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RNAi和GroEL介导的双价抗番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）的研究

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RNAi和GroEL介导的双价抗番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）的研究

作者：郭佳茹安徽农业大学

学位级别：硕士

番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)属于双生病毒科菜豆金色花叶病毒属，由烟粉虱传播引起番茄黄化曲叶病毒病(TYLCVD)，目前该病毒病已在世界范围内多个国家和地区的烟草、番茄等作物上相继发生，给作物的生产造成巨大的损失。为了控制病害的加... 详细信息

番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)属于双生病毒科菜豆金色花叶病毒属，由烟粉虱传播引起番茄黄化曲叶病毒病(TYLCVD)，目前该病毒病已在世界范围内多个国家和地区的烟草、番茄等作物上相继发生，给作物的生产造成巨大的损失。为了控制病害的加剧发生，生产中往往采用物理防治、化学防治和生物防治等方法进行防治，不仅成本高，防治效果也不够理想，甚至给环境造成负面影响，因此，抗病品种的培育是最有效的途径之一。本研究利用实验室构建的SUC-GroEL和pBI121-AC1-AC2植物表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化法共转化番茄，并对获得的转基因材料进行抗病性鉴定，以期获得高抗TYLCV的番茄材料。主要研究进展如下： 1、通过观察番茄外植体在不同浓度卡那霉素分化培养基上的生长状况，确定本研究所用卡那霉素临界筛选浓度为100mg/L。 2、利用SUC-GroEL植物表达载体(利用拟南芥韧皮部启动子SUC和烟粉虱内GroEL基因构建)和pBI121-AC1-AC2反向重复序列植物表达载体(利用TYLCV的AC1和AC2基因构建)，通过农杆菌介导的遗传转化法共转化番茄，经过卡那霉素筛选，获得19株卡那霉素抗性再生植株。 3、利用PCR技术检测抗性再生植株，初步获得转SUC-GroEL载体阳性植株8株，转pBI121-AC1-AC2载体阳性植株6株以及转双载体阳性植株3株。 4、利用RT-PCR技术检测阳性抗性再生植株，获得转SUC-GroEL载体阳性植株5株，转pBI121-AC1-AC2载体阳性植株3株以及转双载体阳性植株2株，说明目的基因在番茄植株转录水平成功表达。 5、对T代转单/双基因的阳性植株进行农杆菌注射接种和烟粉虱传毒实验，并对植株进行病毒检测和抗病性鉴定，获得抗TYLCV的转SUC-GroEL载体抗病植株3株，转pBI121-AC1-AC2载体抗病植株3株以及转双载体抗病植株2株。 6、对抗病的T代阳性抗病植株收种的T代进行PCR鉴定，获得后代分离的阳性植株。对T代转单基因和双基因的阳性植株进行农杆菌注射接种和烟粉虱传毒实验，统计转单/双基因植株的发病情况，统计数据表明，这些抗病植株的抗病能力稳定遗传，且转双基因植株的抗病能力比转单基因植株的抗病能力更强。

关键词： Tomato yellow leaf curl virus(TYLCV) RNA interference(RNAi) GroEL 共转化抗病鉴定

针对水稻条纹病毒的人工miRNA设计与应用

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针对水稻条纹病毒的人工miRNA设计与应用

作者：高鹏浙江师范大学

学位级别：硕士

水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)引起的水稻条纹叶枯病是最重要的水稻病毒病之一,给我国水稻生产安全造成了巨大威胁。为了创制高抗RSV的水稻新种质,本研究首先根据天然microRNA (miRNA)的结构特点和作用原理,针对水稻条纹叶枯病... 详细信息

水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)引起的水稻条纹叶枯病是最重要的水稻病毒病之一,给我国水稻生产安全造成了巨大威胁。为了创制高抗RSV的水稻新种质,本研究首先根据天然microRNA (miRNA)的结构特点和作用原理,针对水稻条纹叶枯病毒基因组设计了人工miRNA(artificial microRNA, amiRNA),同时克隆了miRNA528基因的前体(pre-miRNA)。应用重叠PCR (over-lapping)技术并以这个水稻天然miRNA前体作为骨架,构建2个水稻转化载体(pAmiR-1和pAmiR-2),其中载体pAmiR-1是针对RSV p3基因;载体pAmiR-2是针对RSV pc3基因。通过农杆菌介导法将2个人工miRNA表达载体导入水稻品种武育粳3号,分子鉴定表明共获得219株转基因水稻植株。利用携带RSV的介体灰飞虱(Laodelphax striatellus, Fallen)对部分转基因株系进行抗病毒鉴定,结果表明共有22个转基因水稻株系表现为高抗。进一步通过实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)分析表明所设计构建的人工miRNA高效大量表达。

关键词：水稻条纹病毒人工miRNA 转基因水稻抗病鉴定

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小西葫芦黄花叶病毒遗传多样性及致病力分析

小西葫芦黄花叶病毒遗传多样性及致病力分析

作者：王健山东农业大学

学位级别：硕士

小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus),是侵染葫芦科作物的主要病毒之一,可引起严重花叶、皱缩、果实畸形等症状,给葫芦科作物的生产造成极为严重的损失。建立准确的ZYMV检测体系和种植... 详细信息

小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus),是侵染葫芦科作物的主要病毒之一,可引起严重花叶、皱缩、果实畸形等症状,给葫芦科作物的生产造成极为严重的损失。建立准确的ZYMV检测体系和种植抗病品种是目前最为有效的防治措施。本研究制备了ZYMV外壳蛋白特异性抗血清,分析了危害山东葫芦科作物的ZYMV分离物的分类地位,构建了ZYMV侵染性克隆并研究了HCpro WxxxG基序在ZYMV致病过程中的作用,筛选了抗ZYMV的葫芦科作物品种,为有效防治ZYMV提供了基础。主要研究结果如下:(1)ZYMV CP特异性多克隆抗体的制备及应用。利用ZYMV特异性引物扩增CP基因编码序列,并克隆到原核表达载体pEHISTEV上。通过对宿主菌种类、IPTG诱导时间及浓度等因素进行筛选,获得最佳表达条件:Rosetta菌株,利用0.2 mmol·L IPTG诱导4 h。通过原核表达方法成功诱导表达出37 kDa左右的融合蛋白,将融合蛋白免疫健康新西兰长耳兔获得效价为1:32768的ZYMV CP特异性抗血清。与RT-PCR对比发现,制备的抗血清具有高度的准确性。利用该抗血清对西葫芦(绿源冬宝)和甜瓜(火银瓜)种子检测发现,种子带毒率分别为39.8%、15.1%,幼苗带毒率为2.56%和5.13%,对种子进行热处理可有效降低幼苗带毒率。(2)ZYMV两个山东分离物(CN:Cm:17、CN:Lc:17)全基因组序列的克隆及分析。在山东泰安采集到的有明显黄花叶症状的丝瓜和南瓜样品中检测到ZYMV,利用RT-PCR和5′末端序列扩增技术(RACE)获得了两个分离物的全基因组序列,分别命名为CN:Cm:17(南瓜分离物)和CN:Lc:17(丝瓜分离物)。序列分析结果表明,CN:Cm:17和CN:Lc:17基因组除Poly(A)尾巴外分别含有9,593和9,591个核苷酸(Nucleotides,nt),编码一个含3 080氨基酸的多聚蛋白。在多聚蛋白氨基酸水平上,CN:Cm:17与CN:Lc:17一致率为96.7%,与NCBI数据库中48个ZYMV分离物一致率分别为90.3%7.8%、90.5%8.4%。重组分析发现,CN:Lc:17分离物内具有显著重组事件,为KR:KR-PA:05和CN:Cm:17两个分离物的重组体。基于多聚蛋白编码序列的系统进化聚类结果显示分组与分离物的地理起源存在密切相关性,中国分离物分别聚集在A-V和A-VI亚组。(3)ZYMV CN:Cm:17分离物全长侵染性cDNA克隆的构建。利用同源重组的方法将CN:Cm:17全基因组克隆到含35S启动子的农杆菌双元载体pCam35S上,命名为pCamZYMV。将含有pCamZYMV的利用农杆菌浸润接种到西葫芦(Cucurbita pepo)、南瓜(Cucurbita moschata)等寄主上,接种14天后表现与野生型ZYMV类似症状,侵染效率为100%,表明构建的pCamZYMV具有较好的侵染性。将带绿色荧光蛋白gfp基因序列插入到pCamZYMV侵染性克隆NIb和CP之间,获得pCamZYMV-GFP。将其通过农杆菌浸润方法接种西葫芦、南瓜,5天后接种叶上可观察到绿色荧光,14天后系统叶片表现花叶症状,并在发病部位观察到明显绿色荧光。(4)WxxxG保守基序影响ZYMV致病力并参与HCpro抑制RNA沉默功能。在pCamZYMV-GFP侵染性克隆的HCpro编码区域WxxxG基序保守位点引入突变,获得单突变体W207A、G211A及双突变体WG。将突变体接种至西葫芦品种绿源冬宝发现,突变W位点或WG位点均减轻症状,显著降低病毒积累水平;突变G位点对病毒症状和积累水平无明显影响。RNA沉默试验分析发现,突变W位点对HCpro抑制RNA沉默能力无明显影响,但突变G位点能够显著降低ZYMV HCpro抑制RNA沉默能力。(5)40个葫芦科品种对ZYMV的抗性鉴定。结果发现,精选唐山秋瓜和青丰长瓠子瓜为高抗品种;雪峰小玉五号和金福为抗病品种;津研四号、中农28号、耐热王中王、泰国中绿丝瓜、蟋蟀牌肉多多、高抗巨龙、盈克二号、浙蒲6号和佳丽蒲瓜9个为中抗品种。

关键词：小西葫芦黄花叶病毒抗血清制备遗传多样性 HCpro 抗病鉴定

甘蓝枯萎病病原菌研究及抗病种质群体结构分析

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甘蓝枯萎病病原菌研究及抗病种质群体结构分析

作者：田仁鹏甘肃农业大学

学位级别：硕士

甘蓝枯萎病是近年在北京、山西、河北等地发现的一种土传病害。最近在甘蓝产区呈蔓延之势,生产中由于缺乏有效的控制措施,因此了解甘蓝枯萎病致病菌,筛选甘蓝抗病品种是目前育种工作当务之急。本实验从甘蓝枯萎病发生的严重的北京和山... 详细信息

甘蓝枯萎病是近年在北京、山西、河北等地发现的一种土传病害。最近在甘蓝产区呈蔓延之势,生产中由于缺乏有效的控制措施,因此了解甘蓝枯萎病致病菌,筛选甘蓝抗病品种是目前育种工作当务之急。本实验从甘蓝枯萎病发生的严重的北京和山西两地田间采集枯萎病病株,在实验室分离纯化出和鉴定了引起枯萎病的病原菌GLHW1和GLHWY以及非致病菌GLHW2和GLHW4,通过真菌的形态学和两种致病镰刀菌的分子克隆和AFLP分析,结果表明这两种镰刀菌相似率很高,但在致病性和形态学以及分子水平上都有一定差异。通过不同接种方法、浓度和时期的实验最终制定出甘蓝枯萎病抗性鉴定接种的推荐方法为:接种时期为苗龄3叶1心期,采用浸根法接种,在每毫升1×106的孢子悬浮液中浸泡15min。如果为了省工省力,采用灌根法,则必须人为制造根系伤口,以加速病原菌侵入,同时应采用1×107或更大的接种浓度以保证足够的病原菌数量。北京蔬菜研究中心87份甘蓝育种材料接种GLHW1进行抗枯萎病鉴定,研究发现,具有高抗枯萎病特性的育种材料有36份,高感材料27份,而处于抗、中抗和中感反应的一共只有24份,其结果未表现出明显的数量型性状的抗性反应。通过农艺性状和抗病鉴定进行分析,发现农艺性状的差异与甘蓝枯萎病并不存在显著的关联性。通过对抗感组合的F2代接种,后代抗感分离比率3:1,初步结果表明甘蓝枯萎病抗性为显性单基因遗传。关联分析是一种新的基因定位方法,不需要培育群体而提高了速度,并且高分辨率也是其最大的优势。通过对67份甘蓝核心种质资源群体进行关联分析获得7个与甘蓝枯萎病抗性关联的AFLP分子标记,其中E36M54-4、E36M54-15这2个分子标记与抗性关联程度达到极显著水平(P<0.01)。

关键词：甘蓝枯萎病镰刀菌抗病鉴定 AFLP 群体结构关联分析

玉米自交系青枯病抗性鉴定及F_1与亲本遗传关系的初步探讨

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黑龙江农业科学 1994年第1期 16-18页

作者：张坪张瑞英钟占贵苏俊李春霞龚世琛宋锡章黑龙江省农科院玉米研究中心

玉米青枯病乃世界性病害。在我国一般发病率均在１０％左右，重发区可达３０％以上。我省近几年青枯病发病呈上升趋势，已严重影响玉米产量。本试验从１９８９～１９９２年四年间采用了人工伤根法，对自育的１３８个龙抗号玉米自交系和... 详细信息

玉米青枯病乃世界性病害。在我国一般发病率均在１０％左右，重发区可达３０％以上。我省近几年青枯病发病呈上升趋势，已严重影响玉米产量。本试验从１９８９～１９９２年四年间采用了人工伤根法，对自育的１３８个龙抗号玉米自交系和外引的８９份稳定自交系，进行了接菌鉴定，从中鉴选出不感病品系１９个；高抗病系１７个，同时还通过一批杂交种Ｆ_１及其双亲抗、感病性的鉴定分析，初步探索出杂交种Ｆ_１的感抗青枯病性介于双亲之间且多倾向母本。

关键词：青枯病自交系抗病鉴定玉米遗传

云南省区试玉米新品种对4种叶斑病的抗性鉴定

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种子 2009年第3期28卷 64-67页

作者：马荣吴景芝吴毅歆何月秋云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201

对2006年和2007年63份云南省区域试验新品种进行了人工接种鉴定。结果表明,海97-4、YA 06821、YA 74824、SB2421、旭1446和路单7号6份抗灰斑病,宁玉507、YA7482、兴黄单892、ND128、黔玉3号、金银818、TY10333、云优78、珍油玉8号9个品... 详细信息

对2006年和2007年63份云南省区域试验新品种进行了人工接种鉴定。结果表明,海97-4、YA 06821、YA 74824、SB2421、旭1446和路单7号6份抗灰斑病,宁玉507、YA7482、兴黄单892、ND128、黔玉3号、金银818、TY10333、云优78、珍油玉8号9个品种中抗灰斑病,中抗和抗病共15份,占23.81%。这些新品种对大斑病和小斑病的抗性突出,高抗到中抗的均有61份,占96.83%;对弯孢菌叶斑病抗病性较差,仅HK5824、红Q-2、金锋1号和蠡试2403这4份抗病,珍油玉7号等27份中抗,抗病和中抗病累计31份,占49.21%;同时抵抗4种病害的仅YA7482、ND128、海97-4、金银818、兴黄单892、云优78和珍油玉8号7个品种,占10.00%。

关键词：玉米抗病鉴定灰斑病大斑病小斑病弯孢菌叶斑病

甘蓝型油菜抗（耐）菌核病恢复系7-5、7-6的选育

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甘蓝型油菜抗（耐）菌核病恢复系7-5、7-6的选育

作者：姜小燕华中农业大学

学位级别：硕士

油菜在我国是最为重要的油料作物和优质的蛋白饲料作物之一,其种植面积和总产量均占世界的1/3,其主要种植区域在长江流域,约占世界种植面积的1/4,因此我国是世界上最大的油菜产区(涂金星,2007)。菌核病是我国油菜生产的三大病害之首,成... 详细信息

油菜在我国是最为重要的油料作物和优质的蛋白饲料作物之一,其种植面积和总产量均占世界的1/3,其主要种植区域在长江流域,约占世界种植面积的1/4,因此我国是世界上最大的油菜产区(涂金星,2007)。菌核病是我国油菜生产的三大病害之首,成为制约油菜产量和品质提高的主要因素,一般发病率为10%-80%,产量损失为5%-30%。虽然在病害预报、栽培方式的改进和药剂防治等方面取得了很大的进展,但是尚未从根本上解决菌核病对油菜危害严重这一局面。因此,传统育种与现代生物技术相结合的方法选育抗(耐)菌核病油菜品种,成为人们越来越关注的热点。本研究以回交育种和分子标记辅助选择相结合的方法改良甘蓝型油菜恢复系7-5、7-6的菌核病抗性。试验中选用L135、中双9号作为抗菌核病的供体亲本,分别与受体亲本7-5、7-6杂交,杂交后代再与对应的轮回亲本7-5、7-6连续回交两次,将最后筛选的抗病材料套袋自交,自交后代可作为新的抗菌核病的恢复系。主要结果如下：1.将获得的三个F1代(即7-5×L135、7-5×中双9号、7-6×L135)分别与相应的轮回亲本回交,获得三个BC1F1群体(BC1F1-A、BC1F1-B、BC1F1-C)。通过利用苗期离体叶片菌丝块接种法对三个BC1F1群体进行抗病性鉴定,在BC1F1-A、BC1F1-B、BC1F1-C群体中分别获得71、53、80个病斑小于供体亲本的株系;通过利用茎秆包埋菌丝块方法在成株期对BC1F1-A、BC1F1-B群体进行抗病鉴定,分别获得34、21个病斑小于供体亲本的株系。2.利用AFLP标记技术分别对三个BC1F1群体中苗期病斑小于供体亲本的单株进行背景选择,得到遗传背景与轮回亲本最相近的单株数分别为4、3、5。3.将获得的优良单株分别与其对应的轮回亲本回交获得三个BC2F1群体(BC2F1-A、BC2F1-B、BC2F1-C)。利用SSR分子标记分别对三个BC2F1群体进行背景选择,每个群体均得到2个单株遗传背景与轮回亲本最相近。3.将BC1F1-A、BC1F1-B和BC1F1-C中获得的2个优良单株自交获得BC2F2-A、BC2F2-B和BC2F2-C三个群体。通过对三个BC2F2群体进行苗期和成株期抗病鉴定,综合两次鉴定结果和田间植株长势,分别从BC2F2-A、BC2F2-B、BC2F2-C群体筛选出5、4、7个单株作为新的恢复系耐菌核病种质资源。4.苗期和成株期抗病鉴定结果显示油菜在这两个时期抗病性相关性很低,但是成株期3d、5d、7d测得菌斑长度两两之间的相关性极显著。

关键词：甘蓝型油菜恢复系菌核病抗病鉴定背景选择相关性分析

321份小麦种质条锈病抗性评价及Yr基因分子标记检测

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321份小麦种质条锈病抗性评价及Yr基因分子标记检测

作者：习玲四川农业大学

学位级别：硕士

评价四川、云南普通小麦种质资源对中国当前流行的条锈菌生理小种的抗性水平,分析其可能携带的抗条锈病基因,为西南麦区小麦抗病育种、抗病品种的合理布局和抗性基因资源的有效利用提供科学依据。本研究对321份云南小麦地方品种和四川... 详细信息

评价四川、云南普通小麦种质资源对中国当前流行的条锈菌生理小种的抗性水平,分析其可能携带的抗条锈病基因,为西南麦区小麦抗病育种、抗病品种的合理布局和抗性基因资源的有效利用提供科学依据。本研究对321份云南小麦地方品种和四川小麦育成品种(系)进行条锈病抗性鉴定及抗条锈病基因分子标记检测,主要获得以下结果:1、利用当前中国小麦生产上毒性强、流行频率高的条锈菌生理小种CYR32和CYR34对243份云南小麦地方品种进行苗期抗病性鉴定,成株期使用CYR32、CYR33、CYR34和贵农致病类群等混合生理小种进行抗性鉴定,并利用小麦生产上重要抗条锈病基因Yr5、Yr10、Yr15、Yr18、Yr26、Yr28、Yr29、Yr30、Yr36、Yr39、Yr41、Yr48、Yr65、Yr67、Yr80和Yr81的紧密连锁标记或功能标记对供试材料进行分子检测。结果显示,在243份小麦材料中,18份种质对CYR32表现苗期抗性,32份种质对CYR34表现苗期抗性,对CYR32和CYR34均表现苗期抗病的有8份,占3.29%。结合苗期和成株期抗性鉴定,174份地方种质表现为稳定的成株期抗性,占71.6%,其中105份种质高抗条锈病。分子检测结果显示,携带Yr10、Yr18、Yr29、Yr30、Yr65和Yr81抗性基因的材料分别有48、44、4、6、4和101份。同时携带2、3和4个抗性基因的材料各有32、3和1份。所有供试材料均未检测到Yr5、Yr15、Yr26、Yr28、Yr36、Yr39、Yr41、Yr48、Yr67和Yr80。此外,77份地方种质未检测到以上所有抗性基因,其中60份具有成株期抗性,可能携带其他已知或新的条锈病抗性基因,可作为进一步挖掘抗条锈病新基因或QTL的亲本来源。2、利用当前小麦条锈菌优势小种CYR32和CYR34对2016年以后78份四川小麦育成品种(系)进行苗期鉴定,CYR32、CYR33、CYR34,以及贵22-14、贵农致病类群等混合菌进行成株期人工接种鉴定,并结合19个抗条锈病QTL和基因***-4BL、Yr5、Yr10、Yr15、Yr17、Yr18、Yr26、Yr28、Yr29、Yr30、Yr36、Yr39、Yr41、Yr48、Yr65、Yr67、Yr78、Yr80和Yr81的分子标记对供试材料进行抗条锈病基因检测。结果表明,在78份供试材料的苗期鉴定中,对CYR32表现出抗性的有60份,占76.92%;对CYR34表现出抗性的有40份,占51.28%;同时对CYR32和CYR34表现抗性的有36份,占46.15%。78份小麦品种(系)在成株期均表现抗条锈病,其中绵麦835、蜀麦1743、蜀麦1829和蜀麦1868表现为免疫。苗期和成株期抗病性鉴定结果表明,成株期抗性材料有42份,占53.85%;全生育期抗性材料有36份,占46.15%。分子检测结果表明,可能携带***-4BL、Yr15、Yr17、Yr18、Yr26、Yr28、Yr29、Yr30、Yr39、Yr41、Yr65、Yr67、Yr78、Yr80和Yr81的材料分别有5、5、45、2、30、5、30、39、3、2、22、8、23、6和24份。同时携带2-6个抗条锈病基因的聚合材料分别有24、22、11、14和3份,占94.87%。所有供试品种(系)均未检测到Yr5、Yr10、Yr36和Yr48,仅西科麦18未检测到上述19个抗条锈病基因,可能携带其他已知或新的条锈病抗性基因。本研究鉴定了78份四川小麦育成品种(系)对条锈病抗性水平整体较好,明确了其携带的抗条锈病基因,为利用其培育持久抗性小麦品种提供了科学依据。

关键词：小麦地方品种育成品种(系) 条锈病抗病鉴定分子标记 Yr基因

苋色藜NDR1基因在转基因水稻中的表达及功能分析

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苋色藜NDR1基因在转基因水稻中的表达及功能分析

作者：战园中国农业科学院

学位级别：硕士

NDR1(non-race-specific disease resistance)基因在植物的防御反应中发挥重要作用,介导植物的广谱抗病特性。本实验室以特色抗病植物苋色藜为材料,鉴定并克隆与该基因同源的两个基因并分别命名为Ca NDR1a和Ca NDR1b,转Ca NDR1a、Ca ND... 详细信息

NDR1(non-race-specific disease resistance)基因在植物的防御反应中发挥重要作用,介导植物的广谱抗病特性。本实验室以特色抗病植物苋色藜为材料,鉴定并克隆与该基因同源的两个基因并分别命名为Ca NDR1a和Ca NDR1b,转Ca NDR1a、Ca NDR1b基因的转基因烟草对植物病毒具有一定的抗性。在此基础上,利用农杆菌介导的遗传转化,将Ca NDR1a与Ca NDR1b基因分别转入水稻材料日本晴中,获得转基因株系并进行室内和田间白叶枯抗性鉴定。试验结果总结如下:1)分别构建含有Ca NDR1a、Ca NDR1b基因的植物表达载体。经农杆菌介导的遗传转化获得转NDR1基因水稻株系,PCR及southern杂交证明Ca NDR1a、Ca NDR1b基因已整合到水稻基因组中。2)设计白叶枯病菌接种浓度梯度进行预实验,确定合适的白叶枯病菌接种浓度。田间培养T0代水稻,收集种子并再次种植,获得T1代水稻。随机选取部分T1代转基因水稻株系进行抗病鉴定,记录接种后3天、5天、10天的叶片病斑长度,统计数据。从中挑选出抗病效果较好的株系重复实验。结果表明:转Ca NDR1a、Ca NDR1b基因水稻对白叶枯病有一定的抗性,可延迟发病。3)利用实时荧光定量PCR技术检测各转基因水稻株系Ca NDR1基因的表达量,并用日本晴做对照。结合抗病鉴定结果分析数据,表明转基因水稻植株中外源基因的表达量明显高于对照株系,抗病性较好株系Ca NDR1基因的表达量并不高。4)将部分转基因水稻株系及对照品系田间种植,进行相应的农艺性状调查。结果表明:多数转基因植株表现为植株较矮。但在结实率、千粒重等农艺性状与对照组并无显著差异。根据统计结果来看,我们可以筛选出有价值的转基因株系,具有较好的抗病性,同时也具有良好的农艺性状表现与适应性。

关键词： NDR1 转基因水稻白叶枯病抗病鉴定