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中国西部区域人群Leber先天性黑曚的分子遗传学与临床表型研究

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中国西部区域人群Leber先天性黑曚的分子遗传学与临床表型研究

作者：朱路瑶中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

Leber先天性黑曚(Leber congenital amaurosis,LCA)是最早发病的一类具有致盲性的遗传性视网膜疾病(Inherited retinal dystrophies,IRD),以1岁之前的严重视觉损伤和视网膜电流图波形熄灭为主要临床特征,主要遗传方式是常染色体隐性遗... 详细信息

Leber先天性黑曚(Leber congenital amaurosis,LCA)是最早发病的一类具有致盲性的遗传性视网膜疾病(Inherited retinal dystrophies,IRD),以1岁之前的严重视觉损伤和视网膜电流图波形熄灭为主要临床特征,主要遗传方式是常染色体隐性遗传。迄今为止,在中国以及其他国家已经报道了28个与LCA相关的已知致病基因,主要包括CRB1、RDH12、RIPGRIP1和CEP290等。LCA具有高度的遗传异质性和表型异质性,复杂的基因突变类型和临床表现使LCA的诊断难度加大。目的:探究中国西部区域汉族人群的Leber先天性黑曚(LCA)的主要分子遗传学和临床特征,筛查中国人群LCA中已知致病基因的突变频谱和新的突变位点。探索分子遗传学特征和临床表型之间的相关性,为临床诊断和治疗奠定更多的信息基础。方法:1、2009年至2019年,在遗传性视网膜疾病(IRD)队列中,筛选出严格定义的LCA患者37例74眼。进行标准化的相关信息收集和整理,其中包括知情同意书签署,患者及家系成员基本信息采集,家系图谱绘制。分析家系的患病情况和地域分布特点等。2、设计以195个已知的IRD致病基因作为靶序列的捕获芯片,通过靶向二代测序(Next-generation sequencing,NGS)筛选突变,进行Sanger测序验证和分离分析,在家系成员和200名正常对照组中进行新位点验证,运用生物信息学技术分析新突变的致病性。3、对37例LCA患者74眼进行全面的临床检查,包括最佳矫正视力(Best Corrected Visual Acuity,BCVA),视野(Visual Field,VF),闪光视觉诱发电位(Flash Visual Evoked Potential,FVEP),闪光视网膜电图(Flash Electroretinogram,FERG),多焦视网膜电图(Multi-focal Electroretinogram,mf ERG),眼底彩照,眼底荧光血管造影(Fundus Fluorescein Angiography,FFA)和光学相干断层扫描(Optical Coherence Tomograpy,OCT),总结临床特征,结合致病基因结果分析患者临床表型和基因型的相关性。结果:1、本研究采用NGS技术,以195个IRD相关致病基因作为特异性基因靶序列的捕获芯片在37例LCA患者中,有34例患者检测出具有已知的LCA基因,突变检出率为91.9%。2、本研究共检测出47个突变位点,其中检测出的8种基因都是与LCA相关的已知基因,即CRB1,RDH12,RPGRIP1,CEP290,GUCY2D,RPE65,LCA5和AIPL1。首次发现21个新突变位点,新突变位于CRB1,RDH12,RPGRIP1和CEP290基因,预测为具有致病性。在200名正常对照者中未发现新的突变。3个最高频突变的基因分别是CRB1(27.0%),RDH12(24.3%)和RPGRIP1(18.9%)。3、CRB1和RPGRIP1基因在中国西部LCA患者突变频谱中占主要比例。这两个基因所占比例和在中国其他区域的比例也相似,而中国西部LCA患者中与RDH12相关的LCA的比例更大。4、本次研究中的LCA患者37名大部分视力较差,其中21名患者为低视力,15名患者为盲,眼底形态不同,呈现圆形、骨细胞样或者网格样色素,伴或不伴黄斑萎缩,电生理检查提示视觉功能受损严重。5、与CRB1相关的LCA临床特征是周边视网膜色素的眼底。RDH12相关的LCA临床表现为黄斑萎缩。与RPGRIP1相关的LCA的眼底变化与视觉功能损失的程度不一致。CEP290以及RPE65相关的LCA眼底外观基本正常或白点样色素。结论1、严格的临床诊断标准结合NGS技术有助于LCA检出率的提高。2、本研究完成了37名患者LCA致病基因筛查,共检测出47个突变等位基因,首次发现21个新突变,扩大了中国人群LCA的突变频谱。3、中国西部LCA患者中与RDH12相关的LCA的比例比其他区域大,揭示了LCA致病基因的地域分布和种族分布差异。4、本次研究首次分析了中国西部区域人群中LCA突变频谱的基因型及临床表型的关系。筛查出了新的突变位点,但是未发现新的临床表型。这丰富了LCA遗传学研究内容,为遗传咨询和基因疗法补充了必要的信息。

关键词： Leber先天性黑曚二代测序基因型-临床表型突变频谱新突变 CRB1 RDH12 RPGRIP1

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两种遗传病的致病机制研究

两种遗传病的致病机制研究

作者：张雪莲南方医科大学

学位级别：硕士

第一部分一个智力障碍家系致病机制研究背景与目的智力障碍/发育迟缓(Intellectual Disability,ID/Developmental Delay,DD)是儿童和成人最常见的一种神经精神疾病,是指发育各阶段(18岁以前)出现的认知功能障碍和社会适应能力显著受损... 详细信息

第一部分一个智力障碍家系致病机制研究背景与目的智力障碍/发育迟缓(Intellectual Disability,ID/Developmental Delay,DD)是儿童和成人最常见的一种神经精神疾病,是指发育各阶段(18岁以前)出现的认知功能障碍和社会适应能力显著受损的疾病,其智力水平(评分常常低于或等于70分。ID又称智力低下、精神发育迟滞(Mental Retardation,MR),多用于5岁以上儿童的诊断,此时智商(IQ)测定已经较为可靠且稳定。DD则是指当ID发生在5岁以下的婴幼儿及学龄前儿童时。智力障碍(MR)又称智力低下,是指18岁以前出现的认知和社会适应陛能力的显著受损。25%～50%的MR是由于遗传因素所致,包括染色体异常、基因拷贝数异常和单个基因突变。方法:采集家系中所有成员的外周静脉血,酚/氯仿提取DNA,收集家系中成员的临床资料。用外周血淋巴细胞进行染色体核型分析,分析病人的染色体是否异常。利用微阵列比较基因组杂交实验(arrary CGH)对部分患者进行全基因组缺失或复制的检测。并结果比对到OMIM数据库,根据数据库上基因信息挑选出有功能的基因。利用NCBI和oligo7软件对OMIM上筛选的16种基因设计引物,扩增相应基因的人mRNA的CDS区。根据GeneCards找到这16种基因在不同组织的表达量,用TRIZOL提取人类血或其他组织的RNA,逆转录为cDNA。将上述基因克隆到表达载体PCS2中,单酶切呈线性,用SP6试剂盒体外合成mRNA。通过显微注射将mRNA两两一组导入斑马鱼的受精卵,4.25hpf后用体视显微镜观察斑马鱼的,并拍照,在电脑中测量斑马鱼头的宽度和体长,并用软件统计不同组之间的差异。有差异的小组单独导入斑马鱼的受精卵,找到导致斑马鱼鱼头发生大小变化的基因。结果对该家系的部分成员进行(患者和正常人)进行染色体核型分析,染色体核型分析结果为全部正常。比较基因组杂交实验发现先征者(IV-10)和其他类似症状(IV-14)的,其2号染色体出现2.2Mb 2q terminal deletion,4号染色体出现4.6Mb 4p terminal duplication。而表型相反,身材矮小,发育迟缓的IV-18,2号染色体出现2.2Mb 2q terminal duplication,4号染色体出现4.6Mb 4p terminal deletion。斑马鱼过表达 mRNA 实验发现STK25和SEPT2、PPP1R7和OTOS与只注射DEPC水组相比,斑马鱼头部宽度均小于DEPC组。结论根据本课题组的研究,通过染色体核型分析和比较基因组杂交技术,将致病基因的候选区域定位在2.2Mb 2q terminal和4.6Mb 4p terminal,其中4号染色体前人报道上Wolf-Hirschhorn导致严重生长迟缓和精神缺陷。过表达2号染色体STK2和SEPT2P、PP1R7和OTOS对斑马鱼头宽度有影响。第二部分一个中国家系OCRL基因突变引起眼脑肾综合征的研究背景与目的:Lowe综合征(眼脑肾综合征)是罕见的X-连锁的隐性遗传性疾病,其特征为先天性白内障,智力迟钝和近端肾小管功能障碍。在本研究中,我们调查了一个中国汉族家系Lowe综合征的OCRL基因突变,并研究了OCRL基因突变的致病机制。方法:根据眼睛,脑和肾的临床症状进行临床诊断。采集各个家庭成员的外周血。用聚合酶链反应(PCR)来扩增OCRL基因,然后送公司Sanger测序。通过生物信息学,RT-PCR,亚细胞定位和Western-blotting分析新突变的致病机制。结果:先证者和他的兄弟均被诊断患有Lowe综合征。Sanger测序显示在OCRL基因的14外显子上有新突变c.1383delA。患者父母没有明显的临床症状,只有母亲携带突变位点。该移码突变导致转染后的人胚胎肾(HEK-293T)细胞会表达截短蛋白。亚细胞定位实验显示GFP标记的野生型和突变OCRL蛋白位于HEK-293T细胞的细胞质中。蛋白质印迹分析,转染后的HEK-293T细胞中,GFP-突变型融合蛋白表达量显着低于野生型蛋白。结论:我们的研究表明OCRL基因的新移码突变(c.1383delA)导致蛋白质截断,而Lowe综合征发病机制与蛋白质的功能丧失和无义介导的mRNA降解有关。这些发现扩大了基因的突变谱,为Lowe综合征家族的治疗和遗传咨询提供理论依据。

关键词：智力障碍染色体核型分析比较基因组杂交斑马鱼 mRNA过表达鱼头宽度 Sanger测序新突变 c.1383delA 蛋白功能 Lowe综合征 OCRL

伴发1型神经纤维瘤病样色素沉着的斑驳病——一家系调查和致病基因的研究

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伴发1型神经纤维瘤病样色素沉着的斑驳病——一家系调查和致病基...

作者：贾苇雪北京协和医学院

学位级别：硕士

背景斑驳病(piebaldism)是一种少见的先天性常染色体显性遗传性皮肤病,临床特征是额前中线的三角型或菱形白斑,常伴有白色额发,白斑也可累及躯干、四肢的前中部。斑驳病主要由KIT基因突变引起,部分由SLUG基因缺失所致。1型神经纤维瘤... 详细信息

背景斑驳病(piebaldism)是一种少见的先天性常染色体显性遗传性皮肤病,临床特征是额前中线的三角型或菱形白斑,常伴有白色额发,白斑也可累及躯干、四肢的前中部。斑驳病主要由KIT基因突变引起,部分由SLUG基因缺失所致。1型神经纤维瘤病为常染色体显性遗传性疾病,临床特点是咖啡斑、神经纤维瘤、腋窝和腹股沟雀斑、虹膜错构瘤和骨损害,由NF1基因突变引起。目的本研究收集到一斑驳病家系,先证者具有典型的斑驳病皮损的同时还具有1型神经纤维瘤病的色素沉着。对该家系进行分子生物学检测,为斑驳病提供更多的基因突变信息,研究斑驳病基因型与临床表型的关系,探讨伴发1型神经纤维瘤病样色素沉着的斑驳病与1型神经纤维瘤病的关系。方法对该患者进行家系调查,记录皮损的发病部位并进行拍照。运用PCR、DNA测序等方法对家系中患者KIT、SLUG、NF1基因进行基因检测,并选择正常成人作为对照。结果临床上发现先证者额面部、躯干、四肢散在白斑,伴有白色额发,白斑及正常皮肤间散在分布大小不一的咖啡斑,双侧腋窝、腹股沟散在分布雀斑。先证者之子有类似临床表现。基因测序发现先证者的KIT基因存在杂合错义突变,位于第17号外显子的第2431位碱基T被碱基G置换(c.2431T>G),在SLUG基因及NF1基因未发现突变。先证者之子存在相同突变。100个正常成人未发现该突变,且在“千人基因组计划”(1000 Genomes Project)数据库中未检索到KIT基因此位点多态性。结论 KIT基因细胞内酪氨酸激酶活性区域编码序列的杂合错义突变c.2431T>G(p.F811V)是导致该家系成员发生斑驳病的致病突变,该突变位点未曾报道。斑驳病临床表型的轻重与KIT基因突变位点相关,细胞内酪氨酸激酶活性部位的突变,常导致临床表型为重型。斑驳病伴发1型神经纤维瘤病样色素沉着是斑驳病临床色素异常谱的一部分,不应诊断为斑驳病合并1型神经纤维瘤病。

关键词：斑驳病新突变 KIT 1型神经纤维瘤病

罕见OI-Ⅸ型和MPS-Ⅵ型的表型和基因型的相关性研究

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罕见OI-Ⅸ型和MPS-Ⅵ型的表型和基因型的相关性研究

作者：姜煜中山大学

学位级别：硕士

遗传性骨病(Genetic skeletal disorder,GSD)种类繁多,据2015年国际遗传性骨病的最新分类标准,一共分为42组436种。临床上相对常见的有软骨发育不全(ACH)、软骨发育低下(HCH)、致死性侏儒症(TD)、假性软骨发育不全(PSACH)、多发性骨骺... 详细信息

遗传性骨病(Genetic skeletal disorder,GSD)种类繁多,据2015年国际遗传性骨病的最新分类标准,一共分为42组436种。临床上相对常见的有软骨发育不全(ACH)、软骨发育低下(HCH)、致死性侏儒症(TD)、假性软骨发育不全(PSACH)、多发性骨骺发育不良(MED)、迟发性脊椎骨骺发育不良(SEDT)、成骨不全I型和II型、黏多糖贮积症I型和II型等,而本文所研的OI-Ⅸ型和MPS-Ⅵ型都是罕见的遗传性骨病,这些骨病与其不同型、亚型之间有很多相似之处如均表现骨软骨发育不良、骨骼畸形、发育迟缓、身材矮小等症。所以,仅凭临床症状和影像检查结果通常难以鉴别和诊断,往往需要通过分子诊断(包括基因诊断和/或蛋白/酶学功能鉴定)方能确诊,而只有确诊才能为后续的产前/植入前诊断和早期干预治疗奠定基础。本论文主要围绕近些年接诊的成骨不全(OI)和黏多糖贮积症(MPS)这两类遗传性骨病进行基因诊断和新突变的致病性鉴定,以期揭示各病的表现型和基因型的相关性,从而为今后的产前特别是植入前基因诊断创造必要的前提条件。成骨不全(Osteogenesis imperfect,OI,MIM:166210),又称脆骨病,是一类骨量减少、骨脆性增加并且伴有骨骼畸形及其他胶原组织改变的结缔组织病,至今已报道的就有17种类型。除了I型为常染色体显性(AD)遗传外,其他均为常染色体隐性(AR)遗传。其中,成骨不全Ⅸ型(OI-Ⅸ)是一种十分罕见的脆骨病,目前国内未见任何报道,国外也仅报道过数例。该型症状相对较重,主要表现为长骨多发性骨折,股骨呈弓形弯曲、头围偏大,脊柱后侧凸,巩膜为灰色,髋外展并屈曲、髋和指关节运动幅度偏大、胫骨前凸。本文第一部分着重围绕送检的疑似成骨不全的高危胎儿及其家系成员进行详细的基因检测并对PPIB基因2种新突变进行系列的致病性鉴定。通过NGS高通量检测,发现MATN3、FGFR3、HSPG2、ACAN、PPIB等基因存在可疑突变。结合患胎产前超声检查结果及患胎父母的家族史进行综合分析和分级排查,并通过Sanger测序验证和生物信息学分析、蛋白高级结构预测和q-PCR定量分析验证,最后确定PPIB基因的2个新突变(p.M9V和p.G170D)为该高危胎儿的致病性突变。父、母亲分别为p.M9V和p.G170D的携带者,胎儿为p.M9V和p.G170D的复合杂合子。通过父系和母系家族成员的测序验证,结果显示突变情况与预期的完全一致。进一步证实此2种新突变就是胎儿患病的真正内因。这为下一步的植入前基因诊断(PGD)奠定了坚实的基础。黏多糖贮积症Ⅵ型(Mucopolysaccharidosis typeⅥ,MPS-Ⅵ,OMIM 253200)即Maroteaux-Lamy综合征,是一种严重致残致死性的、常染色体隐性遗传的遗传性骨病和代谢病,发病率约为1/105。ARSB基因发生病理性突变是本病发生的根本内因,该基因编码的芳香基硫酸酯酶B(arylsulphatase B,ARSB)的活性降低或缺陷/缺乏,可以影响到黏多糖(GAGs)以及中间代谢产物硫酸皮肤素(DS)/硫酸角质素(KS)和硫酸软骨素(CS)的分解,导致中间代谢产物在体内各组织器官的堆积。过多的代谢产物势必影响到各组织器官的生长发育,致使患者表现出发育迟缓,个头矮小,特殊面容,肝脾肿大,体表多毛等症。尿检通常呈强阳性(++)或超强阳性(+++),但智力基本正常。依据发病时间以及临床症状的严重程度、累及的器官、疾病进展的快慢,此病症可以分轻型及重型两种。本病至今仍无行之有效的根治疗法,骨髓移植/造血干细胞移植存在免疫排斥的风险,而且费用高,远期疗效也不明确;酶替代疗法疗效虽好,但是费用超昂贵且需终生治疗。故查清病因进而对再次孕育的高危胎儿(或胚胎)实施产前(或植入前)基因诊断、防止患胎出生仍是目前防治该病的最佳应对策略。探索黏多糖贮积症Ⅵ患者的表现型和基因型的相关性,就是为今后的防治工作奠定基础,为优生优育工作积累宝贵经验。本文第二部分主要对收集到的三家疑似MPS-Ⅵ型的患者进行了ARSB基因的突变检测,结果发现家系1的ARSB基因E5存在c.943 C>T/p.R315X杂合无义突变,E6存在c.1197 C>G/p.F399L杂合错义突变,先证者为2种突变的复合杂合子。经检索HGMD数据库证实两种突变均为病理性突变。其父为p.F399L错义突变的携带者,其母为p.R315X无义突变的携带者。家系2发现ARSB基因E3存在c.523T>G/p.Y175D杂合错义新突变,E6存在c.1197C>G/p.F399L已报杂合错义突变,先证者为两种突变的复合杂合子。其父为p.Y175D新错义突变的携带者,其母为另一错义突变p.F399L(为突变热点)的携带者。家系3通

关键词：成骨不全Ⅸ型黏多糖贮积症Ⅵ型新突变致病性鉴定相关性研究

序列捕获高通量测序技术建立citrin缺乏症基因检测平台及其应用

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序列捕获高通量测序技术建立citrin缺乏症基因检测平台及其应用

作者：刘刚华南理工大学

学位级别：硕士

Citrin缺乏症是因SLC25A13基因突变导致其编码的Citrin蛋白功能缺失从而出现一系列的临床表现和生化检测指标异常的常染色体隐性遗传疾病。近年来研究发现该遗传病呈现世界性分布,但以东亚地区多发,包括我国在内。SLC25A13基因突变分析... 详细信息

Citrin缺乏症是因SLC25A13基因突变导致其编码的Citrin蛋白功能缺失从而出现一系列的临床表现和生化检测指标异常的常染色体隐性遗传疾病。近年来研究发现该遗传病呈现世界性分布,但以东亚地区多发,包括我国在内。SLC25A13基因突变分析检测是目前确诊Citrin缺乏症的主要依据。当前SLC25A13基因突变分析的方法主要是经典的Sanger测序技术和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)等,而这些技术都有其缺点:Sanger测序技术操作繁琐、通量低等;PCR-RFLP技术则不能发现新突变等。本研究希望建立基于高通量测序技术与目标序列捕获技术的SLC25A13基因检测新型平台。本研究中高通量测序技术与目标序列捕获技术结合的基因检测平台以炎黄YH标准基因组DNA测试整个试验检测流程并确定平台的数据过滤方法。其后,连续检测100个正常人基因组DNA样品和2个citrin缺乏症患者的基因组DNA样品。为了筛选致病未报道的新的候选突变,利用多款预测软件(如SIFT、Polyphen、GERP、LRT等)对这些突变进行有害性和保守型预测,最终鉴定导致疾病发生的相关基因及突变。其结果建立了100个正常中国SLC25A13和ASS1基因变异频率表,以及在2名citrin缺乏症患者的SLC25A13基因上检出致病突变:c.85154del GTAT/c.1177+1G>A与c.754G>A/c.1177+1G>A。其中c.754G>A(***252 Lys)之前未见中外报道,对其进行预测分析为其位置具有高度保守性和该突变具有有害性或致病性。通过经典Sanger测序对患者及其家属进行验证,其结果为本研究中高通量测序结果与Sanger测序结果相一致。同时,也说明了患者分别从其父母双方遗传得到一个致病突变,使得患者在SLC25A13基因存在复合杂合突变,这与citrin缺乏症的常染色体隐性遗传方式相一致。本研究说明了由高通量测序技术与目标序列捕获技术所组成的基因检测平台应是一种为诊断某些明确发病机制的遗传病而检测其基因的有效方法,包括本研究中的citrin缺乏症(瓜氨酸血症II型)。同时,该平台对其他遗传病或基因缺陷病都有着重要的应用价值和研究意义。

关键词： citrin缺乏症 SLC25A13 新突变目标序列捕获二代高通量测序

Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)一家系临床、遗传学和功能分析

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Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)一家系临床、遗传...

作者：曾汉石暨南大学

学位级别：硕士

背景和目的:Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(Neonatal Intrahepatic Cholestasis caused by Citrin Deficiency,NICCD)是SLC25A13基因突变引起的孟德尔遗传病。NICCD目前缺乏公认的生化或临床诊断标准,其确诊依赖SLC25A13基因分析。但是,新错义突变的致病性仅靠遗传学分析难以解决。虽然生物信息学技术可以预测错义突变的致病性,但不同工具的预测结果有时并不一致,此外不同类型突变导致的Citrin功能受损程度也难以精确预测。本研究研究一个NICCD家系的临床、遗传学和功能学特征,为患儿确诊及该家系产前诊断提供科学依据。方法:以一个NICCD家系为研究对象,系统收集、整理和分析该家系中NICCD患儿病史和临床表现、历次生化检查结果,以及血液MS-MS和尿液GS-MS筛查发现,并以病例报告形式描述。通过SLC25A13基因高频突变筛查和Sanger测序对患儿及其父母进行遗传学分析。以突变重组质粒、SLC25A13基因完整ORF重组质粒和空质粒分别转染敲除同源基因的酿酒酵母株(agc1Δ),培养96小时后通过OD600nm检测不同组agc1Δ酵母株生长能力。通过不同组酵母生长能力的比较,研究新错义突变对Citrin蛋白功能的影响。结果:患儿为6月19日大男婴,因发现皮肤黄染半年余入院,查体发现皮肤微黄,生化检查发现ALT、AST、GGT、ALP、TBA、Tbil和Dbil等肝功能指标升高。血MS-MS分析发现瓜氨酸、酪氨酸、蛋氨酸含量明显升高。尿液GC-MS分析发现大量4-羟基苯乳酸及4-羟基苯丙酮酸,中量3-羟基苯乳酸。SLC25A13基因分析发现患儿为突变c.851del4和c.103A>G(p.M35V)的复合杂合子,其父、母分别为突变c.103A>G(p.M35V)和c.851del4的携带者。功能分析结果提示p.M35V突变导致Citrin蛋白功能完全失活。总结:本研究NICCD患儿以胆汁淤积症主要临床表现,伴有相对特征性的代谢组学改变。遗传学分析揭示患儿系父源性突变c.103A>G(p.M35V)和母源性突变c.851del4的复合杂合子,功能分析证实了新错义突变p.M35V的致病性及其严重程度。本研究丰富了SLC25A13基因的突变谱,同时为患儿NICCD确诊及该家系产前诊断提供了科学依据。

关键词： SLC25A13基因 Citrin缺陷病 MS-MS串联质谱法 GS-MS气相色谱-质谱法新突变功能分析

黏多糖贮积症Ⅵ型表现型和基因型的相关性研究

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热带医学杂志 2017年第2期17卷 142-147,F0002页

作者：姜煜郭源平艾阳唐佳方子水杜敏联郭奕斌中山大学中山医学院医学遗传室广东广州510080 中山大学医学遗传室暑期科研小组广东广州510080 广东理工学院广东肇庆526000 中山大学附属第一医院儿科广东广州510080

目的对3家拟诊为黏多糖贮积症Ⅵ型(MPSⅥ)的患儿及其父母进行芳香基硫酸酯酶B(ARSB)基因的突变检测,以阐明其分子发病机制并揭示MPSⅥ表现型和基因型的相关性。方法尿糖胺聚糖(GAG)定性检测后对患儿及其父母的DNA进行ARSB基因的PCR扩增... 详细信息

目的对3家拟诊为黏多糖贮积症Ⅵ型(MPSⅥ)的患儿及其父母进行芳香基硫酸酯酶B(ARSB)基因的突变检测,以阐明其分子发病机制并揭示MPSⅥ表现型和基因型的相关性。方法尿糖胺聚糖(GAG)定性检测后对患儿及其父母的DNA进行ARSB基因的PCR扩增及Sanger测序。对所发现的新突变,用变性高效液相色谱(DHPLC)法进行快速筛检,用多种生物信息学方法对新突变的致病性进行系列鉴定。结果家系1先证者为c.943C>T和c.1197C>G的复合杂合子;家系2先证者为c.523T>G/p.Y175D(新突变,父源)和c.1197C>G/p.F399L(母源)的复合杂合子;家系3先证者的E2和E3无扩增产物,而其父母均有400 bp和459 bp特异带。DHPLC结果显示,正常对照组和患儿母亲为正常单峰,而患儿及其父为异常双峰。正常和突变的ARSB蛋白的高级结构存在明显差异;突变点所在氨基酸在物种进化过程中具有高度保守性;Poly Phen-2和SIFT软件预测结果:Probably damaging(很可能有害)和Damaging(有害的)。结论家系2的p.Y175D是一新的致病性突变,为患儿发病的内在原因之一。家系1和2可确诊为MPSⅥ型,其表现型和基因型有显著的相关性;家系3虽经酶检确诊,临床症状、尿检结果也均与MPSⅥ型符合,但DNA水平未查到明确突变类型,其表现型与基因型的相关性有待进一步证实。

关键词：黏多糖贮积症Ⅵ型 ARSB基因新突变鉴定相关性

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无家族史的常染色体显性疾病的遗传咨询

国际遗传学杂志 1985年第5期 270-271页

作者：孙月桂

对双亲正常但有常染色体显性遗传病的患儿做遗传咨询是困难的。如此病为完全外显,它的出现通常归因于基因新突变,复发风险很低。常染色体显性遗传病有不完全外显的个别病例不能总是归于新突变,这一类情形有相当的复发风险,可在无症状双... 详细信息

对双亲正常但有常染色体显性遗传病的患儿做遗传咨询是困难的。如此病为完全外显,它的出现通常归因于基因新突变,复发风险很低。常染色体显性遗传病有不完全外显的个别病例不能总是归于新突变,这一类情形有相当的复发风险,可在无症状双亲以后的妊娠中发现。本文推导一计算复发风险的公式并探讨其意义。复发风险估计的推导:Haldane(1949)曾指出过突变-选择平衡的常染色体显性遗传病的公式:

关键词：遗传咨询常染色体显性遗传外显率适合度不完全遗传商谈适应值常染色体显性疾病双亲新突变携带者

一个希特林缺陷病家系SLC25A13基因的新剪接位点变异及异常转录子

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中华医学遗传学杂志 2019年第2期36卷 116-119页

作者：邓梅程映舒赛男黄志华宋元宗暨南大学附属第一医院儿科广州510630 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科武汉430030

目的探讨1例希特林缺陷病患儿的临床及遗传学特征。方法整理分析患儿临床资料,提取患儿及其父母外周血DNA标本,采用靶向外显子测序检测致病突变,并通过一代测序进行验证。提取患儿外周血淋巴细胞mRNA,通过逆转录-PCR、cDNA克隆和San... 详细信息

目的探讨1例希特林缺陷病患儿的临床及遗传学特征。方法整理分析患儿临床资料,提取患儿及其父母外周血DNA标本,采用靶向外显子测序检测致病突变,并通过一代测序进行验证。提取患儿外周血淋巴细胞mRNA,通过逆转录-PCR、cDNA克隆和Sanger测序等技术,分析新突变对SLC25A13转录产物的影响。结果患儿为SLC25A13突变c.845_c.848+1delG和c.1841+3_1841+4delAA复合杂合子,后一突变尚未见文献报道,克隆结果证实该突变造成mRNA异常剪接,形成异常转录子[r.1841_1842ins1841+1_1841+67;1841+3_c.1841+4del]。结论本研究通过传统DNA分析方法结合cDNA克隆技术,发现了新突变c.1841+3_1841+4delAA及其异常剪接变异体,为患儿希特林缺陷病确诊提供了实验依据,同时扩展了SLC25A13基因突变谱。

关键词：希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症 SLC25A13基因 cDNA克隆新突变