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曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白质的分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第2期28卷 129-132页

作者：蒋红涛陈艳唐贵文陈璐贵阳医学院寄生虫学教研室贵阳550004 贵州出版集团贵阳550004

目的分析曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白组分。方法提取曼氏迭宫绦虫裂头蚴总蛋白后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向凝胶电泳(2-DE)进行分离,转膜后用感染裂头蚴小鼠的血清和健康小鼠血清作为一抗,行蛋白质印迹(We... 详细信息

目的分析曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白组分。方法提取曼氏迭宫绦虫裂头蚴总蛋白后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向凝胶电泳(2-DE)进行分离,转膜后用感染裂头蚴小鼠的血清和健康小鼠血清作为一抗,行蛋白质印迹(Western blotting)分析,比较杂交蛋白点的差异。结果曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白经SDS-PAGE分离出33条蛋白带,相对分子质量(Mr)范围在13800～145400,其中Mr26500、Mr37600、Mr88200和Mr130200为高丰度蛋白区带。经Western blotting分析,Mr31600和Mr37600条带为曼氏迭宫绦虫裂头蚴特异性蛋白条带,能被感染小鼠血清识别。裂头蚴总蛋白双向电泳凝胶的蛋白质斑点总数为367个,大部分分布在Mr18840～46800,246个蛋白质斑点的等电点为4.0～7.0,占总数的67%;Western blotting分析显示,30个抗原抗体结合点为特异性抗原斑点。结论曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白有2条特异性蛋白带和30个特异性蛋白斑点,以偏酸性为主。

关键词：曼氏迭宫绦虫裂头蚴抗原 SDS-PAGE 蛋白质印迹双向电泳

曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I(SmCaMK I)基因的生物信息学分析与表达鉴定

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中国人兽共患病学报 2016年第12期32卷 1044-1050,1057页

作者：李奕基陈新新符瑞佳陈小静吕刚梁培海南医学院热带病转化医学教育部重点实验室海口571199 海南医学院热带医学与检验医学院海口571199 海南大学农学院海口570228

目的开展SmCaMK I(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I)的潜在生物学特征分析和功能研究。方法利用相关网站和软件对SmCaMK I的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测。此外,... 详细信息

目的开展SmCaMK I(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I)的潜在生物学特征分析和功能研究。方法利用相关网站和软件对SmCaMK I的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测。此外,SmCaMK I进行扩增,并克隆到表达载体pET-28α(+)中进行蛋白的表达纯化,制备大鼠免疫血清进行虫体免疫组织定位分析。结果 SmCaMK I是一个全长基因,由1 068bp组成,编码355个氨基酸。SmCaMK I与细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫的CaMK I保守功能域的氨基酸序列一致性分别为89%和88%,与人的CaMK I氨基酸序列一致性仅仅只有44%。分子进化树分析中SmCaMK I与绦虫属的亲缘关系最近,与其他物种亲缘性较远。与人类CaMK I相比,淋巴细胞表位具有统计学差异。SmCaMK I能够定位在成虫的睾丸和虫卵,在裂头蚴中大量表达和特异定位于体表。结论SmCaMK I是参与虫体生长发育繁殖的重要蛋白分子,还可能是一个潜在的疫苗靶标蛋白。

关键词：曼氏迭宫绦虫 SmCaMK I 生物信息学分析原核表达免疫组织化学定位

曼氏迭宫绦虫果糖-1,6-二磷酸酶的生物信息学分析、基因克隆及蛋白表达

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中国病原生物学杂志 2020年第7期15卷 805-811页

作者：王清吟谭钦月符瑞佳周晓君刘亚妹王妹妹林于金左世亮韩媛尹飞飞吕刚梁培海南医学院热带医学与检验医学院海南海口571199 海南医学院热带病转化医学教育部重点实验室宁波市奉化区人民医院共体总院浙江宁波315500 广元市中心医院海南省人民医院

目的通过生物信息学分析预测曼氏迭宫绦虫果糖-1,6-二磷酸酶(SmFBPase)的生物学特性,同时对SmFBPase进行基因克隆及蛋白原核表达。方法通过NCBI网站对SmFBPase基因序列进行开放阅读框分析和核苷酸序列同源性分析。通过ExPASy网站预测SmF... 详细信息

目的通过生物信息学分析预测曼氏迭宫绦虫果糖-1,6-二磷酸酶(SmFBPase)的生物学特性,同时对SmFBPase进行基因克隆及蛋白原核表达。方法通过NCBI网站对SmFBPase基因序列进行开放阅读框分析和核苷酸序列同源性分析。通过ExPASy网站预测SmFBPase的理化性质、结构及表位等特性。构建pET-28α-SmFBPase重组质粒,并转化入~***^BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷对其诱导表达,用Western blot进行鉴定。结果SmFBPase由337个氨基酸组成,无信号肽、无跨膜区,理论相对分子质量约37×10~3,为稳定胞内蛋白。SmFBPase的氨基酸序列与人FBPase的氨基酸序列一致性为61.77%,且进化树中两者亲缘性较远,该蛋白含有13个B细胞表位。PCR、双酶切鉴定及测序分析,证明重组质粒构建成功。Western blot显示重组质粒转化BL21后成功诱导表达SmFBPase蛋白。结论生物信息学分析SmFBPase是一个具有潜在研究价值的药物靶点,原核表达的SmFBPase具有反应原性,为研究其糖代谢规律奠定了基础。

关键词：曼氏迭宫绦虫果糖-1,6-二磷酸酶生物信息学分析蛋白原核表达药物靶点

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曼氏迭宫绦虫裂头蚴活体供肾脂肪囊寄生1例

中国组织工程研究与临床康复 2010年第5期14卷 906-908页

作者：谢续标彭龙开彭风华王彧蓝恭斌余少杰中南大学湘雅二医院器官移植中心泌外器官移植科湖南省长沙市410011

通过现有病例结合相关文献分析曼氏裂头蚴在供肾的寄生特征。49岁女性自愿捐献一肾脏给儿子,健康评估结果符合活体捐献肾脏标准。供肾切取后,修肾时发现供肾腹侧面脂肪囊内近肾门处有一长条形囊肿,切开囊肿,从中抽出一条乳白色活动的带... 详细信息

通过现有病例结合相关文献分析曼氏裂头蚴在供肾的寄生特征。49岁女性自愿捐献一肾脏给儿子,健康评估结果符合活体捐献肾脏标准。供肾切取后,修肾时发现供肾腹侧面脂肪囊内近肾门处有一长条形囊肿,切开囊肿,从中抽出一条乳白色活动的带状虫体,经鉴定为曼氏迭宫绦虫裂头蚴(活体)。囊肿病理检查为肉芽肿性炎症,并中性粒细胞及嗜酸粒细胞浸润。术后供、受者均服用吡喹酮治疗,3个月内多次粪检均未见节片和虫卵排出,也无任何不适症状。供者感染的方式和途径可能是食用未熟的转续宿主肉类或误食受感染的剑水蚤。肾移植前供、受者应进行曼氏裂头蚴等寄生虫感染的检查。由于寄生于肾脏的裂头蚴由于无明显症状,很少被发现,从粪便中查到本虫虫卵为诊断曼氏迭宫绦虫病的依据,询问病史有一定参考价值,血中嗜酸粒细胞增多常提示慢性寄生虫感染,必要时还可以进行动物感染实验,还可以用裂头蚴抗原进行各种免疫学试验可为该病提供免疫学辅助诊断依据。确诊主要靠手术或病理组织检查取得虫体即可确诊并治疗。综合采用CT检查和MRI检查等放射影像技术对供肾裂头蚴病有一定的鉴别诊断价值。

关键词：曼氏迭宫绦虫曼氏裂头蚴病肾移植亲属活体供者

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曼氏迭宫绦虫动物模型的建立和生活史观察

中国人兽共患病学报 2011年第2期27卷 152-153页

作者：蔺西萌张红卫刘长军赵旭东郑丽媛许汴利陈伟奇河南省疾病预防控制中心郑州450016

目的建立曼氏迭宫绦虫动物模型,观察其生活史。方法从感染蛇体内分离曼氏裂头蚴,感染终宿主(猫)和中间宿主(剑水蚤、蝌蚪),以观察其从虫卵孵出幼虫、感染第一、二中间宿主剑水蚤、蝌蚪和终宿主猫的生活史过程。结果感染猫12d后粪检发现... 详细信息

目的建立曼氏迭宫绦虫动物模型,观察其生活史。方法从感染蛇体内分离曼氏裂头蚴,感染终宿主(猫)和中间宿主(剑水蚤、蝌蚪),以观察其从虫卵孵出幼虫、感染第一、二中间宿主剑水蚤、蝌蚪和终宿主猫的生活史过程。结果感染猫12d后粪检发现虫卵,经解剖猫获得成虫、虫卵;虫卵在室温培养12d孵出钩球蚴,感染剑水蚤6d后发育为原尾蚴;感染蝌蚪后第28d发现裂头蚴。结论成功建立曼氏迭宫绦虫动物模型,裂头蚴在猫体内成熟时间仅12d。

关键词：曼氏迭宫绦虫曼氏裂头蚴动物模型猫剑水蚤蝌蚪生活史

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曼氏迭宫绦虫成虫及裂头蚴蛋白电泳初步分析

中国人兽共患病杂志 1992年第1期8卷 16-17页

作者：郭虹吕刚甘秀凤林琼连夏秋菊海南医学院寄生虫学教研室

本文应用PAGE和SDS-PAGE技术对曼氏迭宫绦虫成虫及其裂头蚴的可溶性蛋白作了初步分析及其分子量测定。PAGE:成虫显带23条,主带4条;裂头蚴显带18条,主带5条。SDS-PAGE:成虫显示37条区带、主带10条(分子量分别为71,63,53,44,41,33,30,22,2... 详细信息

本文应用PAGE和SDS-PAGE技术对曼氏迭宫绦虫成虫及其裂头蚴的可溶性蛋白作了初步分析及其分子量测定。PAGE:成虫显带23条,主带4条;裂头蚴显带18条,主带5条。SDS-PAGE:成虫显示37条区带、主带10条(分子量分别为71,63,53,44,41,33,30,22,20,10.5KD);裂头蚴显示24条区带,主带4条(分子量分别为54,41,36,33KD)。成虫和裂头蚴的蛋白电泳图谱及主带分布有显著差别。

关键词：曼氏迭宫绦虫裂头蚴蛋白 PAGE

曼氏迭宫绦虫异柠檬酸脱氢酶的基因克隆、蛋白表达及其在裂头蚴阶段的转录水平检测分析

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中国病原生物学杂志 2022年第9期17卷 1030-1034页

作者：梁鹏张园元符瑞佳王大勇梁培海南医学院热带病转化医学教育部重点实验室海南海口571199 广州金域医学检验中心海南大学生命科学与药学院生物技术与分子药理学实验室

目的利用生物信息学方法识别和分析曼氏迭宫绦虫异柠檬酸脱氢酶(SmNAD-IDH)核苷酸序列及生物学特征;克隆该基因并诱导蛋白表达,分析其在裂头蚴阶段的转录水平。方法利用生物信息学在线分析工具对SmNAD-IDH基因的核苷酸序列进行识别,预... 详细信息

目的利用生物信息学方法识别和分析曼氏迭宫绦虫异柠檬酸脱氢酶(SmNAD-IDH)核苷酸序列及生物学特征;克隆该基因并诱导蛋白表达,分析其在裂头蚴阶段的转录水平。方法利用生物信息学在线分析工具对SmNAD-IDH基因的核苷酸序列进行识别,预测分析氨基酸序列的理化性质。分别以曼氏迭宫绦虫裂头蚴cDNA、孕节cDNA和成节cDNA作为模板PCR扩增目的基因,扩增产物与表达载体pET-30a重组后转化至BL21细胞中诱导蛋白表达。利用real time PCR技术分析裂头蚴阶段三羧酸循环中3个关键代谢酶的转录水平。结果BLASTx分析SmNAD-IDH基因全长1095 bp,编码蛋白由356个氨基酸组成。该基因与其他寄生虫同源基因核苷酸序列一致性>70%,与人类同源基因核苷酸序列一致性为51%。该蛋白的理论等电点为6.84,分子质量为40 ku,并且氨基酸序列中无信号肽和跨膜区,为脂溶性稳定的胞内蛋白。SmNAD-IDH在裂头蚴、成节、孕节中均有表达,在裂头蚴阶段三羧酸循环中的关键酶柠檬酸合成酶、酮戊二酸脱氢酶、SmNAD-IDH均有转录,以SmNAD-IDH的转录水平较高。结论成功重组SmNAD-IDH基因并诱导SmNAD-IDH蛋白表达,该蛋白对于曼氏迭宫绦虫,尤其是裂头蚴,是具有潜在研究价值的重要代谢酶。

关键词：曼氏迭宫绦虫 SmNAD-IDH 基因克隆蛋白表达转录水平

曼氏迭宫绦虫成虫及裂头蚴3种同工酶电泳分析

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中国人兽共患病杂志 1993年第1期9卷 12-13页

作者：郭虹吕刚林琼莲甘秀凤夏秋菊海南医学院

应用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE),对曼氏迭宫绦虫成虫及幼虫裂头蚴的乳酸脱氢酶同工酶、酯酶同工酶及苹果酸脱氢酶同工酶进行了分析测定。结果显示,成虫与幼虫的3种同工酶谱均有明显差别,反映出该绦虫在不同的发育时期,其代谢... 详细信息

应用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE),对曼氏迭宫绦虫成虫及幼虫裂头蚴的乳酸脱氢酶同工酶、酯酶同工酶及苹果酸脱氢酶同工酶进行了分析测定。结果显示,成虫与幼虫的3种同工酶谱均有明显差别,反映出该绦虫在不同的发育时期,其代谢特点不同。

关键词：曼氏迭宫绦虫裂头蚴电泳同功酶

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曼氏迭宫绦虫虫卵孵化影响因素

中国热带医学 2021年第5期21卷 426-430页

作者：汤宪时姚甲凯宋文静张英梁幼生仝德胜江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064

目的本研究探讨实验室条件下环境因素对曼氏迭宫绦虫虫卵孵化的影响,筛选有利因素,以提高曼氏迭宫绦虫虫卵孵化率。方法在其他条件不变的情况下,分别研究自来水中的残留氯气、虫卵在粪便内滞留时间、不同的外部温度、长时间光照和摇晃... 详细信息

目的本研究探讨实验室条件下环境因素对曼氏迭宫绦虫虫卵孵化的影响,筛选有利因素,以提高曼氏迭宫绦虫虫卵孵化率。方法在其他条件不变的情况下,分别研究自来水中的残留氯气、虫卵在粪便内滞留时间、不同的外部温度、长时间光照和摇晃孵育体系对孵育体系内虫卵孵化率的影响。结果室温下,虫卵在自来水、脱氯水和去离子水中20 d的孵化率分别为21.4%、18.9%和20.6%,差异无统计学意义(P>0.05);25℃静置孵育20 d,在粪便中滞留1、3、5、10、15 d的虫卵孵化率分别为22.0%、22.2%、13.7%、0.6%和-0.8%;4、20、25、30、37、40℃条件下,虫卵的孵化率分别为7.0%、8.7%、17.3%、22.0%、25.8%和26.1%;25℃静置孵育20 d,接受光照组虫卵孵化率为19.2%,无光照组28.5%,但差异无统计学意义(P>0.05);30℃下孵育25 d,孵育体系接受规律摇晃的虫卵孵化率为33.1%,明显高于静置虫卵的孵化率7.2%,差异有统计学意义(P曼氏迭宫绦虫虫卵孵化率,在粪便中滞留小于3日的虫卵经淘洗入水可实现较高虫卵孵化率,提高孵育温度至30℃以上,摇晃孵育体系,避免长时间光照,有助于虫卵孵化率的提高。

关键词：曼氏迭宫绦虫虫卵孵化率影响因素