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丹参通络解毒汤含药血清调控MALAT1对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞的保护作用及机制研究

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中国中医药信息杂志 2024年第1期31卷 110-116页

作者：夏旭婷李昇聪李鑫辉蒋啸李彩云湖南中医药大学中医学院湖南长沙410208

目的研究丹参通络解毒汤含药血清调控转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法体外培养大鼠CMECs,构建缺氧/复氧损伤细胞模型,转染过表达/沉默空白MALAT1慢病毒,将细胞分为过表... 详细信息

目的研究丹参通络解毒汤含药血清调控转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法体外培养大鼠CMECs,构建缺氧/复氧损伤细胞模型,转染过表达/沉默空白MALAT1慢病毒,将细胞分为过表达空白+中药组、过表达MALAT1+中药组、过表达MALAT1组、沉默空白+中药组、沉默MALAT1组、沉默MALAT1+中药组,分别予相应血清培养,免疫荧光染色检测Beclin-1蛋白表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(SRPK1)、丝氨酸丰富剪接因子1(SRSF1)、血管内皮生长因子(VEGF)及Bax蛋白表达,RT-PCR检测MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达。结果与过表达空白+中药组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达升高,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著升高(P血管新生,其机制可能与下调SRPK1、SRSF1表达有关。

关键词：丹参通络解毒汤缺氧/复氧心肌微血管内皮细胞自噬 MALAT1 SRPK1 SRSF1

丹参通络解毒汤含药血清调控miR-126表达对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞自噬的影响

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中国中医药信息杂志 2024年第11期 136-141页

作者：颜梦凡刘泳钊李彩云李鑫辉湖南中医药大学中医学院

目的探究丹参通络解毒汤含药血清调控miR-126对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）自噬的影响。方法体外培养CMECs构建缺氧/复氧损伤细胞模型，通过慢病毒转染miR-126抑制基因，将细胞分为空白组、模型组、药物组、沉默组、空... 详细信息

目的探究丹参通络解毒汤含药血清调控miR-126对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）自噬的影响。方法体外培养CMECs构建缺氧/复氧损伤细胞模型，通过慢病毒转染miR-126抑制基因，将细胞分为空白组、模型组、药物组、沉默组、空载组、沉默+药物组，试剂盒检测CMECs上清液乳酸脱氢酶（LDH）含量，流式细胞术检测细胞凋亡率，RT-PCR检测细胞miR-126 mRNA表达，Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、p62表达。结果与空白组比较，模型组细胞上清液LDH含量显著升高，细胞凋亡率显著升高，miR-126 mRNA表达显著降低，Atg5、Beclin1蛋白表达显著升高，p62蛋白表达显著降低，差异均有统计学意义（P细胞上清液LDH含量显著降低，细胞凋亡率显著降低，miR-126 mRNA表达显著升高，Atg5、Beclin1蛋白表达显著降低，药物组p62蛋白表达显著升高，差异均有统计学意义（P细胞上清液LDH含量、细胞凋亡率及Atg5、Beclin1蛋白表达显著升高，miR-126 mRNA表达显著降低（P细胞上清液LDH含量和细胞凋亡率显著升高（P细胞上清液LDH含量、细胞凋亡率及Atg5、Beclin1蛋白表达显著降低（P细胞凋亡，进而保护CMECs，其机制可能与促进miR-126表达有关。

关键词：丹参通络解毒汤 miR-126 缺氧/复氧自噬心肌缺血再灌注损伤心肌微血管内皮细胞

PI3K/Akt在线粒体ATP敏感性钾通道开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞FKN表达中的作用

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解剖学报 2012年第6期43卷 778-783页

作者：陈秋萍黄赛赛周伟伟沈施仁曹苏南通大学附属医院麻醉科江苏南通226001

目的观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)fractalkine(FKN)表达中的作用。方法培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组(n=6):正常对照组(N组)、缺氧... 详细信息

目的观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)fractalkine(FKN)表达中的作用。方法培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组(n=6):正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、二氮嗪预处理+缺氧/复氧组(DZ组)、LY294002+二氮嗪预处理+缺氧/复氧组(LY294002+DZ组)。DZ组加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,LY294002+DZ组在加入100μmol/L LY294002预处理2h后再加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2h、复氧2h。Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,RT-PCR检测Akt和FKNmRNA水平,Western blotting检测Akt蛋白水平。结果与N组比较,H/R组细胞增殖率显著降低(P细胞增殖率显著升高(P细胞增殖,抑制细胞凋亡,实现对缺氧复氧MMECs损伤的保护。

关键词：线粒体ATP敏感性钾通道心肌微血管内皮细胞 PI3K Akt Fractalkine 缺氧复氧反转录-聚合酶链反应免疫印迹法大鼠

利拉鲁肽通过PI3K/Akt和MAPK/ERK通路促进心肌微血管内皮细胞的增殖和迁移

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南方医科大学学报 2015年第9期35卷 1221-1226页

作者：张颖胡舜英尹彤田峰王珊张颖倩陈韵岱解放军总医院心血管内科北京100853

目的研究胰高血糖素样肽-1类似物利拉鲁肽对原代大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖和迁移的影响及其机制。方法使用双酶消化法体外分离培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,差速贴壁法进行纯化,CD31和Ⅷ因子抗体进行免疫细胞化学染色鉴定... 详细信息

目的研究胰高血糖素样肽-1类似物利拉鲁肽对原代大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖和迁移的影响及其机制。方法使用双酶消化法体外分离培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,差速贴壁法进行纯化,CD31和Ⅷ因子抗体进行免疫细胞化学染色鉴定。采用不同浓度利拉鲁肽（0~1000 nmol/L）干预1代细胞,MTT绘制细胞生长曲线,Western blot检测利拉鲁肽对PI3K/Akt和MAPK/ERK通路的激活作用,Brd U荧光标记法和划痕实验观察药物作用下细胞增殖和迁移能力,并使用相应的通路阻断剂LY294002和PD98059来进一步证实。结果体外分离原代CMECs,CD31及Ⅷ因子免疫荧光染色示双阳性率大于95%,MTT示细胞于种植48 h后进入对数生长期,利拉鲁肽以浓度依赖方式促进CMECs的体外增殖,100 nmol/L为其最适生长浓度（P〈0.05）。予以100 nmol/L利拉鲁肽预干预细胞24 h后,Western blot显示胞内Akt和ERK磷酸化水平与正常细胞组相比有明显升高（P〈0.05）,加入相应通路阻断剂LY294002和PD98059,其磷酸化水平相较于利拉鲁肽组明显降低（P〈0.05）。Brd U和划痕实验均说明利拉鲁肽能促进CMECs的增殖和迁移能力（P〈0.05）,使用LY294002和PD98059预处理后,增殖迁移能力均显著低于利拉鲁肽组（P〈0.05）。结论利拉鲁肽是通过激活胞内PI3K/Akt和MAPK/ERK通路从而促进原代大鼠心肌微血管内皮细胞的增殖和迁移。

关键词：利拉鲁肽心肌微血管内皮细胞增殖迁移 PI3K/Akt MAPK/ERK

抵当陷胸汤对高糖诱导心肌微血管内皮细胞损伤的影响

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中国实验方剂学杂志 2022年第9期28卷 52-58页

作者：喻锦储全根李飞翔蔡正银储俊安徽中医药大学中医学院合肥230038 安徽中医药大学教育部新安医学重点实验室合肥230038

目的:基于高糖诱导的心肌微血管内皮细胞(CMECs)模型,观察抵当陷胸汤对其损伤的影响,并探讨其相关作用机制。方法:采用体外培养大鼠原代心肌细胞,给予33 mmol·L^(-1)葡萄糖造模,造模成功后随机分为模型组(葡萄糖终浓度为33 mmol·L^(-... 详细信息

目的:基于高糖诱导的心肌微血管内皮细胞(CMECs)模型,观察抵当陷胸汤对其损伤的影响,并探讨其相关作用机制。方法:采用体外培养大鼠原代心肌细胞,给予33 mmol·L^(-1)葡萄糖造模,造模成功后随机分为模型组(葡萄糖终浓度为33 mmol·L^(-1))、正常组、抵当陷胸汤低剂量组(葡萄糖+5%抵当陷胸汤含药血清)、抵当陷胸汤中剂量组(葡萄糖+10%抵当陷胸汤含药血清)、抵当陷胸汤高剂量组(葡萄糖+20%抵当陷胸汤含药血清)和阿拉氯胺(ALT-711)组(葡萄糖+10%ALT-711含药血清)。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测含药血清对CMECs增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组c-Jun mRNA相对表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化蛋白质酪氨酸激酶1(p-JAK1)、磷酸化信号转导和转录激活因子1(p-STAT1)、转化生长因子-β;(TGF-β;)蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞中c-Jun mRNA、p-JAK1、p-STAT1及TGF-β;蛋白的表达均显著升高(P细胞中c-Jun mRNA表达水平显著降低(P细胞内JAK/STAT信号转导通路活性有关。

关键词：抵当陷胸汤糖尿病心肌病心肌微血管内皮细胞蛋白质酪氨酸激酶1/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)信号通路

LY333531对高糖所致心肌微血管内皮细胞通透性上调的拮抗作用

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第4期25卷 303-305页

作者：尹志勇魏丽萍郝媛媛张荣庆李聪叶王海昌第四军医大学第一附属医院心血管内科陕西西安710032

目的:观察LY333531对高糖所致心肌微血管内皮细胞通透性上调的拮抗作用,并探讨其机制。方法:将分离培养并鉴定后的大鼠心肌微血管内皮细胞分为正常组,高糖组(葡萄糖浓度25mmol/L),高糖(葡萄糖浓度25mmol/L)+LY333531(10μmol/L)组,高糖... 详细信息

目的:观察LY333531对高糖所致心肌微血管内皮细胞通透性上调的拮抗作用,并探讨其机制。方法:将分离培养并鉴定后的大鼠心肌微血管内皮细胞分为正常组,高糖组(葡萄糖浓度25mmol/L),高糖(葡萄糖浓度25mmol/L)+LY333531(10μmol/L)组,高糖(葡萄糖浓度25mmol/L)+生理盐水组,通过离体血管通透性检测试剂盒检测单层细胞通透性,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光和Western blot法检测PKCβⅡ的表达。结果:与正常组比较,高糖组单层细胞通透性明显上调(400.0±20.00vs223.3±25.17;P细胞通透性、凋亡率和PKCβⅡ表达的影响不明显。结论:高糖损害心肌微血管内皮细胞的通透功能,LY333531可拮抗此损伤作用。

关键词： LY333531 蛋白激酶C-βⅡ 心肌微血管内皮细胞通透性

通心络干预心肌微血管内皮细胞条件培养液对心肌细胞的保护作用

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中国中西医结合杂志 2017年第11期37卷 1334-1338页

作者：位庚常丽萍尹玉洁张月霞梁小华梁俊清络病研究与创新中药国家重点实验室石家庄050035 石家庄市第二医院内分泌科石家庄050051 河北以岭医药研究院石家庄050035 河北中医学院研究生学院石家庄050090

目的观察心肌微血管内皮细胞条件培养液对心肌细胞的影响及通心络的干预作用。方法制备3种心肌微血管内皮细胞条件培养液:正常内皮细胞条件培养液(N-CM),同型半胱氨酸诱导损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液(H-CM)和通心络干预的心肌... 详细信息

目的观察心肌微血管内皮细胞条件培养液对心肌细胞的影响及通心络的干预作用。方法制备3种心肌微血管内皮细胞条件培养液:正常内皮细胞条件培养液(N-CM),同型半胱氨酸诱导损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液(H-CM)和通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液(T-CM)。将心肌细胞随机分为4组:正常对照组、N-CM组、T-CM组及H-CM组,采用相应培养液培养。倒置显微镜观察心肌细胞形态,酶联免疫吸附法检测细胞上清液心肌肌钙蛋白T(cTnT)含量,JC-1试剂盒测定细胞中线粒体膜电位(MMP),Western blot法检测细胞色素C(Cyt C)和钙网蛋白(CRT)蛋白表达。结果与正常对照组比较,N-CM组细胞形态无明显变化,细胞上清液cTnT含量、MMP水平、CRT及Cyt C蛋白表达无明显变化(P>0.05);与N-CM组比较,H-CM组细胞皱缩,细胞边缘模糊,有大量坏死细胞漂浮,细胞上清液cTnT含量、CRT及Cyt C蛋白表达升高,MMP水平降低(P细胞无明显皱缩,细胞边缘较清楚,坏死漂浮细胞减少,细胞上清液cTnT含量、CRT及Cyt C蛋白表达降低,MMP水平升高(P心肌微血管内皮细胞的条件培养液可损伤心肌细胞,其损伤机制可能与CRT介导的线粒体功能受损有关,通心络可抑制该损伤过程。

关键词：通心络心肌微血管内皮细胞心肌细胞共培养线粒体钙网蛋白

不同波形低频脉冲磁场对大鼠心肌微血管内皮细胞的影响

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中华物理医学与康复杂志 2010年第11期32卷 805-810页

作者：刘楠李飞王海昌王晨粟妍晖谢晓波第四军医大学研究生管理大队西安710032

目的研究在固定时间和频率的情况下不同波形的低频脉冲磁场（LF-PMFs）对大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖、细胞周期、凋亡、迁移、细胞骨架以及一氧化氮（NO）分泌能力的影响.方法磁场频率为15hz,磁场强度分别为0.6mT、1.2mT、1... 详细信息

目的研究在固定时间和频率的情况下不同波形的低频脉冲磁场（LF-PMFs）对大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖、细胞周期、凋亡、迁移、细胞骨架以及一氧化氮（NO）分泌能力的影响.方法磁场频率为15hz,磁场强度分别为0.6mT、1.2mT、1.8mT、2.4mT,作用时间为4h/d,连续作用5d的情况下,以矩形和三角形2种波形磁场分别作用于离体大鼠心肌微血管内皮细胞,对照组不加干预.结果矩形波磁场促进内皮细胞增殖（P〈0.01）,使其细胞周期分布发生改变（P〈0.01）,DNA合成期（S期）和合成后期（G2期）细胞比例增加,凋亡率降低（P〈0.05）,细胞迁移能力显著增强（P〈0.01）,曝磁后细胞骨架结构发生重构,应力纤维增多,NO分泌能力增加（P〈0.01）;三角波磁场0.6mT组和2.4mT组促使CMECs增殖（P〈0.05）,细胞周期改变（P〈0.05）,凋亡率降低（P〈0.05）,迁移能力增强（P〈0.05）,细胞骨架重构,NO分泌能力提高（P〈0.05）.而三角波磁场1.2mT组和1.8mT组上述效果均不明显（P〉0.05）.结论大鼠CMECs的增殖、细胞周期、凋亡、迁移、细胞骨架以及NO分泌能力除受LF-PMFs频率和强度影响外,还受磁场波形的影响.

关键词：低频脉冲磁场心肌微血管内皮细胞增殖细胞周期凋亡迁移细胞骨架一氧化氮

小鼠心肌微血管内皮细胞的原代培养及生物学特性

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中国病理生理杂志 2013年第3期29卷 565-570页

作者：辛毅许秀芳黄益民张颖李温斌李娜首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进... 详细信息

目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进行扩增。利用倒置显微镜观察细胞生长情况;台盼蓝法、绘制生长曲线和MTT法分别测定心肌微血管内皮细胞传代成活率、不同代生长及增殖特征;以DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标,结合CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定细胞表面特异性抗原;体外血管形成实验检测心肌微血管内皮细胞的功能。结果:酶消化、差速贴壁法分离培养2 d后,细胞呈散在的、小簇状聚集性生长,4～5 d迅速生长呈单层排列,细胞为梭形、三角形或多角形,7～8 d后呈铺路石样即可传代;传代细胞经台盼蓝法检测成活率均为95%以上;第1、3代细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示第1、3代细胞在第2～4 d吸光度变化较明显(P细胞生长曲线近似平缓,吸光度无明显变化,细胞逐渐衰老;DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标阳性率为(89.2±3.5)%,相关特异性抗原CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定阳性率为(56.7±3.7)%、(78.5±2.6)%和(67.8±4.2)%;体外血管形成实验显示,6～12 h后出现明显的管腔结构。结论:以多聚赖氨酸作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁法并结合内皮细胞专用培养基,可获得纯度较高的小鼠心肌微血管内皮细胞,为心脏疾病的研究提供种子细胞。

关键词：心肌微血管内皮细胞原代细胞培养生物学特性小鼠