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陶瓷膜气升式纳滤装置过滤杆菌肽水溶液的研究

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高校化学工程学报 2012年第2期26卷 189-195页

作者：石风强景文珩邢卫红南京工业大学材料化学工程国家重点实验室江苏南京210009

气升式纳滤装置是一种新型膜过滤装置,具有能耗低、过滤条件温和等优点,在生化产品的分离纯化中应用前景广泛。以杆菌肽水溶液为过滤体系,采用孔径为0.9 nm的TiO2陶瓷纳滤膜,系统考察了曝气量和跨膜压差对气升式纳滤装置过滤性能的影响... 详细信息

气升式纳滤装置是一种新型膜过滤装置,具有能耗低、过滤条件温和等优点,在生化产品的分离纯化中应用前景广泛。以杆菌肽水溶液为过滤体系,采用孔径为0.9 nm的TiO2陶瓷纳滤膜,系统考察了曝气量和跨膜压差对气升式纳滤装置过滤性能的影响。结果表明,曝气可有效提升通量和截留率;当跨膜压差为0.3 MPa时,曝气量由20 L h 1增大到100 L h 1,通量和截留率分别提升34.0%和14.5%,在曝气量100 L h 1时两者达到最大,进一步增大曝气量,通量和截留率开始下降;当跨膜压差为0.1、0.3、0.5 MPa时,对应的最优曝气量分别为60、100、140 L h 1。并通过模型计算,分析了不同操作条件下,气升式纳滤装置流体力学性质和能耗的变化情况。

关键词：气升纳滤流体力学能耗杆菌肽

HPLC结合组分制备分析杆菌肽中的有关物质及有效组分含量

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中国药学杂志 2018年第23期53卷 2041-2045页

作者：张含智秦峰刘浩上海市食品药品检验所上海201203

目的建立基于HPLC结合组分制备对杆菌肽中有关物质及有效组分含量测定的分析方法。方法采用Agilent HPLC,选择Diamonsil Plus C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),以50 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液(p H经甲酸调至4. 0)为流动相A,乙腈为流动相B... 详细信息

目的建立基于HPLC结合组分制备对杆菌肽中有关物质及有效组分含量测定的分析方法。方法采用Agilent HPLC,选择Diamonsil Plus C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),以50 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液(p H经甲酸调至4. 0)为流动相A,乙腈为流动相B,流速为1 m L·min-1,线性梯度洗脱,检测波长为254 nm。经调整甲酸铵溶液的p H、流动相比例、溶剂等确定了分析方法,开展了专属性、线性、精密度、重复性、稳定性、耐用性等方法学研究。根据半制备液相色谱技术收集了杆菌肽A、B1/B2/B3、C1/C2/C3、F(采用《美国药典》40版中杆菌肽液相分析方法),并在甲酸铵-乙腈液相体系中进行定位及确认。结果建立了适用于杆菌肽有关物质的液相分析方法,方法学试验结果良好。已知组分与相邻杂质之间实现良好分离,特别是B1/B2的分离,明确了各组分的洗脱位置。对比了不同杆菌肽样品中各组分的含量,能够提供更加详细的样品信息。结论该液相分析方法可同时测定杆菌肽中的有关物质及有效组分含量,适用于该产品的质量控制。

关键词：杆菌肽杆菌肽F 杆菌肽A 组分制备

以杆菌肽为模板的金簇制备及其在腺嘌呤核苷三磷酸检测中的应用

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分析化学 2018年第12期46卷 1997-2003页

作者：阮胜利张婷婷张敏章弘扬王月荣胡坪上海市功能性材料化学重点实验室华东理工大学化学与分子工程学院上海市新药设计重点实验室华东理工大学药学院

建立了一种以杆菌肽（Bacitracin）为还原剂和模板制备金纳米簇的方法,并利用腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）能恢复Fe;淬灭的金纳米簇荧光的特性,设计了一种"点亮"型金纳米簇荧光探针,用于ATP的检测。在pH=1的水溶液中,Bacitracin与HAuCl;的... 详细信息

建立了一种以杆菌肽（Bacitracin）为还原剂和模板制备金纳米簇的方法,并利用腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）能恢复Fe;淬灭的金纳米簇荧光的特性,设计了一种"点亮"型金纳米簇荧光探针,用于ATP的检测。在pH=1的水溶液中,Bacitracin与HAuCl;的摩尔比为1∶1时,室温下反应2 h,成功制备了有较强荧光的金纳米簇AuNCs@Bacitracin。淬灭剂Fe;浓度为5 mmol/L时,对AuNCs@Bacitracin的荧光淬灭程度达98%。基于AuNCs@Bacitracin-Fe;复合物建立了一种检测ATP的方法,ATP浓度为10μmol/L～8 mmol/L范围内时,lg（F/F0）与浓度呈线性关系,R;=0.9902。利用此方法对加标人工血清样品进行检测,3个加标水平下ATP的回收率为103.0%～105.0%,RSD<1.0%,结果准确可靠。

关键词：金纳米簇杆菌肽腺嘌呤核苷三磷酸荧光

基于细胞碳-氮-氧需求的补料批发酵策略促进杆菌肽合成

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食品与发酵工业 2019年第15期45卷 30-36页

作者：杨华宋昭戴航陈雄李欣陈守文蔡冬波李俊辉王志发酵工程教育部重点实验室湖北省工业发酵协同创新中心湖北省工业微生物重点实验室湖北工业大学湖北武汉430068 省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室(湖北大学) 湖北武汉430062 绿康生化股份有限公司福建浦城353400

为了提高杆菌肽补料发酵的效率,在50 L罐水平研究了pH耦合、间歇-罐压控制和间歇-溶氧(dissolved oxygen, DO)耦合等补料策略对杆菌肽合成的影响。pH耦合策略的杆菌肽效价为1 006 U/mL,但存在对数中后期因pH低于设定值而无法补入葡萄糖... 详细信息

为了提高杆菌肽补料发酵的效率,在50 L罐水平研究了pH耦合、间歇-罐压控制和间歇-溶氧(dissolved oxygen, DO)耦合等补料策略对杆菌肽合成的影响。pH耦合策略的杆菌肽效价为1 006 U/mL,但存在对数中后期因pH低于设定值而无法补入葡萄糖的问题。间歇-罐压控制策略的效价(1118 U/mL)比pH耦合策略提高了11%,但也存在发酵后期补糖量与DO不匹配的问题。间歇-DO耦合策略克服了以上缺陷,糖对杆菌肽的转化率( Y P/S )比间歇-罐压控制策略提高了22.7%。基于间歇-DO耦合补料策略并于24 h二次补入氮源后,其平均杆菌肽合成速率达到了40.67 U/(mL·h),杆菌肽效价峰值达到了1220 U/mL。建立了基于细胞需求的综合碳-氮-氧因素的补料策略,为工业化补料发酵生产杆菌肽提供了重要参考。

关键词：地衣芽孢杆菌杆菌肽补料分批发酵

代谢工程改造L-半胱氨酸供给模块促地衣芽胞杆菌高效合成杆菌肽

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生物工程学报 2021年第8期37卷 2803-2812页

作者：李凌峰刘佩罗文王勤王志陈晓斌李俊辉蔡冬波马昕陈守文湖北大学生命科学学院省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室湖北省环境微生物工程技术研究中心湖北武汉430062 湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室工业微生物湖北省重点实验室湖北武汉430068 绿康生化股份有限公司福建浦城353400

杆菌肽是一种主要由芽胞杆菌产生的广谱性抗生素,目前作为兽药广泛应用于畜禽养殖领域。前体氨基酸供应不足可能是限制微生物发酵高产杆菌肽的重要因素。文中以杆菌肽工业生产菌株——地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis DW2为出发菌株... 详细信息

杆菌肽是一种主要由芽胞杆菌产生的广谱性抗生素,目前作为兽药广泛应用于畜禽养殖领域。前体氨基酸供应不足可能是限制微生物发酵高产杆菌肽的重要因素。文中以杆菌肽工业生产菌株——地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis DW2为出发菌株,研究L-半胱氨酸供给模块强化对杆菌肽合成的影响。首先,构建了L-半胱氨酸合成酶基因cysK强化表达菌株,杆菌肽效价相比于对照菌株提高了9.47%。接着,为提高L-半胱氨酸合成前体供给,对L-丝氨酸乙酰转移酶基因cysE和硫代硫酸盐/硫酸盐胞内转运蛋白基因cysP进行强化,杆菌肽产量分别提高了7.23%和8.52%。随后,结果表明转运蛋白TcyP负责从胞外向胞内转运胱氨酸,强化表达TcyP后胞内L-半胱氨酸浓度和杆菌肽效价分别提高了29.19%和7.79%。通过组合代谢工程育种,在整合表达了基因cysK基础上,利用强启动子P_(bacA)分别替换基因cysP、cysE和tcyP原始启动子,得到工程菌株CYS4(DW2::cysK-P_(bacA)(cysP)-P_(bacA)(cysE)-P_(bacA)(tcyP)),杆菌肽效价达到910.02 U/mL,相比于出发菌株DW2(747.71 U/mL)提高了21.10%。最后,通过3 L发酵罐小试实验,进一步证实了强化L-半胱氨酸有利于杆菌肽合成。研究表明,强化胞内L-半胱氨酸供给水平是提高地衣芽胞杆菌中杆菌肽产量的有效策略,为杆菌肽工业生产提供了一株具有良好应用前景的菌株。

关键词：地衣芽胞杆菌杆菌肽 L-半胱氨酸供给代谢工程

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杆菌肽及其在畜牧兽医上的应用

微生物学通报 1994年第4期21卷 240-243页

作者：李传友吴允山邹杰中国科学院百泰技术公司江西民星企业集团北京肉鸡生产联营公司

杆菌肽及其在畜牧兽医上的应用李传友（中国科学院百泰技术公司，北京１０００８０）吴允山，邹杰（江西民星企业集团，南昌３３０００８）（北京肉鸡生产联营公司，北京１０２２１１）随着禽畜饲养集约化程度的提高，对群饲中流行性疫... 详细信息

杆菌肽及其在畜牧兽医上的应用李传友（中国科学院百泰技术公司，北京１０００８０）吴允山，邹杰（江西民星企业集团，南昌３３０００８）（北京肉鸡生产联营公司，北京１０２２１１）随着禽畜饲养集约化程度的提高，对群饲中流行性疫病的防治与控制问题也相应突出了。社...

关键词：杆菌肽抗菌素饲料添加剂应用

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杆菌肽高产菌株的诱变选育

食品工业科技 2015年第11期36卷 188-192,196页

作者：谢瑞李力张明亮黄建忠福建师范大学工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院福建福州350108

为了选择有效的方法选育出高产杆菌肽的菌种。利用地衣芽孢杆菌FUN-BL为出发菌株,依次进行紫外线诱变和硫酸二乙酯诱变,再通过平板活性筛选法作为初筛和HPLC作为复筛,筛选出效价较高的菌株。出发菌株F0经过紫外线诱变(15W,照射距离30cm... 详细信息

为了选择有效的方法选育出高产杆菌肽的菌种。利用地衣芽孢杆菌FUN-BL为出发菌株,依次进行紫外线诱变和硫酸二乙酯诱变,再通过平板活性筛选法作为初筛和HPLC作为复筛,筛选出效价较高的菌株。出发菌株F0经过紫外线诱变(15W,照射距离30cm,照射时间120s)后,筛选得到高产菌株F167,效价提高了11.76%。菌株F167经过硫酸二乙酯诱变(处理浓度为2%,处理时间为90min)后,筛选得到高产菌株F2141效价提高了32.19%。将高产菌株F2141进行连续5代遗传稳定性实验,效价依次是1003.23、989.34、976.35、960.32、949.72U/m L。通过紫外线诱变和硫酸二乙酯诱变能够选育出具有遗传稳定性的高产杆菌肽的菌株。

关键词：地衣芽孢杆菌杆菌肽选育诱变 HPLC

地衣芽胞杆菌DW2中敲除氨基酸转运蛋白基因yhdG提高杆菌肽产量

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生物工程学报 2018年第6期34卷 916-927页

作者：李阳吴非蔡冬波占杨杨李俊辉陈晓斌陈慧超陈守文马昕湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化湖北省协同创新中心湖北省环境微生物工程技术研究中心湖北武汉430062 绿康生化股份有限公司福建浦城353400

杆菌肽是微生物产生的由11种氨基酸残基组成的广谱性抗生素,前体物的供应可能是限制杆菌肽高产的重要因素。文中通过支链氨基酸(异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸)的添加实验考察了前体物质支链氨基酸对杆菌肽高产的影响,证实了异亮氨酸(Ile)... 详细信息

杆菌肽是微生物产生的由11种氨基酸残基组成的广谱性抗生素,前体物的供应可能是限制杆菌肽高产的重要因素。文中通过支链氨基酸(异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸)的添加实验考察了前体物质支链氨基酸对杆菌肽高产的影响,证实了异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)的添加可以提高杆菌肽的效价,其中Ile的添加对杆菌肽效价提高的效果较为明显。随后,文中以地衣芽胞杆菌DW2为出发菌株,分别构建了支链氨基酸转运蛋白Yhd G的缺失和强化表达菌株。发酵结果表明,转运蛋白Yhd G缺失工程菌DW2△yhd G的杆菌肽效价达到917.35 U/m L,与原始菌DW2相比提高了11%,而强化Yhd G则会使杆菌肽效价下降25%。最后通过分析胞内胞外支链氨基酸含量,发现缺失转运蛋白Yhd G能够在发酵中后期显著提高胞内支链氨基酸含量,表明氨基酸转运蛋白Yhd G在地衣芽胞杆菌DW2中可能发挥着氨基酸输出的功能。综上,文中通过缺失转运蛋白Yhd G显著提高了地衣芽胞杆菌胞内支链氨基酸的供给水平,从而提高了杆菌肽效价,为杆菌肽高产菌株的构建提供了一种新的策略。

关键词：杆菌肽地衣芽胞杆菌支链氨基酸转运蛋白YhdG

基因改组选育高产杆菌肽地衣芽孢杆菌及改组菌株差异分析

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食品科学 2016年第23期37卷 135-140页

作者：贾锐张充吕凤霞别小妹赵海珍陆兆新南京农业大学食品科技学院江苏南京210095

为了提高地衣芽孢杆菌肽产量,采用全基因组改组技术进行菌株选育。以地衣芽孢杆菌TJ12为原始菌株,通过紫外诱变、亚硝基胍诱变、常压室温等离子体诱变构建了TJ12菌的突变体库。在优化其原生质体制备和再生条件的基础上,以其中4株诱变菌... 详细信息

为了提高地衣芽孢杆菌肽产量,采用全基因组改组技术进行菌株选育。以地衣芽孢杆菌TJ12为原始菌株,通过紫外诱变、亚硝基胍诱变、常压室温等离子体诱变构建了TJ12菌的突变体库。在优化其原生质体制备和再生条件的基础上,以其中4株诱变菌株(U11、U23、H1、L71)作为亲本,采用聚乙二醇介导的方法进行3轮多亲本的全基因组改组,同时,结合双亲灭活的筛选方法,最终选出1株杆菌肽产量提高并能稳定遗传的优良菌株F3,对其摇瓶发酵36 h,杆菌肽A产量达760 mg/L,为野生菌株TJ12的1.7倍。与野生菌株TJ12相比,改组菌株提前进入生长稳定期,两者发酵过程pH值几乎无差异;最终改组菌生长量虽低于野生菌,但菌株单位细胞还原糖产量及杆菌肽产量都高于野生菌株;其合成基因和调控基因表达量相对野生菌株都上调,其中合成基因上调幅度较大。推测改组菌株自身有了更强大的杆菌肽耐受机制,且合成基因相关部位可能发生了改变。

关键词：杆菌肽地衣芽孢杆菌基因组改组诱变原生质体