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端粒酶线粒体转位与肝癌细胞多药耐药的相关性研究

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肿瘤 2012年第1期32卷 7-15页

作者：文蕾凌贤龙周源第三军医大学新桥医院消化科重庆400038

目的:本研究旨在观察人端粒酶(human telomerase)线粒体转位对肿瘤多药耐药的影响。方法:分别采用顺铂(cisplatin,CDDP)大剂量冲击和间歇诱导的方法处理人肝癌SK-Hep1细胞株,建立具有不同程度耐药指数(resistance index,RI)的人肝癌耐... 详细信息

目的:本研究旨在观察人端粒酶(human telomerase)线粒体转位对肿瘤多药耐药的影响。方法:分别采用顺铂(cisplatin,CDDP)大剂量冲击和间歇诱导的方法处理人肝癌SK-Hep1细胞株,建立具有不同程度耐药指数(resistance index,RI)的人肝癌耐药细胞株;采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测各组细胞的药物敏感性,计算半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)和RI;FCM法检测细胞周期及凋亡率;免疫荧光染色检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在细胞核和线粒体中的分布;蛋白质印迹法检测hTERT蛋白在全细胞和线粒体中的表达情况;实时定量基因扩增荧光检测系统(real-time quantitative PCR detecting system,Q-PCR)检测SK-Hep1亲本细胞株和各耐药细胞株的端粒相对长度;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的氧化损伤;JC-1染色法检测线粒体的膜电位。结果:获得3株对CDDP具有不同程度RI的SK-Hep1细胞,分别命名为SK-Hep1/CDDP1、SK-Hep1/CDDP2和SK-Hep1/CDDP3细胞,CCK-8检测结果显示,它们对CDDP的RI值分别为7.51、9.31和13.76,并对多柔比星和5-氟尿嘧啶有交叉耐药作用。FCM法、免疫荧光染色法、Q-PCR系统、RFQ-PCR法及JC-1染色法的检测结果显示,随着RI值的增加,各耐药细胞株的凋亡率明显降低,hTERT逐渐从细胞核转位到了线粒体中,细胞中的端粒明显缩短,损伤的mtDNA逐渐减少,线粒体膜电位降低。结论:多药耐药肿瘤细胞中端粒酶线粒体转位增加,线粒体端粒酶可发挥保护线粒体的作用。肿瘤细胞通过端粒酶的线粒体保护功能抵抗凋亡。因此,端粒酶线粒体转位可能是肿瘤细胞多药耐药的另一重要的作用机制。

关键词：肝肿瘤抗药性,多药端粒线粒体 SK-Hep1细胞

多药耐药基因ABCB1和ABCG2在下咽癌FaDu细胞多药耐药中的研究

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2012年第4期47卷 305-310页

作者：马聚珂逯素梅于亮田家军李建峰王海波徐伟山东大学附属省立医院耳鼻咽喉头颈外科济南250021

目的研究多药耐药基因ABCB1和ABCG2在下咽癌FaDu细胞株及其耐紫杉醇细胞株FaDu／T中的多药耐药特征及其机制，为进一步研究下咽癌细胞的多药耐药性及逆转提供理论支持。方法以人下咽癌细胞株FaDu为亲本细胞，采用浓度梯度递增法成功建... 详细信息

目的研究多药耐药基因ABCB1和ABCG2在下咽癌FaDu细胞株及其耐紫杉醇细胞株FaDu／T中的多药耐药特征及其机制，为进一步研究下咽癌细胞的多药耐药性及逆转提供理论支持。方法以人下咽癌细胞株FaDu为亲本细胞，采用浓度梯度递增法成功建立下咽癌细胞株FaDu的耐紫杉醇细胞株FaDu／T。四甲基偶氮唑蓝法分别检测FaDu和FaDu／T对顺铂、氟尿嘧啶、多柔比星和长春新碱的多药耐药性；多药耐药基因及蛋白表达变化情况分别通过RT—PCR，Western blot和激光共聚焦检测；c—Jun氨基末端激酶（c—Jun N—terminal kinase，JNK）信号转导通路相关蛋白的表达变化通过Western blot检测。结果耐药细胞株FaDu／T比FaDu细胞有更强的多药耐药性。FaDu细胞相比，FaDu／T细胞株中多药耐药蛋白ABCB1的表达增加（t=22．42，P〈0．05），但ABCG2表达下降（t=10．06，P〈0．05）。紫杉醇初始作用于FaDu细胞后JNK信号转导通路被激活，但是在FaDu／T细胞中JNK信号转导通路呈失活状态，丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的激活剂茴香霉素（Anisomycin）可以使FaDu／T细胞的JNK信号通路重新激活。耐药细胞株FaDu／T中加入茴香霉素时ABCB1表达下调（F=33．72，P〈0．05），ABCG2的表达升高（F=220．16，P〈0．05），但是在预先加入JNK特异性抑制剂SP600125的FaDu／T细胞株中加入茴香霉素时，ABCB1和ABCG2的表达无明显变化（P〉0．05），提示JNK信号通路在下咽癌的多药耐药过程中具有重要的调控作用。结论下咽癌FaDu细胞的多药耐药性以多药耐药蛋白ABCB1的高表达和ABCG2的低表达为主要特征，且两种耐药蛋白的表达变化与JNK信号转导通路密切相关。

关键词：下咽肿瘤 P糖蛋白肿瘤蛋白质类 ATP结合匣式转运子抗药性,多药肿瘤细胞,培养的

低频海马电刺激增加耐药性颞叶癫痫大鼠脑细胞外液γ-氨基丁酸含量和抑制癫痫发作及杏仁核后放电

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中华神经科杂志 2014年第8期47卷 542-547页

作者：伍国锋刘晓英洪震唐太峰贵阳医学院附属医院神经内科 550004 复旦大学华山医院神经内科

目的建立多药耐药性颞叶癫痫模型,以杏仁核后放电频率、癫痫发作频率、海马细胞外液γ-氨基丁酸（GABA）浓度为指标,观察海马电刺激治疗耐药性颞叶癫痫的疗效及可能机制.方法选用Wistar大鼠120只,制作慢性杏仁核点燃癫痫模型,模型制... 详细信息

目的建立多药耐药性颞叶癫痫模型,以杏仁核后放电频率、癫痫发作频率、海马细胞外液γ-氨基丁酸（GABA）浓度为指标,观察海马电刺激治疗耐药性颞叶癫痫的疗效及可能机制.方法选用Wistar大鼠120只,制作慢性杏仁核点燃癫痫模型,模型制作成功后,应用经典抗癫痫药苯妥英钠和苯巴比妥进行筛选,根据癫痫大鼠对药物的反应区别出耐药性癫痫大鼠及药物敏感大鼠,将耐药性癫痫大鼠分为耐药对照组（n=8）及海马刺激组（n=8）,对耐药性癫痫大鼠进行低频海马电刺激,用微透析方法收集脑组织细胞外液,采用高效液相色谱法检测海马电刺激后GABA含量的变化.结果海马刺激组经过2周的低频电刺激后,癫痫发作受到明显抑制,杏仁核后放电频率及波幅降低,8：00-9：00 am和8：00-9：00 pm 2个时段的GABA浓度（μg/ml）分别为32.69±7.80、35.76±6.27,2个时段的GABA浓度（μg/ml）都明显高于耐药对照组（26.58±6.87,t=-21.45,P=0.000;31.50 ±4.87,t=-15.74,P=0.000）,差异具有统计学意义.结论低频电刺激海马可以明显抑制点燃模型的癫痫发作,抑制耐药性颞叶癫痫模型的后放电,降低杏仁核后放电频率及波幅、缩短后放电持续时间,该作用可能是通过增加脑细胞外液GABA浓度而实现的.

关键词：癫痫,颞叶抗药性,多药海马电刺激细胞外液 γ氨基丁酸杏仁核

2004-2010年中国血标本中致病菌耐药趋势分析

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中华结核和呼吸杂志 2013年第6期36卷 411-419页

作者：吕媛李耘薛峰张秀珍胡云建金玉芬褚云卓胡志东赵建宏潘世扬赵旺胜胡必杰俞云松邓秋连杨健李艳刘文恩吕晓菊杨亚静周玲董方府伟灵徐修礼裴凤艳杨滨孟灵季萍王珊北京大学错一医院临床药理研究所 100191 北京医院检验科吉林大学第二医院检验科中国医科大学附属第一医院检验科天津医科大学总医院检验科河北医科大学第二医院检验科南京医科大学第一附属医院临检中心复旦大学中山医院临床微生物室浙江大学医学院附属邵逸夫医院感染科广州市妇女儿童医疗中心检验科深圳市人民医院呼吸科武汉大学人民医院检验科中南大学湘稚医院检验科四川大学华西医院感染性疾病中心成都市妇女儿童中心医院呼吸科昆明市第一人民医院检验科北京儿童医院检验科第三军医大学西南医院检验科第四军医大学两京医院检验科济南市中心医院检验科福建医科大学第一医院检验科兰州大学第二医院检验科新疆医科大学第一医院检验科

目的监测我国2004-2010年主要城市三级甲等医院住院患者血标本中致病菌的耐药状7兑及其耐药特点。方法所有收集的血标本来源菌株统一由中心实验室（北京大学第一医院临床药理研究所）采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的平皿2... 详细信息

目的监测我国2004-2010年主要城市三级甲等医院住院患者血标本中致病菌的耐药状7兑及其耐药特点。方法所有收集的血标本来源菌株统一由中心实验室（北京大学第一医院临床药理研究所）采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的平皿2倍稀释法测定抗菌药物的MIc值，并根据CLSI2011颁布的抗菌药物临界浓度标准进行耐药性分析。结果2004-2005、2007-2008和2009-2010年革兰阳性菌和阴性菌分离率没有明显变化，3个年度革兰阳性菌的分离率分别为43．1％（149／346）、34．0％（151／444）和47．5％（776／1634），革兰阴性菌分别为56．9％（197／346）、66．0％（293／444）和52．5％（858／1634）。耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出率2007-2008年最高（54．1％，20／37），2009-2010年度有所下降（36．5％，62／170）。3个年度甲氧西林耐药的凝同酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率相近。2009-2010年检测到1株（1．8％，1／56）财万古霉素耐药的屎肠球菌，1株对利奈唑胺耐药的粪肠球菌（MIC值为8mg／L）。肺炎链球菌的耐药性监测结果发现，与2007-2008年相比，2009-2010年虽然口服青霉素不敏感菌株检出率没有增加，分别为54．5％（6／11）和53．9％（7／13），但耐药株检出率从未检出增加到30．8％（4／13）。按肺炎链球菌非颅内感染株静脉给药折点标准判定，2007-2008年肺炎链球菌对青霉素的敏感度为100．0％（11／11），2009-2010年敏感度下降至84．6％（11／13）。3个年度大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的菌株检出率相似，分别为66．7％（30／45）、73．2％（71／97）和67．9％（233／343），肺炎克雷伯菌巾产ESBL菌株的检出率逐年下降，2004-2005年、2007-2008年和2009-2010年依次为72．4％（21／29）、50．0％（18／36）和41．1％（65／158）。纵观3个年度碳青霉烯类抗菌药物敏感性检测结果，肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物的敏感度均在90％以上，耐药率〈5％。多重耐药或泛耐药以鲍曼不动杆菌最为严重。2009-2010年监测中发现多重耐药率为81．8％（81／99），此外，还发现了1株泛耐药鲍曼不动杆菌（1．0％，1／99）。结论细菌对抗感染药物的耐药现状形势严峻，鲍曼不动杆菌耐药最为明显，常呈现多重耐药特点，甚至泛耐药。碳青霉烯类抗菌药物仍然是抗肠杆菌科细菌最有效的药物。已发现对利奈唑胺和替加环素等新型抗菌药物的耐药菌株。

关键词：血液标本细菌抗药性,多药

两种常用PI3K抑制剂对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/MIT耐药性的不同影响

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肿瘤 2009年第7期29卷 620-625页

作者：肖洋炯张萍黄明辉陈菲陈季武覃文新华东师范大学生命科学学院上海200062 上海交通大学肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002(LY)和wortmannin(Wort)对米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7/MIT耐药性的逆转作用。方法:LY或Wort与MIT联合作用耐药细胞株MCF-7/MIT后,在光学显微镜下记录细胞生长状况,MTT法检测细胞增殖和细胞活性。FCM法检测细胞内MIT的积聚。罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)染色法检测细胞线粒体膜电位。碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色法检测细胞周期。结果:LY和MIT联合作用可显著增强MIT引起的MCF-7/MIT细胞增殖抑制作用、由MIT引起的线粒体膜电位下降以及细胞周期S和G2/M期阻滞,其作用机制与LY增加MIT在MCF-7/MIT细胞内的积聚有关;Wort对MIT的药效无明显增强作用。结论:LY和MIT联合作用可显著提高耐药细胞株MCF-7/MIT对MIT的敏感度。

关键词：乳腺肿瘤 1-磷脂酰肌醇3-激酶米托蒽醌抗药性,多药 MCF-7/MIT细胞

实时聚合酶链反应熔解曲线法快速检测耐多药结核分枝杆菌

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中华结核和呼吸杂志 2011年第12期34卷 888-893页

作者：王峰崔运勇胡思玉桂静杨慧李庆阁刘小立深圳市慢性病防治中心病原检验科 518020 深圳市慢性病防治中心病业务科 518020 厦门大学生命科学学院生物医学科学系分子诊断教育部工程研究中心

目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，并与比例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007--2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和深圳市慢性病防治中心门诊患者临床分离株311株，采用实时PCR熔解曲线... 详细信息

目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，并与比例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007--2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和深圳市慢性病防治中心门诊患者临床分离株311株，采用实时PCR熔解曲线法检On,0rpoB基因耐药突变热点区、ahpC启动子区（硝～30及-15～-3位点）、inhA启动子区（-7～-8位点）、inhA94和katG315位耐药突变，并与耐药基因测序及表型药敏试验结果进行比较。以比例法药敏试验结果作为MTB药敏试验的金标准，评价实时PCR熔解曲线法的敏感度、特异度与金标准的符合率。结果实时PCR熔解曲线法2～3h即可完成检测，扩增和结果判定在1个反应管内完成。检测利福平耐药的敏感度为97．8％，特异度为97．1％，准确性为97．4％；检测异烟肼耐药的敏感度为86．6％，特异度为98．7％，准确性为92．6％。对耐多药MTB的检测敏感度为88．6％，特异度为100．O％，重复性为100．0％。结论实时PCR熔解曲线法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性，与比例法检测结果比较具有很好的一致性，且具有快速、准确的优点，有较好的临床应用价值。

关键词：分枝杆菌,结核抗药性,多药利福平异烟肼突变聚合酶链反应

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中华妇产科杂志 2016年第7期51卷 515-523页

作者：吴文娟王琪张玮李力广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科暨区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室南宁530021 广州医科大学附属肿瘤医院妇科肿瘤外科 510095

目的探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）铂类耐药患者血清中耐药相关的差异表达蛋白质的筛选及其临床价值。方法收集1998年8月—2013年9月在广西医科大学附属肿瘤医院治疗的卵巢肿瘤患者106例，其中卵巢癌铂类耐药患者44例（铂类耐药组），卵... 详细信息

目的探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）铂类耐药患者血清中耐药相关的差异表达蛋白质的筛选及其临床价值。方法收集1998年8月—2013年9月在广西医科大学附属肿瘤医院治疗的卵巢肿瘤患者106例，其中卵巢癌铂类耐药患者44例（铂类耐药组），卵巢癌铂类敏感患者52例（铂类敏感组），卵巢良性上皮性肿瘤患者10例（良性肿瘤组）；以2008年在本院进行健康体检的妇女33例为对照组。采集4组患者的血清标本。（1）每组各取10份血清标本，采用基于同位素标记的相对和绝对定量（iTRAQ）技术的蛋白质组学方法筛选不同组间[即卵巢癌组（包括铂类敏感组和铂类耐药组）与对照组、卵巢癌组与良性肿瘤组、铂类耐药组与铂类敏感组]的差异表达蛋白质，结合生物信息学方法筛选出与卵巢癌铂类耐药相关的差异表达蛋白质。（2）收集铂类耐药组（44例）、铂类敏感组（52例）、对照组（33例）3组患者的血清，采用蛋白印迹（WB）法及ELISA法对筛选出的差异表达蛋白质的表达进行验证。（3）采用Pearson相关分析法，分析差异表达蛋白质的表达与铂类耐药卵巢癌患者临床病理指标的相关性；采用Kaplan-Meier法，分析差异表达蛋白质的表达及不同临床病理指标对铂类耐药卵巢癌患者预后的影响；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析法，评价差异表达蛋白质对铂类耐药卵巢癌的诊断效能。结果（1）基于iTRAQ技术的蛋白质组学方法结合生物信息学方法分析显示，卵巢癌组与对照组间筛选出56个差异表达蛋白质，卵巢癌组与良性肿瘤组间筛选出39个差异表达蛋白质，铂类耐药组与铂类敏感组间筛选出62个差异表达蛋白质。通过检索Haplotter数据库对差异表达蛋白质进行正选择分析显示，C6、CNTN1蛋白在亚洲人群中以及BCHE蛋白在欧洲人群中均存在正选择作用（P值分别为0.031、0.010、0.040）。基于COREMINE数据库的文献挖掘及TCGA数据库基因芯片数据进行交集分析，进一步印证CRP、FN1、S100A9、TF、ALB、VWF、APOC2、APOE、CD44、F2、GPX3、ACTB蛋白与卵巢癌铂类耐药相关。（2）铂类耐药组、铂类敏感组、对照组患者血清中，SERPINA1蛋白的表达水平，WB法检测分别为41.7±9.2、32.8±6.6、14.2±3.6，ELISA法检测分别为（816±246）、（686±205）、（756 ±244）μg/μl；ORM1蛋白的表达水平，WB法检测分别为37.9±7.0、27.0 ±22.5、21.7 ±2.6， ELISA法检测分别为（221±35）、（174±23）、（157±18）μg/μl；FN1蛋白的表达水平，WB法检测分别为30.3±11.4、18.2±5.2、23.7±3.9，ELISA法检测分别为（71±13）、（62±13）、（69±13）ng/μl；GPX3蛋白的表达水平，WB法检测分别为1.2±0.3、2.2±0.3、1.6±0.3。使用WB法及ELISA法验证的各蛋白的表达趋势与iTRAQ技术检测的表达趋势一致。（3）Pearson相关分析显示，SERPINA1、FN1蛋白的表达与卵巢癌铂类耐药患者的复发、生存状态呈明显正相关（P〈0.01，P〈0.05），而与卵巢癌铂类耐药患者的无进展生存时间呈明显负相关（P〈0.05）；ORM1蛋白的表达与卵巢癌铂类耐药患者的复发呈明显正相关（P〈0.01）。Kaplan-Meier法分析显示，手术病理分期、初次治疗结局以及SERPINA1、FN1、ORM1蛋白的表达与卵巢癌铂类耐药患者的无进展生存时间明显有关（P〈0.05）；初次治疗结局与卵巢癌铂类耐药患者的总生存时间明显有关（P=0.027）。ROC曲线分析显示，FN1、ORM1、SERPINA1蛋白的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.679、0.910、0.666，ORM1蛋白对卵巢癌铂类耐药患者的诊断效能明显高于FN1、SERPINA1蛋白（P=0.000）。结论血清中筛选出的差异表达蛋白质FN1、SERPINA1及ORM1蛋白的表达水平可能对卵巢癌铂类耐药有预警及诊断的作用。ORM1蛋白诊断铂类耐药卵巢癌可获得较高的诊断效能，有望成为临床上筛选及诊断铂类耐药卵巢癌的潜在的血清学肿瘤标志物。

关键词：卵巢肿瘤抗药性,多药抗药性,肿瘤肿瘤标记,生物学蛋白质组学

人肿瘤坏死因子α联合溴隐亭对人肝癌裸鼠耐药模型耐药性逆转的研究

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中华外科杂志 2005年第19期43卷 1248-1253页

作者：丁磊陈孝平张志伟王海曹斌王志辉黎春蕾华中科技大学同济医学院附属同济医院肝胆胰研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院超声科武汉430030

目的探讨人肿瘤坏死因子α(TNFα)联合溴隐亭(BCT)对人肝癌裸鼠耐药模型耐药性的逆转作用。方法将人肝癌细胞系HepG2及其经阿霉素(ADM)诱导建立的耐药细胞系HepG2ADM和转染TNFα基因后的耐药细胞系HepG2ADMTNFα分别原位种植BALB/C裸鼠... 详细信息

目的探讨人肿瘤坏死因子α(TNFα)联合溴隐亭(BCT)对人肝癌裸鼠耐药模型耐药性的逆转作用。方法将人肝癌细胞系HepG2及其经阿霉素(ADM)诱导建立的耐药细胞系HepG2ADM和转染TNFα基因后的耐药细胞系HepG2ADMTNFα分别原位种植BALB/C裸鼠肝脏,建立裸鼠原位肝移植瘤模型。64只裸鼠分为4组:HepG2组(HepG2细胞系种植瘤裸鼠),ADM组(HepG2ADM细胞系种植瘤裸鼠),TNFα组(HepG2ADMTNFα细胞系种植瘤裸鼠)和BCT组(HepG2ADMTNFα细胞系种植瘤裸鼠同时口服BCT),成瘤后均给以每天腹腔内注射0.15g/kg的氟脲嘧啶+1.5mg/kg的丝裂霉素+10mg/kg的ADM,连续3d;BCT组化疗的同时另行BCT灌胃治疗(6.25mg·kg-1·d-1)。B超观察种植瘤的大小变化,病理观察组织学结构及裸鼠生长状况和对化疗药物的敏感性。采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测各组种植瘤的多药耐药相关基因(MDR1)和肺耐药相关蛋白(LRP)在mRNA水平、蛋白水平的变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测化疗后肿瘤组织凋亡指数情况。结果细胞系原位种植裸鼠肝脏成功率100%,种植瘤组织学特点符合人肝癌特征;TNFα组和BCT组种植瘤生长速度慢,与HepG2和ADM两组比较差异有统计学意义(P0.05);BCT、TNFα组凋亡指数比ADM组高(P0.05)。结论TNFα基因能下调MDR1和LRPmRNA及蛋白表达,联合BCT能加强对化疗药物的敏感性。

关键词：肿瘤坏死因子α 溴隐亭癌,肝细胞抗药性,多药裸鼠人肿瘤坏死因子α 肝癌裸鼠耐药性逆转耐药模型人肝癌细胞系HepG2

三氧化二砷联合丁硫氨酸亚砜胺对K562/ADM细胞的作用及其机制研究

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中华血液学杂志 2007年第7期28卷 438-443页

作者：王涛马梁明张华屏王宏伟杨林花乔振华山西医科大学第二医院血液科太原030001 山西医科大学实验中心

目的研究三氧化二砷(As_2O_3)联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺(BSO)对肿瘤多药耐药细胞株 K562/ADM 细胞的诱导凋亡效应,及对 P 糖蛋白(P-gp)和 mdrlmRNA表达的抑制作用,探讨谷胱甘肽(GSH)的含量变化与 As_2O_3作用效... 详细信息

目的研究三氧化二砷(As_2O_3)联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺(BSO)对肿瘤多药耐药细胞株 K562/ADM 细胞的诱导凋亡效应,及对 P 糖蛋白(P-gp)和 mdrlmRNA表达的抑制作用,探讨谷胱甘肽(GSH)的含量变化与 As_2O_3作用效果的关系。方法 As_2O_3(0.5、2.0、5.0 μmol/L)单独及联合100 μmol/L BSO 作用于 K562/ADM 细胞,应用 MTT 比色法检测 K562/ADM细胞的增殖活性;膜联蛋白 V/碘化丙锭(Annexin V/PI)标记法观察 K562/ADM 细胞的凋亡效应;分光光度法检测 K562/ADM 细胞内 GSH 含量变化;流式细胞术(FCM)检测 P-gp 水平变化;RT-PCR 方法检测 mdr1mRNA 的表达变化。结果 K562/ADM 细胞内的 GSH 含量为(81.13±3.91)mg/g 蛋白,在BSO 降低 GSH 含量后,临床剂量(0.5、2.0 μmol/L)As_2O_3联合 BSO(100 μmol/L)24 h内即可抑制K562/ADM 细胞的增殖活性,诱导 K562/ADM 细胞发生凋亡,处理48 h凋亡率分别为(59.29±6.01)%,(65.06±8.29)%;72 h凋亡率分别为(82.15±9.28)%,(92.72±9.41)%;其诱导凋亡效果均明显强于单用 As_2O_3临床剂量和高剂量(5.0 μmol/L)组。K562/ADM 细胞 P-gp 表达阳性率为98.1%,mdr1mRNA 的相对表达水平为1.85±0.13,临床剂量 As_2O_3联合 BSO 处理48 h,其抑制 mdr1mRNA 表达的作用效果以及处理72 h对 P-gp 的抑制作用均明显强于单用高剂量 As_2O_3组。结论GSH 的含量变化与 As_2O_3的作用效果密切相关,As_2O_3联合 BSO 可有效诱导 K562/ADM 细胞发生凋亡,有效抑制 P-gp 及 mdr1mRNA 的表达。

关键词： K562/ADM细胞抗药性,多药砷剂谷胱甘肽细胞凋亡