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琼脂糖粉的质量对PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳的影响

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科技风 2023年第23期 148-150页

作者：兰柳波张志珍李彩虹张海涛林小聪刘勇军马卫列丁航广东医科大学生物化学与分子生物学教研室广东东莞523808 广东省高等学校教学重点实验室现代生物化学与分子生物学实验室广东湛江524023

目的:研究琼脂糖粉的质量对聚合酶链式反应(PCR)产物琼脂糖凝胶电泳的影响。方法:PCR产物琼脂糖凝胶电泳中分别使用不同牌子的琼脂糖粉,同时跑胶图像。结果:质量差的琼脂糖粉电泳结果有明显弥散现象,而更换高质量的琼脂糖粉,未见弥散现... 详细信息

目的:研究琼脂糖粉的质量对聚合酶链式反应(PCR)产物琼脂糖凝胶电泳的影响。方法:PCR产物琼脂糖凝胶电泳中分别使用不同牌子的琼脂糖粉,同时跑胶图像。结果:质量差的琼脂糖粉电泳结果有明显弥散现象,而更换高质量的琼脂糖粉,未见弥散现象。结论:琼脂糖粉质量在分子生物学PCR产物琼脂糖凝胶电泳实验中扮演重要角色,使用高质量的琼脂糖粉对实验的成功至关重要。

关键词：琼脂糖粉 PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳

荧光聚合酶链反应法用于新型冠状病毒核酸检测扩增产物污染治理的相关应用

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实用检验医师杂志 2023年第4期15卷 372-376页

作者：闫晓枫李庆伟孙宇强荣维娜黑龙江省医院实验诊断部黑龙江哈尔滨150036

目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)法用于新型冠状病毒(新冠病毒)核酸检测时扩增产物污染治理的相关应用。方法建立新冠病毒基因检测扩增产物污染模型、物面污染模型以及空间(气溶胶)污染模型,比较不同化学试剂及物理紫外线照射治理方式对... 详细信息

目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)法用于新型冠状病毒(新冠病毒)核酸检测时扩增产物污染治理的相关应用。方法建立新冠病毒基因检测扩增产物污染模型、物面污染模型以及空间(气溶胶)污染模型,比较不同化学试剂及物理紫外线照射治理方式对物面污染和空间污染的清除效果。结果75%乙醇消毒剂组、核酸清除剂组和不同浓度有效氯制剂组的循环阈值(CT值)均明显高于对照组,其中核酸清除剂组的CT值最高,玻璃、塑料、金属材质的CT值分别为34.74±2.63、34.68±3.25、35.71±3.07。500、1000、1500、2000、2500 mg/L有效氯制剂组对不同材质的CT值均高于75%乙醇消毒剂组,且有效氯的浓度越高,CT值越大,差异均有统计学意义。不同时长紫外线照射各组的CT值均明显高于对照组;其中以紫外线照射120 min组的CT值最高,玻璃、塑料、金属材质的CT值分别为35.51±2.70、35.49±2.63、35.55±2.58,且紫外线照射时长越长,CT值越大,差异均有统计学意义。治理后的通风+紫外线照射120 min+75%乙醇消毒剂+核酸清除剂+2500 mg/L有效氯制剂组的CT值为36.98±3.47,明显高于治理前及其他各组,差异均有统计学意义。结论荧光PCR法用于新冠核酸检测时扩增产物污染的治理方式较多,对物面污染的治理方式可选择核酸清除剂及2500 mg/L有效氯制剂,以及紫外线照射120 min,对空间污染环境的治理方式可选择通风+紫外线照射120 min+75%乙醇消毒剂+核酸清除剂+2500 mg/L有效氯制剂联合应用,值得重视。

关键词：聚合酶链反应新型冠状病毒核酸检测扩增产物污染治理

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清除聚合酶链反应扩增产物污染的方法探讨

中华检验医学杂志 2004年第9期27卷 605-606页

作者：刘军权陈复兴周忠海曹苏梅解放军第九七医院实验科江苏徐州221004

聚合酶链反应(PCR)具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点.但也常因标本受PCR扩增产物污染而产生假阳性结果.因此,控制外源性DNA污染已成为各实验室非常关注的问题.近年来,人们采用了许多方法消毒处理不同的污染环境和污染物[1-5],但... 详细信息

聚合酶链反应(PCR)具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点.但也常因标本受PCR扩增产物污染而产生假阳性结果.因此,控制外源性DNA污染已成为各实验室非常关注的问题.近年来,人们采用了许多方法消毒处理不同的污染环境和污染物[1-5],但结果报导不一.为选择一种消除实验室DNA污染的最佳方法,我们选用六种传统的消毒法进行对比研究.现将结果报告如下。

关键词：聚合酶链反应方法探讨结果报告污染假阳性结果 DNA 外源性扩增产物 PCR扩增标本

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杉木单染色体扩增产物的RAPD分析

南京林业大学学报（自然科学版） 2003年第3期27卷 55-58页

作者：李湘阳周坚袁汉升张再良南京林业大学江苏南京210037 湖南永州市林业局湖南永州425000

在显微操作器上微分离杉木(Cunninghamialanceolata(Lamb.)Hook)的4条单染色体,以简并寡核苷酸为引物进行PCR扩增(DOP PCR),并将其DOP PCR产物进行RAPD分析。结果表明,不同染色体扩增产物间有明显多态性;用RAPD PCR的方式可反应出不同... 详细信息

在显微操作器上微分离杉木(Cunninghamialanceolata(Lamb.)Hook)的4条单染色体,以简并寡核苷酸为引物进行PCR扩增(DOP PCR),并将其DOP PCR产物进行RAPD分析。结果表明,不同染色体扩增产物间有明显多态性;用RAPD PCR的方式可反应出不同染色体遗传信息的差异,从这些差异中可能找到属于某单染色体的特异信息,进而在分子水平上对染色体进行编号。

关键词：杉木染色体扩增产物 RAPD分析显微分离

一种快速序列比较方法及其在PCR扩增产物判定中的应用

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生物物理学报 1995年第2期11卷 245-248页

作者：吴加金军事医学科学院基础医学研究所

根据影响对序列比较速度的二个重要因素：１．启动硬盘读写时间。２．对盘检索定位和数据译码时间。提出相应的改进措施，达到提高比较速度的目的。并对ＰＣＲ扩增产物的判定为例，说明方法成功地应用于未知序列判定。

关键词：序列比较同源分析聚合酶链反应扩增产物

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中华绒螯蟹微卫星单引物扩增产物的初步分析

中国水产科学 2002年第1期9卷 5-9页

作者：张菁陆仁后邱涛中国科学院水生生物研究所中国科学院水生生物研究所湖北武汉430072

采用人工合成的 6个串联重复寡聚核苷酸单引物 ,以及 2个加锚的二核苷酸引物 ,利用SPAR和ASSR技术 ,对中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)基因组进行PCR扩增 ,结果发现 ,对于GC含量丰富的三、四核苷酸引物如(CGA) 5、(GACA) 4 ,在不同退火... 详细信息

采用人工合成的 6个串联重复寡聚核苷酸单引物 ,以及 2个加锚的二核苷酸引物 ,利用SPAR和ASSR技术 ,对中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)基因组进行PCR扩增 ,结果发现 ,对于GC含量丰富的三、四核苷酸引物如(CGA) 5、(GACA) 4 ,在不同退火温度的PCR反应中 ,都能扩增出清晰的条带 ,可以作为PCR扩增引物 ;反之 ,GC含量扩增产物 ;在基本PCR条件下 ,2个加锚的二核苷酸引物能扩增出可分辨的条带 ,但随着退火温度的升高 ,其中部分条带消失 ;对于不加锚的二核苷酸引物如 (AC) 8、(GA) 8,无论怎样改变退火温度 ,终难形成清晰条带。将不同引物扩增产物分别克隆到T Vector上 ,选取其中 9个阳性克隆进行序列测定 ,发现在 (GACA) 4 引物扩增的 2个片段中 ,序列结构相似 ,除引物序列外 ,都出现了 2～ 3个内部重复序列和高含量的AT ;其余 7个片段在引物序列间都未见内部重复序列

关键词：中华绒螯蟹微卫星扩增产物 SPAR ASSR

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桃SSR-PCR主要因子对扩增产物的影响

江苏农业学报 2006年第1期22卷 76-80页

作者：沈志军马瑞娟俞明亮许建兰江苏省农业科学院园艺研究所江苏南京210014

以寿星桃为试材，通过Mg^2＋和DNA聚合酶、模板DNA和引物用量的两个双因素试验，以及dNTP用量的单因素试验，研究了5个主要因子对SSR扩增结果的影响，并对桃SSR反应体系进行了优化。结果表明，Mg^2＋和DNA聚合酶的用量对SSR扩增结果起... 详细信息

以寿星桃为试材，通过Mg^2＋和DNA聚合酶、模板DNA和引物用量的两个双因素试验，以及dNTP用量的单因素试验，研究了5个主要因子对SSR扩增结果的影响，并对桃SSR反应体系进行了优化。结果表明，Mg^2＋和DNA聚合酶的用量对SSR扩增结果起着关键作用，且两者之间存在明显的可作效应；dNTP用量也对SSR的扩增结果起着重要作用，当浓度在200～300μmol／L时效果较好；模板DNA与引物用量之阃没有很明显的互作效应，适当增加引物用量可以提高SSR的正确扩增；优化的桃SSR反应体系为：25μl的总反应体积中含1×PCR Buffe、Mg^2＋ 3mmol／L、DNA聚合酶1．5U、SSR引物各0．4μmol／L、模板DNA 50ng、dNTP 200 μmol／L。

关键词：桃简单序列重复 PCR扩增扩增产物

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RAPD扩增中商品酶体系对扩增产物的影响

应用与环境生物学报 2002年第3期8卷 308-313页

作者：何礼袁水全莫邦辉姚光贵林宏辉陈放郭骁才四川大学生命科学学院成都610064 中国科学院成都生物研究所成都610041 成都市第一农业科学研究所成都610072

随机选用了 10条RAPD引物 ,采用 3种商品TaqDNA聚合酶体系 ,以 5个不同物种的动植物总DNA为模板 ,进行RAPD扩增 .实验发现 ,在对同一模板、采用同一引物进行的RAPD扩增中 ,仅仅因为使用了不同的商品TaqDNA聚合酶 ,获得的扩增产物差别极... 详细信息

随机选用了 10条RAPD引物 ,采用 3种商品TaqDNA聚合酶体系 ,以 5个不同物种的动植物总DNA为模板 ,进行RAPD扩增 .实验发现 ,在对同一模板、采用同一引物进行的RAPD扩增中 ,仅仅因为使用了不同的商品TaqDNA聚合酶 ,获得的扩增产物差别极大 ;不同商品来源的PCR反应缓冲体系 ,对扩增产物也有一定影响 ,但相对较小 .这说明 ,不同的商品酶体系对RAPD扩增产物影响很大 .因此 ,影响RAPD扩增产物稳定性的一个关键因素是商品TaqDNA聚合酶本身 ;研究中前后一致地使用同一商品TaqDNA聚合酶体系 ,是成功进行RAPD分析的基础 .图 3参

关键词： RAPD扩增商品酶体系扩增产物

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PCR扩增产物的量化检测技术

国外医学（临床生物化学与检验学分册） 1999年第1期20卷 35-37页

作者：顾文莉上海第二医科大学上海市医学检验重点实验室200023

随着分子生物学的日益发展与普及，PCR产物的定量检测受到广泛重视。本文将近年国外报道PCR扩增产物的量化检测技术的某些方法的原理、特点等作简要的介绍。并着重介绍杂交酶免疫测定法的优点及其广阔的应用前景。

关键词：聚合酶链反应扩增产物定量检测