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扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因的克隆及其组织表达差异分析

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中国兽医科学 2010年第6期40卷 572-578页

作者：王利晓薄新文张银亮康立超石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子832000

为了探索烯醇化酶基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用,通过基因质粒文库克隆分析了扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因mRNA的全长序列,同时应用SYBRGreenreal-timeRT-PCR方法检测了该基因在虫体4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节的... 详细信息

为了探索烯醇化酶基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用,通过基因质粒文库克隆分析了扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因mRNA的全长序列,同时应用SYBRGreenreal-timeRT-PCR方法检测了该基因在虫体4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节的组织表达差异。序列分析结果表明,该基因全长1691bp,编码445个氨基酸,蛋白的理论分子质量为48.94ku,等电点为5.56,是含有螺旋和不规则卷曲较多的疏水性蛋白。相似性分析结果显示,其基因表达产物与肝片吸虫氨基酸的相似性达74.8%,属于磷酸丙糖异构酶磷酸盐结合蛋白家族。Real-timeRT-PCR结果表明烯醇化酶基因在虫体各发育阶段的表达丰度差异显著,其从高到低依次为成节、幼节、孕节和头节。据此推测该烯醇化酶基因在虫体寄生过程中对细胞内物质的代谢与能量的产生起关键作用。

关键词：扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因序列分析实时定量反转录聚合酶链反应

扩展莫尼茨绦虫RNA结合蛋白基因的克隆及不同体节mRNA转录水平的分析

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中国兽医科学 2013年第10期43卷 999-1005页

作者：王正荣薄新文赵文娟何延华康立超新疆农垦科学院新疆绵羊重点繁育实验室新疆石河子832000

为研究RNA结合蛋白在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的功能,克隆了该基因的全长序列;同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测了该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节、孕节中的m... 详细信息

为研究RNA结合蛋白在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的功能,克隆了该基因的全长序列;同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测了该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节、孕节中的mRNA转录水平。结果显示,扩展莫尼茨绦虫RNA结合蛋白基因全长为1 905bp,编码562个氨基酸。进化分析表明,该基因与人类DAZ基因有一定的同源性;mRNA转录水平分析显示,目的基因和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。结果表明,此RNA结合蛋白在虫体各发育阶段中的表达丰度存在明显差异,在虫体成节的表达水平最高,其次为幼节、孕节和头节,初步推测该基因可能与人类DAZ基因有相似的功能,对扩展莫尼茨绦虫生殖细胞的发育具有一定的调控作用。

关键词：扩展莫尼茨绦虫 RNA结合蛋白克隆 mRNA转录水平

扩展莫尼茨绦虫不同体节电压门控性钙通道β亚基和胶原纤维mRNA转录水平的研究

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 566-571页

作者：王正荣薄新文赵文娟何延华康立超新疆农垦科学院新疆绵羊重点繁育实验室新疆石河子832000

为了研究电压门控性钙通道β亚基和胶原纤维基因在扩展莫尼茨绦虫不同体节的mRNA转录水平,以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中... 详细信息

为了研究电压门控性钙通道β亚基和胶原纤维基因在扩展莫尼茨绦虫不同体节的mRNA转录水平,以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异。结果显示,电压门控性钙通道β亚基、胶原纤维基因和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99;熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。试验结果表明,电压门控性钙通道β亚基以及胶原纤维基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异。电压门控性钙通道β亚基在幼节的表达水平较高,而胶原纤维基因在孕节的表达水平较高,提示这2个基因可能在幼节和孕节的发育中有重要作用。

关键词：扩展莫尼茨绦虫电压门控性钙通道β亚基胶原纤维 mRNA转录水平

扩展莫尼茨绦虫wnt基因在虫体不同发育体节的差异表达

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畜牧兽医学报 2016年第12期47卷 2483-2492页

作者：王正荣张艳艳薄新文徐雪平徐春生省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000 石河子大学动物科技学院石河子832000

研究扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)wnt基因家族wnt1、wnt2、wnt4、wnt5和wnt11B5个基因在虫体不同发育体节的差异表达及组织分布规律,为进一步揭示Wnt信号通路在扩展莫尼茨绦虫发育中的作用奠定基础。作者采用SYBR GreenⅠqRT-PCR... 详细信息

研究扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)wnt基因家族wnt1、wnt2、wnt4、wnt5和wnt11B5个基因在虫体不同发育体节的差异表达及组织分布规律,为进一步揭示Wnt信号通路在扩展莫尼茨绦虫发育中的作用奠定基础。作者采用SYBR GreenⅠqRT-PCR方法分析了wnt1、wnt2、wnt4、wnt5和wnt11B在虫体头颈节、幼节、成节和孕节的mRNA相对转录情况;采用核酸原位杂交方法分析上述5个基因在虫体头颈节、幼节、成节和孕节的mRNA分布情况。结果显示,wnt基因家族成员在虫体各发育体节均有表达,wnt1、wnt4、wnt5和wnt11B基因在虫体头颈节的mRNA转录水平相对较高,而在虫体孕节的mRNA转录水平最低;与之相反,wnt2基因在虫体头颈节的mRNA转录水平最低,而在虫体幼节的转录水平较高。原位杂交的结果表明,在虫体的头颈节,wnt基因主要表达于虫体的吸盘部位;在幼节和孕节,主要表达于虫体的节间腺,而在成节,wnt基因在虫体的雌雄生殖系统(如卵巢、睾丸)均有表达,并且在虫体的节间腺以及表皮也有一定的表达。综上,扩展莫尼茨绦虫5个wnt基因在虫体头颈节以及幼节的mRNA转录水平较高,且在虫体的吸盘、节间腺以及雌雄生殖细胞均有分布,因此初步推测Wnt信号通路可能参与扩展莫尼茨绦虫体节以及生殖细胞的发育过程,当然这一假说还有待进一步验证。

关键词：扩展莫尼茨绦虫节片发育 wnt基因家族差异表达

扩展莫尼茨绦虫感染对成年牦牛小肠不同部位黏膜固有免疫细胞的影响

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中国兽医科学 2015年第9期45卷 973-978页

作者：曹婷婷王雯慧祁珊珊李淑娴张学锋甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为研究扩展莫尼茨绦虫对成年牦牛小肠黏膜固有免疫细胞的影响,采用组织学、组织化学染色与细胞数量检测以及统计分析的方法对感染组和对照组牦牛小肠不同部位黏膜固有免疫细胞进行了详细观察、分析,并做了比较。结果显示,感染组牦牛十... 详细信息

为研究扩展莫尼茨绦虫对成年牦牛小肠黏膜固有免疫细胞的影响,采用组织学、组织化学染色与细胞数量检测以及统计分析的方法对感染组和对照组牦牛小肠不同部位黏膜固有免疫细胞进行了详细观察、分析,并做了比较。结果显示,感染组牦牛十二指肠、空肠和回肠黏膜中的黏膜固有免疫细胞即上皮内淋巴细胞、杯状细胞、嗜酸性粒细胞、浆细胞和肥大细胞数量均远远多于对照组牦牛的相应部位,差异都极显著(P0.05)。研究结果表明,扩展莫尼茨绦虫感染时,成年牦牛感染部位小肠黏膜固有免疫细胞大量增生,但其分布趋势没有发生改变。

关键词：牦牛扩展莫尼茨绦虫上皮内淋巴细胞杯状细胞嗜酸性粒细胞浆细胞肥大细胞

扩展莫尼茨绦虫蛋白激酶C相互作用蛋白(PICK1)基因的克隆及序列分析

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新疆农业科学 2011年第7期48卷 1307-1312页

作者：赵文娟康立超薄新文王新华新疆农垦科学院新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子832030

【目的】分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)新基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物... 详细信息

【目的】分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)新基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等分析技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较及蛋白质二级结构的初步预测。【结果】获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因蛋白激酶C相互作用蛋白,全长1 527 bp,编码447个氨基酸,CDS预测存在明显的BAR,PDZ结构域。编码蛋白的理论分子质量为50.173 3 ku,等电点为5.22。【结论】获得了扩展莫尼茨绦虫蛋白激酶C相互作用蛋白的全长cDNA序列,为该基因功能的试验性鉴定工作奠定基础。

关键词：扩展莫尼茨绦虫 PICK1 序列分析

扩展莫尼茨绦虫vasa基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国兽医学报 2020年第6期40卷 1136-1141页

作者：钱凌霄王正荣李红欢刘乙张艳艳王炜烨薄新文马勋石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

试验旨在表达、纯化扩展莫尼茨绦虫VASA蛋白,并制备兔抗VASA多克隆抗体。根据扩展莫尼茨绦虫全基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增vasa基因片段;将扩增产物与原核表达载体pET-22b(+)连接,获得重组质粒pET-22b-VASA;经Amp抗... 详细信息

试验旨在表达、纯化扩展莫尼茨绦虫VASA蛋白,并制备兔抗VASA多克隆抗体。根据扩展莫尼茨绦虫全基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增vasa基因片段;将扩增产物与原核表达载体pET-22b(+)连接,获得重组质粒pET-22b-VASA;经Amp抗性筛选阳性菌,双酶切、PCR测序鉴定后,将其转化大肠杆菌(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达;重组融合蛋白经镍柱纯化后,进行Western blot鉴定;将融合蛋白免疫兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒pET-22b-VASA构建正确,通过IPTG诱导获得大小约32200的VASA重组融合蛋白;Western blot分析表明其与鼠抗His单克隆抗体呈阳性反应。纯化的VASA蛋白免疫兔获得了多克隆抗体,ELISA检测其效价为1∶128000。本试验成功制备了具有免疫原性的VASA蛋白及其兔源多克隆抗体,为VASA蛋白生物学功能及该蛋白在绦虫体内的分布等研究奠定基础。

关键词：扩展莫尼茨绦虫 VASA 原核表达多克隆抗体 ELISA

扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin部分片段克隆及不同体节mRNA转录水平分析

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西北农业学报 2015年第8期24卷 16-22页

作者：叶倩马勋薄新文王正荣张艳艳石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆农垦科学院新疆绵羊繁育重点实验室新疆石河子832000

旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行进化分析。同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green re... 详细信息

旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行进化分析。同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技术检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异,最终克隆获得749bp的serpin基因片段。进化分析表明,扩展莫尼茨绦虫serpin基因与多方棘球蚴serpin基因有较近的亲缘关系。标准曲线分析显示,serpin和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。同时试验结果显示,serpin基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。由此初步推测,此基因可能在扩展莫尼茨绦虫虫卵发育为六钩蚴的过程中发挥一定作用。

关键词： serpin 扩展莫尼茨绦虫 RT-PCR

扩展莫尼茨绦虫膜联蛋白B3基因组织表达差异分析

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新疆农业科学 2011年第10期48卷 1864-1869页

作者：王正荣赵文娟王新华薄新文新疆农垦科学院新疆绵羊重点繁育实验室新疆石河子832000

【目的】探索膜联蛋白B3(Annexins B3)基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。【方法】研究以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫四个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕... 详细信息

【目的】探索膜联蛋白B3(Annexins B3)基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。【方法】研究以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫四个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异。【结果】标准曲线分析显示,Annexins B3和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991,溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。【结论】膜联蛋白B3基因在虫体个发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。

关键词： Annexins B3 扩展莫尼茨绦虫 RT-PcR 差异表达