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胰岛素样生长因子-1诱导糖尿病性白内障晶状体上皮细胞表达MCP-1

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第8期23卷 778-779页

作者：马波惠延年第四军医大学西京医院眼科

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱发离体培养的白内障患者晶状体上皮分泌趋化性细胞因子(MCP-1)的作用。方法:将白内障手术中分离糖尿病性白内障患者晶状体上皮和非糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞分别离体培养。加入重组IGF-1... 详细信息

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱发离体培养的白内障患者晶状体上皮分泌趋化性细胞因子(MCP-1)的作用。方法:将白内障手术中分离糖尿病性白内障患者晶状体上皮和非糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞分别离体培养。加入重组IGF-1作用后,以RT-PCR方法检测MCP-1mRNA,夹心ELISA法检测MCP-1蛋白分泌水平。进行核提取后以Westernblot检测转录因子Sp-1核转移水平。利用Sp-1特异性阻抑剂米拉霉素共同孵育后收集上清观察MCP-1水平。结果:成功建立晶状体上皮细胞体外培养体系。IGF-1诱导伴发糖尿病性白内障患者晶状体上皮分泌MCP-1水平明显高于无糖尿病组。IGF-1作用于晶状体上皮细胞后能够活化Sp-1,Sp-1的特异性抑制能够明显降低MCP-1的表达。结论:IGF-1通过Sp-1途径诱导MCP-1的分泌表达。与非糖尿病性白内障患者相比,糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞产生更多的MCP-1。

关键词：糖尿病白内障晶状体上皮胰岛素样生长因子-1 单核细胞趋化蛋白-1

姜黄素抑制尾加压素-Ⅱ诱导的人晶状体上皮细胞增殖及[Ca^(2+)]_i、cAMP、cGMP信号转导机制

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中国病理生理杂志 2010年第A10期26卷 2068-2069页

作者：祁明信黄秀榕胡俊杨丽英福建中医药大学病理生理研究中心福建福州350003

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)抑制尾加压素II(urotensin II,U-II)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelialcells,HLECs)增殖及[Ca2+]i、cAMP、cGMP信号转导机制。方法:将U-II诱导体外培养的HLECs发生增殖,并用不同浓度的Cur与其共同孵育后用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HLECs活性、流式细胞术(flow cytometer,FCM)检测HLECs增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达、荧

关键词：信号转导机制 Ca 细胞增殖晶状体上皮加压素环化腺苷酸 monophosphate proliferating 增殖细胞核抗原 curcumin

TGF-β1、bFGF在先天性白内障晶状体上皮细胞内表达增强

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基础医学与临床 2007年第10期27卷 1168-1169页

作者：肖瑛高志娟潘庆敏赵敬杰山东大学第二医院眼科山东济南250033 山东大学第二医院分子生物实验室山东济南250033

近年来,细胞因子与白内障关系的研究很多,但在先天性白内障患者中的表达尚未见报道.我们通过检测TGF-β1、bFGF在先天性白内障晶状体上皮细胞内的表达,以期为探讨先天性白内障的发病机制提供一些依据.

关键词：先天性白内障 TGF-β1 晶状体上皮 bFGF 细胞内表达增强白内障患者细胞因子

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电场暴露抑制晶状体上皮伤口的愈合

眼科 2006年第4期15卷 274-276页

作者：王恩普王恩彤空军总医院眼科北京100036 空军总医院耳鼻咽喉头颈外科

目的探讨电场暴露对晶状体上皮伤口愈合的作用。设计实验研究。研究对象原代培养的牛晶状体上皮细胞。方法钝头玻璃针戳刺原代培养的牛晶状体上皮细胞单层形成圆形微伤口,暴露于场强为200mV/mm的直流电场2h(n=37),未受电场暴露的伤口作... 详细信息

目的探讨电场暴露对晶状体上皮伤口愈合的作用。设计实验研究。研究对象原代培养的牛晶状体上皮细胞。方法钝头玻璃针戳刺原代培养的牛晶状体上皮细胞单层形成圆形微伤口,暴露于场强为200mV/mm的直流电场2h(n=37),未受电场暴露的伤口作为对照(n=29),由Leica图像分析系统测量伤后0h、1h和2h的伤口面积。用抗F-actin荧光抗体染色观察伤口细胞微丝骨架。主要指标伤口面积及细胞微丝骨架的排列。结果与对照伤口比较,电场暴露伤口愈合延迟,电场暴露伤口伤后2h的平均面积(19106μm2±2167μm2)明显大于未接受电场暴露的对照伤口(8555μm2±1911μm2)(t=2.942,P=0.0045)。对照伤口细胞微丝骨架呈向心性排列,电场暴露伤口细胞微丝骨架则沿伤缘呈“索状”排列。结论生理强度的外源性电场可抑制晶状体上皮伤口的愈合。

关键词：电场晶状体上皮细胞运动伤口愈合

bFGF对人晶状体上皮细胞系内钙离子及IP3R、RyR的作用

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国际眼科杂志 2005年第2期5卷 235-238页

作者：曲勃张劲松中国医科大学附属第四医院眼科中国辽宁省沈阳市110001

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶状体上皮细胞系LEC-B3内静息Ca2+浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)、ryanodine受体(RyR)表达的影响。方法:LEC-B3细胞系传代培养,分别以1,10,100μg/L bFGF诱导第3代细胞的增殖,MTT法检测其增殖... 详细信息

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶状体上皮细胞系LEC-B3内静息Ca2+浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)、ryanodine受体(RyR)表达的影响。方法:LEC-B3细胞系传代培养,分别以1,10,100μg/L bFGF诱导第3代细胞的增殖,MTT法检测其增殖度,激光扫描共聚焦显微镜测细胞内静息钙浓度;RT-PCR(reverse-transcriptase,PCR)方法检测10μg/L bFGF作用后细胞内IP3R和RyRmRNA的表达。结果:与对照组相比,3个浓度的bFGF对LEC-B3都有促增殖作用(P<0.01),其中10μg/L作用最强;bFGF作用后细胞内Ca2+浓度呈bFGF浓度依赖性增高,10μg/L,100μg/LP<0.01,1μg/L<0.05;10μg/L bFGF作用后的细胞IP3RI mRNA表达无明显变化,III型表达明显减弱(P<0.01),ryan-odineRI,IIImRNA表达升高(P<0.05,0.01)。结论:bFGF诱导LEC-B3细胞增殖引起细胞内钙离子浓度增加。Ca2+升高呈bFGF浓度依赖性,并不与细胞增殖度平行。bFGF对IP3R和RyR亚型的mRNA表达有一定影响,并且细胞内Ca2+浓度升高与bFGF刺激RyRmRNA表达升高有关。

关键词： IP3R 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 晶状体上皮细胞系内 ryanodine受体激光扫描共聚焦显微镜钙离子 RyR 三磷酸肌醇受体 Ca^2+浓度 MTT法检测上皮细胞系人晶状体传代培养 PCR) 细胞内第3代钙浓度静息增殖

HNE和Fenton合剂对晶状体上皮细胞骨骼的作用

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眼科研究 2005年第4期23卷 373-376页

作者：肖天林蒋幼芹 Naseem H.Ansari 长沙市爱尔眼科医院 Department of Human Biological Chemistry and Genetics University of Texas Medical Branch 77550 USA 410015

目的研究HNE和Fenton合剂对人晶状体上皮细胞株(HLEC)和大鼠晶状体的细胞骨骼的早期改变,以了解这些改变在白内障发生中的作用.方法HLEC及大鼠晶状体经HNE、Fenton合剂处理,使用试剂盒测定细胞凋亡,观察和记录白内障的变化;加抗肌动蛋白... 详细信息

目的研究HNE和Fenton合剂对人晶状体上皮细胞株(HLEC)和大鼠晶状体的细胞骨骼的早期改变,以了解这些改变在白内障发生中的作用.方法HLEC及大鼠晶状体经HNE、Fenton合剂处理,使用试剂盒测定细胞凋亡,观察和记录白内障的变化;加抗肌动蛋白、vimentin和微管蛋白抗体进行免疫组织化学及Western Blot分析.结果HNE诱导HLEC细胞凋亡发生在接触后1 h,2～4 h最为明显;Fenton合剂迟至4 h发生,48 h达高峰.HNE和Fenton合剂均能引起大鼠晶状体混浊,并随时间延长而加剧.接触HNE和Fenton合剂后,HLEC细胞变圆和皱缩,细胞骨骼丢失明显;肌动蛋白、vimentin和微管蛋白随时间延长而减少;大鼠晶状体皮质和核的这三种细胞骨骼几乎均有明显下降甚至消失.结论HNE和Fenton合剂可致晶状体上皮细胞凋亡及白内障形成,该结果与细胞骨骼的损伤和丢失密切相关,脂质过氧化引起的细胞骨骼的损伤可能在白内障形成过程中起一定的作用.

关键词：晶状体上皮细胞骨骼 HNE Fenton合剂白内障

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电场暴露抑制晶状体上皮细胞的增殖

眼科研究 2003年第6期21卷 568-571页

作者：王恩彤王恩普李丹空军总医院耳鼻咽喉-头颈外科北京100036 空军总医院眼科北京100036

目的　观察外源性电场对晶状体上皮细胞增殖行为的影响并研究其作用机制。方法　将培养的晶状体上皮细胞暴露于场强为 2 0 0mV/mm的直流电场 48h ,未受电场暴露的细胞作为对照。以细胞的密度、生长率和分裂指数评价其增殖能力 ,并通过... 详细信息

目的　观察外源性电场对晶状体上皮细胞增殖行为的影响并研究其作用机制。方法　将培养的晶状体上皮细胞暴露于场强为 2 0 0mV/mm的直流电场 48h ,未受电场暴露的细胞作为对照。以细胞的密度、生长率和分裂指数评价其增殖能力 ,并通过流式细胞仪进行细胞周期分析和蛋白印记分析检测细胞周期调节蛋白的表达。结果　细胞的增殖在电场中受到明显抑制 ,表现为细胞密度、生长率及分裂指数明显下降。电场暴露抑制细胞周期由G1期向S期的过渡 ,导致G1期阻滞。电场暴露细胞的cyclin E表达明显降低 ,但Cdk2的表达不受影响 ,而cyclin E/Cdk2复合物的抑制蛋白p2 7kip1的表达明显增加。结论　电场抑制晶状体上皮细胞的增殖 ,阻止细胞周期G1/S期的过渡使细胞周期休止于G1期 ,这一作用是藉增加p2 7kip1的表达和减少cyclin

关键词：电场晶状体上皮细胞增殖细胞周期

高糖对大鼠晶状体上皮细胞的影响及茶多酚干预作用的实验研究

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高糖对大鼠晶状体上皮细胞的影响及茶多酚干预作用的实验研究

作者：于同利山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察高糖对培养的大鼠晶状体上皮细胞线粒体活性氧、内质网的影响及茶多酚干预后的变化,研究高糖对大鼠晶状体上皮细胞的影响及茶多酚的干预作用,初步探讨糖尿病性白内障的发病机制及茶多酚抗糖尿病性白内障的效果。方法:1体外培... 详细信息

目的:观察高糖对培养的大鼠晶状体上皮细胞线粒体活性氧、内质网的影响及茶多酚干预后的变化,研究高糖对大鼠晶状体上皮细胞的影响及茶多酚的干预作用,初步探讨糖尿病性白内障的发病机制及茶多酚抗糖尿病性白内障的效果。方法:1体外培养大鼠晶状体上皮细胞,加入不同浓度的葡萄糖,模拟体内高血糖条件,加入不同浓度茶多酚进行干预,观察高糖条件下及茶多酚干预后大鼠晶状体上皮细胞形态的变化。2共聚焦显微镜检测各条件下大鼠晶状体上皮细胞线粒体活性氧量的变化,分析高糖及茶多酚干预对细胞线粒体活性氧表达的影响。3流式细胞仪检测各条件下大鼠晶状体上皮细胞线粒体膜电位和细胞死亡率的变化,分析高糖及茶多酚干预对细胞线粒体膜电位、细胞死亡率的影响。4免疫细胞化学及免疫荧光化学检测各条件下大鼠晶状体上皮细胞内质网的表达情况,分析高糖及茶多酚干预对细胞内质网的影响。结果:1在高糖条件下的上皮细胞逐渐死亡,数量明显减少,传代后容易老化。而用茶多酚干预的高糖条件的上皮细胞则较好的保持了上皮细胞的形态,未见减少,传代未见老化。2在高糖条件下的上皮细胞线粒体活性氧产生的增多,而应用茶多酚干预组活性氧的产生明显减少。3在高糖条件下的上皮细胞死亡率明显升高,线粒体膜电位降低;而茶多酚干预组细胞死亡率降低,线粒体膜电位升高。4经免疫细胞化学和免疫荧光检测,高糖条件下大鼠晶状体上皮细胞中内质网的阳性率明显降低,而应用茶多酚干预后内质网的阳性率明显升高。结论:高糖可以通过各种途径引发晶状体上皮细胞的死亡,上皮细胞的死亡可能是糖尿病性白内障发生的原因之一,而茶多酚可有效抑制线粒体活性氧的产生,可以保护晶状体上皮细胞免受损害,维持其结构和功能的正常,从而可能延缓糖尿病性白内障的发生,因此茶多酚有望成为有效预防和治疗糖尿病性白内障的新药,为广大糖尿病患者带来光明。

关键词：细胞培养晶状体上皮线粒体活性氧茶多酚

晶状体上皮细胞mRNA定量分析中内部参照标准β-肌动蛋白RT-PCR反应条件的研究

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临床眼科杂志 2005年第5期13卷 469-471页

作者：熊新春苗娟席祖莲张海江胡义珍魏厚仁华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022 湖北省宜昌市夷陵医院眼科

目的探讨晶状体上皮细胞mRNA定量分析中内部参照标准β-肌动蛋白RT-PC反应条件。方法从培养的人晶状体上皮细胞中提取mRNA，应用设计的引物RT-PCR检测β-肌动蛋白，电泳分析53.2℃、53.9℃、55℃、56.2℃、57.4℃、58.6℃、59.8℃、6... 详细信息

目的探讨晶状体上皮细胞mRNA定量分析中内部参照标准β-肌动蛋白RT-PC反应条件。方法从培养的人晶状体上皮细胞中提取mRNA，应用设计的引物RT-PCR检测β-肌动蛋白，电泳分析53.2℃、53.9℃、55℃、56.2℃、57.4℃、58.6℃、59.8℃、60℃、62℃、62.7℃不同的退火温度的扩增产物。结果各退火温度条件下，β-actin扩增产物均形成长度为302bp片段，且未见非特异性扩增产物条带。退火温度为58.6℃时，β-actin扩增产物的条带最清晰。结论采用本实验中所设计的引物联合58.6℃退火温度等实验条件所扩增的长度为302bp片段，清晰稳定，是晶状体上皮细胞mRNA定量分析中良好的内部参照标准。

关键词：晶状体上皮 mRNA β-肌动蛋白逆转录-聚合酶链反应人晶状体上皮细胞 PCR检测参照标准定量分析反应条件 RT