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应用PCR技术快速检测柑桔溃疡病的研究

中国南方果树 2005年第2期34卷 1-4页

作者：唐科志周常勇王雪峰周彦刘科宏刘英中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

应用PCR检测柑桔溃疡病,所用引物为5'TTGGTG TCGTCGCTTGTAT 3'和5'CACGGGTGCAAAAAATCT3'.从病样的叶片、果皮和枝皮抽提溃疡病菌的PCR扩增,其产物经琼脂粮凝胶电泳,产生大约220bp的特征条带,与纯培养溃疡病菌的PCR产物一致.试验比较两... 详细信息

应用PCR检测柑桔溃疡病,所用引物为5'TTGGTG TCGTCGCTTGTAT 3'和5'CACGGGTGCAAAAAATCT3'.从病样的叶片、果皮和枝皮抽提溃疡病菌的PCR扩增,其产物经琼脂粮凝胶电泳,产生大约220bp的特征条带,与纯培养溃疡病菌的PCR产物一致.试验比较两种核酸抽提方法,微量快速抽提法的灵敏度明显高于高盐抽提法.有症状病样品的不同部位均能检测到溃疡病;病株的无症状叶片、果皮、枝皮有部分检测到病菌.病果园健康植株大多数检测不到病菌,少数植株PCR产物电泳务带较弱.取样量以10～20mg为宜.该PCR技术可用于快速检测柑桔溃疡病.

关键词：柑桔溃疡病溃疡病菌植株果皮病株叶片果园 PCR产物核酸抽提方法

表面展示外源蛋白的毕赤酵母细胞壁蛋白抽提及分析

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表面展示外源蛋白的毕赤酵母细胞壁蛋白抽提及分析

作者：周新莹华南理工大学

学位级别：硕士

在众多的微生物展示体系中，酵母表面展示技术的发展非常迅速，该技术已广泛应用于许多的领域，展现出广阔的发展前景。在各种展示体系中，细胞壁对其展示功能起着极其重要的作用。酵母细胞壁在维护自身功能、生物代谢及代谢转运和环境... 详细信息

在众多的微生物展示体系中，酵母表面展示技术的发展非常迅速，该技术已广泛应用于许多的领域，展现出广阔的发展前景。在各种展示体系中，细胞壁对其展示功能起着极其重要的作用。酵母细胞壁在维护自身功能、生物代谢及代谢转运和环境胁迫响应等发挥着极其重要的作用，酵母细胞壁生物学研究已成为快速发展的领域。这对于解释细胞形态发生学、阐明细胞循环进程中网络结构调控机理以及新型抗真菌药物的开发和应用等方面具有重要意义。细胞壁蛋白是酵母细胞壁的重要组成部分，与细胞壁的精细结构及各种生理功能密切相关。建立稳定有效的细胞壁蛋白抽提方法是开展毕赤酵母细胞壁蛋白质组及其甲醇代谢调控相关性研究的前提。酵母中各种共价及非共价结合的细胞壁蛋白均已应用于表面展示体系，而目前毕赤酵母所利用的锚定蛋白多数为外源细胞壁蛋白，为了开发新的毕赤酵母内源细胞壁蛋白，而更加适合用于毕赤酵母本身展示外源蛋白，本研究做了如下工作：（1）以具非共价结合壁蛋白Flo1p絮凝素的重组酵母GS115/KFS-CALB、具共价结合壁蛋白α凝集素的重组酵母GS115/KNS-CALB和具共价结合壁蛋白Pir1的重组酵母GS115/PIR1-CALB为对象，用热SDS、昆布多糖酶、氢氟酸吡啶和温和碱水解对上述壁蛋白抽提，结果表明：3种壁蛋白已成功地展示于毕赤酵母细胞壁的表面;用这3种酿酒酵母细胞壁蛋白展示脂肪酶，对细胞的生长状况影响不大，而对展示酶的表达量影响较大，GS115/KFS-CALB、GS115/KNS-CALB和GS115/PIR1-CALB的脂肪酶水解酶比活力最高达855.02、1239.40和210.47U每克细胞干重;热SDS可有效抽提GS115/KFS-CALB上非共价连接的Flo1p絮凝素，昆布多糖酶和氢氟酸吡啶可释放GS115/KNS-CALB上共价连接的α凝集素，而昆布多糖酶和温和碱可释放GS115/PIR1-CALB上共价连接的的Pir1。（2）将毕赤酵母中所有蛋白质通过Big-PI Fungal Predictor软件及信号肽预测发现了50个潜在GPI型细胞壁蛋白，分别以它们作为锚定蛋白，以南极假丝酵母脂肪酶B（CALB）为报告基因，构建新的毕赤酵母展示体系。流式细胞术和昆布多糖酶抽提细胞壁蛋白的Western Blot检测结果显示，有13个融合蛋白成功锚定在细胞壁上，并且符合GPI蛋白的特征，由此证明这13个蛋白是毕赤酵母GPI型细胞壁蛋白。另外，这13个新的GPI细胞壁蛋白对毕赤酵母表面展示CALB的效率较高，且展示的CALB水解酶活力值也较大，但不同的GPI细胞壁蛋白展示的CALB水解酶活力不同。通过生物信息学软件对13个新的GPI细胞壁蛋白的性质进行了分析。

关键词：表面展示巴斯德毕赤酵母细胞壁蛋白抽提方法 GPI蛋白

Alternaria Alternata菌丝细胞壁凝集素的分离纯化及特性研究

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Alternaria Alternata菌丝细胞壁凝集素的分离纯化及特性研究

作者：张成省山东农业大学

学位级别：硕士

在各种不同的生命现象中，识别是中心事件，也是许多基于细胞间互作的生命进程中的第一步。真菌细胞壁作为细胞的最外层部分，调节着真菌(包括菌寄生真菌或寄主真菌)与周围环境最初的物理化学相互作用，细胞壁结合蛋白质在这些过程中扮... 详细信息

在各种不同的生命现象中，识别是中心事件，也是许多基于细胞间互作的生命进程中的第一步。真菌细胞壁作为细胞的最外层部分，调节着真菌(包括菌寄生真菌或寄主真菌)与周围环境最初的物理化学相互作用，细胞壁结合蛋白质在这些过程中扮演着重要角色，细胞壁蛋白质的研究成为生物间相互识别机制研究的热点。菌寄生是菌寄生真菌与寄主真菌间的一种寄生方式，结合于寄主真菌菌丝细胞壁上的特异性蛋白—凝集素被认为是菌寄生过程中的重要识别因子。纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum系接触性活体营养菌寄生真菌，寄主之一是Alternaria alternata，关于这一类菌寄生真菌与寄主真菌间的识别机制研究国内外尚未见报道。本研究选择二者作为研究系统，分离纯化了寄主细胞表面的特异性蛋白质凝集素，对其在菌寄生过程中的作用作了初步探讨，为进一步研究菌寄生过程中的信号传递奠定基础，为阐明生物间的相互作用机理提供一定证据;同时对真菌菌丝细胞壁可溶性蛋白的分离方法也作了研究，为真菌菌丝细胞壁研究提供方法参考和实验依据。结果如下： 1．以***为研究材料，分别用三种不同的化学方法，对真菌菌丝细胞壁蛋白质的抽提方法进行了比较和研究。结果表明依次经过液氮研磨、超声波细胞粉碎机和细胞匀浆混合器处理，可使细胞壁破碎率≥99％在一定条件下(1200g，2min)离心即可制备较纯的细胞壁，纯度约95％。将分离到的细胞壁分别用三种不同的化学方法即碱抽提(常温)、热碱抽提和SDS抽提，并对抽提液的蛋白含量及组分进行分析，结果表明三种方法均为有效的抽提***菌丝细胞壁蛋白的方法。其中，热碱法抽提蛋白含量最大，常温碱法次之，SDS法最小;三种方法所抽提蛋白主要成分均一致(≥40％)，但所抽提的蛋白组分又有差异。SDS法和常温碱法相似性极大(≥80％)，而二者与热碱法差异相对较大;三种方法所得到的细胞壁抽提液的含糖量各不相同，常温碱法含糖量很低，SDS法与热碱法含糖量则很高，以SDS法为最高：含糖量越高，其对蛋白质研究影响越大。本研究仅仅对蛋白质的抽提方法做了比较和研究，这些方法所抽提到的非蛋白组分对随后的研究是否有影响或有哪些影响还需进一步的研究。 ***菌丝细胞壁可溶性蛋白抽提液对***的孢子具有较强的凝集力，用氯仿一异戊醇去除蛋白后，对***的孢子的凝集力则显著下降，这说明起凝集作用的因子很可能是一种蛋白质。经硫酸铵沉淀，DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析和Sephacryl S-100分子筛层析分离到了这种蛋白，活性分析表明它是一种凝集素，定名为AAL，分子量为37kDa，其等电点是pH4.7，最大紫外吸收波长为282nm。经糖染色鉴定为一种糖蛋白，中性糖含量约为14％。本研究结果表明AAL在***菌丝和***的孢子吸附事件中扮演着重要角色，对***的孢子具有极强的凝集力，当其缺乏时，孢子凝集力显著下降，暗示AAL很可能起识别因子的作用，与菌寄生真菌细胞表面的特殊位点(可能为糖蛋白)相张成省：Alternaria alternate菌丝纫胞壁凝集素的分离纯化及特性研究结合，以达到相互识别和附着的作用。

关键词：菌寄生真菌凝集素细胞壁蛋白抽提方法

一种利用从桉木APMP制浆废水中提取的化感物质抑制铜绿微囊藻的方法

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天津造纸 2019年第3期41卷 26-29页

作者：刘廷志亓晖周盼丽李丽娟不详

本发明涉及一种利用从桉木APMP制浆废水中提取的化感物质对铜绿微囊藻的抑制方法,采用不同极性的有机溶剂进行抽提方法从APMP制浆废水中提取化感物质,浓缩至总有机相体积的1%~3%,得到的浓缩物即为化感物质有机溶剂溶解液,然后在通氮保... 详细信息

本发明涉及一种利用从桉木APMP制浆废水中提取的化感物质对铜绿微囊藻的抑制方法,采用不同极性的有机溶剂进行抽提方法从APMP制浆废水中提取化感物质,浓缩至总有机相体积的1%~3%,得到的浓缩物即为化感物质有机溶剂溶解液,然后在通氮保护情况下,在25~60℃温度下将化感物质有机溶剂溶解液进一步使有机溶剂挥发1~6 h,得到桉木APMP制浆废水化感物质;稀释后使用即可。本发明制备的化感物质的抑藻率为50%~85%,大规模应用时,将桉木APMP制浆废水化感物质中加入适量水,经高速剪切乳化后直接加入生长有铜绿微囊藻的水体中,添加量在1.0~15 g/mL,对铜绿微囊藻的抑藻率为40%~85%。

关键词：桉木溶解液溶剂挥发有机溶剂抽提方法铜绿微囊藻相体积化感物质

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关于道路交通事故的法医物证检验

广东公安科技 1996年第3期4卷 108-109页

作者：蔡锐波中山医科大学法医学系

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桑叶非结构性碳水化合物的测定对比研究

蚕桑通报 2023年第1期54卷 18-22页

作者：刘岩林天宝卢红伶朱燕计东风吕志强浙江省农业科学院蚕桑与茶叶研究所浙江杭州310021

非结构性碳水化合物是植物体内碳水化合物的一种重要存在形式,其含量高低与植物生长发育、逆境胁迫响应密切相关。为分析桑叶中非结构性碳水化合物含量,本研究利用80%乙醇、75%甲醇和MCW介导的不同抽提方法,设置不同条件进行测定对比分... 详细信息

非结构性碳水化合物是植物体内碳水化合物的一种重要存在形式,其含量高低与植物生长发育、逆境胁迫响应密切相关。为分析桑叶中非结构性碳水化合物含量,本研究利用80%乙醇、75%甲醇和MCW介导的不同抽提方法,设置不同条件进行测定对比分析。结果显示:75%甲醇和MCW抽提获得的可溶性糖产物无明显色素干扰,且75%甲醇方法抽提产物的可溶性糖与淀粉比值更高;增加抽提重复次数时,可溶性糖抽提得率增加。本研究经综合分析提出75%甲醇恒温振荡抽提1 h是适合桑叶非结构性碳水化合物的简便快速抽提方法。这为今后开展桑树生长发育的生理学以及桑树品种抗逆性能等分析提供方法学参考。

关键词：非结构性碳水化合物可溶性糖淀粉抽提方法

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模拟反应系统中吡嗪的液态微抽提

世界热带农业信息 1997年第11期 17-18页

作者：江柏萱

CCl_4大鼠肝纤维化形成与消减过程中肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用

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中西医结合肝病杂志 2005年第3期15卷 146-148页

作者：刘莺刘平徐列明上海中医药大学肝病研究所上海200032

目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子。方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化... 详细信息

目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子。方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化瘀方干预,治疗从第12周始至16周止。采用蛋白质分步抽提方法,提取肝组织蛋白质,分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DE)分离、凝胶银染,显示各组蛋白质分子的差异表达的蛋白质分子。结果:在各组银染凝胶图谱上,可辨识的蛋白质斑点达1000～1400个左右,蛋白质表达中除有肝组织看家蛋白质,模型组也有特异蛋白质表达,且在不同时期蛋白质分子表达也有差异,特异表达蛋白质分子为100至300多个不等,在不同阶段表达是不相同的,经质谱鉴定确定了有几类功能不同的蛋白质分子。结论:扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制是多方面的,其干预作用与多种蛋白质分子相关。

关键词：扶正化瘀方干预作用 CCl4 组织蛋白质组肝纤维化形成大鼠动态变化二维聚丙烯酰胺凝胶电泳亲水性蛋白质分子蛋白质表达消减纤维化肝组织肝纤维化过程不同时期抗肝纤维化差异展示皮下注射动态观察抽提方法

三种提取乳酸菌中内源性质粒DNA方法的比较

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微生物学杂志 2008年第6期28卷 36-39页

作者：王艳霞石泉包秋华张和平格日勒图内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010018

采用3种不同抽提质粒DNA的方法普查了6株不同乳酸菌的内源性质粒DNA,并对3种不同方法进行比较。在相同条件下,琼脂糖凝胶电泳检测的结果显示:效果最佳者为改进的Anderson-Mckay方法,其次为液氮反复冻融方法,最差者为改进的碱裂解方法。... 详细信息

采用3种不同抽提质粒DNA的方法普查了6株不同乳酸菌的内源性质粒DNA,并对3种不同方法进行比较。在相同条件下,琼脂糖凝胶电泳检测的结果显示:效果最佳者为改进的Anderson-Mckay方法,其次为液氮反复冻融方法,最差者为改进的碱裂解方法。为抽提革兰阳性细菌乳酸菌类的内源性质粒DNA提供了行之有效的方法。

关键词：乳酸菌内源性质粒抽提方法