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低氧对成骨生长肽诱导的小鼠间充质干细胞成骨分化的影响

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中国骨质疏松杂志 2016年第11期22卷 1380-1385页

作者：张磊龚跃昆赵学凌周厚俊云南省第一人民医院康复医学科昆明650032 昆明医科大学第一附属医院骨科昆明650032 昆明医科大学第一附属医院神经外二科昆明650032

目的探讨低氧对成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)诱导的小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法将第三代小鼠BMSCs随机分为四组:对照组(A组,常氧条件下培养);1%O2组(B组,... 详细信息

目的探讨低氧对成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)诱导的小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法将第三代小鼠BMSCs随机分为四组:对照组(A组,常氧条件下培养);1%O2组(B组,1%O2条件下培养);OGP组(C组,常氧条件下添加OGP培养)、1%O2联合OGP组(D组,1%O2条件下添加OGP)。分别于培养后1天、2天、3天、4天收集细胞,噻唑蓝(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法观察BMSCs增殖能力;培养7、14天后收集细胞,可见光比色法检测细胞碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase,ALP);培养1天后收集细胞,ELISA法检测低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)表达,培养3、7天后收集细胞,实时荧光定量PCR检测RUNX2、Osterix表达。结果 MTT结果显示,与C组相比,在培养第2、3、4天D组能明显促进BMSCs增殖(P成骨分化的作用。

关键词：低氧成骨生长肽骨髓间充质干细胞成骨分化

成骨生长肽羧基端片段及其衍生物对去卵巢大鼠骨密度的影响

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山东医药 2009年第8期49卷 42-43页

作者：郭伟红王翠娟卢飚邱明才王德心天津医科大学总医院天津300052 秦皇岛市第一医院中国医学科学院药物研究所

将70只SD雌性大鼠分为8组，1～7组行双侧卵巢切除术（OVX），第8组行假手术。术后1—6组分别给予不同剂量成骨生长肽（OGP）衍生物OOJ、OOH和H88H。术后12周股动脉放血处死，检测血（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP），分离股骨、腰椎... 详细信息

将70只SD雌性大鼠分为8组，1～7组行双侧卵巢切除术（OVX），第8组行假手术。术后1—6组分别给予不同剂量成骨生长肽（OGP）衍生物OOJ、OOH和H88H。术后12周股动脉放血处死，检测血（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP），分离股骨、腰椎检测骨密度（BMD）。发现H88H。组ALP水平较SHAM组升高（P〈0．05），各给药组ALP水平低于OVX组（P〈0．01）。各给药组腰椎BMD较OVX组均增高（P〈0．05）。认为骨质疏松症早期，以松质骨为主的部位受累为著，OGP（10—14）衍生物OOJ、OOH和H88H通过激活骨再建频率、提高骨转换率，能不同程度地促进骨形成、增加BMD，以腰椎为著。

关键词：成骨生长肽衍生物骨质疏松骨密度

pcDNA_(3.1)-成骨生长肽真核表达载体在骨髓基质干细胞中的表达(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第36期15卷 6696-6700页

作者：安刚吕松岑郭亚山薛震邓秋奎哈尔滨医科大学附属第二医院骨科黑龙江省哈尔滨市150086

背景:成骨生长肽具有明显的促进成骨细胞增殖、分化、成熟的作用。目的:观察成骨生长肽基因转染兔骨髓基质干细胞后的表达及表达产物对骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的影响。方法:构建重组真核表达载体pcDNA3.1-成骨生长肽,并在脂质体... 详细信息

背景:成骨生长肽具有明显的促进成骨细胞增殖、分化、成熟的作用。目的:观察成骨生长肽基因转染兔骨髓基质干细胞后的表达及表达产物对骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的影响。方法:构建重组真核表达载体pcDNA3.1-成骨生长肽,并在脂质体介导下,将其导入兔骨髓基质干细胞。通过G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR方法检测成骨生长肽基因在骨髓基质干细胞内的表达,并观察转染pcDNA3.1-成骨生长肽后骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的情况。结果与结论:实验成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-成骨生长肽,转染pcDNA3.1-成骨生长肽的骨髓基质干细胞可见成骨生长肽mRNA的表达,同时羟脯氨酸的分泌水平增加,碱性磷酸酶活性增高。证实经pcDNA3.1-成骨生长肽转染的兔骨髓基质干细胞不仅可以表达成骨生长肽,而且具有向成骨细胞分化的特性。

关键词：成骨生长肽 pcDNA3.1载体骨髓基质干细胞基因转染表达

人工合成成骨生长肽对正常小鼠造血的促进作用和体外造血活性测定

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中国药理学通报 2003年第1期19卷 89-92页

作者：陈红红施德源邵云潮罗伟华陈统一崔大敷程文英复旦大学放射医学研究所上海200032 复旦大学放射医学研究所附属中山医院骨科上海200032 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

目的　通过观察sOGP在体内的促造血活性和体外促进造血祖细胞增殖的作用 ,初步探索sOGP促造血活性的作用环节及机制。方法　正常小鼠连续 14d皮下注射sOGP ,观察外周血象、骨髓有核细胞数及骨髓有核细胞分类计数的变化 ;又应用离体骨髓... 详细信息

目的　通过观察sOGP在体内的促造血活性和体外促进造血祖细胞增殖的作用 ,初步探索sOGP促造血活性的作用环节及机制。方法　正常小鼠连续 14d皮下注射sOGP ,观察外周血象、骨髓有核细胞数及骨髓有核细胞分类计数的变化 ;又应用离体骨髓细胞培养方法观察sOGP对正常小鼠和人骨髓粒系祖细胞集落形成的影响。结果　sOGP能升高正常小鼠骨髓有核细胞数和外周血白细胞数分别为2 0 %和 40 % ,红细胞和血小板也有增加趋势 ,骨髓细胞增生较空白对照组活跃 ,粒系增生较明显。体外CFU G集落培养实验进一步证实了sOGP具有直接刺激小鼠和人骨髓粒系祖细胞增殖的作用 ,1× 10 -14 mol·L-1浓度时已有明显的效果 ,sOGP和阳性对照药rhG CSF在相近浓度时效果相接近。结论　sOGP可能具有促进小鼠骨髓全系细胞增生的作用 ,以促进粒系造血为主 ,其机制可能是直接作用于造血干 /祖细胞或改善造血微环境促进造血 ,提示sOGP在促进放

关键词：人工合成成骨生长肽体外造血成骨生长肽造血功能 CFU-G

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重组人成骨生长肽的表达、纯化和活性的研究

中国生物化学与分子生物学报 2004年第4期20卷 467-472页

作者：余琼周凌云林雪松徐建永王淑静刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学学院生物化学与分子生物学教研室

将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (rec... 详细信息

将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide ,rhOGP) .体外实验证明 :rhOGP对成纤维细胞 (NIH3T3)的增殖有促进作用 .体内实验证明 :rhOGP加速兔移植骨成活 ,使血清中碱性磷酸酶活性增高 ,骨钙素增高 .重组人成骨生长肽促进成骨。

关键词：成骨生长肽融合蛋白亲和层析活性成骨

合成成骨生长肽对人骨髓间充质干细胞成骨转化的促进

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第6期13卷 1053-1058页

作者：徐杨陈统一林飞跃尹晓明福建省立医院骨一科福建省福州市350001 复旦大学附属中山医院骨科上海市200032

背景:成骨生长肽在体内外细胞培养中具有明显的促成骨活性,这种促成骨作用的分子机制还不清楚,现已通过人工方法成功制备了合成成骨生长肽。目的:探讨合成成骨生长肽对体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用。设计、时间及... 详细信息

背景:成骨生长肽在体内外细胞培养中具有明显的促成骨活性,这种促成骨作用的分子机制还不清楚,现已通过人工方法成功制备了合成成骨生长肽。目的:探讨合成成骨生长肽对体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用。设计、时间及地点:基因和蛋白水平的细胞学体外观察,于2006-07/2007-12在福建省医学科学研究所基因工程实验室及复旦大学附属中山医院中心实验室完成。材料:骨髓标本来源于福建省立医院骨一科收治的男性髂骨植骨患者,合成成骨生长肽由中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所崔大敷教授惠赠,ERK1/2抑制剂U0126为美国CST公司产品。方法:密度梯度离心法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,单纯矿化液组加入由10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50mg/LL-抗坏血酸组成的矿化液;10-7,10-9,10-11mol/L合成成骨生长肽组分别加入对应浓度的合成成骨生长肽,再加入矿化液;常规培养组加入含体积分数为0.1胎牛血清的低糖DMEM。主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR法和免疫组织化学染色检测成骨标志物的表达,Western-blot法分析合成成骨生长肽对ERK1/2信号通路的影响,观察U0126对合成成骨生长肽作用的干预。结果:加入合成成骨生长肽后,骨髓间充质干细胞体积增大,突起增多,呈多角形,胞浆含有较多颗粒状物质,出现致密细胞结节。合成成骨生长肽在mRNA和蛋白水平均能促进成骨标志物碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素的表达,定量分析结果显示10-9mol/L合成成骨生长肽促成骨作用最强。加入合成成骨生长肽后能够引起ERK1/2信号通路的持续性激活,经U0126预处理后几乎完全阻断了合成成骨生长肽对骨髓间充质干细胞的促成骨作用。结论:合成成骨生长肽可明显促进人骨髓间充质干细胞向成骨方向的转化,在10-9mol/L浓度下促成骨能力最强,其促成骨作用可能是通过激活MAPK家族ERK1/2途径实现的。

关键词：成骨生长肽骨髓间充质干细胞成骨 ERK1/2

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重组成骨生长肽对骨折愈合影响的实验研究

中国组织化学与细胞化学杂志 2003年第3期12卷 311-316页

作者：周凌云杨春波刘宏超余琼徐文弟刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150086 协和医科大学齐齐哈尔市第一医院

目的　成骨生长肽 (osteogenicgrowthpeptide ,OGP)是具有促进成骨和刺激造血等多方面作用的 14肽。本实验旨在研究重组OGP (rOGP)的促成骨活性。方法　一、检验动物模型骨折后不同时期血清Ca、P、AKP (碱性磷酸酶 )水平 ;二、作骨折断... 详细信息

目的　成骨生长肽 (osteogenicgrowthpeptide ,OGP)是具有促进成骨和刺激造血等多方面作用的 14肽。本实验旨在研究重组OGP (rOGP)的促成骨活性。方法　一、检验动物模型骨折后不同时期血清Ca、P、AKP (碱性磷酸酶 )水平 ;二、作骨折断端病理切片 ;以观察rOGP对骨折愈合的影响。结果　rOGP具有降低血清Ca ,升高血清P、AKP及加速骨折愈合的作用 ,且其促成骨效果明显优于目前临床常用的促成骨生物制剂骨宁注射液。

关键词：成骨生长肽 OGP 重组成骨生长肽骨折愈合骨宁注射液

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RP-HPLC测定成骨生长肽鼻喷剂含量

中国现代应用药学 2009年第6期26卷 489-491页

作者：张望刚叶小弟陈爱瑛郑高利陈国神浙江省医学科学院药物研究所杭州310013

目的建立反相高效液相色谱法测定成骨生长肽鼻喷剂含量的方法。方法KromsoilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈A(含0.1%三氟乙酸)和蒸馏水B(含0.1%三氟乙酸)(采用梯度洗脱,比例为0～25min时A从20%～30%);流速为1.0mL·min-1,柱温35... 详细信息

目的建立反相高效液相色谱法测定成骨生长肽鼻喷剂含量的方法。方法KromsoilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈A(含0.1%三氟乙酸)和蒸馏水B(含0.1%三氟乙酸)(采用梯度洗脱,比例为0～25min时A从20%～30%);流速为1.0mL·min-1,柱温35℃,检测波长210nm。结果反相高效液相色谱法测定成骨生长肽的线性范围为0.05～1.0mg·mL-1(n=3),线性方程为Y=14294X+90.2,r=0.9998;最低检测限为6μg·mL-1;日内、日间精密度良好(RSD<2.5%);方法回收率为(100.6±1.6)%。结论本方法专属性强,重复性好,回收率高,可用于该制剂的含量控制。

关键词：成骨生长肽鼻喷剂高效液相色谱法含量测定

基因芯片分析成骨生长肽对OPG^(-/-)小鼠骨髓间充质干细胞的作用

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第27期15卷 4975-4978页

作者：米尔萨力江.亚森郭常军费琴明陈统一崔大敷复旦大学附属中山医院骨科上海市200032 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海市200031

背景:合成成骨生长肽在体外可刺激骨髓间充质干细胞增殖和向成骨细胞分化,体内可增加骨密度改善骨质疏松,但具体作用机制尚未明确。目的:应用小鼠全基因组芯片筛查合成成骨生长肽作用下OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞的差异表达基因,探索... 详细信息

背景:合成成骨生长肽在体外可刺激骨髓间充质干细胞增殖和向成骨细胞分化,体内可增加骨密度改善骨质疏松,但具体作用机制尚未明确。目的:应用小鼠全基因组芯片筛查合成成骨生长肽作用下OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞的差异表达基因,探索成骨生长肽作用下可能影响到的基因与信号传导通路。方法:应用上海伯豪生物技术有限公司提供的小鼠全基因组Oligo芯片,筛选成骨生长肽干预组与空白对照组OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞差异表达基因,实时定量PCR分析验证部分与增殖分化相关的差异表达基因,并结合聚类分析及通路分析来探索成骨生长肽的作用机制。结果与结论:芯片结果显示,成骨生长肽作用后使346条基因表达下调,121条基因表达上调。PCR验证结果与芯片结果相符。经BioCarta通路分析,涉及6条通路蛋白;经KEGG通路分析,涉及12条通路。成骨生长肽对OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞的作用涉及多条信号传导通路,其中MAPK信号传导通路可能对其促增殖起着至关重要作用。

关键词：基因芯片骨髓间充质干细胞成骨生长肽信号传导细胞增殖