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荔枝核提取物体外抗病毒活性及其机制研究

中国药科大学学报 2008年第5期39卷 437-441页

作者：王辉陶小红王洋黄雪松郭国庆沈伟哉暨南大学医学院广州510632 暨南大学食品科学与工程系广州510632

目的:研究荔枝核提取物(LSE)的体外抗病毒活性,并初步研究其抗病毒的作用机制。方法:采用细胞病变效应(CPE)减少法和MTT法检测LSE对柯萨奇B3病毒(CoxB3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的体外抗病毒活性,... 详细信息

目的:研究荔枝核提取物(LSE)的体外抗病毒活性,并初步研究其抗病毒的作用机制。方法:采用细胞病变效应(CPE)减少法和MTT法检测LSE对柯萨奇B3病毒(CoxB3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的体外抗病毒活性,并通过观察直接杀病毒作用、对宿主细胞的保护作用、抑制病毒吸附作用以及在病毒感染后不同时间加入实验,对LSE抑制HSV-1的作用机制进行探讨。结果:LSE有一定的细胞毒性,它不能抑制CoxB3在宿主细胞内的增殖,但对RSV、HSV-1和HSV-2表现出明显的浓度依赖性抗病毒活性,其IC50值分别为32.3,27.9和20.4μg/mL。该提取物预培养Vero细胞后不能保护细胞免受HSV-1感染,但它对HSV-1有直接的灭活作用。LSE可影响HSV-1对Vero细胞的吸附,当浓度为31.3μg/mL时对病毒吸附的抑制率为51。LSE对HSV-1在细胞内的增殖表现出很强的抑制活性。结论:LSE具有较强的体外抗RSV和HSV活性,它对HSV的抑制作用可能通过多种方式和途径实现。

关键词：荔枝核提取物呼吸道合胞病毒单纯疱疹病毒抗病毒活性阿昔洛韦

鸡突变型和未突变型Mx蛋白体外抗病毒活性研究

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中国农业科学 2012年第5期45卷 990-998页

作者：傅德智孙敏郑蒙蒙高波张亚妮窦套存王克华李碧春孙怀昌扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室中国农业科学院家禽研究所扬州大学兽医学院

【目的】研究鸡Mx蛋白第631位氨基酸变异与抗病性的相关性。【方法】用已经构建成功的中国狼山鸡Mx蛋白基因突变型pcDNA3.0-MMx和未突变型pcDNA3.0-Mx真核表达载体分别转染鸡成纤维(CEF)细胞和鼠成纤维(NIH-3T3)细胞;利用RT-PCR检测突变... 详细信息

【目的】研究鸡Mx蛋白第631位氨基酸变异与抗病性的相关性。【方法】用已经构建成功的中国狼山鸡Mx蛋白基因突变型pcDNA3.0-MMx和未突变型pcDNA3.0-Mx真核表达载体分别转染鸡成纤维(CEF)细胞和鼠成纤维(NIH-3T3)细胞;利用RT-PCR检测突变型MMx基因和未突变型Mx基因的表达,微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)和水泡性口炎病毒(VSV)的效果。【结果】诱变鸡Mx基因的表达重组蛋白可保护CEF细胞在孵育48 h内免受NDV的感染;转染突变型pcDNA3.0-MMx真核表达载体的NIH-3T3细胞在孵育60 h内亦未受到VSV的浸染;而转染未突变型pcDNA3.0-Mx真核表达载体的CEF和NIH-3T3细胞在24 h内均发生了病变。【结论】体外重组突变的Mx蛋白在单细胞水平上具有延缓NDV和VSV感染的能力。

关键词： Mx蛋白抗病毒活性抗NDV 抗VSV 狼山鸡

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黄花倒水莲化学成分及其抗病毒活性研究

中草药 2009年第3期40卷 345-348页

作者：李药兰戴杰黄伟欢岑颖洲张晓琦叶文才暨南大学药学院中药及天然药物研究所广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院化学系广东广州510632

目的研究黄花倒水莲的化学成分及其体外抗病毒活性。方法采用柱色谱技术分离黄花倒水莲乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位的化学成分;根据光谱数据鉴定分离所得化合物的结构;采用细胞病变抑制法(CPE re-duction assay)测定化合物的体外抗病... 详细信息

目的研究黄花倒水莲的化学成分及其体外抗病毒活性。方法采用柱色谱技术分离黄花倒水莲乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位的化学成分;根据光谱数据鉴定分离所得化合物的结构;采用细胞病变抑制法(CPE re-duction assay)测定化合物的体外抗病毒活性。结果分离并鉴定了10个化合物:棕榈酸(Ⅰ)、1,3-二羟基-2-甲基酮(Ⅱ)2、4乙基-豆甾-7,(E)-22-二烯-3-醇(Ⅲ)、对羟基苯甲醛(Ⅳ)、1,3-二羟基酮(Ⅴ)、1,3-二羟基-2-甲氧基酮(Ⅵ)、1-甲氧基-2,3-亚甲二氧基酮(Ⅶ)、1,7-二羟基-2,3-亚甲二氧基酮(Ⅷ)、对羟基苯甲酸(Ⅸ)和原儿茶酸甲酯(Ⅹ)。其中化合物Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ在体外有一定的抗单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)和柯撒奇B3型病毒(Cox B3)的活性。结论化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅹ为首次从该植物中分离得到,化合物Ⅱ和Ⅹ为首次从该属植物中分离得到,化合物Ⅱ为新天然产物。首次研究该植物化学成分的抗病毒活性,化合物Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ均为1,3-二羟基取代酮。

关键词：黄花倒水莲 1,3-二羟基取代讪酮抗病毒活性

利用小鼠脾细胞上清抗病毒活性建立新型抑制性ODN的体外筛选方法

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吉林大学学报（医学版） 2009年第5期35卷 785-789页

作者：杨光孙然孙陆果万敏王莉吴秀丽胡大利王丽颖于永利吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室吉林长春130021

目的：通过检测小鼠脾细胞上清抗病毒活性,建立一种体外筛选小鼠敏感的新型抑制性寡聚脱氧核苷酸（ODN）的方法,为后续小鼠体内实验提供抑制性ODN的体外筛选方法。方法：将小鼠脾细胞分为对照组、CpG 2216刺激组,收集不同浓度（0、0.25... 详细信息

目的：通过检测小鼠脾细胞上清抗病毒活性,建立一种体外筛选小鼠敏感的新型抑制性寡聚脱氧核苷酸（ODN）的方法,为后续小鼠体内实验提供抑制性ODN的体外筛选方法。方法：将小鼠脾细胞分为对照组、CpG 2216刺激组,收集不同浓度（0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00及32.00 mg.L-1）的CpG 2216刺激上清及CpG 2216作用小鼠脾细胞不同时间（3、6、12、24、48、72及96 h）的刺激上清,通过VSV病毒保护实验检测的A578评价各组上清的抗病毒活性,确定CpG 2216的最佳作用浓度、作用时间及刺激上清稀释度;再将小鼠脾细胞分为对照组、CpG 2216刺激组、CpG 2216＋抑制性ODN（A151）组,同上确定A151的最佳作用浓度;将小鼠脾细胞分为对照组、CpG 2216刺激组、CpG 2216＋抑制性ODN（MAT0106）组,应用上述优化的实验条件如各ODN剂量、作用时间等处理细胞后,收集刺激上清,采用VSV病毒保护实验,观察各抑制性ODN的抑制作用,以初步判定此方法的可行性。结果：筛选方法确定为：浓度为5×10^6·mL^-1的小鼠脾细胞铺于96孔圆底细胞培养板,加入CpG 2216至终浓度2 mg·L^-1和/或抑制性ODN至终浓度16 mg·L^-1,孵箱中培养24 h后收集上清,1∶4稀释上清后加入已贴壁的L929细胞板内,共孵育18 h后弃上清,加入VSV病毒液继续培养48 h。弃净上清后结晶紫染色、脱色并检测A578。此种筛选方法可以区别本室自行设计的抑制性ODN之间的抑制活性。结论：成功建立了抑制性ODN抑制小鼠脾细胞抗病毒活性的筛选方法,抑制性ODN的小鼠体外筛选方法的建立,为后续抑制性ODN在小鼠体内的生物学活性观察提供了体外筛选平台。

关键词：抑制性寡聚脱氧核苷酸 CpGODN 小鼠近交BALBC 脾细胞抗病毒活性

重组鸡γ-干扰素在家蚕中的表达及抗病毒活性

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蚕业科学 2018年第6期44卷 898-904页

作者：赵泽赵璐璐刘兴健王朋李轶女张志芳易咏竹江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212018 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)是一类具有免疫调节及抗病毒活性的细胞因子。利用家蚕杆状病毒表达系统表达具有高生物活性的鸡γ-干扰素。首先,对ChIFN-γ基因序列进行优化与合成,再将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393多克隆位点中,与缺少orf1... 详细信息

鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)是一类具有免疫调节及抗病毒活性的细胞因子。利用家蚕杆状病毒表达系统表达具有高生物活性的鸡γ-干扰素。首先,对ChIFN-γ基因序列进行优化与合成,再将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393多克隆位点中,与缺少orf1629基因的家蚕杆状病毒reBmBac共转染BmN细胞获得重组病毒reBm-ChIFN-γ。将reBm-ChIFN-γ注射感染家蚕5龄幼虫,检测感染后96~120 h之间发病蚕体的血淋巴。PCR扩增结果显示成功构建了重组杆状病毒reBm-ChIFN-γ,Western blot检测重组杆状病毒在家蚕体内表达了目的干扰素,微量细胞病变抑制法检测表达产物具有明显的抗病毒活性,效价约为(3.24±0.32)×10^6 U/mL。试验结果表明,利用家蚕杆状病毒表达系统成功地表达出具有较高抗病毒活性的鸡γ-干扰素,为鸡γ-干扰素相关生物制剂的研发奠定了基础。

关键词：鸡γ-干扰素杆状病毒表达系统家蚕抗病毒活性

水牛干扰素α的可溶性原核表达、纯化及其抗病毒活性

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中国生物制品学杂志 2017年第3期30卷 272-277页

作者：李树启赵俊王利利俞海洋甘霖王明丽安徽九川生物科技有限公司安徽芜湖241000 安徽医科大学微生物学教研室安徽合肥230032

目的在E.coli中高效表达可溶性水牛干扰素α(recombinant bovine interferon alpha,r Bo IFNα),纯化后检测其抗病毒活性。方法采用RT-PCR方法从水牛肝脏总RNA中扩增IFNα基因,插入原核表达载体p ET-32a中,构建重组表达质粒p ET-32a-IFN... 详细信息

目的在E.coli中高效表达可溶性水牛干扰素α(recombinant bovine interferon alpha,r Bo IFNα),纯化后检测其抗病毒活性。方法采用RT-PCR方法从水牛肝脏总RNA中扩增IFNα基因,插入原核表达载体p ET-32a中,构建重组表达质粒p ET-32a-IFNα,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测后,使用His Trap^(TM) HP镍离子亲和层析柱进行纯化,并采用细胞病变抑法,在水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)/MDBK细胞滴定系统上检测其抗病毒活性。结果核酸测序结果显示,r Bo IFNα基因全长498 bp,与Gen Bank报道的牛IFNαC亚型基因核苷酸序列同源性为100%;表达的r Bo IFNα蛋白主要存在于破碎菌体的上清中,表达量约占菌体总蛋白的63.8%;纯化的r Bo IFNα纯度高达98.52%,能与牛IFNα多克隆抗体特异性结合,比活性为(3.6±0.2 5)×10~6 U/mg。结论成功在E.coli中高效表达了可溶性r Bo IFNα蛋白,纯化的蛋白具有较强的抗病毒活性,为其临床应用奠定了基础。

关键词：牛干扰素α 原核细胞基因表达纯化抗病毒活性

猫干扰素α基因的克隆及其表达产物的抗病毒活性分析

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 186-190页

作者：李华汉武娇范文禄姜艳平崔文李一经徐义刚东北农业大学动物医学学院/黑龙江省动物疾病防控技术与制剂创制重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为制备重组猫IFN-α并检测其抗病毒活性,本研究采用水泡性口炎病毒(VSV)感染结合poly I:C刺激实验猫后,提取猫脾淋巴细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板经RT-PCR方法扩增获得了567 bp的猫IFN-α基因,测序后进行生物信息学分析。结果显... 详细信息

为制备重组猫IFN-α并检测其抗病毒活性,本研究采用水泡性口炎病毒(VSV)感染结合poly I:C刺激实验猫后,提取猫脾淋巴细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板经RT-PCR方法扩增获得了567 bp的猫IFN-α基因,测序后进行生物信息学分析。结果显示,猫IFN-α有21个潜在磷酸化位点、1个N-糖基化位点和8个O-糖基化位点,二级结构以α-螺旋为主。将该基因经BamH I/Kpn I酶切处理后克隆至pCold-TF载体,构建重组表达质粒pCold-α,将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞后获得了表达猫IFN-α的重组大肠杆菌pCold-α/BL21。重组菌经IPTG诱导后SDS-PAGE检测结果显示重组猫IFN-α蛋白获得高效表达,采用His标签蛋白纯化柱纯化后得到纯化蛋白浓度为340 mg/L。以VSV和猫冠状病毒(FCoV)为模式病毒,采用微量细胞病变抑制法检测了重组猫IFN-α的抗病毒效果,结果显示,其抗VSV活性为5.91×10^(5) IU/mg,抗FCoV活性可达6.25×10^(6) IU/mg,具有良好的抗病毒活性。本研究为猫干扰素的开发应用奠定了物质基础。

关键词：猫干扰素α 基因克隆可溶性表达抗病毒活性

利用家蚕杆状病毒表达系统表达人γ干扰素及产物的抗病毒活性检测

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蚕业科学 2021年第3期47卷 240-246页

作者：曾振李家磊刘兴健唐平李轶女张志芳沈兴家易咏竹江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室江苏镇江212100 中国农业科学院蚕业研究所农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室江苏镇江212100 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

干扰素-γ(IFN-γ)是免疫反应中重要的免疫调节因子,对多种免疫细胞具有激活作用。利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕中高效表达具有活性的人γ干扰素(hIFN-γ),首先根据家蚕密码子偏好性对hIFN-γ的编码基因进行优化合成,将优化合成后的... 详细信息

干扰素-γ(IFN-γ)是免疫反应中重要的免疫调节因子,对多种免疫细胞具有激活作用。利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕中高效表达具有活性的人γ干扰素(hIFN-γ),首先根据家蚕密码子偏好性对hIFN-γ的编码基因进行优化合成,将优化合成后的序列克隆到杆状病毒转移载体pBR中,然后与orf1629基因缺失的失活拯救型杆状病毒BmBacmid共转染BmN细胞,获得重组病毒reBmBac-hIFN-γ,最后利用获得的重组病毒感染家蚕并收获表达产物。采用微量细胞病变抑制法,在Vero/VSV-GFP系统中检测到重组hIFN-γ的效价达到(3.69±2.02)×106 IU/mL。此外,重组hIFN-γ可以抑制猪蓝耳病病毒(PRRSV)在Marc-145细胞中的增殖。上述结果为利用家蚕生物反应器高效生产具有活性的人γ干扰素奠定了试验基础。

关键词：人γ扰素杆状病毒表达系统家蚕抗病毒活性

菲并吲哚里西啶生物碱及其盐类衍生物的抗病毒活性和构效关系研究

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中国科学：化学 2016年第11期46卷 1210-1218页

作者：吴萌韩贵芳刘玉秀汪清民元素有机化学国家重点实验室南开大学元素有机化学研究所天津300071 化学化工协同创新中心(天津) 天津300071

本文研究了菲并吲哚里西啶生物碱1～17和（S）-6-O-脱甲基安托芬的盐类衍生物18～31对烟草花叶病毒的抗病毒活性和构效关系.发现其中部分化合物表现出很高的体内和体外抗病毒活性,尤其是（R）-6-O-脱甲基安托芬（14）和（S）-6-O-脱甲... 详细信息

本文研究了菲并吲哚里西啶生物碱1～17和（S）-6-O-脱甲基安托芬的盐类衍生物18～31对烟草花叶病毒的抗病毒活性和构效关系.发现其中部分化合物表现出很高的体内和体外抗病毒活性,尤其是（R）-6-O-脱甲基安托芬（14）和（S）-6-O-脱甲基安托芬氢碘酸盐（18）表现出了比商品化抗病毒剂宁南霉素更高的抗病毒活性,可以作为潜在的抗植物病毒剂.

关键词：菲并吲哚里西啶生物碱盐类衍生物抗病毒活性烟草花叶病毒安托芬 6-O-脱甲基安托芬