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柴胡皂苷体内外抗鸡柔嫩艾美耳球虫的研究

中国预防兽医学报 2024年第6期46卷 621-629页

作者：孟心茹甘晓凤郭丽君张嫱郑哲王燕春赵权蔡亚南吉林农业大学动物医学院吉林长春130118 动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林长春130118

为了探究柴胡皂苷对柔嫩艾美耳球虫(***)体内外感染的影响,本实验采用CCK-8法检测2倍倍比稀释(0.384 g/L~0.0645 g/L)的柴胡皂苷对MDBK细胞活力的影响,结果显示,浓度为0.0645 g/L的柴胡皂苷对MDBK细胞的活力影响最小,并且可以促进细胞... 详细信息

为了探究柴胡皂苷对柔嫩艾美耳球虫(***)体内外感染的影响,本实验采用CCK-8法检测2倍倍比稀释(0.384 g/L~0.0645 g/L)的柴胡皂苷对MDBK细胞活力的影响,结果显示,浓度为0.0645 g/L的柴胡皂苷对MDBK细胞的活力影响最小,并且可以促进细胞的生长,因此以该浓度的柴胡皂苷进行后续试验。本研究设置阴性对照组(NC)、***感染组(PC)、磺胺嘧啶钠对照组(WM)以及柴胡皂苷治疗组(CA)。除NC组外,每组细胞加入1.6×10^(6)个***子孢子,4 h后WM组加入0.5 g/L磺胺嘧啶钠,CA组加入0.0645 g/L柴胡皂苷,继续培养至不同时间,分别提取4组细胞蛋白,通过western blot检测感染***的MDBK细胞中p65蛋白的磷酸化水平;采用荧光定量PCR(qPCR)检测4组细胞中炎症因子的转录水平。Western blot结果显示,培养至24 h时,4组细胞中p65蛋白磷酸化水平均无显著差异;感染48 h与72 h时,与WM和PC组相比,CA组细胞中p65蛋白磷酸化水平极显著降低(P柴胡皂苷,1 mL/只,WM组雏鸡口服0.5 g/L磺胺嘧啶,1 mL/只,共服用7 d。感染后4 d~8 d,采用血球计数板计算每组鸡粪便卵囊排出率。感染后8 d将各组鸡称重后剖杀,观察盲肠的剖检病变,并通过计算各组肉鸡的相对增重率、存活率、卵囊值以及盲肠病变值计算每组雏鸡的抗球虫指数(ACI);分别于感染后4 d、6 d和8 d分别剖杀10只鸡,取盲肠组织制备病理切片,观察各组鸡盲肠组织的病变。结果显示,CA组鸡粪便卵囊排出率为22.00%,极显著低于PC组(P柴胡皂苷在体内外均可有效抑制***对细胞的感染,并且能够改善与修复***对雏鸡盲肠的损伤,本研究为天然中药成分用于治疗***的感染提供参考依据。

关键词：柴胡皂苷柔嫩艾美耳球虫 p65蛋白的磷酸化 NF-κB信号通路

柴胡皂苷d通过抑制炎性反应减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

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中华实验外科杂志 2024年第9期41卷 2006-2010页

作者：朱山飞张建松郝定盈苑伟吴帆王百林暨南大学附属广州红十字会医院普通外科广州510220 中山大学附属第一医院贵州医院胃肠外科贵阳550000 贵州医科大学临床医学院贵阳550004

目的观察柴胡皂苷d(SSd)预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)炎性反应和Toll样因子受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)传导通路的影响.方法随机数字表法将24只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和SSd预处理组(SSd组),每... 详细信息

目的观察柴胡皂苷d(SSd)预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)炎性反应和Toll样因子受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)传导通路的影响.方法随机数字表法将24只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和SSd预处理组(SSd组),每组8只.SSd组在术前连续5 d腹腔注射2mg/kg SSd,Sham组和I/R组腹腔注射等量浓度的二甲基亚砜(DMSO).随后,I/R组和SSd组采用Pringle法阻断第一肝门1 h,Sham组只行开腹、关腹手术和肝门解剖等操作.术后6 h,采集大鼠的血清及肝标本.生化检测血清的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)值;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织细胞损伤和坏死情况;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝脏TLR4、TNF-α及IL-1β的相对表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测TLR4、MyD88和NF-κB在3组肝组织的表达差异.结果血清学指标:I/R组ALT、AST、TNF-α及IL-1β高于Sham组[(1526.16±147.42)U/L比(71.32±10.21)U/L、(2705.17±127.81)U/L比(189.78±20.04)U/L、(48.60±23.03)pg/ml比(6.67±1.72)pg/ml、(119.18±40.35)pg/ml比(5.55±3.61)pg/ml,t=27.85、54.99、5.13、7.93,P<0.01];而SSd组上述指标低于I/R组[(402.79±67.54)U/L比(1526.16±147.42)U/L、(658.89±88.35)U/L比(2705.17±127.81)U/L、(11.38±5.08)pg/ml比(48.60±23.03)pg/ml、(24.82±5.98)pg/ml比(119.18±40.35)pg/ml,t=19.59、37.25、4.63、6.54,P<0.01],差异有统计学意义.HE染色观察肝组织病理改变及评分:给予SSd干预后,SSd组肝脏组织损伤轻于I/R组,Suzuki评分差异有统计学意义(5.40±1.67比8.00±0.71,t=3.20,P<0.01).进一步通过RT-qPCR结果发现,I/R组TLR4、TNF-α及IL-1β的mRNA相对表达量明显高于Sham组(2.45±0.32比1.00±0.00、1.96±0.17比1.00±0.00、1.63±0.19比1.00±0.00,t=4.63、7.93、5.74,P<0.01),而SSd组TLR4、TNF-α及IL-1β的mRNA相对表达量低于I/R组(1.92±0.20比2.45±0.32、1.55±0.05比1.96±0.17、1.24±0.07比1.63±0.19,t=3.45、3.97、3.36,P<0.05),差异均有统计学意义.Western blot结果提示,I/R组的TLR4、MyD88和NF-κB蛋白的表达高于Sham组(t=27.95、8.67、4.26,P<0.01),而SSd组的TLR4、MyD88和NF-κB蛋白的表达水平则低于SSd组(t=3.69、9.43、2.86,P<0.05),差异有统计学意义.结论SSd预处理可以显著降低大鼠HIRI的炎症反应,其作用机制可能与下调TLR4/NF-κB信号转导通路蛋白的表达有关.

关键词：柴胡皂苷肝缺血再灌注损伤炎性反应 Toll样因子受体4 核因子-κB

RP-HPLC-ELSD法测定逍遥颗粒中柴胡皂苷c、a、d的含量

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中国食品药品监管 2024年第8期 138-145页

作者：范洋李明辉逯小萌王丽霞河南省濮阳市食品药品检验检测中心

目的:采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测(RP-HPLC-ELSD)法同时测定逍遥颗粒中柴胡皂苷c、a、d三种成分的含量。方法:采用安捷伦(Agilent)SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)。梯度洗脱程序为0~18min,30%A;18~26m... 详细信息

目的:采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测(RP-HPLC-ELSD)法同时测定逍遥颗粒中柴胡皂苷c、a、d三种成分的含量。方法:采用安捷伦(Agilent)SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)。梯度洗脱程序为0~18min,30%A;18~26min,35%~45%A;26~35min,45%~55%A。流速为1.0ml/min,柱温为30℃,气体流速为2.5L/min,蒸发温度为60℃,进样量为10μl。结果:柴胡皂苷c、a、d分别在0.950~19.000μg、1.088~21.760μg、1.520~30.400μg的范围内线性关系良好。柴胡皂苷c平均回收率为99.49%,RSD为0.35%(n=9);柴胡皂苷a平均回收率为99.99%,RSD为0.66%(n=9);柴胡皂苷d平均回收率为99.12%,RSD为0.47%(n=9)。结论:该方法准确、灵敏、重复性好,可作为逍遥颗粒中柴胡皂苷c、a、d的含量测定方法。

关键词：逍遥颗粒柴胡皂苷反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法含量测定质量控制

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨柴胡皂苷对多发性抽动症小鼠的治疗作用

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山东医药 2024年第19期64卷 25-29页

作者：陈羽王佳斌颜建宏张颖河北省沧州中西医结合医院儿一科河北沧州061000 河北省沧州中西医结合医院影像科任丘市人民医院儿科

目的基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路探讨柴胡皂苷(SS)对多发性抽动症(TS)模型小鼠的治疗作用。方法将小鼠随机分为对照组、TS组、SS低剂量(SS-L)组、SS高剂量(SS-H)组、阳性药物组、SS-H+... 详细信息

目的基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路探讨柴胡皂苷(SS)对多发性抽动症(TS)模型小鼠的治疗作用。方法将小鼠随机分为对照组、TS组、SS低剂量(SS-L)组、SS高剂量(SS-H)组、阳性药物组、SS-H+PKA抑制剂(H-89)组,每组10只。除对照组外,其他各组经腹腔注射亚氨基二丙腈溶液建立TS小鼠模型。造模后,SS-L组、SS-H组分别给予25、100 mg/kg SS腹腔注射,并以生理盐水灌胃;阳性药物组以0.5 mg/kg氟哌啶醇灌胃,并以生理盐水腹腔注射;SS-H+H-89组以100 mg/kg SS、5 mg/kg H-89腹腔注射,并以生理盐水灌胃;TS组及对照组分别以等体积的生理盐水腹腔注射、灌胃。每天1次,连续干预3周。对小鼠运动行为、刻板行为进行评分,用ELISA法检测纹状体组织中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)以及多巴胺(DA),用苏木精-伊红法观察脑组织形态学变化,用免疫组化法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元,用Western blotting法检测cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,TS组脑细胞形态被破坏,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量高(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达低(P均<0.05);与TS组比较,SS-L组、SS-H组、阳性对照组脑细胞形态得到改善,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量低(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达高(P均<0.05);S-H+H-89组逆转SS-H组各指标的变化(P均<0.05)。结论SS可能通过调节cAMP/PKA/CREB信号通路对TS小鼠发挥治疗作用。

关键词：多发性抽动症柴胡皂苷环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白信号通路

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柴胡皂苷经不同给药途径血药和脑药动力学的比较研究

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中国中药杂志 2017年第14期42卷 2767-2772页

作者：戴雅洁陈晓兰唐红艳邓显仪谢浪贵阳中医学院药学院贵州贵阳550002

通过比较柴胡皂苷经不同途径给药后血药及脑药动力学,评价柴胡皂苷治疗癫痫的最佳给药途径。柴胡皂苷经不同途径给予小鼠后于不同时间点取血和全脑,以乙腈-甲醇(9∶1)沉淀血浆蛋白质,采用UPLC-MS/MS测定SSa在小鼠血浆和脑组织中的浓度,... 详细信息

通过比较柴胡皂苷经不同途径给药后血药及脑药动力学,评价柴胡皂苷治疗癫痫的最佳给药途径。柴胡皂苷经不同途径给予小鼠后于不同时间点取血和全脑,以乙腈-甲醇(9∶1)沉淀血浆蛋白质,采用UPLC-MS/MS测定SSa在小鼠血浆和脑组织中的浓度,用Kinetica程序软件计算药代动力学参数和生物利用度,并计算脑靶向系数(Re)和药物脑靶向指数(DTI)。鼻腔给药后脑药Re为142.17%,DTI为3.06,要显著高于注射组。灌胃组DTI为1.25。柴胡皂苷鼻腔给药后脑靶向性要高于注射组和灌胃给药组,显示出鼻腔给药"引药入脑"的优势。

关键词：柴胡皂苷药代动力学脑靶向系数药物靶向指数

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响应面法优化柴胡药渣中柴胡皂苷提取工艺

北京理工大学学报 2023年第5期43卷 540-548页

作者：孙立权滕茂浩丛勇罗爱芹北京理工大学生命学院北京100081 北京理工大学生物与医学工程公共实验中心北京100081

为确立微波提取柴胡药渣中柴胡皂苷的最佳工艺,采用响应面实验设计优化了提取过程中的工艺参数.基于单因素实验对工艺参数进行初步筛选,进一步的采用响应面实验建立二阶回归模型,优化了提取时间、提取温度、料液比和甲醇体积百分比4个... 详细信息

为确立微波提取柴胡药渣中柴胡皂苷的最佳工艺,采用响应面实验设计优化了提取过程中的工艺参数.基于单因素实验对工艺参数进行初步筛选,进一步的采用响应面实验建立二阶回归模型,优化了提取时间、提取温度、料液比和甲醇体积百分比4个工艺参数.结果发现:提取温度和提取时间的交互作用、提取温度和甲醇体积百分比的交互作用、提取温度和料液比的交互作用对皂苷提取率的影响较为显著;优化最佳工艺参数提取温度为68℃、料液比为1∶59 g/mL、提取时间为30 min、甲醇体积百分比为60%.在该工艺参数下柴胡皂苷提取率最大,达到5.14 mg/g.

关键词：柴胡柴胡皂苷响应面实验设计

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一种新的四糖柴胡皂苷结构的NMR研究

化学学报 1996年第12期54卷 1200-1208页

作者：马立斌金怡珠涂光忠罗何生赵玉英胡长风张如意来鲁华徐筱杰唐有祺北京微量化学研究所北京100091 北京医科大学药学院植化室北京100083 北京大学化学系北京100871

本文报道从小叶黑柴胡(Bupleurum Smithii Wolff *** Shan et ***)分离出的一种新皂苷,应用COSY,CH-COSY,TOCSY,HMQC-COSY,HMBC等NMR方法对其结构进行了研究,确定该化合物为3β,16β,23,28-四羟基齐墩果烷-11,13(18)-二烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(1).命名为柴胡皂苷O(Saikosapnin O).

关键词：柴胡皂苷 TOCSY HMQC-COSY HMBC NMR

柴胡皂苷对热诱导的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化能力和热休克蛋白基因表达的影响

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动物营养学报 2021年第11期33卷 6420-6430页

作者：胡海涛孙先枝黄峰王青峰李晶晶卓钊范彩云苏衍菁程建波安徽农业大学动物科技学院合肥230036 上海城建职业学院上海201415 光明牧业有限公司上海200436

本试验旨在研究柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d(SSd)对热诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)抗氧化能力和热休克蛋白基因表达的影响。以38℃培养的BMECs作为阴性对照组;高温42℃分别培养BMECs 1、4、8、12和24 h,建立热应激模型(阳性对照组);BM... 详细信息

本试验旨在研究柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d(SSd)对热诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)抗氧化能力和热休克蛋白基因表达的影响。以38℃培养的BMECs作为阴性对照组;高温42℃分别培养BMECs 1、4、8、12和24 h,建立热应激模型(阳性对照组);BMECs培养基中分别添加0.1、1.0μmol/L SSa和0.01、0.10μmol/L SSd,38℃培养4 h(SSa和SSd作用细胞时间)后,42℃分别处理1、4、8、12和24 h(处理组)。测定各组BMECs中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性及培养液中丙二醛(MDA)含量,并检测细胞中热休克转录因子-1(HSF-1)和热休克蛋白70(HSP70)mRNA相对表达量。结果表明:与阴性对照组相比,阳性对照组BMECs中SOD和GSH-Px活性显著降低(P0.05),或者显著降低了以上抗氧化酶的活性(P<0.05),且在热诱导12 h时0.1μmol/L SSd组培养液中MDA含量显著升高(P<0.05),表明SSa和SSd对BMECs氧化应激的缓解作用存在剂量和时间依赖性。在热诱导1 h时,各处理组BMECs中HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05);在热诱导4 h时,0.1μmol/L SSa处理组BMECs中HSF-1和HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05);在热诱导12和24 h时,0.01μmol/L SSd处理组BMECs中HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05)。综上所述,42℃热处理可诱导BMECs氧化应激,适宜浓度的SSa和SSd能够缓解热诱导BMECs的氧化应激,其中0.1μmol/L SSa和0.01μmol/L SSd对42℃热诱导条件下BMECs的氧化应激有较好的缓解作用,并可提高HSF-1和HSP70基因的表达,保护BMECs免受高温诱导的损伤。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞热诱导柴胡皂苷氧化应激热休克蛋白

柴胡皂苷及其代谢产物潜在靶点蛋白预测和部分验证

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中国药理学与毒理学杂志 2018年第2期32卷 105-111页

作者：钟倩雯朱安王旗北京大学公共卫生学院毒理学系北京100191 国家中医药管理局中药配伍减毒重点研究室北京100191 食品安全毒理学研究与评价北京市重点实验室北京100191

目的以柴胡的主要药效/毒性成分柴胡皂苷(SS)及代谢产物(共30种化合物)为研究对象,预测并验证部分靶点蛋白。方法 (1)通过Pharm Mapper反向分子对接法和Sybyl X正向分子对接预测SS及其代谢产物的潜在靶点蛋白,并预测了柴胡皂苷a(SSa)与... 详细信息

目的以柴胡的主要药效/毒性成分柴胡皂苷(SS)及代谢产物(共30种化合物)为研究对象,预测并验证部分靶点蛋白。方法 (1)通过Pharm Mapper反向分子对接法和Sybyl X正向分子对接预测SS及其代谢产物的潜在靶点蛋白,并预测了柴胡皂苷a(SSa)与潜在靶点蛋白谷胱甘肽S转移酶A2(GST A2)间的结合模式。(2)体外实验:用SSa 0,0.03,0.06,0.13,0.25和0.50 mmol·L^(-1)处理Hepa RG细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率;Hepa RG细胞用SSa 0,0.03,0.13和0.50 mmol·L^(-1)处理24 h,GST活性检测试剂盒检测细胞GST酶活性。结果 (1)Pharm Mapper和Sybyl X预测SS及代谢产物的潜在靶点蛋白包括:GST A2、磷脂酰胆碱转移蛋白、腺苷激酶、胸苷酸合成酶、雌激素受体、雌二醇17-β-脱氢酶1、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Pim1、胆汁酸受体和维A酸结合蛋白2。预测结果显示,SSa与GST A2之间对接得分最高,二者匹配良好,很可能存在相互作用。(2)体外实验:SSa能抑制Hepa RG细胞存活,呈一定的量效关系(R2=0.8848,P<0.05);随着SSa浓度升高,细胞内GST活性升高(P<0.01)。结论 SS及其代谢产物的潜在靶点蛋白为GST和磷脂酰胆碱转移蛋白等,GST可能是SSa的靶点蛋白之一。

关键词：柴胡皂苷靶点蛋白谷胱甘肽S转移酶