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亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白的表达及其杂交瘤细胞株的筛选与鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第1期37卷 70-74页

作者：王立群梁盼红张少华侯俊玲王莉杰毛立骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

目的筛选并制备亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白(Ta EP45)的杂交瘤细胞株。方法设计带有酶切位点的特异性引物,以亚洲带绦虫成虫总RNA为模板, RT-PCR扩增Ta EP45完整的开放阅读框(ORF),克隆至原核表达载体pET-30a (+),转化至大肠埃希菌B... 详细信息

目的筛选并制备亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白(Ta EP45)的杂交瘤细胞株。方法设计带有酶切位点的特异性引物,以亚洲带绦虫成虫总RNA为模板, RT-PCR扩增Ta EP45完整的开放阅读框(ORF),克隆至原核表达载体pET-30a (+),转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达带组氨酸(His)标签的TaEP4蛋白,用亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清蛋白质印迹(Western blotting)分析Ta EP45的反应原性。以纯化的Ta EP45免疫BALB/c小鼠(100μg/鼠,首次免疫用等量弗氏完全佐剂,第2、第3次免疫用等量弗氏不完全佐剂),选择血清抗体效价高的小鼠,取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,用纯化的Ta EP45和His标签蛋白ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,用亚洲带绦虫全虫抗原Western blotting鉴定杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。结果 RT-PCR扩增获得的Ta EP45基因ORF长1 362 bp,编码453个氨基酸。重组融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为60 000,可被亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清识别。筛选获得5株稳定分泌Ta EP45抗体的杂交瘤细胞株,其抗体效价均≥1∶2 430,亚型分别为IgG2b或IgG1。Western blotting分析结果显示, 5株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体均能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应。结论表达纯化了Ta EP45,筛选出5株能稳定分泌高滴度Ta EP45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应。

关键词：亚洲带绦虫 45 kDa雌激素调节蛋白杂交瘤细胞株

抗IBDV独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及其产物生物学特性测定

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生物工程学报 2003年第4期19卷 462-466页

作者：朱瑞良崔治中赵静扬州大学畜牧兽医学院扬州225009 山东农业大学动物科技学院泰安271018

用纯化的抗IBDVIgG免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 0细胞在聚乙二醇 (PEG)作用下融合 ,ELISA法检测筛选 ,经有限稀释法克隆 3次 ,获得 2株 (5F4株 ,2B6 株 )分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株 ,其能诱生Balb c小鼠产生ELISA抗体效... 详细信息

用纯化的抗IBDVIgG免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 0细胞在聚乙二醇 (PEG)作用下融合 ,ELISA法检测筛选 ,经有限稀释法克隆 3次 ,获得 2株 (5F4株 ,2B6 株 )分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株 ,其能诱生Balb c小鼠产生ELISA抗体效价分别为 1∶12 80 0和 1∶2 5 60 0的含抗IBDV独特型抗体的腹水。用此独特型抗体与福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂乳化制备成抗IBDV独特型抗体疫苗 ,免疫接种SPF鸡和普通京白公鸡 ,然后用IBDV强毒株 (SD株 ) 2 0 0 0ELD50 攻毒 ,SPF鸡免疫组 5 0只 ,有 5只发病、2只死亡 ;对照组 10只全部发病 ,8只死亡。普通京白鸡免疫组 3 0只 ,有 7只发病 ,1只死亡 ;对照组 10只全部发病 ,6只死亡。经X2 检验 ,SPF鸡X2 =3 4 15 ,普通鸡X2 =16 68,查X2 值表得X2(1 ) 0 0 1 =6 63 ,SPF鸡X2 和普通鸡X2 均大于X2(1 ) 0 0 1 (P <0 0 1) ,由此表明抗IBDV独特型抗体疫苗具有很好的免疫原性 ,对易感日龄的SPF鸡和普通鸡均具有极其明显的保护作用。

关键词： IBDV 杂交瘤细胞株产物生物学特性抗独特型抗体鸡传染性法氏囊病

抗SRBC杂交瘤细胞株的建立及其在细胞毒T细胞功能测定中的应用

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中国免疫学杂志 1989年第1期5卷 17-19页

作者：马爱红谢蜀生龙振洲北京医科大学免疫学教研室

本文报告用淋巴细胞杂交瘤技术建立抗SRBC的杂交瘤细胞株MX-87的方法及其应用情况。MX-87具有H-2~d表型并分泌IgM类抗SRBC单克隆抗体。用微量溶血空斑试验检查,每个MX-87杂交瘤细胞都可以形成一个清晰、透明的空斑。以这个杂交瘤细胞作... 详细信息

本文报告用淋巴细胞杂交瘤技术建立抗SRBC的杂交瘤细胞株MX-87的方法及其应用情况。MX-87具有H-2~d表型并分泌IgM类抗SRBC单克隆抗体。用微量溶血空斑试验检查,每个MX-87杂交瘤细胞都可以形成一个清晰、透明的空斑。以这个杂交瘤细胞作为靶细胞,用空斑减少试验可以敏感地检测细胞毒T细胞(CTL)的功能。本文探讨了用溶血空斑减少试验进行CTL功能测定的最适条件。

关键词：杂交瘤细胞株抗SRBC 细胞毒T细胞

分泌抗Bt Cry1Ac蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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高技术通讯 2005年第2期15卷 91-93页

作者：乔艳红张维林敏张杰潘家荣中国农业科学院农产品加工研究所北京100094 中国农业科学院生物技术研究所北京100094 中国农业科学院植物保护研究所北京100094

从苏云金芽孢杆菌HD-73中提取Bt Cry1Ac蛋白,电镜观察Bt Cry1Ac蛋白为标准的菱形.用SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞与经该Bt Cry1Ac蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,经3次克隆化,筛出两株稳定分泌Bt Cry1Ac单克隆的杂交瘤细胞株1C3、2F3.两株... 详细信息

从苏云金芽孢杆菌HD-73中提取Bt Cry1Ac蛋白,电镜观察Bt Cry1Ac蛋白为标准的菱形.用SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞与经该Bt Cry1Ac蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,经3次克隆化,筛出两株稳定分泌Bt Cry1Ac单克隆的杂交瘤细胞株1C3、2F3.两株细胞均具有抗Bt Cry1Ac特异性,与Bt Cry1Ab和Bt Cry2A无明显的交叉反应,经亚型鉴定均为IgG1.腹水滴度均为1∶1024000.

关键词： c蛋白杂交瘤细胞株抗B 分泌单克隆抗体克隆化滴度 Cry1 苏云金芽孢杆菌 BALB/c小鼠

抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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中国兽医科技 2005年第12期35卷 979-982页

作者：杨百亮冯力赵翠萍孙东波张建斌天津农学院动物科学系天津300384 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

应用杂交瘤技术获得了1株分泌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞2D6。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG3;杂交瘤染色体数为88;间接ELISA检测细胞培养上清液效价为1∶256,诱生腹水抗体效价达1∶6×104,与猪流行性腹泻病... 详细信息

应用杂交瘤技术获得了1株分泌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞2D6。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG3;杂交瘤染色体数为88;间接ELISA检测细胞培养上清液效价为1∶256,诱生腹水抗体效价达1∶6×104,与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪致病性大肠埃希氏菌(Escherichia coli)以及禽传染性支气管炎病毒(IBV)抗原之间均无交叉反应;ELISA阻断试验表明,TGEV特异性阳性血清对TGEV-McAb有明显的阻断作用,该McAb所识别的抗原是TGEV所特有的抗原决定基。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株

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抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建

海洋环境科学 2019年第5期38卷 804-808页

作者：周勇韩德明马煜宁程金平上海交通大学环境科学与工程学院

为了构建针对石油运输泄露导致的海洋环境中萘等多环芳烃污染的免疫学快速检测方法,需获得高效稳定的分泌抗萘单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文以2-萘丁酸-KLH为免疫抗原免疫BALb/c小鼠,间接竞争ELISA测定小鼠血清效价,用细胞融合筛选技... 详细信息

为了构建针对石油运输泄露导致的海洋环境中萘等多环芳烃污染的免疫学快速检测方法,需获得高效稳定的分泌抗萘单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文以2-萘丁酸-KLH为免疫抗原免疫BALb/c小鼠,间接竞争ELISA测定小鼠血清效价,用细胞融合筛选技术筛选抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株,捕获ELISA测定小鼠免疫球蛋白亚型。结果显示,实验小鼠免疫血清效价最高能达到1∶80000,经过HAT筛选、复检和亚克隆后得到5个能分泌抗萘单克隆抗体的细胞株,细胞株上清液效价最高能达到1∶15625,抗萘单克隆抗体免疫球蛋白亚型均为IgG1,Kappa轻链。本方法成功构建的杂交瘤细胞株能稳定高效分泌抗萘单克隆抗体,抗体亚型符合免疫学检测的特性,为萘的ELISA检测方法建立及胶体金免疫层析(GICA)试纸条的研制提供了稳定高效的单克隆抗体源。

关键词：萘杂交瘤细胞株单克隆抗体 HAT筛选 GICA

抗鹦鹉热衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

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中国人兽共患病杂志 2005年第12期21卷 1125-1126页

作者：邱洪流谢琴宁夏医学院护理学院银川750021 宁夏大学生命科学院

鹦鹉热衣原体（Chlamydia Psittaci，Cps）是感染人和多种畜禽的病原体，自70年代以来，我国青海、广西、湖南、四川、陕西等省区先后对衣原体病在山羊、猪、鸡、鸽、牦牛等动物中的流行及诊断研究作了报道。随着单克隆抗体（McAb）检... 详细信息

鹦鹉热衣原体（Chlamydia Psittaci，Cps）是感染人和多种畜禽的病原体，自70年代以来，我国青海、广西、湖南、四川、陕西等省区先后对衣原体病在山羊、猪、鸡、鸽、牦牛等动物中的流行及诊断研究作了报道。随着单克隆抗体（McAb）检测技术的发展，如能将其引入该病的检测，必将大大提高该病检测技术的特异性、敏感性和简便性。为此，我们进行了本项研究、制备了具有抗牛源鹦鹉热衣原体特异性的单克隆抗体并进行了初步应用研究，现报告如下。[第一段]

关键词：鹦鹉热衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株初步检测技术诊断研究病原体敏感性牦牛异性

抗人全T细胞单克隆抗体大鼠杂交瘤细胞株的建立

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中国免疫学杂志 1989年第2期5卷 71-74页

作者：夏汉章 Raveot AM Ninane J Bazin H 中国医学科学院肿瘤研究所免疫室布鲁塞尔新鲁汶大学医学院血液免疫研究室实验免疫学研究室

通过融合大鼠免疫细胞株IR983F和经T细胞株HPB—ALL免疫大鼠脾细胞,获得分泌单克隆抗体LO—CD6a的杂交瘤细胞株。实验证实,LO—CD6a是人全T细胞特异性的。

关键词： T细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株

分泌抗ALD-A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与初步应用

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第二军医大学学报 1990年第1期11卷 15-18页

作者：吴存忠郭向阳戴益民陶文照张柏和吴孟超第二军医大学病理解剖学教研室长海医院肝胆外科研究所

用兔肌ALD-A免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选后得到5株分泌高效价特异性抗ALD-A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中E_10株所分泌的单克隆抗体经鉴定属IgM。免疫组化定位研究发现,该抗体除对肌肉组织有弱阳性反应外,对正常人肝、脾、肺、胃和结... 详细信息

用兔肌ALD-A免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选后得到5株分泌高效价特异性抗ALD-A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中E_10株所分泌的单克隆抗体经鉴定属IgM。免疫组化定位研究发现,该抗体除对肌肉组织有弱阳性反应外,对正常人肝、脾、肺、胃和结肠组织均呈阴性反应。而对人肝癌组织则不论是血清AFP阳性者或血清AFP阴性者均呈阳性反应。提示抗ALD-A单克隆抗体在肝癌,特别是AFP阴性肝癌的诊断中,具有潜在的应用前景。

关键词：单克隆抗体 ALD 肝癌杂交瘤细胞株