。核桃黑斑病属于高度危险的林业有害生物种类,在我国核桃主要产区均有不同程度的发生,严重影响我国核桃的生长发育、产量和品质。该文将核桃黑斑病的病害特征、发生规律、侵染机制和防控技术4个方面的研究进展进行归纳分析,以期为减轻核桃黑斑病危害,充分发挥核桃的经济、社会和生态效益,实现核桃产业绿色可持续发展提供参考依据。

关键词：核桃黑斑病病害特征发生规律侵染机制防治技术

核桃黑斑病病原实时荧光PCR特异性检测研究

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核桃黑斑病病原实时荧光PCR特异性检测研究

作者：谢玲四川农业大学

学位级别：硕士

核桃(Juglans regia L.)又名胡桃,合桃、羌桃等,是胡桃科(Juglandaceae)、胡桃属(Juglans L)植物,它分布广泛,是世界著名干果之一。近年来,随着核桃种植面积的增加,核桃黑斑病日益频发,影响核桃产业的健康发展。由于该病害早期症状难以... 详细信息

核桃(Juglans regia L.)又名胡桃,合桃、羌桃等,是胡桃科(Juglandaceae)、胡桃属(Juglans L)植物,它分布广泛,是世界著名干果之一。近年来,随着核桃种植面积的增加,核桃黑斑病日益频发,影响核桃产业的健康发展。由于该病害早期症状难以靠肉眼分辨,且传统形态学鉴定存在困难,因此急需建立能够在病害发生早期快速检测该病害的分子生物学诊断方法。本研究以核桃黑斑病菌Xanthomonas campestris pv.为研究对象,以其16s RNA序列为靶标,设计合成特异性引物,并建立、优化核桃黑斑病菌*** pv.实时荧光PCR特异性检测体系,为快速检测核桃黑斑病菌*** pv.提供有效的技术支持。本研究取得如下结果:1.对核桃黑斑病菌*** pv.序列进行比对,然后利用Primer5.0和Oligo6.0软件设计出核桃黑斑病菌*** pv.的特异引物:XC-F(5′-TACCCGATTGTTCTGACG-3′);XC-R(5′-ATTCCGCTACCCTCTACCAC-3′)。PCR扩增结果表明,进行温度筛选后的特异性引物XC-F/XC-R能在核桃黑斑病菌*** pv.为模板c DNA的PCR反应体系中扩增得到约为211 bp大小的单一条带,而其它供试菌株和阴性对照均无此条带。2.本研究成功建立了适合供试菌株的最佳实时荧光PCR反应体系。利用优化后的反应体系及反应参数对23组供试菌的模板c DNA进行实时荧光PCR扩增,核桃黑斑病菌*** pv.所产生的特异性扩增曲线在30个循环以内便出现了,而其它供试菌在30个循环以后才出现扩增曲线或没有出现扩增曲线,将此扩增结果与上述供试菌的普通PCR扩增的电泳结果进行对比分析,发现两种方法的检测结果完全一致。3.利用优化后的反应体系及反应参数扩增不同浓度的核桃黑斑病菌*** pv.模板c DNA,结果表明,当模板c DNA浓度≥7.0×10μg/ml时,该反应体系均可以特异性扩增,即该标准方法的检测灵敏度为7.0×10μg/ml。4.通过对田间自然发病植株的验证,上述建立的实时荧光PCR检测体系能准确地检测到处于不同发病程度的核桃叶片组织中的核桃黑斑病菌*** pv.。本研究所采用的实时荧光PCR是一种快速、准确的检测技术,符合田间检测要求,可以用于核桃黑斑病的早期诊断和病原鉴定。

关键词：核桃黑斑病快速检测技术实时荧光PCR

四川盆地核桃黑斑病病原菌的分离、鉴定与核桃抗病性评价

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热带亚热带植物学报 2020年第5期28卷 487-494页

作者：杨汉波韩珊何丹蒋时姣曹广黎万雪琴长江上游林业生态工程四川省重点实验室长江上游森林资源保育与生态安全国家林业和草原局重点实验室华西雨屏区人工林生态系统研究长期科研基地四川农业大学生态林业研究所成都611130

为鉴定引起四川盆地地区核桃黑斑病的病原菌,采用组织分离法对病原菌进行分离,利用柯赫氏法则验证其致病性,依据菌株形态学和基于16S rDNA基因序列分析对病原菌进行鉴定;同时,利用分离的菌株对18个栽培品种(无性系)进行抗病性评价。结... 详细信息

为鉴定引起四川盆地地区核桃黑斑病的病原菌,采用组织分离法对病原菌进行分离,利用柯赫氏法则验证其致病性,依据菌株形态学和基于16S rDNA基因序列分析对病原菌进行鉴定;同时,利用分离的菌株对18个栽培品种(无性系)进行抗病性评价。结果表明,分离菌株的菌落形态与黄单胞杆菌属(Xanthomonas)相似,其16S rDNA序列与树生黄单胞杆菌(***)的(登录号为KP340804.1)同源性高达99%,因此,将引起四川盆地地区核桃黑斑病的病原菌鉴定为树生黄单胞杆菌。18个核桃栽培品种(无性系)的田间侵染发病率和病情指数分别为35.07%~78.57%和17.71%~51.96%,变异系数分别为17.62%和28.78%,并以此为基础评价出5个高抗病品种(无性系)。这为核桃黑斑病致病机理研究和抗病新品种的选育奠定基础。

关键词：核桃黑斑病黄单胞杆菌病原菌抗病性

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陕西核桃黑斑病病原菌鉴定及药剂防治研究

西北农业学报 2021年第3期30卷 452-461页

作者：瞿佳门欣孙晓宇赵玲侠宁硕瀛陈锐陕西省微生物研究所西安710043 陕西省动物研究所西安710032

核桃黑斑病是危害核桃生产的重要细菌性病害,近年来在陕西严重发生。为探究陕西省核桃黑斑病的病原菌种类,制定核桃黑斑病的田间防治策略。采用组织分离法对陕西省内核桃黑斑病的病原菌进行分离纯化,获得纯培养物,通过形态特征、生理生... 详细信息

核桃黑斑病是危害核桃生产的重要细菌性病害,近年来在陕西严重发生。为探究陕西省核桃黑斑病的病原菌种类,制定核桃黑斑病的田间防治策略。采用组织分离法对陕西省内核桃黑斑病的病原菌进行分离纯化,获得纯培养物,通过形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,获得2种病原株系HTX和HTP,分别鉴定为野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)。通过对21种药剂进行室内抑菌试验,筛选出7种药剂对2种病原菌株系均有明显抑制作用。通过室内毒力测定和田间防治试验,结果表明中生菌素、春雷霉素、噻霉酮、琥胶肥酸铜和噻唑锌对核桃黑斑病危害的叶片、果实的防治效果均在67.67%、61.53%以上,防治效果好,可用于核桃黑斑病的田间防治。

关键词：核桃黑斑病病原鉴定杀菌剂田间防治

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洛阳核桃黑斑病病原菌鉴定

植物病理学报 2022年第2期52卷 286-290页

作者：梁家乐李学强丁文轩河南科技大学园艺与植物保护学院果树栽培生理实验室洛阳471023

0引言核桃黑斑病是核桃的三大主要病害之一,发病范围广,危害严重,一般植株受害率70%~90%,果实受害率10%~40%,严重时达65%以上,导致核桃栽培经济效益大幅降低[1]。核桃黑斑病病菌在病枝、芽鳞和残留的病果等处越冬,从气孔、皮孔、柱头、... 详细信息

0引言核桃黑斑病是核桃的三大主要病害之一,发病范围广,危害严重,一般植株受害率70%~90%,果实受害率10%~40%,严重时达65%以上,导致核桃栽培经济效益大幅降低[1]。核桃黑斑病病菌在病枝、芽鳞和残留的病果等处越冬,从气孔、皮孔、柱头、伤口等处侵入,借雨水、花粉、昆虫传播,可多次侵染[2]。

关键词：受害率发病范围核桃栽培病原菌鉴定核桃黑斑病皮孔芽鳞危害严重

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防治核桃黑斑病药剂筛选及田间药效试验

西北林学院学报 2020年第1期35卷 177-182页

作者：郭安柱张力元李岩朱姝颖唐光辉洛南县核桃研究所陕西洛南726100 商洛市林业局陕西商洛726000 西北农林科技大学林学院陕西杨陵712100

核桃细菌性黑斑病是一种危害核桃的重要病害。为明确不同杀菌剂对核桃细菌性黑斑病菌的抑制作用以及田间防效。通过室内抑菌试验及田间喷雾防治试验,研究了中生菌素等14种杀菌剂对核桃细菌性黑斑病的抑制作用。结果表明,中生菌素等7种... 详细信息

核桃细菌性黑斑病是一种危害核桃的重要病害。为明确不同杀菌剂对核桃细菌性黑斑病菌的抑制作用以及田间防效。通过室内抑菌试验及田间喷雾防治试验,研究了中生菌素等14种杀菌剂对核桃细菌性黑斑病的抑制作用。结果表明,中生菌素等7种供试杀菌剂对核桃细菌性黑斑病原菌成团泛菌具有一定的抑制作用,其EC 50在40.27~252.41 mg·L^-1,其中中生菌素的抑制作用最强,EC 50为40.27 mg·L^-1,噻霉酮、硫酸链霉素和春雷霉素的抑制作用相当,EC 50分别为50.62、53.25、54.88 mg·L^-1,氟啶胺的EC 50为176.96 mg·L^-1。中生菌素、噻霉酮、氟啶胺和春雷霉素4种药剂田间药效试验结果表明,4种药剂对核桃黑斑病均有良好的防治效果,田间防效依次顺序为:中生菌素>噻霉酮>氟啶胺>春雷霉素。中生菌素对核桃果实黑斑病防效为81.35%,对核桃叶部黑斑病防效为82.65%。春雷霉素对核桃果实黑斑病防效为71.58%,对核桃叶部黑斑病防效为74.87%。中生菌素、噻霉酮、氟啶胺和春雷霉素等药剂可作为防治核桃细菌性黑斑病的理想药剂。

关键词：核桃黑斑病杀菌剂室内毒力药效