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组胺受体在小儿尿道横纹肌和小鼠成肌干细胞分化过程中的表达

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中华实用儿科临床杂志 2015年第17期30卷 1328-1331页

作者：陈燕冯锦锦王素云张凤文建国郑州大学第一附属医院临床医学重点学科开放实验室 450052 小儿尿动力学中心和泌尿外科

目的探讨组胺受体4种亚型（HI、H2、H3、H4受体）在小儿尿道横纹肌中和小鼠成肌干细胞C2C12分化过程中的表达。方法收集临床小儿尿道横纹肌标本，石蜡包埋，组织切片，免疫组织化学染色检测H1、H2、H3、H4受体。诱导小鼠成肌干细胞C2C1... 详细信息

目的探讨组胺受体4种亚型（HI、H2、H3、H4受体）在小儿尿道横纹肌中和小鼠成肌干细胞C2C12分化过程中的表达。方法收集临床小儿尿道横纹肌标本，石蜡包埋，组织切片，免疫组织化学染色检测H1、H2、H3、H4受体。诱导小鼠成肌干细胞C2C12成肌分化，实时定量聚合酶链反应测量成肌分化早期标志物desmin，中期标志物myogenin，晚期标志物肌球蛋白重链和组胺4种亚型受体mRNA的表达。免疫荧光染色检测各分化标志物和组胺H3受体蛋白质的表达情况。结果成肌分化过程中desminmRNA在分化2、4、6d后的表达量分别为未分化肌母细胞的12、68、60倍；myogeninmRNA在分化2、4、6d后的表达量分别为肌母细胞的631、1408、914倍；肌球蛋白重链mRNA的表达在分化2、4、6d后，表达量分别为未分化的肌母细胞的7718、9448、286288倍。H1受体mRNA在分化6d后，表达量约为未分化肌母细胞的25％；H2受体mRNA在末分化肌母细胞与分化各阶段的细胞中的表达均无明显变化（F=1．47，P〉0．05）；H3受体mRNA在分化2、4、6d后的表达量是未分化肌母细胞的28、103、198倍；未检测到组胺受体H4受体mRNA的表达。免疫荧光染色发现H3受体蛋白染色随着分化荧光染色强度增加。小儿尿道横纹肌的免疫组织化学染色发现H1、H2、H3受体染色阳性，其中H1受体阳性程度最强，H3受体中度阳性，H2受体弱阳性。结论小儿尿道横纹肌中和小鼠成肌干细胞分化过程中发现组胺亚型H1、H2、H3受体的表达，H3受体的表达量随着成肌分化过程而增加，预示着其可能在成熟横纹肌细胞中发挥功能。

关键词：成肌分化横纹肌组胺组胺受体 H3受体

小鼠脂肪间充质干细胞的分离、鉴定与成肌诱导分化研究

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小鼠脂肪间充质干细胞的分离、鉴定与成肌诱导分化研究

作者：吴海浩南京农业大学

学位级别：硕士

本研究运用Ⅰ型胶原酶消化法分离4周龄雌性ICR小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs),进行体外分离培养,随后观察传代生长过程中的形态变化,绘制生长曲线,进行染色体分析,和细胞周期的测定。随后用RT-PCR法对ADSCs... 详细信息

本研究运用Ⅰ型胶原酶消化法分离4周龄雌性ICR小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs),进行体外分离培养,随后观察传代生长过程中的形态变化,绘制生长曲线,进行染色体分析,和细胞周期的测定。随后用RT-PCR法对ADSCs进行转录因子的检测,流式细胞仪检测细胞表面标志CD29,CD31,CD44,CD45。结果显示小鼠ADSCs体外培养时呈成纤维细胞样,增殖速度快,各代次细胞经历生长潜伏期、指数生长期和平台期,生长状态无异常,细胞表面标志CD29阳性率为95.51%,CD44为31.63%,CD31为20.22%,CD45表达量极少。RT-PCR检测ADSCs的转录因子结果表明,小鼠ADSCs少量表达Oct-4和C-kit,大量表达Sca-1。可经成脂诱导体系诱导成为脂肪细胞,经过苏丹黑染色显蓝色,并表达PPARy2这一脂肪细胞分化过程中重要的调节因子。可经成骨诱导体系诱导成为成骨细胞,经过茜素红染色呈红色,并表达钙骨素基因。用胶原酶和胰酶联合消化法消化分离小鼠原代肌肉卫星细胞,该方法比组织块等方法得到卫星细胞所用时间短。免疫荧光显示其表达FITC标记的Myod抗体和Cy3标记的Desmin抗体。RT-PCR结果显示,小鼠骨骼肌卫星细胞表达MyoD, Myogenin和Myf5等生肌决定因子,其中MyoD的表达量最高。不同代次之间不同生肌决定因子的表达量不同,新分离的骨骼肌卫星细胞和第二代细胞之间MyoD的表达量差异并不显著,而MyoG的表达量差异显著,而Myf5的表达量差异极其显著,说明骨骼肌卫星细胞在传代生长过程中,迅速地发生分化,逐渐变为生长成熟的成肌细胞,失去分化增殖能力。用不同浓度去甲基化试剂5-氮杂胞苷(5-Aza)处理间充质干细胞寻找最佳培养条件后进行成肌检测。免疫荧光结果表明其定向分化为肌肉细胞的能力强,添加10μmol-L-15-Aza与10%的马血清(Horse Serum,HS)的条件培养基可使诱导效果更好。诱导后部分相邻细胞开始融合,形成类似肌管样的细胞,成肌特异性抗体anti-MyoD和anti-Desmin阳性表达。5-Aza单独诱导组、5-Aza与马血清(HS)协同诱导组与阴性对照脂肪间充质干细胞(ADSCs)组和阳性对照第一代骨骼肌卫星细胞(SCs)组,RT-PCR结果表明各组之间生肌决定因子MyoD,Myogenin和Myf5的表达量有差异,说明其成肌分化的程度不同,并有改善空间。因此,本研究分离培养得到小鼠ADSCs,该细胞取材容易,带入杂质细胞很少,分离方法简便,体外生长增殖能力强,经多次传代后细胞仍生长稳定、增殖速度快、贴壁率高。并且在利用5-Aza以及优化的协同诱导体系可以在较短时间内使其诱导分化为成肌细胞样细胞,并具有表达生肌的标志性蛋白MyoD和肌肉骨架蛋白Desmin的能力,可以作为体外肌组织工程的种子细胞。

关键词：脂肪间充质干细胞骨骼肌卫星细胞成肌分化生肌因子

长链非编码RNA MSTRG.14200对猪骨骼肌卫星细胞分化及肌纤维转化的影响

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 453-461页

作者：杨玉铭赵鑫铭谭宝华肖丽窈芦格言翟立君黄奕扬洪林君顾婷华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广州510642 农业农村部华南现代生物种业重点实验室广州510642

[目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)MSTRG.14200对猪骨骼肌卫星细胞(PSCs)成肌分化及不同类型肌纤维转化的影响。[方法]选择3头6月龄杜洛克猪,屠宰后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、背最长肌、腿肌、比目鱼肌和趾长伸肌组织,利用... 详细信息

[目的]探究长链非编码RNA(lncRNA)MSTRG.14200对猪骨骼肌卫星细胞(PSCs)成肌分化及不同类型肌纤维转化的影响。[方法]选择3头6月龄杜洛克猪,屠宰后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、背最长肌、腿肌、比目鱼肌和趾长伸肌组织,利用实时荧光定量PCR检测MSTRG.14200在不同组织中的表达情况。构建MSTRG.14200过表达载体pcDNA3.1-14200并转染PSCs细胞,诱导分化3 d后收集细胞。通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测肌球蛋白重链(MyHC)、肌细胞生成素(MyoG)和肌分化因子(MyoD)、MyHCⅠ、MyHCⅡa、MyHCⅡb和MyHCⅡx mRNA和蛋白表达情况;利用免疫荧光法检测MyHC、MyHCⅠ和MyHCⅡb阳性细胞比率。[结果]MSTRG.14200在杜洛克猪不同组织中均有表达,且在背最长肌中表达量最高,极显著高于其他组织(P肌和比目鱼肌中的表达量存在显著差异(P分化相关基因MyoD和MyHC的mRNA水平极显著升高(P肌纤维类型转化相关基因MyHCⅠ的mRNA和蛋白表达量及阳性细胞比例率均显著或极显著降低(P肌成肌分化以及促进慢肌纤维向快肌纤维转化的作用。研究结果为探究猪骨骼肌纤维类型转化的分子机制提供理论基础。

关键词：猪长链非编码RNA(lncRNA) MSTRG.14200 成肌分化肌纤维转化

耐力运动促进骨骼肌卫星细胞线粒体能量代谢及其对成肌分化的影响

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中国运动医学杂志 2012年第5期31卷 402-408,426页

作者：薄海王逊陈啟祥吉力立张勇军事医学科学院环境医学研究所天津300050 天津体育学院天津市运动生理学与运动医学重点实验室天津300381 明尼苏达大学运动科学系美国MN 55455 武警后勤学院部队训练医学教研室天津300162

目的:观察耐力运动训练对骨骼肌卫星细胞线粒体能量代谢的影响,并探讨其对成肌分化的调控机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为安静对照组(N组)和运动训练组(T组)。12周训练后,两步酶消化法分离骨骼肌卫星细胞,免疫化学染色鉴定卫星细胞纯度... 详细信息

目的:观察耐力运动训练对骨骼肌卫星细胞线粒体能量代谢的影响,并探讨其对成肌分化的调控机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为安静对照组(N组)和运动训练组(T组)。12周训练后,两步酶消化法分离骨骼肌卫星细胞,免疫化学染色鉴定卫星细胞纯度。原代培养并体外诱导成肌分化,倒置显微镜观察卫星细胞成肌分化程度。分别在分化0 h和24 h测定线粒体呼吸功能、ATP合成活力、膜电位和MyHC、COXⅣ、AMPK、p-AMPK、p21蛋白表达量。结果 :免疫化学染色显示desmin阳性细胞>90%,表明获取的卫星细胞纯度高。HE染色结果显示T组腓肠肌肌纤维横截面积显著高于N组(P分化0 h时,T组态3呼吸速率(ST3)、呼吸控制比(RCR)、线粒体ATP合成活力、p21表达较N组显著升高(P分化24 h时,T组肌管形成数量及MyHC表达较N组显著升高(P成活力、膜电位、p21及COXⅣ表达显著增加(P分化卫星细胞线粒体能量代谢水平,继而抑制AMPK活化而增加p21表达,从而促进成肌分化的启动和进程。

关键词：耐力运动骨骼肌卫星细胞线粒体能量代谢原代培养成肌分化

槲皮素调控AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路抑制C2C12细胞凋亡

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中医药信息 2024年

作者：张祥生牛晓莹刘源叶茂林柴爽马江涛河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院)

目的：基于AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路探讨槲皮素对C2C12细胞增殖、成肌分化和凋亡的影响。方法：体外培养C2C12细胞进行成肌诱导，分别采用CCK8法（Cell Counting Kit-8）、ATP染色法及TUNEL法检测槲皮素对C2C12细胞增殖活力、成肌能力... 详细信息

目的：基于AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路探讨槲皮素对C2C12细胞增殖、成肌分化和凋亡的影响。方法：体外培养C2C12细胞进行成肌诱导，分别采用CCK8法（Cell Counting Kit-8）、ATP染色法及TUNEL法检测槲皮素对C2C12细胞增殖活力、成肌能力和凋亡的影响；实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹（Western blot）分别检测Myo D1和Myogenin基因和蛋白表达，筛选合适浓度。再采用合适浓度的槲皮素或AKT1通路抑制剂（LY294002）干预成肌诱导后的C2C12细胞，ATP法和TUNEL法分别检测C2C12细胞成肌能力和凋亡水平，Western blot检测p-AKT1、p-AMPK和p-Foxo3a蛋白表达水平。结果：(1)在一定范围内，槲皮素呈浓度依赖性促进C2C12增殖，12.5μmol/L的槲皮素显著促进C2C12细胞成肌分化，能显著提高成肌标志物Myo D1和Myogenin基因和蛋白表达，因此本研究选择12.5μmol/L的槲皮素用于后续研究。(2)10μmol/L LY294002显著抑制C2C12细胞成肌分化，促进细胞凋亡，抑制p-AKT1和p-AMPK蛋白表达，促进p-Foxo3a蛋白表达；12.5μmol/L槲皮素联合10μmol/L LY294002显著促进C2C12细胞成肌分化，抑制细胞凋亡，促进p-AKT1和p-AMPK蛋白表达，抑制p-Foxo3a蛋白表达。结论：槲皮素通过调控AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路的磷酸化促进C2C12细胞增殖和分化，抑制细胞凋亡。

关键词：槲皮素 AKT1/AMPK/Foxo3a信号通路 C2C12细胞成肌分化凋亡

MSTN-/-牛肌肉泛素化蛋白组学分析及MSTN对牛成肌分化的调控作用机制研究

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MSTN-/-牛肌肉泛素化蛋白组学分析及MSTN对牛成肌分化的调控作用...

作者：朱菲菲天津农学院

学位级别：硕士

骨骼肌的生长发育是一个十分复杂的生物学过程,大量研究表明MSTN可以负向调控肌细胞的生长发育。目前,对MSTN调控肌肉发育的机制研究大多集中在MSTN与靶蛋白间的互作关系,因此,获得其他作用机制有助于进一步了解MSTN调控肌肉发育的过程... 详细信息

骨骼肌的生长发育是一个十分复杂的生物学过程,大量研究表明MSTN可以负向调控肌细胞的生长发育。目前,对MSTN调控肌肉发育的机制研究大多集中在MSTN与靶蛋白间的互作关系,因此,获得其他作用机制有助于进一步了解MSTN调控肌肉发育的过程。1.采用Label Free结合LS-MS/MS技术对MSTN鲁西牛和野生型鲁西牛的肌肉进行泛素化定量蛋白组学分析,共鉴定到135个泛素化肽段,归属于66个蛋白。与野生型牛相比,MSTN牛中显著差异的泛素化肽段共17个,归属于17个蛋白质,其中4个上调,13个下调。生物信息学分析发现泛素化差异蛋白显著富集于肌肉生长发育、能量代谢和泛素蛋白水解等过程,STRING分析结果表明,泛素化差异蛋白主要富集在肌肉生长发育过程中。由于泛素蛋白水解系统可能在MSTN介导的肌肉发育过程中发挥重要作用,而泛素激活酶和泛素结合酶在泛素蛋白水解系统中发挥关键作用,所以结合肌肉萎缩、发育相关的参考文献,选择鉴定到的泛素激活酶UBA1,泛素结合酶UBE2L3和筛选到的泛素化差异蛋白泛素结合酶UBE2N,同时选择MRFs家族的生肌调节因子Myo D1和Myo G,与MSTN共同进行STRING蛋白互作分析,结果发现UBA1、UBE2N、UBE2L3、Myo D1、Myo G均和MSTN具有互作关系。初步推测MSTN可能通过泛素化途径中关键的泛素化酶,进而发挥对牛肌肉发育分化的调控作用。2.由于肌卫星细胞的体外成肌分化过程可以很好地模拟体内的发育过程,为了研究MSTN对牛肌肉发育分化的影响,后续试验均利用实验室已建立的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型。首先利用si-MSTN成功构建了牛骨骼肌卫星细胞MSTN抑制表达模型,采用Ed U细胞增殖实验检测牛骨骼肌卫星细胞中的Ed U阳性细胞数,研究MSTN对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响。通过q RT-PCR和Western blot检测牛骨骼肌卫星细胞分化标志因子My HC的m RNA和蛋白表达水平,同时采用免疫荧光技术进一步检测牛骨骼肌卫星细胞的肌管形成状态,研究MSTN对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的影响。发现干扰MSTN表达可以促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖,促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化。3.进一步研究MSTN与泛素蛋白酶体途径之间的关系。首先利用第二章建立的MSTN抑制表达模型,通过Western blot检测牛骨骼肌卫星细胞中蛋白质的泛素化水平,发现干扰MSTN表达可以促进牛骨骼肌卫星细胞中蛋白质的泛素化。筛选出了最适浓度为1.25μmol/L的蛋白酶体抑制剂MG132处理牛骨骼肌卫星细胞24 h,通过阻断蛋白酶体对泛素化蛋白的降解,从而升高牛骨骼肌卫星细胞中蛋白质的泛素化水平。采用Ed U细胞增殖实验检测牛骨骼肌卫星细胞中的Ed U阳性细胞数,通过Western blot检测牛骨骼肌卫星细胞分化标志因子My HC的蛋白表达水平,研究泛素化对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的影响,发现泛素化可以抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖,促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化。推测MSTN通过泛素蛋白酶体途径影响牛肌肉发育分化。4.泛素激活酶是泛素化酶联反应的起点,而泛素激活酶UBA1负责细胞内99%的泛素活化,同时UBA1是MSTN牛肌肉泛素化蛋白组学分析中的泛素化修饰蛋白,第一章中推测MSTN可能通过泛素化途径中关键的泛素化酶,进而对牛肌肉发育分化发挥调控作用。所以本研究首先利用第二章建立的MSTN抑制表达模型,通过Western blot检测牛骨骼肌卫星细胞中UBA1的表达水平,发现干扰MSTN表达可以促进牛骨骼肌卫星细胞中UBA1的表达。进一步利用si-UBA1成功构建了牛骨骼肌卫星细胞UBA1抑制表达模型,通过干扰UBA1进一步分析MSTN通过泛素蛋白酶体途径对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控机制。采用Ed U细胞增殖实验检测牛骨骼肌卫星细胞中的Ed U阳性细胞数,研究UBA1对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响。通过q RT-PCR和Western blot检测牛骨骼肌卫星细胞生肌调节因子Myo D1和分化标志因子My HC的m RNA和蛋白表达水平,同时采用免疫荧光技术进一步检测牛骨骼肌卫星细胞的肌管形成状态,研究UBA1对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的影响。发现干扰UBA1表达可以下调Myo D1的表达,推测MSTN对牛成肌分化的影响是通过泛素蛋白酶体途径中的泛素激活酶UBA1,进而调控Myo D1的表达,而Myo D1表达水平的改变进一步调控了牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化进程。综上所述,本研究对MSTN牛进行了泛素化蛋白组学分析,生物信息学分析发现泛素化差异蛋白与肌肉发育相关。利用牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型,发现干扰MSTN表达可以上调蛋白质的泛素化水平,而泛素化可以促进骨骼肌卫星

关键词：牛泛素化蛋白组学骨骼肌卫星细胞 MSTN 泛素化成肌分化

miR-181a-5p和内质网应激对成肌分化的调控作用研究

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miR-181a-5p和内质网应激对成肌分化的调控作用研究

作者：徐华明四川农业大学

学位级别：硕士

成肌分化过程涉及多种生物学通路,大量的研究表明miRNAs和内质网应激在成肌分化过程中发挥重要的调控作用。研究显示miR-181a-5p能够靶向结合Hox-A11,上调成肌分化关键基因MyoD, MyoG的表达量,促进成肌分化。此外,内质网应激(Endoplasmi... 详细信息

成肌分化过程涉及多种生物学通路,大量的研究表明miRNAs和内质网应激在成肌分化过程中发挥重要的调控作用。研究显示miR-181a-5p能够靶向结合Hox-A11,上调成肌分化关键基因MyoD, MyoG的表达量,促进成肌分化。此外,内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)能够通过ERS介导的凋亡途径促进分化过程中分化能力较弱的细胞凋亡,提高分化效率。因而我们推测：niR-181a-5p和ERS在成肌分化过程中可能存在协同效应,共同促进成肌分化,但需要进一步的实验验证。本研究分析了C2C12细胞分化过程中miR-181a-5p的表达趋势,通过转染miRNA mimics和inhibitor,实现过表达和干扰miRNA,探究了miR-181a-5p对C2C12细胞增殖、分化、内质网应激和肌纤维类型的影响。用毒胡萝卜素(Thapsigargin, Tg)处理C2C12细胞,使细胞发生ERS,探究了ERS对C2C12细胞内源性miR-181a-5p和成肌分化的影响。最后对Tg预处理的C2C 12细胞和猪肌肉成纤维细胞(Porcine Muscle Fibroblasts, PMFs)过表达和干扰miR-181a-5p,分析了ERS情况下,miR-181a-5p对C2C12细胞和PMFs凋亡的影响,并利用双荧光素酶报告系统验证了猪上GRP78和ssc-miR-181a-5p的靶标关系。主要结果如下(1) miR-181a-5p的种子序列及其在GRP78上的结合序列在不同物种中序列高度保守,荧光定量PCR (RT-qPCR)结果显示miR-181a-5p在C2C12细胞分化过程中的表达量呈上升趋势。(2) RT-qPCR检测发现过表达miR-181a-5p促进C2C12细胞分化,靶基因GRP78的mRNA表达量有所降低,但未达到显著水平(P>0.05),成肌分化相关基因Myod, MyoG, Myf5, Myf6和ERS介导的凋亡通路相关基因ATF6, Casp12, CHOP, EIF-2α的mRNA表达量显著升高(P分化,靶基因GRP78的mRNA表达水平显著升高(P成肌分化相关基因Myod, MyoG, Myf5, Myf6和ERS介导的凋亡通路相关基因ATF6, Casp12, CHOP EIF-α的mRNA表达量显著降低(P肌纤维中Ⅱ型肌纤维的含量升高;抑制miR-181a-5p显著降低了MyHcⅡα的mRNA表达量(P肌纤维的含量。(4)过表达或抑制miR-181a-5p后,利用CCK-8细胞增殖和毒性检测试剂分析miR-181a-5p对C2C12细胞增殖的影响,与对照组相比,过表达和抑制miR-181a-5p对C2C12细胞增殖影响均不显著(P>0.05)。(5)用0.1μM Tg处理C2C12细胞,24 h时RT-qPCR检测发现,Tg处理显著增加了ERS介导的凋亡通路相关基因ATF6,Casp12,CHOP,EIF-2α和GRP78的mRNA表达量(P成功诱导细胞发生ERS。同时,Tg处理后,C2C12细胞中miR-181a-5p和成肌分化相关基因Myf5,Myf6和MyoD的mRNA表达量显著升高(P成功构建猪GRP78基因的双荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告系统检测发现猪GRP78和ssc-miR-181a-5p存在靶标关系,且靶基因的mRNA水平不受调控(P>0.05),初步揭示ssc-miR-181a-5p可能在蛋白水平抑制靶基因的表达。(8)体外分离培养PMFs,0.1μM Tg处理PMFs细胞,向细胞中过表达ssc-miR-181a-5p,2

关键词： miR-181a-5p 内质网应激成肌分化细胞凋亡

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干扰Sirt2促进C2C12成肌细胞分化

中国生物化学与分子生物学报 2014年第7期30卷 714-720页

作者：吴国芳路宏朝贾龙宋成创史新娥杨公社孙世铎西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

Sirt2是组蛋白去乙酰化酶(HDAC III)家族成员之一,对细胞周期、自噬、脂肪细胞分化、神经细胞存活等生物学过程的调节发挥重要作用.目前,Sirt2在肌肉发育过程中的研究尚未见报道.本文通过构建Sirt2慢病毒干扰载体,侵染C2C12成肌细胞,并... 详细信息

Sirt2是组蛋白去乙酰化酶(HDAC III)家族成员之一,对细胞周期、自噬、脂肪细胞分化、神经细胞存活等生物学过程的调节发挥重要作用.目前,Sirt2在肌肉发育过程中的研究尚未见报道.本文通过构建Sirt2慢病毒干扰载体,侵染C2C12成肌细胞,并用细胞免疫荧光化学、real-time PCR和Western印迹方法,检测其对成肌分化标志基因及相关信号通路因子的影响.结果显示,干扰质粒shRNA-663处理C2C12细胞后,Sirt2 mRNA及蛋白质表达水平与对照相比显著下调(P分化第4 d,MyoD,MyoG,MyHC mRNA及蛋白质表达均显著增加(P成肌细胞分化,是肌生成的一个潜在调节因子.

关键词： Sirt2 成肌分化 C2C12 干扰载体

miR-143-3p促进C2C12成肌细胞分化

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中国生物化学与分子生物学报 2013年第6期29卷 569-577页

作者：云青吴国芳魏欢庞卫军杨公社沈清武西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

MicroRNAs(miRNAs)是一类小非编码RNA,近年研究发现其在骨骼肌发育调控中发挥重要作用.为探明miR-143-3p在C2C12成肌细胞分化中的调控作用,采用real-time PCR检测了miR-143-3p在小鼠各组织及C2C12成肌细胞分化过程中的表达;使用miR-143... 详细信息

MicroRNAs(miRNAs)是一类小非编码RNA,近年研究发现其在骨骼肌发育调控中发挥重要作用.为探明miR-143-3p在C2C12成肌细胞分化中的调控作用,采用real-time PCR检测了miR-143-3p在小鼠各组织及C2C12成肌细胞分化过程中的表达;使用miR-143-3p的模拟物和特异性抑制剂分别处理细胞,采用real-time PCR和Western印迹分别检测成肌因子MyoG和成肌标志基因MyHC mRNA和蛋白水平的变化;用免疫荧光染色的方法观察肌管的形成.结果显示,miR-143-3p在小鼠各组织中均有表达,并且随着细胞分化表达量逐渐增加;C2C12成肌细胞过表达miR-143-3p,与对照组相比,成肌调控因子MyoG和成肌标志基因MyHC的mRNA和蛋白表达均显著升高,肌管数量明显增多;抑制剂处理结果显示,细胞分化被显著抑制.检测miR-143-3p对MyHC各亚型表达的影响发现,miR-143-3p表达的变化并不直接影响MyHC各亚型的表达.以上结果说明,miR-143-3p在骨骼肌和成肌细胞中均有表达,能够促进C2C12成肌细胞分化,但并不直接调控MyHCs的表达.

关键词：微RNA miR-143-3p C2C12成肌细胞成肌分化