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放射损伤对小鼠骨髓间充质干细胞成骨潜能及造血干细胞龛位的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2009年第3期30卷 295-300页

作者：马杰史明霞李炳宗李静房佰俊孙慧赵春华郑州大学第一附属医院血液科河南郑州450052 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院组织工程研究中心北京100005 河南省肿瘤医院血液科河南郑州450008

目的观察放射对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs)体外成骨潜能及体内骨髓造血干细胞(hematologic stemcells,HSCs)龛位的影响。方法分离、培养正常及接受4 Gy放射后不同时间点小鼠BMMSCs,用碱性磷酸酶(a... 详细信息

目的观察放射对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs)体外成骨潜能及体内骨髓造血干细胞(hematologic stemcells,HSCs)龛位的影响。方法分离、培养正常及接受4 Gy放射后不同时间点小鼠BMMSCs,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和实时定量RT-PCR检测成骨分化相关基因,鉴定BMMSCs体外成骨分化潜能的改变,并通过骨组织形态学和免疫组织化学的方法检测放射后小鼠体内成骨细胞及纺锤形的、表达神经钙黏附分子的成骨细胞(spindle-shaped N-cadherin-expressing osteoblasts,SNOs)数量的变化。结果全身照射(total body irradiation,TBI)后早期小鼠BMMSCs的成骨潜能增强,但随后迅速降低;TBI后28 d小鼠骨髓中成骨细胞和SNOs的数量均显著减少。结论4 Gy放射损伤后远期小鼠BMMSCs的成骨潜能显著降低,体内HSCs龛位也明显缩小。

关键词：放射损伤骨髓间充质干细胞成骨潜能骨髓造血干细胞

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肥大型骨不连断端组织成骨潜能的实验研究

中国临床解剖学杂志 2013年第4期31卷 441-446页

作者：陆联松徐佳康庆林薛峰张长青柴益民苏州大学医学部江苏苏州215006 上海第六人民医院骨科上海200233

目的观察肥大型骨不连断端及其周围区域组织的结构特点,评估其成骨潜能。方法收集2009年至2012年因肥大型骨不连在我院行手术治疗患者的骨不连断端标本共25例,通过光学显微镜及透射电镜观察不同区域的组织结构特点和微观特征。采用免疫... 详细信息

目的观察肥大型骨不连断端及其周围区域组织的结构特点,评估其成骨潜能。方法收集2009年至2012年因肥大型骨不连在我院行手术治疗患者的骨不连断端标本共25例,通过光学显微镜及透射电镜观察不同区域的组织结构特点和微观特征。采用免疫组化检测BMP-2的表达,在高倍镜(400倍)下对阳性细胞进行观察并计数,并作统计分析。结果肥大型骨不连断端区域呈现出不同的组织类型,中心区主要是纤维化组织,其内可见大量的成纤维样细胞;边缘区可见大量的软骨细胞,可见少量的新生血管形成;骨痂区见有一定量的成骨细胞及丰富的新生血管。免疫组化染色显示肥大型骨不连断端中心区、周围区及骨痂区组织BMP-2的表达明显不同(P成骨潜能不同。

关键词：肥大型骨不连断端骨痂成骨潜能 BMP-2

重建端粒酶活性的正常人成纤维细胞的成骨潜能研究

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中国修复重建外科杂志 2002年第3期16卷 200-204页

作者：汪铮李莹朱佑明邓廉夫易静汤雪明上海第二医科大学细胞生物学教研室上海200025 上海第二医科大学发育生物学实验室上海市骨伤科研究所

目的　通过重建端粒酶活性延长人成纤维细胞寿命 ,并对其成骨潜能进行研究 ,为解决组织工程骨修复种子细胞老化问题提供实验依据。方法　将人端粒酶催化亚基 (h TERT)基因用电穿孔法导入正常人原代成纤维细胞 ,用 TRAP- PCR检测细胞端... 详细信息

目的　通过重建端粒酶活性延长人成纤维细胞寿命 ,并对其成骨潜能进行研究 ,为解决组织工程骨修复种子细胞老化问题提供实验依据。方法　将人端粒酶催化亚基 (h TERT)基因用电穿孔法导入正常人原代成纤维细胞 ,用 TRAP- PCR检测细胞端粒酶活性 ,用β-半乳糖苷酶活性测定评价细胞衰老情况。在此基础上用骨形成蛋白(BMP- 2 )和肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)联合诱导已重建端粒酶活性的成纤维细胞在体外培养条件下成骨 ,用四环素活体标记和茜素红染色显示钙盐结节形成。结果　转染 h TERT的人成纤维细胞能稳定表达端粒酶活性 ,培养超过 5 0代后细胞仍保持β-半乳糖苷酶阴性。经 BMP- 2和 TNF-α诱导后 ,转染后传 80代的人成纤维细胞仍可形成四环素标记和茜素红染色均为阳性的钙盐结节。结论　重建端粒酶活性。

关键词：组织工程端粒酶成纤维细胞成骨潜能

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颈椎间盘纤维环组织的成骨潜能(英文)

中国组织工程研究与临床康复 2008年第37期12卷 7386-7389页

作者：卢旭华陈德玉袁文王新伟邓廉夫赵定麟上海长征医院骨科上海市200003 上海市伤骨科研究所 200025

背景:椎间盘组织的骨化机制及脊柱韧带、纤维组织的骨化演变过程尚不清楚。目的:实验拟观察颈椎间盘纤维环组织在骨融合过程中的成骨潜能。设计、时间及地点:对比观察,于2006-10在解放军第二军医大学实验动物中心和上海市伤骨科研究所... 详细信息

背景:椎间盘组织的骨化机制及脊柱韧带、纤维组织的骨化演变过程尚不清楚。目的:实验拟观察颈椎间盘纤维环组织在骨融合过程中的成骨潜能。设计、时间及地点:对比观察,于2006-10在解放军第二军医大学实验动物中心和上海市伤骨科研究所完成。材料:健康实验山羊10只,雄性6只,雌性4只。羊用钛合金颈椎空心螺纹式柱状内固定器由常州康辉医疗器械有限公司参照羊的颈椎仿人用钛合金颈椎空心螺纹式柱状内固定器定制。方法:实验山羊按常规颈椎前路减压、内固定施术,随机取颈2～6椎间隙中相邻的2个间隙,每个间隙各置入2枚钛合金颈椎空心螺纹式柱状内固定器,共4枚。3枚钛合金颈椎空心螺纹式柱状内固定器中的填充组织分别为:单纯松质骨,松质骨+纤维环,纤维环。1枚不充填任何组织作为空白对照。主要观察指标:术后6,12周分别拍摄山羊颈椎正侧位X射线平片、颈椎CT平扫观察植入物在位及融合情况。组织学观察各组植骨融合情况及局部组织反应。结果:①X射线平片及CT显示实验山羊内植钛合金颈椎空心螺纹式柱状内固定器在整个实验过程中均在位,无松动、移位、脱落。山羊内植钛合金颈椎空心螺纹式柱状内固定器与椎体的骨-金属界面周围有骨组织生长,与椎体终板接触部位有成骨现象,骨桥形成。②单纯松质骨组新生软骨、骨小梁存在,原植入骨坏死;松质骨+纤维环组纤维组织有坏死、原骨小梁、纤维环周围新生骨存在,新生软骨堆积;纤维环组术后6周纤维组织内有纤维软骨存在,12周新生软骨存在;空白组对照组术后6周组织学观察无阳性染色结果,12周有少量新生软骨。结论:颈椎间盘纤维环组织的成骨形式可能是成纤维细胞的软骨化骨生成。

关键词：成纤维细胞成骨潜能椎间盘纤维环

家兔皮肤成纤维细胞的成骨潜能（组织化学及放射自显影研究）

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中华骨科杂志 1994年第11期14卷 682-685,T004页

作者：柴本甫汤雪明徐荣辉上海伤骨科研究所上海第二医科大学

家兔皮肤的中厚皮片，经制备成小皮块以后作体外培养。成纤维细胞自皮块游出，不断增多，以后开始汇合、形成多层结构。成纤维细胞分泌众多颗粒，堆积在细胞的表面，逐步形成云雾状物质。云雾状物质增大、成为圆形或卵圆形结节。相邻的... 详细信息

家兔皮肤的中厚皮片，经制备成小皮块以后作体外培养。成纤维细胞自皮块游出，不断增多，以后开始汇合、形成多层结构。成纤维细胞分泌众多颗粒，堆积在细胞的表面，逐步形成云雾状物质。云雾状物质增大、成为圆形或卵圆形结节。相邻的结节可被条状小粱联在一起。用新生骨组织的特异标记物一四环素及茜素红，作组织化学观察，结节及小梁均呈阳性反应，说明成纤维细胞所形成的结节及小梁均为骨组织。将体外培养的成纤维细胞用￣３Ｈ－ＴｄＲ标记后注射进同一家兔的桡骨骨折部位，以后经放射自显影技术可以在骨性骨痴的骨小梁内观察到具银颗粒的骨细胞。这说明在骨折愈合过程中成纤维细胞能演变为骨细胞，从而证明成纤维细胞的成骨潜能。

关键词：成纤维细胞成骨潜能组织化学放射自显影

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成纤维细胞成骨潜能的体外培养研究

中华骨科杂志 1995年第12期15卷 845-848页

作者：饶寒敏徐荣辉朱雅萍柴本甫上海第二医科大学附属瑞金医院

本研究采用新西兰种家兔皮肤的成纤维细胞进行体外培养，通过活体相差显微缩时录像、体视显微镜摄影、ＨＥ染色以及组织化学染色等技术做系列观察。发现成纤维细胞在体外培养条件下，不仅能产生粘多糖、胶原等基质成分，而且还能提供钙... 详细信息

本研究采用新西兰种家兔皮肤的成纤维细胞进行体外培养，通过活体相差显微缩时录像、体视显微镜摄影、ＨＥ染色以及组织化学染色等技术做系列观察。发现成纤维细胞在体外培养条件下，不仅能产生粘多糖、胶原等基质成分，而且还能提供钙盐沉积。培养中期，成纤维细胞培养液显示ＡｌＰ阳性反应；培养后期，培养液与成纤维细胞都可显示ＡｌＰ阳性反应。四环素荧光标记证明成纤维细胞所形成的小结与小梁均为新生骨组织。由此表明：皮肤成纤维细胞在体外培养中能显示成骨潜能。

关键词：成纤维细胞体外培养成骨潜能组织化学

山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞成骨潜能的体外观察

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中国修复重建外科杂志 2005年第12期19卷 977-981页

作者：卢旭华赵定麟冯伟许卫兵陈德玉袁文第二军医大学长征医院骨科上海200003

目的诱导培养椎间盘纤维环成纤维细胞,探讨其成骨潜能,比较重组人骨形成蛋白2(recom b inan thum an bone m orphogenetic prote in 2,rhBM P-2)和肿瘤坏死因子α(tum or necros is factor,αTNF-α)对其成骨的不同影响。方法利用体外... 详细信息

目的诱导培养椎间盘纤维环成纤维细胞,探讨其成骨潜能,比较重组人骨形成蛋白2(recom b inan thum an bone m orphogenetic prote in 2,rhBM P-2)和肿瘤坏死因子α(tum or necros is factor,αTNF-α)对其成骨的不同影响。方法利用体外细胞培养技术,建立实验山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞培养体系,根据培养液的不同,分为空白对照组、TNF-α组(加入50 U/m lTNF-α)、rhBM P-2组(加入0.1μg/m l rhBM P-2)和TNF-α+rhBM P-2组(加入50 U/m l TNF-α+0.1μg/m l rhBM P-2),培养3周观察纤维环成纤维细胞在条件培养液诱导下的成骨表型变化、碱性磷酸酶(a lka line phosphatase,ALP)和骨钙素(osteoca lc in,OC)等成骨指标变化。结果各实验组培养液对细胞增殖无明显影响。rhBM P-2组和TNF-α+rhBM P-2组细胞趋化性生长明显,矿化结节出现,茜素红染色呈深红色钙阳性反应。各实验组ALP活力与空白对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论体外培养的椎间盘纤维环成纤维细胞有成骨潜能,rhBM P-2对纤维环成纤维细胞有明确的诱导成骨作用。

关键词：椎间盘纤维环成纤维细胞成骨潜能骨形成蛋白山羊

重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子联合促进兔骨髓基质细胞血管内皮细胞生长因子表达及其成骨潜能

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第10期15卷 1741-1744页

作者：常祺黄昌林黄涛解放军第150中心医院骨科河南省洛阳市471031 解放军第150中心医院全军军事医学研究所河南省洛阳市471031

背景:了解在体外或体内环境下,应用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,能否达到既加强成骨又促进血管内皮细胞生长因子表达的双重作用。目的:观察兔骨髓基质细胞经重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子刺激后,... 详细信息

背景:了解在体外或体内环境下,应用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,能否达到既加强成骨又促进血管内皮细胞生长因子表达的双重作用。目的:观察兔骨髓基质细胞经重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子刺激后,其血管内皮细胞生长因子表达及成骨潜能的变化。方法:取兔双侧股骨骨髓基质细胞,采用骨髓基质细胞体外培养技术,单独或联合以重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞。细胞培养5d后,进行细胞形态、增殖情况、碱性磷酸酶活性、成骨结节、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率等项目的检测。结果与结论:联合先后应用重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子在细胞计数、碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率4个检测项目上优于同时应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子以及单独应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子。结果表明合理的联合使用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,不仅可促进骨髓基质细胞的快速增殖及向成骨细胞转化,还可促进促血管内皮细胞增生的重要介质血管内皮细胞生长因子的表达。

关键词：血管内皮细胞生长因子重组人骨形态发生蛋白2 碱性成纤维细胞生长因子骨髓基质细胞成骨潜能

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人椎间盘细胞成骨潜能的研究

人椎间盘细胞成骨潜能的研究

作者：李博中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

研究背景: 特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者最终大多需要手术矫正,不仅治疗方案复杂,费用高,而且术中使用的各种融合材料包括自体骨、异体骨、人工骨等都存在着各种不足。椎间盘作为脊柱重要的连接单位,如果... 详细信息

研究背景: 特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者最终大多需要手术矫正,不仅治疗方案复杂,费用高,而且术中使用的各种融合材料包括自体骨、异体骨、人工骨等都存在着各种不足。椎间盘作为脊柱重要的连接单位,如果能通过人工干预使之骨化,则有望达到脊柱融合的目的。椎间盘由纤维环和髓核两部分构成,椎间盘纤维环和髓核的共同特点是细胞外基质丰富而细胞数量较少,类软骨细胞存在于髓核及纤维环内层,成纤维细胞主要存在于纤维环的外层。当具有相应遗传物质基础的细胞处于有利于分化逆转的环境中,会出现转分化(transdifferentiation)。由一种分化状态变为另一种分化状态。研究目的: 观察在实验室模拟的体外环境中椎间盘细胞的细胞学特性与表型表达的特点,观察在给予rh-BMP和bFGF进行人工干预后,体外培养的椎间盘细胞的表型表达和分化特性。实验方法: 大体标本取自16-25岁青年患者,椎间盘本身无病变,标本离体后迅速送到实验室,仔细分离出纤维环和髓核,利用体外细胞培养技术建立腰椎间盘纤维环细胞和髓核细胞培养体系。观察这两种细胞在细胞因子rh-BMP和bFGF诱导下的成骨表型及生物学特性的变化。实验中按培养条件分为四个培养组:A组:DMEM/FBS培养液;B组:DMEM/FBS培养液+rh-BMP;C组:DMEM/FBS培养液+bFGF;D组:DMEM/FBS培养液+rh-BMP+bFGF。实验观察内容包括:细胞形态、生长曲线、碱性磷酸酶活力、Ⅰ型胶原表达、Ⅱ型胶原表达、骨钙素表达、茜素红染色等。实验结果: 随着培养时间的延长,纤维环细胞呈明显的趋化性生长,极性排列,局部有细胞基质堆积。rh-BMP对纤维环细胞增殖无明显影响;能够提高碱性磷酸酶的活力;促进Ⅰ型胶原的表达;提高骨钙素的表达;促进钙盐的沉积,形成钙结节。bFGF能够明显促进细胞增殖;降低了碱性磷酸酶的活力;促进Ⅰ型胶原的表达;促进钙盐沉积,形成钙结节。当rh-BMP和bFGF联合使用时,能够促进细胞增殖;对碱性磷酸酶活力无明显影响;能够强力促进骨钙素、Ⅰ型胶原的表达和钙盐沉积,其效果优于单独使用任何一种细胞因子。原代髓核细胞呈多角形,传代后变成星形或长梭形,培养后期呈明显的趋化性生长,极性排列。rh-BMP能够抑制细胞的增殖;提高骨钙素的表达;促进钙盐沉积,形成钙结节。bFGF能够促进细胞增殖;促进Ⅰ型胶原的表达;促进钙盐沉积,形成钙结节。当rh-BMP和bFGF联合使用时,能够促进细胞增殖;促进骨钙素、Ⅰ型胶原的表达和钙盐沉积,戍骨诱导效果最佳。四个培养组的Ⅱ型胶原表达均为阴性。结论: rh-BMP对纤维环细胞体外有明确的成骨诱导作用,bFGF能够增强rh-BMP的成骨诱导作用。 rh-BMP对髓核细胞体外有明确的成骨诱导作用,bFGF能够增强rh-BMP的成骨诱导作用。

关键词：纤维环细胞髓核细胞细胞培养重组人骨形态发生蛋白碱性成纤维细胞生长因子成骨潜能