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扬子鳄源普通变形杆菌FliL基因缺失株的构建及其特性分析

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南京农业大学学报 2022年第4期45卷 729-735页

作者：李林俐朱来旭张雪费荣梅南京农业大学农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 深圳海关广东深圳518026

[目的]本文旨在研究FliL基因对扬子鳄源普通变形杆菌(Proteus vulgaris from Alligator sinensis)生物学特性的影响。[方法]在扬子鳄源普通变形杆菌野生株XX2的基础上利用Red重组系统构建FliL基因缺失株和互补株。通过对野生株、FliL基... 详细信息

[目的]本文旨在研究FliL基因对扬子鳄源普通变形杆菌(Proteus vulgaris from Alligator sinensis)生物学特性的影响。[方法]在扬子鳄源普通变形杆菌野生株XX2的基础上利用Red重组系统构建FliL基因缺失株和互补株。通过对野生株、FliL基因缺失株和互补株的生长曲线分析,探究FliL基因缺失对扬子鳄源普通变形杆菌生物学特性的影响;利用细菌具有周期性群集运动特性,通过分析FliL基因缺失株与野生株在固体LB培养基和Mot半固体培养基上的迁移运动,探究FliL基因对扬子鳄源普通变形杆菌运动的影响;通过小鼠致病性试验,探究FliL基因对细菌毒力的影响。[结果]细菌接种后5 h内FliL基因缺失株与野生株生长速度基本无差别,5 h后其生长速度慢于野生株;细菌群集运动和细菌动力试验显示,FliL基因缺失株群集运动明显减弱,但仍可在Mot半固体琼脂培养基上正常进行迁移运动;小鼠致病性试验显示,野生株XX2的LD_(50)为2.3×10^(6) CFU·mL^(-1),FliL基因缺失株XX2ΔFliL的LD_(50)为4.9×10^(8) CFU·mL^(-1),FliL基因缺失株LD_(50)升高了约100倍。[结论]FliL基因缺失可显著降低扬子鳄源普通变形杆菌的群集运动和细菌毒力,将为进一步研究扬子鳄源普通变形杆菌介导的扬子鳄痛风等疾病奠定基础。

关键词：普通变形杆菌扬子鳄 FliL基因毒力

普通变形杆菌噬菌体的分离鉴定和生物学特性的研究

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普通变形杆菌噬菌体的分离鉴定和生物学特性的研究

作者：孙盟盟吉林大学

学位级别：硕士

变形杆菌在自然界中分布较广泛是人体肠道的正常菌群。只有离开了正常寄居的肠道而进入人体其他部位时才引起感染。在医院内,长期接受广谱抗生素、激素、免疫抑制剂、抗肿瘤药等治疗的机体抵抗力下降的病人易感染,先进的检查治疗方法在... 详细信息

变形杆菌在自然界中分布较广泛是人体肠道的正常菌群。只有离开了正常寄居的肠道而进入人体其他部位时才引起感染。在医院内,长期接受广谱抗生素、激素、免疫抑制剂、抗肿瘤药等治疗的机体抵抗力下降的病人易感染,先进的检查治疗方法在某种程度上也为变形杆菌入侵人体提供了途径,使变形杆菌在医院内感染中占有重要地位。噬菌体治疗已表现出许多突出的优越性,尤其是针对使用抗生素治疗动物细菌感染时易产生细菌耐药性及残留等缺点。经过大量的动物模型试验及人类临床治疗的实践,对于噬菌体治疗中存在的缺点和不足,人们已经开始在噬菌体的选择、宿主谱、作用效力及其作用的动力学原理等方面进行探索性的改造,从而获得较理想的治疗效果,维护人类及动物的健康。实验中我们采用双层琼脂噬斑法分离、提纯变形杆菌噬菌体,根据《分子克隆指南手册》第二版λ噬菌体核酸提取方法提取核酸并进行酶切。测定该噬菌体的最佳感染复数,绘制一步生长曲线。分析实验结果得出如下结论:本实验利用10株临床分离的变形杆菌为宿主菌,从居民污水中分离得到4株毒性噬菌体,分别命名为噬菌体Pr-v 01、噬菌体Pr-v 02、噬菌体Pr-v 03、噬菌体Pr-v 04,其形成噬斑为圆形、透明、边界清晰。其中噬菌体Pr-v 04滴度最高为2.06×1012PFU/ml,形成直径0.8～2.3mm的溶菌空斑。交叉实验显示噬菌体Pr-v 04裂解能力强、滴度高、较宽的裂解谱,故筛选为本实验的研究对象。电镜显示,噬菌体Pr-v 04蝌蚪形,头部呈多面体立体对称,直径约为40～50nm,有一短尾。基因组DNA经EcoRⅠ、HindⅢ和NedⅠ酶切后、证实为双链DNA,其基因组大小约为26kb,且有多个EcoRⅠ的酶切位点。噬菌体Pr-v 04感染宿主的一步生长曲线显示潜伏期为15min作用,爆发时间为18min左右,裂解量170左右。噬菌体Pr-v 04感染其宿主普通变形杆菌的最佳感染复数为0.1。在4℃条件下,噬斑可保存10个月左右,而噬菌体Pr-v 04与其宿主菌的混悬液可保存至少6个月。

关键词：普通变形杆菌噬菌体最佳感染复数生长曲线

普通变形杆菌TWN-3株基因文库构建及免疫印迹筛选

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普通变形杆菌TWN-3株基因文库构建及免疫印迹筛选

作者：张涛四川大学

学位级别：硕士

长期以来，对水产疫病的控制主要依靠使用各种抗生素和化学药物，但大量使用药物产生的药物残留问题与对食品品质与安全日益严格的要求这对矛盾越发突出。近年来，我国水产品因为药物残留超标而多次出口受阻就是惨痛的教训。不仅造成了... 详细信息

长期以来，对水产疫病的控制主要依靠使用各种抗生素和化学药物，但大量使用药物产生的药物残留问题与对食品品质与安全日益严格的要求这对矛盾越发突出。近年来，我国水产品因为药物残留超标而多次出口受阻就是惨痛的教训。不仅造成了巨大的经济损失，而且严重打击了养殖户的生产积极性，影响水产养殖业进一步发展。1991年，Hansen等首先报道了外源基因能够在鲤鱼肌肉组织中表达。1996年，Anderson等第一次报告了带有传染性造血组织坏死症病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus，IHNV)糖蛋白基因的质粒能够在虹鳟中表达，并且能够保护IHNV病毒对受免疫鱼的感染。随后的一些实验也证明，在多种鱼体内，外源基因不仅能够高效，持久地表达，而且能够引起宿主鱼类对外源蛋白的免疫应答。这些为构建鱼类DNA疫苗提供了理论基础。同时对鱼病防治指出了一个新的途径。通过有计划的对养殖鱼类的主要疾病进行疫苗接种可以大大减少抗生素等化学药物在养殖鱼类上的使用量。提高水产品品质和食用安全性，促进我国水产品出口创汇。普通变形杆菌(***)广泛存在于自然界，是一种条件致病菌。由该菌引发的人类疾病国内有较多报道，此类菌对虾、蟹、赤点石斑鱼、鳄鱼等水生生物均具有感染性甚至致死，其中不少品种是水产经济动物。本实验室成功从大口鲇病鱼体内分离出普通变形杆菌TWN-3株，经研究发现其pH和盐的耐受度强，在适宜生长温度范围内生长十分迅速，因此十分容易造成爆发性疾病，对水产养殖生产是一种潜在的威胁。同时研究还发现，该菌株对许多抗生素都不敏感，因此一旦发病，目前的常规鱼病防治手段难以取得明显的效果。尝试用DNA疫苗的方法对其进行预防不失为一个有益的尝试。成功构建DNA疫苗的必须获得相应抗原的主要保护性抗原基因。本研究用带有普通变形杆菌TWN-3株总DNA片段的重组pUC18质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞，构建普通变形杆菌TWN-3株DNA文库，获得了3.6×10～3个带有插入片段的重组子。根据Clarke-Carbon公式，该文库对普通变形杆菌TWN-3株所有基因的覆盖率在99％以上。然后用雄性新西兰大白兔制备普通变形杆菌TWN-3株的多克隆抗血清，采用免疫印迹筛选技术对组成文库的所有重组子进行初筛并对初筛呈阳性反应的重组子进行3次复筛，以排除假阳性的干扰，最终获得了8个稳定呈抗原阳性反应的重组子，为获得普通变形杆菌主要保护性抗原基因及DNA疫苗的研究奠定基础和提供依据。

关键词：普通变形杆菌基因组文库免疫印迹

NaCl和pH对普通变形杆菌和蜂房哈弗尼菌碳源代谢能力的影响

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食品工业科技 2019年第10期40卷 168-173页

作者：单珂郭全友李保国上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093 中国水产科学研究院东海水产研究所上海200090

本文以轻腌大黄鱼优势菌(普通变形杆菌和蜂房哈弗尼菌)为研究对象,利用BIOLOG分析了两种菌在5℃条件下,不同NaCl浓度和pH水平胁迫对其碳源代谢的影响,通过丰富度指数、孔平均颜色变化率及利用面积,结合主成分分析法评价其碳源代谢能力... 详细信息

本文以轻腌大黄鱼优势菌(普通变形杆菌和蜂房哈弗尼菌)为研究对象,利用BIOLOG分析了两种菌在5℃条件下,不同NaCl浓度和pH水平胁迫对其碳源代谢的影响,通过丰富度指数、孔平均颜色变化率及利用面积,结合主成分分析法评价其碳源代谢能力。结果表明,普通变形杆菌和蜂房哈弗尼菌利用的碳源种类均以糖类为主,其他依次为羧酸类、氨基酸类和己糖磷酸类。NaCl浓度对两株菌的碳源利用能力影响随其浓度升高而增强,NaCl增加到5%时,几乎完全抑制了两株菌对碳源的利用。pH在5.0～7.0范围内,其对两株菌的碳源利用抑制效应随p H降低而增大,但总体抑制效应不显著。结论:NaCl浓度的增加能够逐渐抑制两株菌的碳源代谢,增加到3%时几乎完全被抑制,在pH5.0～7.0的范围内,对两株菌的碳源代谢影响不大。

关键词：普通变形杆菌蜂房哈弗尼菌碳源代谢主成分分析

斑点叉尾鮰源普通变形杆菌的分离、鉴定及药敏特性

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微生物学通报 2017年第10期44卷 2391-2397页

作者：杨移斌余琳雪杨秋红刘永涛胥宁杨先乐艾晓辉中国水产科学研究院长江水产研究所湖北武汉430223 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心湖北武汉430223 上海海洋大学上海201306

【目的】对患病斑点叉尾鮰进行病原菌分离、鉴定及药敏实验,为斑点叉尾鮰肠道坏死病的防控提供参考。【方法】从患病斑点叉尾鮰病灶、肝、脾和肾分离纯化病原菌,经理化特性测定及16S rRNA基因序列分析对其进行鉴定,开展人工感染试验,并... 详细信息

【目的】对患病斑点叉尾鮰进行病原菌分离、鉴定及药敏实验,为斑点叉尾鮰肠道坏死病的防控提供参考。【方法】从患病斑点叉尾鮰病灶、肝、脾和肾分离纯化病原菌,经理化特性测定及16S rRNA基因序列分析对其进行鉴定,开展人工感染试验,并利用纸片扩散法进行药敏特性分析。【结果】分离菌株k1为本次引发斑点叉尾鮰病害的致病菌,其对斑点叉尾鮰的LD50为2.82×10~5 CFU/g。菌株k1理化特性与普通变形杆菌Proteus vulgaris基本一致,16S rRNA基因序列与普通变形杆菌相似性最高,综合判定分离菌株为普通变形杆菌。分离菌株k1对环丙沙星、头孢唑林及头孢拉定等12种抗生素高度敏感,对苯唑西林、阿莫西林及痢特灵等7种抗生素耐药。【结论】分离菌株k1是斑点叉尾鮰病原菌,养殖时可选用庆大霉素及氟苯尼考等药物进行防控。

关键词：普通变形杆菌斑点叉尾鮰鉴定药敏特性

无根根霉R25和普通变形杆菌P1混合培养发酵L-苹果酸的研究

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微生物学报 1989年第2期29卷 129-136页

作者：蒋明珠白照熙张俊贤谢红吴芷萍许孟琴孙文敬山西省生物研究所

所筛的41株属于根霉属的菌侏,均具有从葡萄糖产生延胡索酸的能力。其中,R25产延胡索酸能力最高,同时产生部分L-苹果酸。该菌株被鉴定为无根根霉(Rhizopus arrhizus)。普通变形杆菌(Proteus vulgaris)P1具有强的延胡索酸酶活性,可将延胡... 详细信息

所筛的41株属于根霉属的菌侏,均具有从葡萄糖产生延胡索酸的能力。其中,R25产延胡索酸能力最高,同时产生部分L-苹果酸。该菌株被鉴定为无根根霉(Rhizopus arrhizus)。普通变形杆菌(Proteus vulgaris)P1具有强的延胡索酸酶活性,可将延胡索酸转化为L-苹果酸。无根根霉R25在含有12%葡萄糖的培养基中,31℃振荡培养3天,进行延胡索酸发酵。然后接入在液体培养基中31℃生长2天的普通变形杆菌P1。在同样条件下发酵2天,L-苹果酸产量可达5.48g/100ml。在含有18%的薯干粉培养基中发酵,能得到相同的产量。发酵产物经分离提纯为白色结晶,经纸色谱、红外光谱分析和熔点测定,与已知的L-苹果酸一致。

关键词： L-苹果酸无根根霉普通变形杆菌

家蝇抗菌肽MDC协同庆大霉素抗普通变形杆菌作用研究

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生物技术通报 2020年第11期36卷 85-93页

作者：陈晴汝桂水清卢雪梅广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006 深圳市第二人民医院深圳大学第一附属医院中心深圳518031

以普通变形杆菌(Bacillus proteus vulgaris)为研究对象,探讨家蝇抗菌肽(Musca domestical cecropin,MDC)和庆大霉素(Gentamicin)的体外联合抗菌效果及协同抗菌机制。采用微量肉汤稀释法、棋盘法、结晶紫染色等方法研究两药的协同抗菌... 详细信息

以普通变形杆菌(Bacillus proteus vulgaris)为研究对象,探讨家蝇抗菌肽(Musca domestical cecropin,MDC)和庆大霉素(Gentamicin)的体外联合抗菌效果及协同抗菌机制。采用微量肉汤稀释法、棋盘法、结晶紫染色等方法研究两药的协同抗菌作用和抗生物膜作用;通过荧光染色、流式细胞术(FCM)、透射电子显微镜(TEM)观察两药联用的抗菌机制。家蝇抗菌肽MDC与庆大霉素的FIC为0.313,表明两者具有较好的协同抗菌作用;结晶紫染色结果显示两药对细菌初始生物膜、成熟生物膜和胞外蛋白质的影响也有一定的协同作用;荧光和流式细胞术结果显示药物可以有效杀伤细菌,使细菌死亡数目上升;透射电镜观察到给药后大部分细菌细胞壁破损,细胞膜不完整,胞质内容物坏死溶解导致细胞肿胀破裂。家蝇抗菌肽MDC和庆大霉素具有协同抗普通变形杆菌作用,且两药的作用机制相辅相成。

关键词：普通变形杆菌家蝇抗菌肽庆大霉素协同抗菌

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临床样品中124株普通变形杆菌的重新鉴定

临床检验杂志 1998年第3期16卷 165-165页

作者：庞君容西充县医院细菌室

临床样品中１２４株普通变形杆菌的重新鉴定庞君容（西充县医院细菌室，四川西充６３７２００）关键词普通变形杆菌分类鉴定普通变形杆菌（Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）分为三个生物群，其中Ⅰ型生物群已定名为潘尼变形杆菌（Ｐ．ｐｅｎｎｅ... 详细信息

临床样品中１２４株普通变形杆菌的重新鉴定庞君容（西充县医院细菌室，四川西充６３７２００）关键词普通变形杆菌分类鉴定普通变形杆菌（Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）分为三个生物群，其中Ⅰ型生物群已定名为潘尼变形杆菌（Ｐ．ｐｅｎｎｅｒｉ），Ⅱ、Ⅲ型生物群未定名。我们...

关键词：临床样品分类鉴定普通变形杆菌

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鲎素I对普通变形杆菌的作用研究

生物技术通报 2014年第5期30卷 190-196页

作者：金元宝王英刘莉萍王倩金刚张丽君代建国深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院深圳518055 广州城市职业学院食品系广州510405

旨在研究鲎素Ⅰ对普通变形杆菌的抑杀作用机制。利用鲎素Ⅰ对普通变形杆菌的抑杀浓度、壁膜通透性和电荷性、分泌蛋白酶活力的影响及其在培养基中的稳定性进行研究。结果显示,鲎素Ⅰ对普通变形杆菌的MIC和MBC值分别为40-80和80μg/mL,... 详细信息

旨在研究鲎素Ⅰ对普通变形杆菌的抑杀作用机制。利用鲎素Ⅰ对普通变形杆菌的抑杀浓度、壁膜通透性和电荷性、分泌蛋白酶活力的影响及其在培养基中的稳定性进行研究。结果显示,鲎素Ⅰ对普通变形杆菌的MIC和MBC值分别为40-80和80μg/mL,它也能增加普通变形杆菌的壁膜通透性及其所带的正电荷。在鲎素Ⅰ浓度≤40μg/mL时,普通变形杆菌分泌的蛋白酶活力有所增加,而≥60μg/mL时,则呈下降趋势。在普通变形杆菌培养环境中的鲎素Ⅰ含量会降低。结果证明,鲎素Ⅰ能对普通变形杆菌产生抑杀作用,其抑菌机制与破坏细菌壁膜的通透性有关。

关键词：鲎素Ⅰ 普通变形杆菌抑菌作用蛋白酶活