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2005'中国修复重建外科论坛

作者：陈希哲林云锋田卫东唐尤超李声伟四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科

目的分离人体脂肪基质细胞,经过诱导培养后研究其向骨骼肌细胞分化的潜能。方法通过脂肪抽吸术获取健康成人脂肪,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化,得到脂肪基质细胞在BGJb培养基中原代培养10d,传代细胞在含有10%胎牛血清、5%马血清及50μmo... 详细信息

目的分离人体脂肪基质细胞,经过诱导培养后研究其向骨骼肌细胞分化的潜能。方法通过脂肪抽吸术获取健康成人脂肪,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化,得到脂肪基质细胞在BGJb培养基中原代培养10d,传代细胞在含有10%胎牛血清、5%马血清及50μmol/L氢化可的松的DMEM/F-12培养基中进行成肌诱导培养20d。细胞爬片经4%多聚甲醛固定后,用甲苯胺蓝、Mallory磷钨酸苏木素及myosin单克隆抗体免疫细胞化学染色。结果经过成肌诱导培养的细胞与常规培养的脂肪基质细胞在形态上有明显的差异,表现为细胞体积增大,单个核的细胞融合形成多核的肌管样结构,胞浆内细胞器发达,肌浆网扩张并形成肌原纤维骨骼肌特异性的myosin表达阳性。而未经诱导的脂肪基质细胞在相同时间点无此现象。结论人类脂肪基质细胞中存在着成体干细胞,在成肌诱导培养条件下具有向骨骼肌细胞分化的潜能,脂肪组织可能成为骨骼肌组织工程的又一种子细胞库。

关键词：脂肪组织基质细胞细胞培养成肌分化

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共培养体系下小鼠巨噬细胞与骨骼肌细胞间的相互作用研究

共培养体系下小鼠巨噬细胞与骨骼肌细胞间的相互作用研究

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2019中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与慢性病防控”学术研讨会

作者：罗维李显王博发周越北京体育大学运动生理学教研室

研究目的近年来炎症学说在胰岛素抵抗发病机制中的作用备受关注,巨噬细胞是慢性炎症中重要的炎症细胞,骨骼肌萎缩加快胰岛素抵抗的发生发展,因此研究巨噬细胞与骨骼肌细胞肌生成间的相互作用及机制对于探讨胰岛素抵抗发生发展的病理机... 详细信息

研究目的近年来炎症学说在胰岛素抵抗发病机制中的作用备受关注,巨噬细胞是慢性炎症中重要的炎症细胞,骨骼肌萎缩加快胰岛素抵抗的发生发展,因此研究巨噬细胞与骨骼肌细胞肌生成间的相互作用及机制对于探讨胰岛素抵抗发生发展的病理机制具有重要意义。本研究目的在于建立巨噬细胞RAW264.7和成肌细胞C2C12共培养体系,检测该共培养体系下培养不同时长RAW264.7和C2C12间的相互作用。

关键词：成肌细胞巨噬细胞细胞共培养成肌分化极化表型

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TCDD对肌肉细胞中乙酰胆碱酯酶的影响

TCDD对肌肉细胞中乙酰胆碱酯酶的影响

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2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会

作者：罗亚利夏英杰谢群慧詹华强赵斌中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室中国科学院大学香港科技大学生命科学部

目的:二恶英是典型的持久性有机污染物,2,3,7,8-四氯二苯并对二恶英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD）是其中毒性最强的化合物。二恶英可以通过芳香烃受体（Arylhydrocarbonreceptor,AhR）信号通路,干扰一系列基因的表达,... 详细信息

目的:二恶英是典型的持久性有机污染物,2,3,7,8-四氯二苯并对二恶英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD）是其中毒性最强的化合物。二恶英可以通过芳香烃受体（Arylhydrocarbonreceptor,AhR）信号通路,干扰一系列基因的表达,从而造成细胞功能的紊乱,最终导致多种毒理效应的发生,包括影响肌肉的发育和运动功能等。研究表明,高剂量TCDD暴露后,大鼠体重明显下降,并可见明显的肌肉萎缩。此外,流行病学研究也发现二恶英暴露人群常见肌肉疼痛和肌无力,进一步说明肌肉是二恶英暴露的靶组织。由此可以推测,二恶英很有可能干扰骨骼肌功能相关的基因与蛋白,从而造成上述效应。乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase,EC3.***.1.7,AChE）是调控神经肌肉传导功能的重要功能蛋白,也是有机磷农药等污染物毒性评价的重要生物标志物。AChE可以来源于骨骼肌细胞,是成熟肌管中表达的重要标志性蛋白之一。那么二恶英是否会干扰骨骼肌细胞中AChE的表达和功能呢?为解答这一问题,本研究中采用小鼠成肌细胞C2C12和具有自主收缩功能的大鼠原代骨骼肌细胞的体外成肌分化系统来研究TCDD对肌源性AChE基因表达和酶活性的影响。方法:我们在诱导C2C12和原代骨骼肌细胞分化的同时分别加入TCDD（10-12,10-11,10-10,10-9mol/L）,以0.01%的DMSO为对照。在肌管分化的中期和末期收集细胞进行定量PCR（qPCR）实验,研究AChE基因表达水平的变化,并用Ellman法分析AChE酶活性的变化。此外,还应用AhR拮抗剂CH223191（10-6 mol/L）进行预处理,研究AhR在TCDD诱导的AChE异常中的作用。结果:（1）在C2C12细胞和大鼠原代骨骼肌细胞分化过程中,AChE基因表达水平及酶活性逐渐升高。（2）在TCDD连续处理至肌管分化中期和末期,C2C12细胞中AChE的酶活性及基因表达受到显著抑制。但是,AhR拮抗剂CH223191无法有效阻止TCDD对AChE表达和酶活性的抑制作用。（3）在大鼠原代骨骼肌细胞分化过程中,TCDD对AChE没有影响。结论:在C2C12细胞中AhR不能直接介导TCDD对肌源性AChE表达的抑制作用。而大鼠原代骨骼肌细胞中的AChE对TCDD处理不敏感,可能与细胞的自主收缩活动的代偿保护作用有关。

关键词：二恶英 C2C12 大鼠原代骨骼肌细胞乙酰胆碱酯酶芳香烃受体成肌分化

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山羊SKIP基因的分离、鉴定及与生长性状的关联分析

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华中农业大学学报 2017年第6期36卷 83-88页

作者：熊琪张年李小姗李晓锋索效军杨前平陶虎陈明新湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064 华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/农业部猪遗传育种重点开放实验室/生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为研究SKIP基因对山羊生长发育的影响,并寻找与山羊生长性状相关的分子标记,利用绵羊与牛SKIP基因的同源序列设计引物,RT-PCR扩增得到一段长1 350bp的山羊SKIP基因表达序列,包括其完整编码区序列,编码449个氨基酸的蛋白。通过序列Blast... 详细信息

为研究SKIP基因对山羊生长发育的影响,并寻找与山羊生长性状相关的分子标记,利用绵羊与牛SKIP基因的同源序列设计引物,RT-PCR扩增得到一段长1 350bp的山羊SKIP基因表达序列,包括其完整编码区序列,编码449个氨基酸的蛋白。通过序列Blast比较和系统发育树的构建,发现山羊SKIP与绵羊SKIP序列相似性最高(99.52%)。利用生物信息学分析SKIP蛋白的理化性质,预测SKIP蛋白分子质量为52ku,等电点为5.18,包含典型的疏水区域和磷脂酰肌醇5-磷酸磷酸酶结构域,定位在细胞质(60.9%)和细胞核(26.1%)中。间接免疫荧光试验验证了SKIP的细胞定位,并发现位于细胞核中的SKIP在成肌细胞分化过程中转移到细胞质。通过波尔山羊和麻城黑山羊的DNA混池测序,发现SKIP内含子2有一处G/A突变,利用PCRRFLP方法对波尔×麻城黑山羊F2代杂交后代进行基因分型,性状关联分析发现该单核苷酸多态性位点(SNP)与出生体质量、胸围、管围、身高等性状显著相关,等位基因G与生长呈正相关。

关键词：单核苷酸多态性位点山羊骨骼肌和肾脏富集的肌醇磷酸酶生长性状成肌分化

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MSTN基因对牛肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响

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中国畜牧兽医 2021年第10期48卷 3554-3564页

作者：盛辉郭益文张林林谭皓云胡德宝李新丁向彬郭宏天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300384

为探究肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)对牛骨骼肌生长发育的作用机制,本研究前期利用定量蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学分析野生型蒙古牛(***)和MSTN+/-蒙古牛(***+/-)腿臀肌肌肉组织中蛋白质水平和磷酸化修饰水平的差异变化,使用已建... 详细信息

为探究肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)对牛骨骼肌生长发育的作用机制,本研究前期利用定量蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学分析野生型蒙古牛(***)和MSTN+/-蒙古牛(***+/-)腿臀肌肌肉组织中蛋白质水平和磷酸化修饰水平的差异变化,使用已建立的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型,检测设计合成的MSTN siRNA(si-MSTN)干扰效果;采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测转染si-MSTN的增殖期(GM)和分化第3天(DM3)牛骨骼肌卫星细胞中肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的mRNA和蛋白水平的表达变化,研究敲低MSTN表达对肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响。结果显示,在MSTN+/-蒙古牛肌肉组织中共鉴定到16个肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因表达丰度上调;转染si-MSTN细胞中的MSTN表达水平极显著降低(P肌卫星细胞中,肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因ENAH、ACTN4和Cdc42的mRNA水平均显著升高(P肌卫星细胞中,ENAH、CFL1、SCIN和Cdc42基因mRNA水平均显著升高(P肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的表达,探明了MSTN可能通过介导肌动蛋白细胞骨架调节通路影响牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的分子机制,为进一步研究MSTN对牛成肌分化的调控机制提供参考。

关键词：牛肌肉生长抑制素骨骼肌卫星细胞肌动蛋白细胞骨架调控通路增殖成肌分化

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NF-κB和Nrf2信号通路在成肌细胞抗氧化应激中的作用

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山西农业科学 2023年第11期51卷 1252-1259页

作者：李君王鹤洁安洁李俊玲窦敏敏翟竹汇何浪李振月秦健杜荣山西农业大学动物医学学院山西太谷030801 山西农业大学生命科学学院山西太谷030801 山西农业大学实验教学中心山西太谷030801

成肌分化是动物肌肉发育的关键环节,与其健康和生产性能密切相关。为研究成肌细胞抗氧化应激的机制,试验分离了绵羊胎儿成肌细胞,利用地塞米松处理分化中的成肌细胞建立氧化应激模型;试验分为4组,包括正常分化48 h组(N 48 h)、地塞米松... 详细信息

成肌分化是动物肌肉发育的关键环节,与其健康和生产性能密切相关。为研究成肌细胞抗氧化应激的机制,试验分离了绵羊胎儿成肌细胞,利用地塞米松处理分化中的成肌细胞建立氧化应激模型;试验分为4组,包括正常分化48 h组(N 48 h)、地塞米松处理分化48 h组(Dex 48 h)、正常分化72 h组(N 72 h)、地塞米松处理分化72 h组(Dex 72 h),通过倒置显微镜观察各组细胞的形态变化,利用ROS检测试剂盒检测ROS含量,用RNA-seq检测NF-κB和Nrf2信号通路相关基因mRNA的表达情况,并采用皮尔森相关系数法分析相关性,用STRING数据库分析蛋白的互作关系。结果表明,地塞米松诱导的氧化应激对成肌分化具有明显的抑制作用,且抑制作用随处理时间的延长而增加;ROS含量较各自对照组均显著增加,且随着处理时间的延长而增加。由RNA-seq分析结果可知,与对照组相比,地塞米松处理组NF-κB和Nrf2信号通路被激活,上游基因P65、IKK2、IκBα、IκBβ、Nrf2、Keap1以及相应下游靶基因SOD1、SOD2、FHC、HO-1、GSH-Px的mRNA相对表达量均显著升高,各基因之间存在不同程度的相关性以及错综复杂的蛋白互作关系,其中Keap1基因是联系2条通路的重要枢纽。综上所述,在成肌细胞分化过程中,NF-κB和Nrf2信号通路交互联系,共同在地塞米松诱导的成肌细胞氧化应激中发挥抗氧化作用。

关键词：绵羊成肌细胞成肌分化 RNA-seq 氧化应激 NF-κB通路 Nrf2通路

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