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木香烃内酯通过调控circ_0000285/miR-409-3p影响胃癌细胞恶性表型

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肿瘤药学 2024年第2期14卷 193-202页

作者：刘昭郑志超张亚鹏任玉川阳泉市第一人民医院肿瘤内科山西阳泉045001 辽宁省肿瘤医院胃外科辽宁沈阳110042

目的探讨木香烃内酯对胃癌细胞恶性表型的影响及可能机制。方法体外培养胃癌细胞HGC-27,采用不同剂量(2.5、10、40μmol·L^(-1))木香烃内酯干预HGC-27细胞24 h,或转染circ_0000285小干扰RNA至HGC-27细胞后培养24 h。采用40μmol·L^(-1... 详细信息

目的探讨木香烃内酯对胃癌细胞恶性表型的影响及可能机制。方法体外培养胃癌细胞HGC-27,采用不同剂量(2.5、10、40μmol·L^(-1))木香烃内酯干预HGC-27细胞24 h,或转染circ_0000285小干扰RNA至HGC-27细胞后培养24 h。采用40μmol·L^(-1)木香烃内酯干预转染circ_0000285过表达载体的HGC-27细胞24 h。CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Bcl-2、Bax、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,RT-qPCR检测circ_0000285和miR-409-3p表达,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000285和miR-409-3p的调控关系。结果木香烃内酯可降低HGC-27细胞的OD值、集落形成数、迁移距离、侵袭数,以及Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平,提高细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平,并呈剂量依赖性。木香烃内酯可抑制HGC-27细胞中circ_0000285的表达,促进miR-409-3p表达。干扰circ_0000285表达可降低HGC-27细胞的增殖、迁移能力,并促进细胞凋亡。circ_0000285可靶向结合并负调控miR-409-3p。过表达circ_0000285可逆转木香烃内酯对HGC-27细胞恶性表型的影响。结论木香烃内酯可能通过调控circ_0000285/miR-409-3p轴抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。

关键词：木香烃内酯胃癌 circ_0000285 miR-409-3p 细胞增殖迁移侵袭凋亡

UPLC-MS/MS法测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量

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光明中医 2024年第8期39卷 1566-1569页

作者：吴洋生蒋玲周云峰黄招光宜春市袁州区检验检测中心江西宜春336000 宜春市袁州区卫生健康服务中心江西宜春336000 宜春市检验检测中心江西宜春336000

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量。方法以Waters ACQUITY UPLC?BEH C18(1.7μm×2.1 mm×100 mm)为色谱柱,流动相为0.1%甲酸-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 ml/min,柱温35℃... 详细信息

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量。方法以Waters ACQUITY UPLC?BEH C18(1.7μm×2.1 mm×100 mm)为色谱柱,流动相为0.1%甲酸-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 ml/min,柱温35℃,进样量2μl;质谱采用电喷雾离子源(ESI)、正离子扫描模式,以多反应监测模式(MRM)进行数据采集,木香烃内酯的定量离子对为m/z 233→187,去氢木香内酯的定量离子对为m/z 231→185。结果木香烃内酯与去氢木香内酯分别在0.0430~2.1498μg/ml、0.0439~2.1970μg/ml浓度范围内线性关系良好(r≥0.9913),平均加标回收率为102.60%和95.56%,RSD分别为3.6%与2.3%。3批样品木香烃内酯的含量范围为5.267~5.574 mg/g,去氢木香内酯的含量范围为4.822~5.191 mg/g。结论所建方法能有效测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量,可为完善该制剂的质量标准提供借鉴。

关键词：心可舒胶囊木香木香烃内酯去氢木香内酯

蒙药制剂亚玛熏药散中木香烃内酯的含量测定方法研究

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中国民族民间医药 2024年第3期33卷 33-36页

作者：郭司群鲁海涛迟晓雪郭刚魏红呼伦贝尔市食品药品检验所内蒙古呼伦贝尔021008 呼伦贝尔市林业和草原科学研究所内蒙古呼伦贝尔021008 呼伦贝尔市疾病预防控制中心内蒙古呼伦贝尔021008

目的:建立亚玛熏药散中木香烃内酯的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为ZORBOX SB-C_(18) 5μm 4.6 mm×250 mm;流动相为乙腈∶水(50∶50)洗脱;流速:0.8 mL/min;柱温:35℃;检测波长:225 nm。结果:木香烃内酯在8.59~85.91μ... 详细信息

目的:建立亚玛熏药散中木香烃内酯的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为ZORBOX SB-C_(18) 5μm 4.6 mm×250 mm;流动相为乙腈∶水(50∶50)洗脱;流速:0.8 mL/min;柱温:35℃;检测波长:225 nm。结果:木香烃内酯在8.59~85.91μg/mL的浓度范围内线性关系良好,r=0.9999,回收率为97.4%。结论:该方法经方法学验证准确可行,可用于亚玛熏药散的质量控制。

关键词：高效液相色谱法亚玛熏药散木香烃内酯

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高效液相色谱法同时测定清热祛瘀液中丹皮酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯的含量

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中国处方药 2024年第7期22卷 34-37页

作者：饶玉萍宋佳陈金花蓝献泉李庆德郑锦坤陈华龙粤北人民医院广东韶关512026 韶关市食品药品检验所广东韶关512028

目的建立同时测定清热祛瘀液中丹皮酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯的反相高效液相色谱法。方法采用CAPCELL PAK C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(70:30),流速1.0 ml/min,检测波长:215 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果... 详细信息

目的建立同时测定清热祛瘀液中丹皮酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯的反相高效液相色谱法。方法采用CAPCELL PAK C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(70:30),流速1.0 ml/min,检测波长:215 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果丹皮酚在浓度范围0.7541~60.3291μg/ml(r=0.9996)、木香烃内酯在浓度范围1.1563~92.5074μg/ml(r=0.9999)、去氢木香烃内酯在浓度范围1.3818~110.5445μg/ml(r=0.9998),线性良好,三种物质检出限(LOD)为0.01~0.04μg/ml、定量限(LOQ)为0.03~0.13μg/ml;三种物质平均回收率为97.0%~103.5%,回收率RSD为1.3%~1.8%(n=6)。结论该方法操作简便,重复性好,准确度高,可用于清热祛瘀液的含量测定及质量控制。

关键词：清热祛瘀液高效液相色谱法丹皮酚木香烃内酯去氢木香烃内酯

木香烃内酯通过内质网应激和自噬诱导骨肉瘤细胞凋亡

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中国免疫学杂志 2022年第15期38卷 1803-1807,1812页

作者：刘景新陈余兴王贵海南西部中心医院骨科儋州571700

目的:探讨木香烃内酯(Cos)对骨肉瘤(OS)细胞凋亡的影响及其相关分子机制。方法:体外培养MG63细胞,采用不同浓度(5、10、15、20、25、40μmol/L)Cos处理MG63细胞48 h。CCK-8法检测细胞增殖抑制率,划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell小... 详细信息

目的:探讨木香烃内酯(Cos)对骨肉瘤(OS)细胞凋亡的影响及其相关分子机制。方法:体外培养MG63细胞,采用不同浓度(5、10、15、20、25、40μmol/L)Cos处理MG63细胞48 h。CCK-8法检测细胞增殖抑制率,划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell小室法测定细胞侵袭能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bax)、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及微管相关蛋白轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)、Beclin-1、p62蛋白表达水平。结果:Cos显著降低MG36细胞增殖活力,且其抑制作用呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。Cos显著降低MG36细胞迁移、侵袭能力,提高细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05)。Cos可显著上调MG36细胞的eIF2α、CHOP、PERK蛋白表达水平,上调MG36细胞中LC3B-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平,下调p62蛋白表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。Cos显著下调Bcl-2蛋白表达水平,上调Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05);内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(TUDC)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)均可逆转Cos对MG36细胞凋亡相关蛋白的调控作用。结论:Cos通过介导OS细胞内质网应激和自噬促进OS细胞凋亡。

关键词：木香烃内酯骨肉瘤凋亡自噬内质网应激

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木香烃内酯抗肿瘤活性研究进展

中国临床药理学与治疗学 2023年第10期28卷 1168-1176页

作者：刘丹刘明金良友潘娟辛昊儒刘梦圆李鑫郑坤冯晓灵重庆三峡医药高等专科学校三峡库区道地药材开发利用重庆市重点实验室重庆万州404120 重庆移通学院重庆綦江401520 重庆三峡学院重庆万州404120

近年来,中药抗肿瘤作用的研究呈现逐年增加的趋势,无论是中药有效提取成分或是复方制剂在肿瘤治疗方面都具有显著的疗效及优势。中药木香中的活性成分木香烃内酯是一种天然倍半萜内酯,具有多种药理作用,如抗氧化、抗炎、降血糖、抗微生... 详细信息

近年来,中药抗肿瘤作用的研究呈现逐年增加的趋势,无论是中药有效提取成分或是复方制剂在肿瘤治疗方面都具有显著的疗效及优势。中药木香中的活性成分木香烃内酯是一种天然倍半萜内酯,具有多种药理作用,如抗氧化、抗炎、降血糖、抗微生物等。近年来,越来越多的体内外实验研究表明,该成分具有抗肿瘤活性,可抑制乳腺癌、胃癌、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、肝癌、肺癌、卵巢癌、食管癌、结直肠癌、骨肉瘤等多种肿瘤的生长。其抗肿瘤的机制主要是通过调控PI3K/AKT/mTOR、AKT-MDM2-p53、ROS-AKT/GSK3β、Bcr/Abl和Stat5等信号通路,影响活性氧、细胞凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白、细胞周期蛋白等方面,从而诱导细胞凋亡、介导自噬及导致细胞周期阻滞在G2/M期、G1期、S期。此外,木香烃内酯与伊马替尼、阿霉素联用可以起到减毒增效、增强抗肿瘤作用,并且还能逆转肿瘤耐药。笔者通过查阅和整理国内外相关研究文献,对木香烃内酯抗肿瘤作用及机制、联合用药、逆转肿瘤耐药的研究进展进行综述,以期为该成分新药开发与利用提供理论依据。

关键词：木香烃内酯肿瘤机制研究进展联合用药

木香烃内酯对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其作用机制

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中国生物制品学杂志 2022年第10期35卷 1195-1199页

作者：刘丹张永慧何秀贞熊书马羚冯彬彬冯晓灵重庆三峡医药高等专科学校三峡库区道地药材开发利用重庆市重点实验室重庆404020

目的探讨木香烃内酯(costunolide,Cos)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将SMMC-7721细胞随机分为对照组、10、20、30μmol/L Cos剂量组。采用流式细胞术检测Cos对SMMC-7721细胞凋亡的影响,Western blot检测SMMC-7721... 详细信息

目的探讨木香烃内酯(costunolide,Cos)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将SMMC-7721细胞随机分为对照组、10、20、30μmol/L Cos剂量组。采用流式细胞术检测Cos对SMMC-7721细胞凋亡的影响,Western blot检测SMMC-7721细胞中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)通路相关蛋白(GRP78、CHOP、ATF4)的表达水平。结果 10、20和30μmol/L Cos剂量组SMMC-7721细胞凋亡率(apoptosis rate,AR)均明显高于对照组(P 0.05);各组SMMC-7721细胞中Caspase-3蛋白表达水平差异无统计学意义(P> 0.05);10、20μmol/L Cos剂量组SMMC-7721细胞中GRP78、CHOP、ATF4蛋白表达水平均明显升高(P <0.05)。结论 Cos可通过激活ERS通路促进诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡。

关键词：木香烃内酯肝癌 SMMC-7721细胞细胞凋亡内质网应激

木香烃内酯通过AMPK/mTOR信号通路抑制STX17-SNAP29-VAMP8复合物的形成增加卵巢癌细胞顺铂敏感性的机制研究

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木香烃内酯通过AMPK/mTOR信号通路抑制STX17-SNAP29-VAMP8复合物...

作者：梁宵川北医学院

学位级别：硕士

目的:明确木香烃内酯(Costunolide,CTD)对卵巢癌细胞生长增殖的作用,探讨木香烃内酯抑制卵巢癌细胞自噬的具体机制,并深入研究木香烃内酯通过抑制自噬促进卵巢癌细胞顺铂敏感性的具体调控机制。方法:(1)不同浓度CTD处理卵巢癌细胞后,CC... 详细信息

目的:明确木香烃内酯(Costunolide,CTD)对卵巢癌细胞生长增殖的作用,探讨木香烃内酯抑制卵巢癌细胞自噬的具体机制,并深入研究木香烃内酯通过抑制自噬促进卵巢癌细胞顺铂敏感性的具体调控机制。方法:(1)不同浓度CTD处理卵巢癌细胞后,CCK-8实验检测CTD对卵巢癌细胞生长增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡的变化,蛋白免疫印迹实验(Western Blot,WB)检测凋亡相关蛋白PRAP、Caspase9、Caspase8、Caspase3、Cleaved-Caspase3的表达变化。(2)通过m RFP-GFP-LC3双荧光系统、BSA淬灭实验、溶酶体探针结合流式细胞仪/激光共聚焦荧光显微镜检测CTD处理卵巢癌细胞24 h后自噬流的变化、自噬小体的成熟度、溶酶体的功能,WB实验检测自噬发生成熟过程中关键蛋白(p62、LC3B、Cathepsin B、LAMP2)表达水平的变化。(3)使用不同浓度的CTD处理卵巢癌细胞,联合或不联合Metformin(AMPK激活剂)或Torin 1(m TOR激酶抑制剂)处理卵巢癌细胞24 h后,利用Western Blot检测细胞自噬相关蛋白、AMPK/m TOR信号通路相关蛋白(p-AMPK、AMPK、p-m TOR、m TOR)表达水平的变化。(4)在卵巢癌细胞中过表达VAMP8或Torin1处理细胞,联合或不联合CTD处理细胞24 h后,WB实验检测SNARE复合体(STX17、SNAP29、VAMP8)的蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜检测自噬泡与溶酶体的融合的变化,m RFP-GFP-LC3双荧光系统结合流式细胞仪检测自噬流的变化;蛋白质免疫共沉淀实验(Immunoprecipitation,IP)检测CTD调控的SNARE复合体形成的变化。(5)CTD处理A2780或ES-2细胞,联合或不联合CDDP处理细胞24 h,CCK-8实验检测细胞生长增殖的变化,流式细胞仪检测凋亡的变化,WB实验检测凋亡相关蛋白PRAP、Bcl-2、Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3及自噬相关蛋白p62、LC3B的表达情况。(6)通过动物皮下瘤实验检测CTD与CDDP联合使用对卵巢癌细胞生长增殖的影响,WB实验检测凋亡、自噬及AMPK/m TOR信号通路相关蛋白的表达水平,免疫组织化学染色检测小鼠皮下瘤组织Ki67的表达。结果:(1)CCK-8实验、细胞周期及凋亡检测和WB实验结果显示CTD能够显著抑制卵巢癌细胞的生长增殖,诱导细胞凋亡以及阻滞细胞周期在G2/M期。(2)通过m RFP-GFP-LC3双荧光系统、BSA淬灭实验、溶酶体探针结合流式细胞仪/激光共聚焦荧光显微镜的结果显示在卵巢癌细胞中CTD是通过阻止自噬启动和阻断自噬泡与溶酶体的融合来抑制自噬流,而不是影响溶酶体的功能,WB实验结果也显示CTD上调了自噬相关蛋白p62、LC3B、Cathepsin B、LAMP2的表达。(3)CTD通过抑制AMPK/m TOR信号及下游靶蛋白的表达进而抑制自噬的启动。(4)CTD不仅抑制STX17-SNAP29-VAMP8复合物的形成,并通过m TORC1介导的VAMP8下调,进而阻断了自噬泡与溶酶体融合;同时免疫共沉淀结果也表明了CTD调控SNARE复合物分子间的相互结合。(5)CTD不仅阻断顺铂诱导的保护性自噬,并通过激活Caspase3使得卵巢细胞对凋亡更加敏感。(6)动物皮下瘤实验结果显示,与单药治疗组相比,CTD联合CDDP治疗可明显抑制肿瘤的生长并减轻肿瘤的重量;WB实验结果显示CTD通过抑制AMPK/m TOR信号通路进而抑制自噬的发生,导致卵巢癌细胞对CDDP诱导凋亡的敏感性增强。结论:(1)CTD可以呈时间-浓度依赖性抑制卵巢癌细胞的生长增殖、诱导凋亡和阻滞细胞周期在G2/M期。(2)CTD抑制卵巢癌细胞的自噬启动,但不影响溶酶体功能。(3)CTD通过抑制AMPK/m TOR信号通路进而抑制卵巢癌细胞的自噬。(4)CTD通过抑制SNARE复合物的形成进而抑制自噬泡与溶酶体的融合。(5)CTD通过抑制CDDP诱导的自噬从而促使卵巢癌细胞对CDDP敏感。(6)CTD增强了CDDP在体内对卵巢癌异种移植瘤的疗效。

关键词：木香烃内酯自噬溶酶体顺铂卵巢癌

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木香烃内酯抗骨质疏松动物实验研究

木香烃内酯抗骨质疏松动物实验研究

作者：魏朋兰州理工大学

学位级别：硕士

木香烃内酯(Costunolide,CTL)是从传统中药木香中提取分离出的一种具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗癌和抗糖尿病等多种生物活性的天然倍半萜内酯。本课题组在前期研究中发现,CTL有促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨性分化活性,提示其可能有... 详细信息

木香烃内酯(Costunolide,CTL)是从传统中药木香中提取分离出的一种具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗癌和抗糖尿病等多种生物活性的天然倍半萜内酯。本课题组在前期研究中发现,CTL有促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨性分化活性,提示其可能有抗骨质疏松作用。为此,本论文开展了CTL抗骨质疏松动物实验。第一部分为对生长期大鼠骨质量影响的研究,选用1月龄SD雌性大鼠30只,随机分为3组:对照组(Control)、9 mg/kg/d CTL给药组(CTL-9)组和18mg/kg/d CTL给药组(CTL-18)组,每组10只。8周后处死所有大鼠,检测骨密度,进行骨微结构分析。第二部分为抗绝经后骨质疏松的研究,选用3月龄Wistar雌性大鼠60只,随机分为5组:假手术组(Sham-operated,Sham)、切除卵巢组(ovariectomized,OVX)、炔雌醇组(ethinylestradiol,EE)、CTL-9和CTL-18,每组12只。除Sham外均采用卵巢切除术建立大鼠绝经后骨质疏松模型,CTL-9组灌胃剂量为9 mg/kg/d,CTL-18组为18 mg/kg/d,EE组灌胃剂量为200μg/kg/d,OVX和Sham组仅灌服等体积生理盐水。8周后处死所有大鼠,检测离体骨密度、生物力学指标、血清骨代谢指标,进行Micro-CT扫描和骨组织形态计量学分析,并通过大鼠体重变化、脏器系数和脏器切片的组织病理学观察等评价用药安全性。主要实验结果如下:1.9 mg/kg/d和18 mg/kg/d的CTL均可显著提高生长期大鼠的骨密度,优化骨微结构,提高骨质量;2.18 mg/kg/d的CTL可以阻止切除卵巢大鼠发生骨质疏松;3.18 mg/kg/d的CTL能保持切除卵巢大鼠的骨密度和股骨、椎骨的生物力学性能,避免骨微结构的退化;4.血清骨代谢生化指标检测结果表明,CTL通过促进骨形成而抑制骨吸收来发挥抗骨质疏松活性;5.药物安全性评价结果表明,CTL对大鼠主要器官无明显毒副作用,并且可能具有雌激素样活性。以上结果表明:木香烃内酯可预防切除卵巢大鼠发生骨质疏松,并明显改善生长期大鼠的骨质量,具有开发为抗骨质疏松新药的潜在价值。

关键词：木香烃内酯骨质疏松症卵巢切除术骨密度骨形态计量学