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鸡传染性贫血病毒感染特性与致病特征分析

鸡传染性贫血病毒感染特性与致病特征分析

作者：冯笑艳中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡传染性贫血(Chicken infectious anemia,CIA)是由鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CAV)引起的一种免疫抑制及垂直传播病,典型症状是贫血及免疫器官萎缩,目前该病呈世界范围内流行。我国最早于1992年首次分离到CAV,... 详细信息

鸡传染性贫血(Chicken infectious anemia,CIA)是由鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CAV)引起的一种免疫抑制及垂直传播病,典型症状是贫血及免疫器官萎缩,目前该病呈世界范围内流行。我国最早于1992年首次分离到CAV,目前在全国范围内广泛流行,给我国养禽业带来了巨大的经济损失。由于无特效药和疫苗,该病主要通过生物安全进行防控。但由于目前对CAV感染后的排毒规律、感染特性与发病特征等基础数据研究不够深入,严重制约了该病的高效净化。本研究通过现地鸡群检测及人工感染实验对CAV流行毒株感染特性与发病特征展开研究,为防控净化工作提供了重要参考意见。为了解CAV感染鸡抗体与病原间的相关性,对黑龙江省两个无明显临床症状现地鸡群(B和S)分别通过ELISA和PCR方法进行CAV抗体及病原检测。结果显示,B群和S群CAV抗体阳性率分别为62.7%(79/126)、68.2%(88/129),病原阳性率分别为43.0%(49/114)、62.3%(48/77)。一一对应每只鸡的血清抗体与病原检测结果发现,B群及S群抗体与病原双阳性的鸡中,分别有62.5%(20/32)、58.3%(21/36)的鸡抗体滴度在1.0×10及以上,高滴度抗体下病原仍可存在。为进一步验证病原的存在,从CAV阳性全血中分离获得毒株HLJ/2022并分析其VP1基因序列,同时对两鸡群环境进行病原检测。结果显示,分离株HLJ/2022的VP1基因序列具有强毒的分子特征,环境拭子阳性率为10.0%。为了解不同日龄SPF鸡感染CAV后的临床症状、排毒规律、血清抗体消长规律、病毒组织分布规律、水平及垂直传播能力,将CAV分离毒株JL17/1204分别通过人工和同居途径对1日龄及28日龄的SPF鸡进行感染,采集样品并进行检测。临床观察结果显示,1日龄感染组及同居组鸡的死亡率分别为50.0%、10.0%,死亡时间为感染后12～15天,发病鸡瘦小,精神沉郁,发病率分别为100.0%、20.0%;28日龄感染组及同居组鸡感染后无死亡,发病率分别为10.0%、8.0%。剖检结果显示,1日龄感染组及同居组鸡均在3～21 dpi(day post infection,dpi)出现胸腺萎缩和/或贫血症状;28日龄感染组及同居组鸡分别在3～9 dpi、7～9 dpi出现胸腺萎缩和/或贫血症状;排毒检测结果显示,1日龄感染组鸡呼吸道、消化道排毒期分别为3～14 dpi、5～14 dpi;1日龄同居组鸡呼吸道、消化道排毒期分别为同居后5～84 d、7～42 d,1日龄感染组与同居组鸡排毒率分别为94.7%(或以上)、100.0%;28日龄感染组鸡呼吸道、消化道排毒期分别为3～9 dpi、5～14 dpi;28日龄同居组鸡呼吸道、消化道排毒期分别为同居后5～9 d、5～42 d,28日龄感染组与同居组鸡排毒率分别为91.7%、75.0%;血清抗体检测结果显示,1日龄及28日龄感染组鸡血清抗体转阳时间分别为9 dpi、3 dpi,抗体转阳率分别为50.0%、100.0%,1日龄及28日龄同居组鸡血清抗体转阳时间分别晚于感染组鸡5 d、18 d,抗体转阳率分别为100.0%、93.3%;病毒组织分布及载量检测结果显示,1日龄及28日龄感染组鸡分别在5-21 dpi、3-21 dpi在胸腺、脾、肝、肾、法氏囊、抗凝血中保持高拷贝复制,随后下降,同居组鸡各组织病毒初始检出时间在同居后9-11 d不等,病毒载量趋势为先上升后下降,同居后21 d为载量高峰,其中胸腺的检出时间最长、病毒载量最高;感染鸡产蛋后收集鸡蛋进行孵化并对胚体及尿囊液进行病原检测,结果显示CAV阳性率分别为18.5%、33.3%,以上结果显示,SPF鸡与感染鸡同居后可感染CAV并进行排毒、可引发临床症状、血清抗体转阳及子代胚体、尿囊液带毒,表明CAV JL17/1204株具有很强的水平和垂直传播能力。本研究通过对现地鸡群展开血清学及病原学检测,发现临床上CAV抗体阳性鸡群带毒率高达43.0%～62.3%,这可能是该病目前发病率高、难于防控的重要原因。人工感染实验发现,CAV分离毒株JL17/1204株对1日龄SPF鸡具有较高的发病率和死亡率,相比之下对28日龄SPF鸡致病性减弱,但也可引起感染鸡通过呼吸道、消化道排毒,进而传播给同居的鸡,人工及同居感染后均能引起鸡体血清抗体的转阳及滴度升高,也可通过蛋将病毒传给子代,具有较强的水平及垂直传播能力。本研究系统地评价了CAV的致病特征、排毒规律、血清抗体消长规律、水平及垂直传播能力,研究结果为鸡群科学开展CAV的净化提供了理论指导和科学依据。

关键词：鸡传染性贫血病毒血清学病原学 SPF鸡感染特性

1株感染多种致病性大肠杆菌噬菌体的生物学特性研究

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畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 282-289页

作者：林焱罗润波刘燕坤朱伟云国家动物消化道营养国际联合研究中心江苏省消化道营养与动物健康重点实验室南京农业大学消化道微生物研究室南京210095 西藏农牧学院动物科学学院林芝860000

旨在测定此前从断奶前仔猪粪样中分离得到的1株大肠杆菌噬菌体C6在致病性大肠杆菌上的生物学特性,并比较该噬菌体在不同致病菌上的感染特性。利用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在致病性大肠杆菌上的... 详细信息

旨在测定此前从断奶前仔猪粪样中分离得到的1株大肠杆菌噬菌体C6在致病性大肠杆菌上的生物学特性,并比较该噬菌体在不同致病菌上的感染特性。利用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在致病性大肠杆菌上的宿主谱,通过噬菌斑形态、最佳感染复数(MOI)、成斑率(EOP)、吸附率、一步生长曲线以及抑菌曲线等来评价噬菌体在多株致病菌上的感染特性。结果显示:噬菌体C6可感染1株非致病性大肠杆菌和4株致病性大肠杆菌,包括大肠杆菌O157(E.coli W1)、2株产志贺毒素大肠杆菌(STEC W3、STEC W5)和1株肠致病性大肠杆菌(EPEC 143)。通过比较噬菌体C6在4株致病菌上的各项感染特性指标发现:噬菌斑大小和成斑率E.coli W1>EPEC 143>STEC W3>STEC W5;吸附率E.coli W1>EPEC 143、STEC W3、STEC W5;最佳MOI EPEC 143、STEC W3、STEC W5>E.coli W1;液体LB中生长能力和抑菌能力E.coli W1>STEC W3>EPEC 143、STEC W5。噬菌体C6为T4样噬菌体,可感染多株致病性大肠杆菌,在不同致病菌上的感染特性存在差异,但均能显著抑制致病菌的生长。

关键词：大肠杆菌噬菌体大肠杆菌O157 产志贺毒素大肠杆菌肠致病性大肠杆菌感染特性抑菌效力

温度、pH和亚硝酸盐水平对拟态弧菌的感染相关表型及胞外产物特性的影响

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温度、pH和亚硝酸盐水平对拟态弧菌的感染相关表型及胞外产物特性...

作者：康振亚四川农业大学

学位级别：硕士

拟态弧菌(Vibrio mimicus)是一种重要的水生生物病原菌,广泛存在于海水、淡水和淡咸水等各种水环境中,可感染鳌虾、蟹、龟和多种鱼类而致病,尤其是对以黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、南方鲇(Silurus meridionalis)等为代表的淡水鲇... 详细信息

拟态弧菌(Vibrio mimicus)是一种重要的水生生物病原菌,广泛存在于海水、淡水和淡咸水等各种水环境中,可感染鳌虾、蟹、龟和多种鱼类而致病,尤其是对以黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、南方鲇(Silurus meridionalis)等为代表的淡水鲇形目鱼类危害最为严重。研究表明,环境因子温度、pH、亚硝酸盐水平在疾病的发生与发展中具有重要的影响作用。为探究环境因子对拟态弧菌的感染与致病相关特性的影响,本研究通过设定温度(13℃、18℃、23℃、28℃、33℃)、pH(6.0、7.0、8.0、8.5、9.0)、亚硝酸盐水平(0.00、0.10、1.25、3.75、5.00 mg/L)的单因子变化,研究在这些条件下拟态弧菌的增殖、运动、自聚集、生物膜形成、胞外产物(Extracellular products,ECPs)特性及其转录组的变化,其研究结果将为进一步阐释拟态弧菌的感染与致病机制提供资料,同时也为养殖生产中通过调控水环境防控拟态弧菌感染提供参考。在13～33℃时,随温度升高拟态弧菌的增殖、泳动性增强,自聚集、生物膜与胞外产物的蛋白量、溶血活性与酶活性呈波动性。温度在18℃时,ECPs的蛋白量、酶活性、溶血性最强,此时拟态弧菌的能量合成代谢、蛋白质合成与蛋白质跨膜运输等过程较活跃,溶血素等毒力基因高表达;23℃时,自聚集与生物膜形成最强。在pH 6.0～9.0时,随pH升高拟态弧菌的增殖与ECPs溶血活性先增强后减弱,自聚集、生物膜形成、ECPs的蛋白量与酶活性及其对斑马鱼的毒力等呈波动性。pH 6.0时,自聚集、生物膜形成、ECPs的蛋白量、酶活性最强;pH 8.5时增殖最强,但自聚集、生物膜形成以及ECPs的蛋白量、酪蛋白酶酶活性、溶血性及其对斑马鱼的毒力弱,此时拟态弧菌糖代谢、氧化磷酸化膜转运基因表达上调,嘌呤与嘧啶合成与叶酸代谢、核苷酸代谢等基因表达下调。在亚硝酸盐水平0.0～5.0 mg/L时,亚硝酸盐水平对拟态弧菌的增殖无显著影响,但随亚硝酸盐水平升高其泳动性先下降后上升趋势,自聚集与生物膜形成、ECPs的酶活性与溶血性呈波动性,ECPs的蛋白量呈上升趋势。0.1 mg/L时拟态弧菌泳动性、自聚集、生物膜形成最强;2.5 mg/L时泳动、自聚集、生物膜形成、ECPs的卵磷脂酶、明胶酶活性最弱,ECPs对斑马鱼的毒力最强,此时拟态弧菌的氨基酸代谢、氮代谢、尿素循环等过程活跃,这可能引起拟态弧菌表型变化。温度、pH和亚硝酸盐水平变化对拟态弧菌的增殖、自聚集、泳动、生物膜形成等感染相关表型及其胞外产物特性均有影响,它们通过调控多种代谢途径及其相关基因表达影响拟态弧菌表型变化。

关键词：拟态弧菌环境因子感染特性胞外产物转录组分析

回顾性分析CRE感染特性与药敏试验结果情况

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中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2023年第2期 43-45页

作者：高礼信重庆市忠县中医医院重庆404300

对CRE感染的基本特性以及在进行治疗时间的药敏情况做出回顾性分析。方法从2020年1月到2022年1月时间段内, 选取100例在我院接受抗碳青霉烯类肠杆菌治疗的患者作为实验分析的对象,详细观察患者在接受治疗过程中的药敏试验结果、标本分... 详细信息

对CRE感染的基本特性以及在进行治疗时间的药敏情况做出回顾性分析。方法从2020年1月到2022年1月时间段内, 选取100例在我院接受抗碳青霉烯类肠杆菌治疗的患者作为实验分析的对象,详细观察患者在接受治疗过程中的药敏试验结果、标本分布情况、CRE类型情况和科室分布情况等等。结果在本次实验研究中发现,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌类型占比较大,分别为49.00%和25.00%,聚泉沙雷菌和黏质沙雷菌占比较少,分别为4.00%和5.00%。在科室分布研究中发现,ICU科室的占比最高为36.00%。在标本分布研究中发现,痰液标本和尿液标本占比最高,分别为55.00%和30.00%,穿刺引流标本占比最低,为5.00%。研究分析抗碳青霉烯类肠杆菌药敏试验结果发现,抗碳青霉烯类肠杆菌具有很强的耐药性,尤其是对美罗培南、亚胺培南、氨苄西林、头孢西丁、头孢唑啉、氨曲南、厄他培南。结论在碳青霉烯类肠杆菌研究中,最为常见的肺炎雷博菌,ICU科室是发病率最高的科室,多在痰液标本和尿液标本中出现。临床治疗期间,要选择合适的药物进行治疗。

关键词： CRE感染药敏试验感染特性

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柞蚕微孢子虫对不同昆虫细胞的感染特性分析

蚕业科学 2019年第5期45卷 699-705页

作者：岳冬梅王林美李佩佩叶博赵振军张波李树英范琦辽宁省海洋水产科学研究院

为建立柞蚕微孢子虫体外培养增殖方法,找到适合微孢子虫增殖的昆虫细胞,将柞蚕微孢子虫接种High5、Sf21和柞蚕卵巢原代细胞后进行显微观察,分析不同昆虫细胞对柞蚕微孢子虫的敏感性。结果发现,柞蚕微孢子虫可以通过吞噬或胞饮作用进入Hi... 详细信息

为建立柞蚕微孢子虫体外培养增殖方法,找到适合微孢子虫增殖的昆虫细胞,将柞蚕微孢子虫接种High5、Sf21和柞蚕卵巢原代细胞后进行显微观察,分析不同昆虫细胞对柞蚕微孢子虫的敏感性。结果发现,柞蚕微孢子虫可以通过吞噬或胞饮作用进入High5和Sf21细胞中,但在这2种细胞的整个病变过程中,均未观察到孢子增殖阶段的其他形态;柞蚕微孢子虫接种柞蚕卵巢原代细胞后,在细胞病变过程中可以观察到裂殖体、产孢体、孢子母细胞等增殖阶段的孢子形态,后期扩繁的孢子大量形成并释放。结果表明,柞蚕微孢子虫在High5、Sf21这2种细胞中不能扩繁增殖,但可以侵染柞蚕卵巢原代细胞,并大量增殖扩繁。

关键词：柞蚕微孢子虫昆虫细胞卵巢原代细胞感染特性

志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

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微生物学报 2008年第9期48卷 1227-1233页

作者：苏良科严亚贤陆承平上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min... 详细信息

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min27(△stx∷cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体,命名为ΦMin27(△stx∷cat)。采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察ΦMin27(△stx∷cat)感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为O60和O138的大肠杆菌可以被ΦMin27(△stx∷cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的ΦMin27(△stx∷cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。【结论】ΦMin27(△stx∷cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出ΦMin27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。

关键词：大肠杆菌O157:H7 Stx2噬菌体 ΦMin27(△stx∷cat) 感染特性

狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性

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中国生物制品学杂志 2013年第9期26卷 1258-1259,1263页

作者：张芮铭高正伦方群左静刘海文郑学学刘翠郑森元北京民海生物科技有限公司北京102600

目的观察狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性。方法分别将0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10MOI的PM株狂犬病病毒接种至MRC-5细胞中,显微镜观察感染细胞的状态;间接免疫荧光法检测病毒收获液的滴度;小鼠NIH法测定病毒... 详细信息

目的观察狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性。方法分别将0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10MOI的PM株狂犬病病毒接种至MRC-5细胞中,显微镜观察感染细胞的状态;间接免疫荧光法检测病毒收获液的滴度;小鼠NIH法测定病毒灭活液的效价。结果 MOI为0.06～0.07时,病毒收获前细胞出现聚集现象,液体中基本无死细胞;病毒收获液的滴度和病毒灭活液的效价较高。结论观察了狂犬病病毒PM株在人二倍体MRC-5细胞中的感染特性,为疫苗生产工艺的优化提供了实验依据。

关键词：狂犬病病毒PM株 MRC-5细胞感染特性滴度效价

慢性阻塞性肺疾病气道细菌感染的特性及耐药性分析

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中华医院感染学杂志 2012年第14期22卷 3025-3027页

作者：刘洪光赖伟文深圳市康宁医院检验科广东深圳518020 深圳市坪山人民医院外科广东深圳518000

目的分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者气道细菌感染的特性及耐药性分析。方法选取2010年1月至2011年3月在医院确诊并有完整病原学资料的260例COPD住院患者进行痰标本采集,对痰标本进行细菌培养及耐药性分析。结果共检出细菌21种195株,总... 详细信息

目的分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者气道细菌感染的特性及耐药性分析。方法选取2010年1月至2011年3月在医院确诊并有完整病原学资料的260例COPD住院患者进行痰标本采集,对痰标本进行细菌培养及耐药性分析。结果共检出细菌21种195株,总阳性率为75.0%,革兰阴性菌127株,占65.1%,革兰阳性菌68株,占34.9%;铜绿假单胞菌对加替沙星、头孢噻肟和环丙沙星的耐药性较强,分别为55.9%、47.5%、47.5%;大肠埃希菌对氨苄西林及环丙沙星的耐药性较强,分别为75.6%、84.4%;肺炎克雷伯菌对头孢噻肟及头孢他啶的耐药性较强,均87.0%;金黄色葡糖球菌和肠球菌属对除万古霉素外的其他抗菌药物的耐药性均较强。结论 COPD患者检出主要病原菌为革兰阴性杆菌,耐药性明显,临床医师应注意气道细菌感染的种类及耐药性分析,合理使用抗菌药物,及时调整治疗方案,利于尽早控制感染,降低患者的死亡率。

关键词：慢性阻塞性肺疾病感染特性耐药性

鸡产蛋下降综合征病毒NE_4毒株对KM小鼠感染特性观察

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中国实验动物学报 2012年第6期20卷 43-46,I0006,I0007页

作者：马震原李刚郭宇飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站北京100193 四川农业大学动物医学院雅安625014 金陵科技学院动物科学院南京210038

目的初步探究鸡产蛋下降综合征病毒NE4(EDSV NE4)毒株对昆明小鼠的感染特性。方法用106TCID50攻毒量的EDSV NE4株对4～6周龄的KM小鼠进行攻毒试验,同时以正常尿囊液接种作为阴性对照。用荧光定量PCR对小鼠组织及粪便中的EDSV进行检测,... 详细信息

目的初步探究鸡产蛋下降综合征病毒NE4(EDSV NE4)毒株对昆明小鼠的感染特性。方法用106TCID50攻毒量的EDSV NE4株对4～6周龄的KM小鼠进行攻毒试验,同时以正常尿囊液接种作为阴性对照。用荧光定量PCR对小鼠组织及粪便中的EDSV进行检测,同时用HE染色及免疫组化法对小鼠组织切片进行病理组织学观察和抗原定位。结果 EDSV攻毒对小鼠的采食情况产生一定影响,但并未引起明显的临床症状;攻毒组小鼠可产生针对EDSV特异性的抗体,HI抗体滴度可高达212,阴性对照组小鼠体内抗体检测为阴性;攻毒后小鼠大部分组织器官如肝脏、子宫、肾脏、肺脏等与攻毒7 d后粪便中均可检测到EDSV,阴性对照小鼠所有受检组织中均未检测到病毒;EDSV攻毒未能引起小鼠组织的病理学变化,攻毒后不同时间内,可在子宫、肺脏、肝脏、肾脏中可检测到阳性信号,最为典型的定殖位置是子宫腺体上皮细胞及肌层细胞的胞质中。结论 EDSV NE4株可以感染KM小鼠。

关键词：鸡产蛋下降综合征病毒 NE4株小鼠感染特性