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HLA-G在HtLV-1病毒感染免疫中的作用研究

HLA-G在HTLV-1病毒感染免疫中的作用研究

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作者：赵桂增新乡医学院

学位级别：硕士

背景成人t淋巴细胞白血病病毒I型(Human t-cell leukemia virus type 1,HtLV-1)属于一种δ逆转录病毒,可以通过临床输血、毒品注射或性接触等途径传播。病毒感染后,HtLV-1可以感染多种固有免疫细胞并造成其功能损害,致使其成功逃脱免疫... 详细信息

背景成人t淋巴细胞白血病病毒I型(Human t-cell leukemia virus type 1,HtLV-1)属于一种δ逆转录病毒,可以通过临床输血、毒品注射或性接触等途径传播。病毒感染后,HtLV-1可以感染多种固有免疫细胞并造成其功能损害,致使其成功逃脱免疫监视可长达二十余年。HtLV-1作为内源性抗原,主要由组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHCⅠ)递呈给t淋巴细胞识别并诱导免疫反应,因此,MHCⅠ类分子在HtLV-1感染过程中发挥重要作用。人类白细胞抗原G(Human leukocyte antigen-G,HLA-G)是一种功能性非经典MHCⅠ类分子,主要通过与免疫细胞表达的特异性受体结合发挥免疫抑制作用,包括抑制CD4t细胞的增殖和树突状细胞的抗原提呈作用,抑制NK细胞和CD8t细胞的杀伤功能,促进抑制性受体的表达。HLA-G具有免疫耐受功能,在诱导HIV免疫逃逸中发挥作用,那么HIV样的逆转录病毒HtLV-1感染细胞后,是否也会诱导HLA-G的高表达?高表达的HLA-G是否会影响HtLV-1的复制或免疫逃逸?有待我们进一步研究。目的研究人类白细胞抗原G(HLA-G)在成人t淋巴细胞白血病病毒I型(HtLV-1)感染中的表达情况,探讨HLA-G在HtLV-1病毒感染免疫中的作用。方法***2细胞(HtLV-1t细胞)分别与HeLa和tHP1细胞共培养24小时,以Mt2-HeLa、Mt2-tHP1细胞共培养体系建立HtLV-1病毒感染模型,qRt-PCR检测病毒感染后宿主细胞HLA-G异构体mRNA的表达情况。2.利用Jurkat细胞(HtLV-1t细胞)分别与HeLa和tHP1细胞共培养24小时作为阴性对照组;以Mt2细胞分别与HeLa和tHP1细胞共培养24小时作为实验组,Western blot检测病毒感染后宿主细胞HLA-G蛋白的表达情况。3.利用能识别HLA-G1的特异性抗体对HeLa和tHP1细胞进行荧光染色,流式细胞术检测病毒感染后宿主细胞HLA-G1的表达情况。4.我们在HeLa细胞中通过基因转染上调HLA-G的表达,再利用HtLV-1病毒感染细胞,从蛋白水平上验证HtLV-1病毒tax蛋白的表达情况。5.我们利用siRNA技术,将HeLa细胞中HLA-G基因沉默以后,再利用HtLV-1病毒感染细胞,从蛋白水平上验证HtLV-1病毒tax蛋白的表达情况。结果***-1病毒感染宿主细胞均能诱导HLA-G异构体mRNA的差异性表达,以HLA-G1和G5为主,其余异构体无明显改变。*** blot结果显示HtLV-1病毒感染HeLa细胞后明显上调HLA-G蛋白的表达;感染tHP1细胞诱导了HLA-G蛋白的表达。3.流式细胞术结果显示HtLV-1病毒感染HeLa细胞后明显上调HLA-G1的表达;感染tHP1细胞后HLA-G1的表达显著增加,与对照组相比,差异均有统计学意义(P细胞被HtLV-1病毒感染后tax蛋白明显升高。证明随着HLA-G的高表达,HtLV-1病毒tax蛋白也显著增加。***-G基因沉默的HeLa细胞被HtLV-1病毒感染后tax蛋白明显降低。证明随着HLA-G的低表达,HtLV-1病毒tax蛋白也显著降低。结论免疫耐受分子HLA-G在HtLV-1病毒感染细胞后表达量明显上升,高表达的HLA-G有助于HtLV-1病毒的传播和复制,这或许是导致HtLV-1病毒持续感染的原因之一。

关键词：人类白细胞抗原G 成人t淋巴细胞白血病病毒ⅰ型感染免疫耐受

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