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2014-2020年间中国鸡源H9N2亚型禽流感病毒抗原漂移位点的筛选及验证

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2014-2020年间中国鸡源H9N2亚型禽流感病毒抗原漂移位点的筛选及...

作者：罗钰雯四川农业大学

学位级别：硕士

禽流感(Avian influenza,AI)是一种常见的人兽共患病,在宿主感染禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)时,会引起身体各个器官的病变,尤其是呼吸道、消化道和生殖系统。低致病性禽流感病毒的感染一般不会表现出明显的病症,但因其易与... 详细信息

禽流感(Avian influenza,AI)是一种常见的人兽共患病,在宿主感染禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)时,会引起身体各个器官的病变,尤其是呼吸道、消化道和生殖系统。低致病性禽流感病毒的感染一般不会表现出明显的病症,但因其易与其他病原共同感染引发宿主致病,且易跨宿主传播,因此对公众健康和卫生安全构成了极大威胁。H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)已成为我国AIV的主要流行亚型。由于抗原漂移等原因使得现有疫苗无法起到免疫保护作用,从而导致免疫逃逸。为了明确近五年引发H9N2 AIV抗原漂移的关键位点,本研究首先对2014-2020年中国鸡源H9N2 AIV分离株HA基因进行了遗传进化分析,预选出抗原漂移位点;然后通过构建突变株,进行双向交叉血凝抑制实验和微量中和实验,对预选位点进行鉴定。研究结果对H9N2 AIV的进化和新疫苗制备具有重要的参考意义。本研究主要包含以下3个部分:1、中国地区2014-2020年鸡源H9N2 AIV HA基因抗原漂移位点的筛选本研究收集了2014-2020年我国鸡源H9N2 AIV分离株HA基因的序列,通过构建MCC进化树,并对各分支的氨基酸位点和正向选择位点进行统计。结果表明,序列均属于clade 15分支,并进化为4个亚群(Group 1-4),平均进化速率为1.04×10位点/年(95%HPD:9.30×10～1.15×10)。每个亚群均存在特异性氨基酸突变,且主要集中于87-201位氨基酸。此外,通过对近五年的分离株HA蛋白氨基酸位点突变率进行统计,显示145-201位氨基酸突变率较高。基于AIV的抗原位点主要位于HA1亚基的头部表面,结合高频突变位点,本研究共预选出6个抗原漂移位点(164、168、171、198、200和201)进行后期验证,其中选择性压力分析显示,168为强正向选择位点。2、突变株的构建与生长特性分析本研究分别选用2014年分离株A/Chicken/China/Sichuan CQY/2014(H9N2)(简称CQY)和2020年分离株A/Chicken/China/Sichuan GH/2020(H9N2)(简称GH)进行实验。为验证HA基因以及预选片段对抗原漂移的影响,以CQY株为骨架,分别替换GH株的HA基因和164-201片段,拯救出r CQY-GHHA和r CQY-GHHA(CQY164-201)重组株。为进一步明确造成抗原漂移的关键位点,分别对预选位点进行点突变,拯救出7株单位点突变株(r CQY-R164Q,r CQY-D168N,r CQY-I171T,r CQY-T198A,r CQY-R200T,r CQY-D201G,r CQY-D201A)。生长特性检测结果显示,9株突变株在MDCK细胞中的TCID及SPF鸡胚中的EID均低于亲本毒株CQY,但无显著差异;亲本毒株与重组毒株在MDCK及鸡胚中的生长曲线无显著差异。结果表明重组片段和位点突变对病毒在MDCK和鸡胚中的增殖无明显影响。3、突变点对H9N2 AIV抗原性的影响疫苗对我国防治H9N2 AIV起到十分重要的作用,为了研究预选出的位点是否会引起H9N2 AIV的抗原漂移,本研究采用交叉血凝抑制实验、微量中和实验以及动物免疫保护试验进行验证。结果表明,2014年的CQY分离株与2020年的GH分离株已产生明显的抗原性差异,且HA蛋白的164-201位氨基酸片段对抗原性的影响较大。其中,D168N和D201G氨基酸位点的取代可以明显改变H9N2 AIV的抗原性,且D201G可以引发抗原漂移。综上所述,2014-2020年间我国H9N2 AIV鸡源分离株中的HA基因主要仍以clade13为主,并且主要分为4个亚群,每个亚群均有其特异的氨基酸位点。其中,位于HA蛋白头部的D168N和D201G突变可以明显改变H9N2 AIV的抗原性,且D201G可以引发抗原漂移。研究结果为H9N2 AIV进化预测和新疫苗研发提供重要参考。

关键词：禽流感遗传进化 H9N2 反向遗传抗原性抗原漂移

2010-2015年湖北省H3N2亚型流感病毒抗原漂移分析

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疾病监测 2017年第5期32卷 387-393页

作者：方斌余晓李翔叶国军刘琳琳湖北省疾病预防控制中心卫生检验检测研究所流感参比实验室湖北武汉430079

目的了解2010-2015年湖北省H3N2亚型流感病毒流行特征、基因进化和抗原漂移情况。方法通过2010-2015年湖北省H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性率划分流行高峰,分析各流行高峰病毒的阳性数、分离数和进化簇分布,结合抗原决定簇氨基酸突变位... 详细信息

目的了解2010-2015年湖北省H3N2亚型流感病毒流行特征、基因进化和抗原漂移情况。方法通过2010-2015年湖北省H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性率划分流行高峰,分析各流行高峰病毒的阳性数、分离数和进化簇分布,结合抗原决定簇氨基酸突变位点和三维建模数据,分析3C.2a簇病毒抗原决定簇氨基酸突变位点变化情况。结果 2010-2015年湖北省H3N2亚型流感病毒存在8个流行高峰,流行高峰会受到其他型别流感流行的影响,3C.2a簇病毒主要在第Ⅶ流行高峰后流行,与3C.3a簇病毒在HA蛋白3处抗原决定簇上存在7处不同氨基酸突变位点,3C.2a簇病毒159Y-160T位点和3C.3a簇病毒159S-160K位点在三维模拟结构图中差异明显。结论 2010-2015年湖北省H3N2亚型流感病毒进化簇不断进化,加强对近期3C.2a簇病毒的进化学监测和抗原漂移分析,有助于提高湖北省流感病原学和流行病学监测水平和能力。

关键词： H3N2亚型流感病毒 3C.2a簇病毒流行特征抗原漂移进化

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麻疹病毒基因变异与抗原漂移

江西医药 2002年第5期37卷 387-390页

作者：董华生张一江西医学院一附院感染科，南昌330006

麻疹曾经是一种严重危害儿童健康的传染病.麻疹疫苗前时代,流行有明显的季节性,集中在冬末春初,患者年龄大多在5岁以下,且临床症状典型.60年代初随着麻疹减毒活疫苗的问世,扩大免疫规化的开展,麻疹的发病率和死亡率已大幅度地下降.80年... 详细信息

麻疹曾经是一种严重危害儿童健康的传染病.麻疹疫苗前时代,流行有明显的季节性,集中在冬末春初,患者年龄大多在5岁以下,且临床症状典型.60年代初随着麻疹减毒活疫苗的问世,扩大免疫规化的开展,麻疹的发病率和死亡率已大幅度地下降.80年代以来,一些国家发现,从自然界分离到的麻疹病毒基因有变异.尽管麻疹病毒(MV)被认为只有一种血清型,且Tamin等[1]报道,ED疫苗株对现流行株均有免疫保护力,但免疫血清中和野生株滴度低于中和疫苗株.同时人们发现,MV能在体内持续性感染引起亚急性硬化性脑炎(SSPE)与非SSPE相关性疾病.因而,MV可能存在着基因变异(Genetic Diversity)与抗原漂移(Antigentic Drlft).

关键词：麻疹麻疹病毒基因变异抗原漂移

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麻疹病毒的抗原漂移和新型疫苗的展望

中国计划免疫 1996年第6期2卷 295-298页

作者：陈志慧卫生部上海生物制品研究所

麻疹病毒的抗原漂移和新型疫苗的展望陈志慧（卫生部上海生物制品研究所，上海市，２０００５２）１９５４年Ｅｎｄｅｒｓ等以原代人胚肾和猴肾细胞分离出第１株麻疹病毒Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ（Ｅｄ）株，为研制麻疹疫苗（ＭＶ））奠定了... 详细信息

麻疹病毒的抗原漂移和新型疫苗的展望陈志慧（卫生部上海生物制品研究所，上海市，２０００５２）１９５４年Ｅｎｄｅｒｓ等以原代人胚肾和猴肾细胞分离出第１株麻疹病毒Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ（Ｅｄ）株，为研制麻疹疫苗（ＭＶ））奠定了基础。６０年代初麻疹减毒活疫苗问世...

关键词：麻疹病毒疫苗抗原漂移

济宁市2017-2020年流感流行季甲型H3N2流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特征

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中国疫苗和免疫 2022年第3期28卷 303-308页

作者：韩淑琪王胜男王玉宁江亚娟焦伯延济宁市疾病预防控制中心山东济宁272000

目的了解济宁市甲型H3N2流感病毒流行株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因特征。方法于2017-2020年流感流行季在济宁市2家流感监测哨点医院和流感聚集疫情中选取流感样疾病(ILI)病例咽拭子标本中分离获得的19株甲型H3N2流感病毒,分析HA和N... 详细信息

目的了解济宁市甲型H3N2流感病毒流行株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因特征。方法于2017-2020年流感流行季在济宁市2家流感监测哨点医院和流感聚集疫情中选取流感样疾病(ILI)病例咽拭子标本中分离获得的19株甲型H3N2流感病毒,分析HA和NA基因序列同源性、HA基因进化特征、HA和NA基因位点的氨基酸差异。结果济宁市2017-2020年流感流行季ILI病例中甲型H3N2流感病毒检测阳性率为4.77%(218/4575),检测阳性数占流感病毒检测总阳性数的25.89%(218/842)。19株甲型H3N2流感病毒之间HA和NA氨基酸同源性分别为97.7%-100%和98.6%-99.5%,平均遗传距离分别为0.009和0.008。HA基因进化树显示,19株分离株均属3C.2a1b分支,与疫苗代表株A/Kansas/14/2017的亲缘性较远。与该疫苗代表株相比,分离株HA的33个位点存在氨基酸差异,包括10个抗原表位位点、4个受体结合位点、3个糖基化位点、1个潜在类泛素蛋白修饰分子化修饰位点和1个潜在泛素化修饰位点;NA的27个位点存在氨基酸差异,但NA的酶活性催化位点、耐药位点和糖基化位点均无氨基酸差异。结论济宁市2017-2020年流感流行季甲型H3N2流感病毒可能发生了抗原漂移;需加强甲型H3N2流感监测,为疫苗株筛选提供依据。

关键词：甲型H3N2流感病毒血凝素神经氨酸酶抗原漂移基因特征

2016—2023年湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

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疾病监测 2024年

作者：邓先群李冰清李雯严小雪杨芸荆门市疾病预防控制中心

目的了解2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒血凝素(HA)基因特征及抗原漂移情况。方法对2016—2023监测年度湖北省荆门市分离到的60株H3N2流感毒株进行全基因组测序，利用MEGA 11、UCSF Chimera 1.18等软件对HA基因序列... 详细信息

目的了解2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒血凝素(HA)基因特征及抗原漂移情况。方法对2016—2023监测年度湖北省荆门市分离到的60株H3N2流感毒株进行全基因组测序，利用MEGA 11、UCSF Chimera 1.18等软件对HA基因序列进行抗原变异分析和三维建模分析。结果 2016—2023监测年度共计5个监测年度有H3N2亚型流感病毒检出，共有3C.2a1、3C.2a2、3C.2a3、3C.2a1b.1b、3C.2a1b.2a.1a、3C.2a1b.2a.2a.3a.1共计6个进化簇流行，优势毒株从2016年的3C.2a2簇逐步变更为2023年的3C.2a1b.2a.2a.3a.1簇，两者在HA蛋白抗原表位上存在差异的氨基酸突变位点达21个，有I140K等13处氨基酸突变位点在表面模式结构图中差异明显。结论 2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒不断进化，发生了抗原漂移，应持续加强对H3N2亚型流感病毒的分子变异监测。

关键词： H3N2亚型流感病毒血凝素基因抗原漂移

H7N9禽流感病毒分子生物学变异的研究进展

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病毒学报 2018年第6期34卷 904-910页

作者：李艳华高海女杨仕贵李兰娟传染病诊治国家重点实验室杭州310031 浙江大学医学院第一附属医院感染性疾病诊治协同创新中心杭州310031 树兰(杭州)医院杭州310031

2018年是自1918年H1N1“西班牙流感”首次流感大流行以来第100周年。与近代历史上致命的大流行有关的流感,一般由人畜共患流感病毒引起,通过累积变异跨越动物-人类屏障,导致人类流感,临床表现可以从轻微的呼吸道疾病到多器官功能障碍。H... 详细信息

2018年是自1918年H1N1“西班牙流感”首次流感大流行以来第100周年。与近代历史上致命的大流行有关的流感,一般由人畜共患流感病毒引起,通过累积变异跨越动物-人类屏障,导致人类流感,临床表现可以从轻微的呼吸道疾病到多器官功能障碍。H7N9禽流感病毒跨越动物——人类屏障在中国已引起五波流感大流行,死亡率较高。目前仅存在有限的人传人,但如果它们能够有效地完成人与人之间传播,特别是通过空气传播,无疑将引发新的大流行。因此,本综述系统地阐述了H7N9禽流感病毒的结构、流行病学情况、病毒变异及感染传播的可能发病机制。

关键词：甲型流感流感大流行抗原漂移空气传播高致病性禽流感

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流行性感冒

中国人兽共患病学报 2020年第7期36卷 593-598页

作者：张智芳王晓欢梁小洁林志龙严延生福建省疾病预防控制中心福州350001

流行性感冒(简称“流感”)可引起全球大流行。引起流感的病原体是分节段的RNA流感病毒,流感病毒每年在人群中循环,可引起季节性流感的发生。而流感病毒在流行过程中常引发抗原的“漂移”变异,是老年人等高危人群发病死亡的主要原因之一... 详细信息

流行性感冒(简称“流感”)可引起全球大流行。引起流感的病原体是分节段的RNA流感病毒,流感病毒每年在人群中循环,可引起季节性流感的发生。而流感病毒在流行过程中常引发抗原的“漂移”变异,是老年人等高危人群发病死亡的主要原因之一。因此需要WHO组织全球的流感监测,经过检测分析,推测次年流行的季节性流感病毒,以应疫苗的制备。

关键词：流行性感冒流感病毒抗原漂移疫苗

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A型流感病毒M2蛋白疫苗的研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 2009年第6期23卷 493-495页

作者：徐一张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

流感是由流感病毒引起的一种呼吸道传染病。目前应用的流感疫苗主要是针对流感病毒的膜蛋白HA和NA，但HA和NA存在抗原漂移和抗原转变问题，需要不断改换制备疫苗用的毒株。解决办法之一是研制一种“通用型”流感疫苗。M2蛋白是流感病毒... 详细信息

流感是由流感病毒引起的一种呼吸道传染病。目前应用的流感疫苗主要是针对流感病毒的膜蛋白HA和NA，但HA和NA存在抗原漂移和抗原转变问题，需要不断改换制备疫苗用的毒株。解决办法之一是研制一种“通用型”流感疫苗。M2蛋白是流感病毒第三种跨膜蛋白，具有离子通道作用，而且其基因序列高度保守。

关键词： A型流感病毒蛋白疫苗呼吸道传染病流感疫苗跨膜蛋白抗原转变抗原漂移 M2蛋白