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猪脂肪组织发育过程中Wnt/β-catenin信号通路相关基因及脂肪转录因子的时序表达

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生物工程学报 2008年第5期24卷 746-753页

作者：罗肖李惠侠杨公社西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室杨凌712100

为研究Wnt/β-catenin信号通路对猪脂肪组织发育的影响,并探讨其可能的作用机制,以1-120日龄长白猪脂肪组织为试验材料,采用SQRT-PCR法检测Wnt信号通路中相关基因β-catenin、GSK3β、Fz1及主要的脂肪转录因子PPARγ、C/EBPα和分化早... 详细信息

为研究Wnt/β-catenin信号通路对猪脂肪组织发育的影响,并探讨其可能的作用机制,以1-120日龄长白猪脂肪组织为试验材料,采用SQRT-PCR法检测Wnt信号通路中相关基因β-catenin、GSK3β、Fz1及主要的脂肪转录因子PPARγ、C/EBPα和分化早期标志基因LPL mRNA的表达变化;石蜡切片免疫组化方法定性检测β-catenin在脂肪组织发育中的时序表达变化。SQRT-PCR结果显示,β-catenin mRNA在猪出生第1天有高水平表达,随着个体日龄的增长,其表达量逐渐降低,60日龄后维持在一个较低水平。GSK3β和Fz1mRNA的表达量也伴随脂肪组织的发育而逐渐降低。而LPL、PPARγ和C/EBPα的mRNA表达量随着个体日龄的增长而逐渐升高,60日龄后仍保持高水平的表达。石蜡切片免疫组化结果显示,随着脂肪组织的发育,β-catenin蛋白的表达也随之降低,并且β-catenin蛋白的表达部位逐渐由细胞核和细胞质共表达变为只在细胞质中表达。上述基因表达的时序变化规律提示,β-catenin在维持前体脂肪细胞的未分化状态,抑制脂肪组织发育中具有重要作用,其作用机制可能是通过对脂肪细胞转录因子PPARγ、C/EBPα及分化早期标志基因LPL mRNA的调控来进行的。

关键词： Wnt/β-catenin 猪脂肪发育时序表达

HCMV IE1和pp65在人神经胶质瘤U_(251)细胞中的时序表达

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中南大学学报（医学版） 2007年第4期32卷 551-556页

作者：李建华傅鹰陈利玉戴橄罗敏华杨滔中南大学湘雅医学院微生物学系长沙410078

目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点。方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用... 详细信息

目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点。方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用抗蛋白IE1及蛋白pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,检测IE1及pp65的表达水平。结果:受染的U251细胞出现了明显的形态学改变,并用PCR方法检测到了HCMV核酸。免疫细胞化学染色表明,蛋白IE1在感染后30min～2h无表达,4h开始表达,14h达高峰,随后下降;蛋白pp65在感染后1h为入侵型pp65,4～96h一直呈低水平表达,至120h表达急剧升高。结论:U251细胞是HCMV的容许细胞,HCMV在其中的表达具有时序性,但是其时序表达较在人成纤维细胞中延迟。

关键词：人巨细病毒人神经胶质瘤 U251细胞 IE1 pp65 时序表达

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牛PLIN1基因CDS区扩增及时序表达

西北农业学报 2020年第10期29卷 1472-1478页

作者：雷召雄魏大为汪书哲杨梦丽马云宁夏大学农学院银川750021

PLIN1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛PLIN1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPC... 详细信息

PLIN1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛PLIN1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPCR技术检测PLIN1在牛皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中(0、2、4、6、10 d)mRNA的相对表达水平。结果表明,牛PLIN1基因CDS区长为1551 bp,共编码517个氨基酸;细胞时序表达结果显示,诱导分化的第0天PLIN1不表达,随着分化时间的推移,其表达量呈上升趋势,与分化的第2天相比,在第6天和第10天表达量上升最快,PPARγ在分化的第0天有少量表达,表达趋势与PLIN1一致,在第6天和第10天显著升高。表明PLIN1在牛脂肪组织生成过程中起重要作用,在前体脂肪细胞分化阶段依赖于PPARγ的表达而表达。

关键词：牛 PLIN1 基因克隆时序表达

从江香猪LPL基因克隆、多态及时序表达图谱构建

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农业生物技术学报 2017年第4期25卷 599-606页

作者：张雄张勇尚以顺陈祥史开志白优陆静贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州省畜牧兽医研究所

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)具有调控动物机体脂肪沉积的功能,但在小型地方猪种中LPL基因分子遗传机制研究鲜有报道。为探究LPL基因调控功能,揭示其对从江香猪(Sus scrofa)肉质性状的影响,本研究以从江香猪为实验动物,利用RT-PC... 详细信息

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)具有调控动物机体脂肪沉积的功能,但在小型地方猪种中LPL基因分子遗传机制研究鲜有报道。为探究LPL基因调控功能,揭示其对从江香猪(Sus scrofa)肉质性状的影响,本研究以从江香猪为实验动物,利用RT-PCR技术克隆从江香猪LPL基因CDS区(Gen Bank No.1994531),生物信息学软件预测蛋白理化性质及结构特征,通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术对从江香猪LPL基因第5内含子AfaⅠ位点进行遗传效应分析,运用q RT-PCR技术分析不同月龄阶段从江香猪背最长肌组织中LPL mRNA表达发育规律,并研究其与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量相关性。结果表明,从江香猪LPL基因CDS区全序列长1 437 bp,共编码478个氨基酸,构成具有PLAT/LH2结构域的稳定亲水性蛋白。不同品种猪间氨基酸序列的同源性很高,其中从江香猪与挪威长白猪和陆川猪氨基酸序列的同源性高达99.8%,与贵州白香猪同源性最低,为99.2%。PCR-RFLP分析结果显示,AfaⅠ位点共检测到CC、CG和GG 3种基因型,其中CG为优势基因型,等位基因C和G的频率分别为35.05%和64.95%,从江香猪群体在此位点处于Hardy-Weinberg平衡状态;CC基因型的皮厚显著高于CG型(P0.05)。时序表达谱显示,不同月龄阶段从江香猪背最长肌组织中LPL mRNA表达水平呈现出先降低后升高的趋势,LPL mRNA表达量与IMF呈显著正相关(P<0.05)。结果表明,LPL基因可作为影响从江香猪脂肪沉积的关键候选基因之一,实验结果可为从江香猪LPL基因结构功能的后续研究提供理论依据。

关键词：从江香猪脂蛋白脂酶(LPL) 克隆时序表达限制性长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)

巴哈雀稗PnDREB2基因克隆及时序表达图谱构建

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核农学报 2019年第1期33卷 7-15页

作者：张宇君王普昶赵丽丽曾庆飞张雄陈超董瑞贵州大学动物科学学院草业科学系贵州贵阳550025 贵州省农业科学院草业研究所贵州贵阳550006 贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵州贵阳550005

脱水反应元件结合蛋白(DREBs)在植物非生物逆境胁迫中可调节下游一系列抗逆基因的表达。为探究巴哈雀稗DREB2基因在逆境胁迫下的功能,本研究采用RNA-Seq结合RT-PCR技术从巴哈雀稗中获得一个DREB2基因CDS区全序列,命名为PnDREB2(GenBank... 详细信息

脱水反应元件结合蛋白(DREBs)在植物非生物逆境胁迫中可调节下游一系列抗逆基因的表达。为探究巴哈雀稗DREB2基因在逆境胁迫下的功能,本研究采用RNA-Seq结合RT-PCR技术从巴哈雀稗中获得一个DREB2基因CDS区全序列,命名为PnDREB2(GenBank登录号:MH150946)。核苷酸序列分析表明,该基因开放阅读框全长774 bp,编码257个氨基酸,相对分子质量为28.09 kD,理论等电点为5.25;该植物蛋白中具有DREB类基因家族典型的保守域AP2结构域,属于DREB2类转录因子A类中A2亚类的亚型1。进化和聚类分析结果表明,巴哈雀稗PnDREB2基因与高粱、割手密、玉米、谷子及牛鞭草亲缘关系较近,氨基酸序列同源性分别为91.10%、89.50%、88.20%、87.60%和87.60%。RT-qPCR和生物信息学分析表明,PnDREB2基因在茎中表达量最高,幼穗次之,叶最低;表达产物定位于细胞质中,具有26个磷酸化位点,并具有结构和功能的特异性。PnDREB2表达量受干旱(PEG-6000,20%)和高温(40℃)的强烈诱导,同时也受到高盐(NaCl,300 mmol·L^(-1))、低温(4℃)、脱落酸(ABA,100μmol·L^(-1))和赤霉素(GA,100μmol·L^(-1))等非生物胁迫和激素的不同程度诱导,随着处理时间的延长,整体上均呈先增加后降低的趋势。本试验为巴哈雀稗抗逆分子机理研究与抗性增强的转基因材料培育奠定了理论基础。

关键词：巴哈雀稗非生物胁迫 RNA-Seq RT-qPCR 时序表达

饲粮半胱氨酸水平对獭兔生产性能、氮代谢、毛皮品质及KAP6.1基因时序表达的影响

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中国兽医学报 2013年第5期33卷 764-769页

作者：常馨月张恩平陈玉林曾洁西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

本研究旨在研究饲粮半胱氨酸水平对獭兔生产性能、氮代谢及毛皮品质和KAP6.1基因时序表达的影响。选取120只90日龄健康獭兔随机分为4组(每组30个重复,每个重复1只兔),对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础饲粮中添加0.25%、0.35%、0.45%... 详细信息

本研究旨在研究饲粮半胱氨酸水平对獭兔生产性能、氮代谢及毛皮品质和KAP6.1基因时序表达的影响。选取120只90日龄健康獭兔随机分为4组(每组30个重复,每个重复1只兔),对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础饲粮中添加0.25%、0.35%、0.45%水平的半胱氨酸的试验饲粮,预饲期7d,正式期40d。结果,饲粮半胱氨酸水平0.25%、0.45%组末重显著高于0%、0.35%组(P0.05);半胱氨酸0.35%组食入氮、可消化氮极显著高于其他组(P0.05);饲粮半胱氨酸水平0.45%组处理40d皮张面积显著大于其余各组(P0.05);饲粮半胱氨酸水平0.45%处理20d,KAP6.1基因在软骨、皮肤中表达量均显著高于其他组(P表达量无显著影响(P>0.05)。综上所述,獭兔饲粮中半胱氨酸适宜添加量为0.45%,且110～120日龄使用效果最佳。

关键词：獭兔半胱氨酸生产性能氮代谢 KAP6 1 时序表达

牦牛TNFAIP6基因克隆及其在卵巢活动中的时序表达

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生物技术通报 2019年第11期35卷 46-54页

作者：马鸿程熊显荣穆松银海卓秦文昌李键西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用国家教育部重点实验室成都6100041

旨在探讨牦牛TNFAIP6基因的序列特征,比较分析其在牦牛不同组织以及发情周期卵巢中的时序表达差异性。采集健康雌性牦牛的心脏、肺脏、脾脏、肾脏、肝脏、子宫、小肠、胃、肌肉和不同发情期的卵巢组织,提取各组织总RNA和总蛋白,通过RT-... 详细信息

旨在探讨牦牛TNFAIP6基因的序列特征,比较分析其在牦牛不同组织以及发情周期卵巢中的时序表达差异性。采集健康雌性牦牛的心脏、肺脏、脾脏、肾脏、肝脏、子宫、小肠、胃、肌肉和不同发情期的卵巢组织,提取各组织总RNA和总蛋白,通过RT-PCR技术克隆获得牦牛TNFAIP6基因序列并对其进行生物信息学分析,用半定量PCR检测其在牦牛不同组织中的表达水平,Western blot和qRT-PCR法分别检测其在不同发情期牦牛卵巢中的蛋白和mRNA表达水平,并进行统计学分析。克隆获得牦牛TNFAIP6基因CDS区全长830 bp,共编码279个氨基酸。蛋白质分析显示,TNFAIP6蛋白为亲水酸性稳定蛋白,无跨膜结构但有信号肽,其中包含Link和CUB两个结构域,其二级结构和三级结构主要由无规卷曲和α-螺旋组成。通过同源性比对分析,发现牦牛TNFAIP6基因与野牦牛和黄牛的同源性较高。半定量PCR结果显示,TNFAIP6基因在牦牛各组织中均有表达,其中在卵巢、子宫、脾脏和肌肉组织中表达显著高于其他组织。qRT-PCR结果显示,TNFAIP6基因在卵泡期卵巢中的表达水平极显著高于其他两个时期(P表达水平差异不显著(P>0.05)。Western blot结果与qRT-PCR结果基本一致。提示TNFAIP6基因可能参与牦牛卵巢活动调控,为进一步探讨TNFAIP6基因在牦牛卵巢活动中的作用机制提供基础资料。

关键词：牦牛卵巢 TNFAIP6 时序表达

ox-LDL诱导巨噬细胞TNF-α的时序表达

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中国病理生理杂志 2003年第11期19卷 1552-1553页

作者：林秋雄余细勇单志新林曙光 Huiyao Lan 广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室广东广州510080 Department of Medicine Baylor College of Medicine Houston Texas USA

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白桦BpSOC1基因的克隆及时序表达分析

东北林业大学学报 2011年第4期39卷 1-4页

作者：刘菲菲李慧玉王姗刘桂丰林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室(东北林业大学) 哈尔滨150040

根据NCBI中已注册的近缘树种的SOC1同源基因序列设计引物,采用RT-PCR技术在4年生白桦茎尖中分离得到1条SOC1-like cDNA序列,命名为BpSOC1。该序列编码区长660 bp,编码220个氨基酸,蛋白质相对分子质量为25 367.77 D,理论等电点为9.32。... 详细信息

根据NCBI中已注册的近缘树种的SOC1同源基因序列设计引物,采用RT-PCR技术在4年生白桦茎尖中分离得到1条SOC1-like cDNA序列,命名为BpSOC1。该序列编码区长660 bp,编码220个氨基酸,蛋白质相对分子质量为25 367.77 D,理论等电点为9.32。蛋白结构预测分析表明,BpSOC1具有典型的MADS-box结构域和K-box结构域,同时具有多处DNA结合位点、糖基化位点和磷酸化作用位点,属于MADS家族转录因子。系统发育分析表明,BpSOC1属于MADS-box家族的SOC1/TM3亚家族。采用实时定量PCR技术研究不同树龄白桦BpSOC1从5月初至9月在茎尖的时序表达规律,结果显示:BpSOC1无论在2年生苗期的营养生长阶段还是进入3、4年生的生殖生长阶段均有表达,表达高峰均在7月初和9月初。但2年生苗期的BpSOC1表达量最高的7月初和9月初间无显著差异,而进入生殖生长期后9月初的BpSOC1表达量显著高于7月初的表达量,表明Bp-SOC1既参与白桦的营养生长,又参与生殖生长。

关键词：白桦 BpSOC1 基因克隆时序表达