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自身免疫性肝炎小鼠差异表达基因的筛选及柴胡皂苷d对部分差异表达基因表达水平的影响

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自身免疫性肝炎小鼠差异表达基因的筛选及柴胡皂苷D对部分差异表...

作者：陈浩山西中医药大学

学位级别：硕士

目的建立刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠模型,采用高通量的基因芯片对AIH小鼠差异表达基因进行筛查,为AIH的发病机制的研究提供研究靶点;观察柴胡皂苷d(Saikosaponin d,SS-d)对部... 详细信息

目的建立刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠模型,采用高通量的基因芯片对AIH小鼠差异表达基因进行筛查,为AIH的发病机制的研究提供研究靶点;观察柴胡皂苷d(Saikosaponin d,SS-d)对部分差异表达基因表达的影响,为SS-d用于AIH的临床治疗提供实验室依据。方法1.C57BL/6雌性小鼠36只,随机分为6组(n=6):正常对照组、AIH 6h组、AIH12h组、AIH 24h组、AIH 48h组、AIH 168h组。正常对照组小鼠给予尾静脉注射生理盐水;其余各组小鼠按15 mg·kg体重的剂量经尾静脉注射Con A溶液以建立AIH小鼠模型,并分别于注射后的相应时间点处死小鼠。收集各实验组小鼠肝脏和血清,分别采用HE染色和ELISA法观察肝脏内肝细胞坏死及炎细胞浸润程度,血清ALT、AST含量变化情况。2.C57BL/6雌性小鼠8只,随机分为正常对照组(n=4)和模型组(n=4)。正常对照组常规饲养,模型组小鼠按上述方法建立AIH模型。模型组小鼠造模后12h处死,无菌、低温条件下提取肝组织,抽提肝组织总RNA,并按Agilent-085631芯片说明书进行差异表达基因的筛选,并对差异表达基因进行KEGG pathway富集分析。同时采用qRT-PCR技术对部分差异表达基因进行验证。3.C57BL/6雌性小鼠24只,随机分为正常对照组、模型组、治疗组(n=8)。正常对照组小鼠给予尾静脉注射生理盐水,模型组和治疗组按前述方法建立AIH小鼠模型。其中,模型组小鼠造模12h后处死;治疗组小鼠在建模前12h给予SS-d 5.0mg·kg预处理,建模后12h处死。无菌、低温条件下收集各实验组小鼠肝脏及外周血。部分肝脏进行常规HE染色,部分用于抽提总RNA,并采用qRT-PCR法观察各实验组小鼠肝脏部分差异表达基因(包括IFN-γmRNA、IL-4 mRNA、IL-5 mRNA、IL-13 mRNA和IL-17 mRNA)的含量变化;观察各实验组小鼠血清ALT、AST含量变化情况。结果1.经Con A诱导的AIH小鼠模型,血清ALT、AST的含量呈现时间依赖性升高,到达一定时间点(ALT:6h,AST:24h)开始下降;肝脏内可见肝细胞变性、坏死(呈典型的界板性坏死),炎细胞浸润明显(以淋巴细胞为主)。上述病变具有时间相关性,即在造模6h时,小鼠肝小叶中央静脉周围出现淋巴细胞活化,并开始出现肝细胞急性损伤;12h见肝小叶中央静脉周围及肝血窦内淋巴细胞浸润显著增多;24h时淋巴细胞异常活化,肝组织浸润程度达峰值,同时伴有肝细胞损害显著加重;48h时出现典型的界面性坏死,并伴有淋巴细胞浸润;而在168h时小鼠肝脏内淋巴细胞浸润消失,但遗留肝实质细胞大面积变性坏死。提示造模12h时适合用于研究AIH早期免疫紊乱机制。2.与正常对照组小鼠比较,基因芯片组小鼠共筛查差异表达基因11 512个,其中表达上调5 189个,下调6 323个。其中781个表达上调基因可注释到292条信号通路,差异富集最显著的前3条信号通路分别是Cytokine-cytokine receptor interaction signaling pathway、TNF signaling pathway、NOd-like receptor signaling pathway;789个表达下调基因可注释到306条信号通路,差异富集最显著的前3条信号通路分别是Metabolic signaling pathway、Retinol metabolism signaling pathway、Peroxisome signaling pathway。IFN-γmRNA、IL-4 mRNA、IL-5 mRNA、IL-13 mRNA和IL-17 mRNA含量变化的qRT-PCR检测结果与芯片筛查结果一致,不仅表明芯片检测结果的可信,同时表明上述基因的表达变化与AIH小鼠的发病机制密切相关。3.与模型组比较,SS-d治疗组小鼠血清ALT、AST含量、肝脏内淋巴细胞浸润程度显著降低;同时,各实验组间的IFN-γmRNA、IL-4 mRNA、IL-5 mRNA、IL-13mRNA和IL-17 mRNA含量变化差异具有统计学意义。提示SS-d可以减轻AIH小鼠肝脏的免疫性损伤,其作用机制与调控差异表达基因IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-17的表达有关。结论Con A诱导AIH小鼠肝脏的免疫性损伤呈现时间依赖性,其中12h组小鼠的肝脏炎细胞浸润显著而肝细胞损伤轻微,可以作为研究AIH早期免疫紊乱机制的理想模型;AIH的发病机制十分复杂,系大量基因异常表达的共同作用结果,并与多条信

关键词：自身免疫性肝炎刀豆蛋白A 基因芯片差异表达基因柴胡皂苷d

柴胡皂苷d对人乳腺癌MCF-7细胞株迁移、凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响

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现代中药研究与实践 2018年第6期32卷 16-19页

作者：赵炜刘睿修俊青姜翠红赵志正中国中医科学院广安门医院肿瘤科北京102618

目的探讨柴胡皂苷d对乳腺癌MCF-7细胞株内质网应激(ERS)所致的凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响。方法将乳腺癌MCF-7细胞分为对照组、低、中、高剂量组;检测各组细胞增殖、迁移及凋亡情况;Western blot检测各组细胞Calnexin、Calr... 详细信息

目的探讨柴胡皂苷d对乳腺癌MCF-7细胞株内质网应激(ERS)所致的凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响。方法将乳腺癌MCF-7细胞分为对照组、低、中、高剂量组;检测各组细胞增殖、迁移及凋亡情况;Western blot检测各组细胞Calnexin、Calreticulin、GRP78、CHOP的表达。结果与对照组相比,低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移能力降低,细胞凋亡率增加,且细胞中Calnexin、Calreticulin、GRP78、CHOP蛋白表达增高。结论柴胡皂苷d可能通过影响MCF-7细胞Calnexin/Calreticulin循环,加重乳腺癌细胞ERS,引发细胞凋亡,从而降低细胞增殖率及迁移能力。

关键词：乳腺癌柴胡皂苷d Calnexin/Calreticulin循环内质网应激凋亡

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柴胡皂苷d预防实验大鼠肝纤维化的作用观察

中日友好医院学报 2006年第4期20卷 225-228,F0002页

作者：李忻王琛于文明李平王泰龄潘琳陈玉武李克明郭景珍中日友好临床医学研究所药物药理室北京100029 国家中医药管理局北京100026

目的:观察柴胡皂苷d抗实验大鼠肝纤维化的作用和可能的作用机理。方法:本实验将18只雄性Sd大鼠随机分为正常组,模型组和柴胡皂苷d(saikosaponind,SSd)预防组。模型组和SSd预防组大鼠均腹腔注射二甲基亚硝胺(dMN),建立大鼠肝纤维化模型... 详细信息

目的:观察柴胡皂苷d抗实验大鼠肝纤维化的作用和可能的作用机理。方法:本实验将18只雄性Sd大鼠随机分为正常组,模型组和柴胡皂苷d(saikosaponind,SSd)预防组。模型组和SSd预防组大鼠均腹腔注射二甲基亚硝胺(dMN),建立大鼠肝纤维化模型。在造模的同时予以SSd腹腔注射预防,1次/d,共4周。正常组大鼠只相应注射生理盐水。检测肝功和血清肝纤维化指标IV型胶原(IV-C)水平。病理学观察HE和天狼星红染色切片。免疫组化法测定α-SMA和TGF-"1在肝组织中的表达。结果:和模型组相比SSd预防组大鼠血清ALT和肝纤维化标志物IV-C的水平显著下降(Pd对肝脏具有保护作用;HE和天狼星红染色观察到肝纤维化程度改善,胶原沉积面积明显减少(Pd显著抑制-αSMA和TGF-"1在大鼠肝组织中的表达(Pd具有预防dMN诱导的肝纤维化作用,能够预防肝纤维化的发展,可能和它调节胶原沉积,抑制肝星状细胞活化作用有关。

关键词：肝纤维化柴胡皂苷d 二甲基亚硝胺大鼠实验研究

柴胡皂苷d对解脲脲原体耐药株与敏感株的活性研究

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同济大学学报（医学版） 2008年第3期29卷 30-32页

作者：黄峥烨潘展砚贾亚利徐燕萍武济民施伟民同济大学附属同济医院性病实验室上海200065 同济大学附属同济医院皮肤科上海200065

目的研究柴胡皂苷d对解脲脲原体耐药株与敏感株的活性。方法采用微量稀释法,测定柴胡皂苷d单体以及四环素等对Uu的最低抑制浓度,收集来自临床的50个Uu菌株,并且粗筛对四环素耐药(MIC>4μg/ml)的Uu,按上述微量稀释法,测出柴胡皂苷d单体的... 详细信息

目的研究柴胡皂苷d对解脲脲原体耐药株与敏感株的活性。方法采用微量稀释法,测定柴胡皂苷d单体以及四环素等对Uu的最低抑制浓度,收集来自临床的50个Uu菌株,并且粗筛对四环素耐药(MIC>4μg/ml)的Uu,按上述微量稀释法,测出柴胡皂苷d单体的MIC。结果50株Uu对3种抗生素的都敏感者18例(36%),对3种抗菌互有耐药性者为8例(16%)。Uu在柴胡皂苷d浓度为2μg/ml时,都不敏感,浓度为4μg/ml时,敏感率为22%,浓度为8μg/ml时,敏感率为84%,在浓度为16μg/ml时,全部敏感。结论柴胡皂苷d对Uu耐药与非耐药株的生长抑制作用都很明显。

关键词：柴胡皂苷d 解脲脲原体微量稀释法 MIC

柴胡皂苷d对蟾蜍离体坐骨神经干电生理特性的影响

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西部中医药 2022年第2期35卷 16-20页

作者：罗林徐婷婷陈卫杨春艳张建武川北医学院四川南充637100

目的:应用电生理方法观察不同浓度的柴胡皂苷d(saikosaponind,SSd)对蟾蜍离体坐骨神经干动作电生理特征的影响。方法:将制备好的蟾蜍离体坐骨神经干置于标准任氏液中浸泡15 min后,随机分为SSd 18、36、72μmol/L组和任氏液组,应用BL-420... 详细信息

目的:应用电生理方法观察不同浓度的柴胡皂苷d(saikosaponind,SSd)对蟾蜍离体坐骨神经干动作电生理特征的影响。方法:将制备好的蟾蜍离体坐骨神经干置于标准任氏液中浸泡15 min后,随机分为SSd 18、36、72μmol/L组和任氏液组,应用BL-420F生物机能实验系统引导神经干复合动作电位,测定神经干复合动作电位的阈强度、幅度、传导速度及不应期。结果:药物处理后与加药前进行比较,不同浓度(18、36、72μmol/L)SSd均可减小蟾蜍离体坐骨神经干动作电位的阈强度,增大其动作电位幅度,加快神经干的传导速度,且呈现较明显的浓度依赖性,差异有统计学意义(Pd具有小幅度缩短蟾蜍离体坐骨神经干动作电位不应期的药理作用,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SSd可增强蟾蜍离体坐骨神经干的兴奋性,加速其神经动作电位的传导。

关键词：柴胡皂苷d 坐骨神经干动作电位蟾蜍

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柴胡皂苷d药理作用的研究进展

中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2021年第11期 459-461页

作者：刘思佳黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040

柴胡的药用记载最早见于《神农本草经》,自古以来是医药师们常用的大宗药材。柴胡的最重要的活性成分是柴胡皂苷,其中柴胡皂苷d又以含量和活性的优势占据首要研究地位。本文主要对近几年来对柴胡皂苷d药理作用研究进展进行综述,分别从... 详细信息

柴胡的药用记载最早见于《神农本草经》,自古以来是医药师们常用的大宗药材。柴胡的最重要的活性成分是柴胡皂苷,其中柴胡皂苷d又以含量和活性的优势占据首要研究地位。本文主要对近几年来对柴胡皂苷d药理作用研究进展进行综述,分别从其抗肿瘤、抗炎作用、抗抑郁、保肝、免疫调节这几个主要方面进行简单阐述,为进一步研究柴胡皂苷d药用资源方面提供参考价值。

关键词：柴胡皂苷d 抗肿瘤抗炎作用抗抑郁保肝免疫调节

柴胡皂苷d联合黄芩苷对脑缺血再灌注损伤大鼠抗氧化酶的影响

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河北北方学院学报（自然科学版） 2017年第2期33卷 11-14页

作者：崔玉环董利平赵宝民连晶晶谷伟杨继雷刘占矿魏玉磊河北北方学院附属第一医院老年科河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院检验科河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院心外科河北张家口075000

目的探讨柴胡皂苷d联合黄芩苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠抗氧化酶的作用。方法雄性Sd大鼠60只,采用线栓法制备脑缺血再灌注模型,按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组、柴胡皂苷d组(70 mg·kg^(-1))、黄芩苷组(30 mg·kg^(-1)... 详细信息

目的探讨柴胡皂苷d联合黄芩苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠抗氧化酶的作用。方法雄性Sd大鼠60只,采用线栓法制备脑缺血再灌注模型,按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组、柴胡皂苷d组(70 mg·kg^(-1))、黄芩苷组(30 mg·kg^(-1))、柴胡皂苷d(70 mg·kg^(-1))+黄芩苷组(30 mg·kg^(-1)),缺血/再灌注后,每天腹腔注射一次,连续给药7d后,检测大鼠神经功能损伤评分,检测脑组织、血清中丙二醛(MdA)含量、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOd)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX))的活性。结果与假手术组比,模型组大鼠神经功能损伤评分显著升高,差异有统计学意义(PdA含量增加,差异有统计学意义(Pd、GSH-PX活性降低,差异有统计学意义(PdA含量降低,差异有统计学意义(Pd、GSH-PX活性增强,差异有统计学意义(P柴胡皂苷d(70 mg·kg^(-1))+黄芩苷组(30 mg·kg^(-1))抗氧化酶作用显著。结论柴胡皂苷d联合黄芩苷对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用可能通过抗氧化作用实现。

关键词：柴胡皂苷d 黄芩苷脑缺血/再灌注抗氧化酶

柴胡皂苷d通过逆转EMT抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭

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现代肿瘤医学 2017年第16期25卷 2561-2564页

作者：张平安王晓伟郭向好陕西中医药大学第二附属医院骨科陕西咸阳712000

目的:研究柴胡皂苷d对人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其潜在分子机制。方法:运用MTT试验检测柴胡皂苷d对细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell迁移试验检测柴胡皂苷d细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭试验研究柴... 详细信息

目的:研究柴胡皂苷d对人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其潜在分子机制。方法:运用MTT试验检测柴胡皂苷d对细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell迁移试验检测柴胡皂苷d细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭试验研究柴胡皂苷d对细胞侵袭能力的影响,Western-blot检测柴胡皂苷d对EMT相关蛋白的影响。结果:对MG-63增殖无明显影响浓度的柴胡皂苷d显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P柴胡皂苷d上调E-cadherin的表达而下调N-cadherin和Vimentin的表达。结论:柴胡皂苷d通过逆转EMT改变抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭。

关键词：柴胡皂苷d 人成骨肉瘤迁移和侵袭 EMT

柴胡皂苷d对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体膜电位及细胞凋亡的影响

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上海中医药杂志 2016年第6期50卷 90-93页

作者：李妍赵东海张巍罗军朱文赫吕士杰吉林医药学院生物化学与分子生物学教研室吉林吉林132013 吉林医药学院病理学教研室吉林吉林132013

目的研究不同浓度的柴胡皂苷d（saikosaponin d,SSd）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体膜电位（mitochondrial transmembrane potential,△ψm）及凋亡水平的影响。方法体外常规培养SH-SY5Y细胞,将细胞置于分别含0-10μmol/L SSd的dME... 详细信息

目的研究不同浓度的柴胡皂苷d（saikosaponin d,SSd）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体膜电位（mitochondrial transmembrane potential,△ψm）及凋亡水平的影响。方法体外常规培养SH-SY5Y细胞,将细胞置于分别含0-10μmol/L SSd的dMEM高糖培养基中,作用48 h;Rh123染色后流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化,Tunel法、吖啶橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色法检测细胞凋亡水平的变化。结果与对照组比较,8-10μmol/L SSd预处理的SH-SY5Y细胞TUNEL染色后凋亡指数明显升高（P〈0.01）;AO/EB染色后可见明显的阳性细胞。此外,不同浓度的SSd作用后均可见SH-SY5Y细胞中Rh123荧光强度减弱,且细胞Rh123荧光强度降低有剂量依赖关系。结论一定浓度的SSd可引起SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与影响线粒体膜电位有关。

关键词：柴胡皂苷d SH-SY5Y细胞线粒体膜电位凋亡