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通过微弹轰击的转基因甘蔗植株

国外农学（甘蔗） 1993年第4期 5-11页

作者： Bower,R 曾献军

通过微弹轰击细胞悬浮培养物和电激原生质体实现甘蔗愈伤组织抗除草…

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国外农学（甘蔗） 1993年第4期 1-5页

作者： Cho.,MKC 林俊芳

用微弹轰击法将GUS基因导入香蕉茎尖组织细胞

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海南大学学报（自然科学版） 1994年第4期12卷 308-310页

作者：徐立新林栖凤李冠一何雪梅张永清海南大学热带生物研究中心中国科学院微生物研究所

用在弹轰击法将外源ＤＮＡ导入香蕉（Ｍｕｓａ，ｓｐｐ）茎尖细胞，以ＧＵＳ基因作为报告基因，用Ｘ－Ｇｌｕｃ浴液对ＧＵＳ基因表达产物进行组织化学鉴定。样品材料细胞中发现有明显的蓝色斑点，而对照则没有。实验说明用微弹轰击法可... 详细信息

用在弹轰击法将外源ＤＮＡ导入香蕉（Ｍｕｓａ，ｓｐｐ）茎尖细胞，以ＧＵＳ基因作为报告基因，用Ｘ－Ｇｌｕｃ浴液对ＧＵＳ基因表达产物进行组织化学鉴定。样品材料细胞中发现有明显的蓝色斑点，而对照则没有。实验说明用微弹轰击法可以将外源基因导入香蕉茎尖组织并在其中成功表达，这为香蕉的外源基因导入工作提供了新的有效途径．

关键词：微弹轰击 GUS基因香蕉基因导入细胞

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微弹轰击介导转化

生物技术通报 1996年第5期12卷 12-12页

作者：李思经

渗透压处理促进基因枪介导转化瑞典农业科学院***及其同事研究发现,在微弹轰击前后用渗透处理挪威云杉胚性细胞悬浮培养物可使轰击转移及报道基因表达提高3～20倍。0.25M肌醇或蔗糖对轰击一天后表达率的促进效应比甘露醇+山梨醇约高2... 详细信息

渗透压处理促进基因枪介导转化瑞典农业科学院***及其同事研究发现,在微弹轰击前后用渗透处理挪威云杉胚性细胞悬浮培养物可使轰击转移及报道基因表达提高3～20倍。0.25M肌醇或蔗糖对轰击一天后表达率的促进效应比甘露醇+山梨醇约高2倍。脱落酸提高肌醇的效应。轰击10天后测定发现,细胞保存在含有肌醇的培养基上可使基因表达率提高5～12倍,且对生长及其形态学无副作用。

关键词：微弹轰击介导转化基因表达基因枪悬浮培养物脱落酸渗透处理细胞保存表达率山梨醇

微弹射击将大麦黄矮病毒外壳蛋白基因转入小麦获可育植株

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山东大学学报（自然科学版） 1996年第1期31卷 94-101页

作者：夏光敏陈惠民郭光沁成卓敏吴茂森中国农科院植保所

以小麦品种济南１７７、３８４、４７１的幼胚和济南１７７的胚性愈伤组织为材料，质粒为ｐＰＰＩ２［含大麦黄矮病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因和ＧＵＳ（β－葡萄糖苷酸酶）基因］；ｐＰＰＩ５（含ＣＰ基因）＋ｐＥｍｕＧＮ（含ＧＵＳ基因... 详细信息

以小麦品种济南１７７、３８４、４７１的幼胚和济南１７７的胚性愈伤组织为材料，质粒为ｐＰＰＩ２［含大麦黄矮病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因和ＧＵＳ（β－葡萄糖苷酸酶）基因］；ｐＰＰＩ５（含ＣＰ基因）＋ｐＥｍｕＧＮ（含ＧＵＳ基因），用高速基因枪轰击钨粉质粒进入幼胚和胚性愈伤组织细胞．ＧＵＳ基因的瞬间表达平均频率幼胚约为４２％，愈伤组织为１８．５％．转化处理后用ＰＣＲ扩增技术检测植株中ＣＰ基因是否存在并稳定遗传．检测结果表明，来源于幼胚的Ｔ０代转化频率为２～９％（１９９３～１９９４年），并获得Ｔ１、Ｔ２和Ｔ３代稳定表达的转化植株．用愈伤组织转化，其转化频率３月龄者为０．４％；２年龄者为零．潮霉素（Ｈｍ）用于对转化幼胚和愈伤组织的筛选，低浓度时不能抑制非转化细胞的生长，高浓度则使细胞受伤害。

关键词：小麦微弹轰击 BYDV CP基因转基因可育植株

拟南芥atslA基因启动子和ats2B基因启动子的克隆及其功能分析

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拟南芥atslA基因启动子和ats2B基因启动子的克隆及其功能分析

作者：王利军西北农林科技大学

学位级别：硕士

近年来利用植物作为生物反应器生产目的产品成就瞩目,正成为基因工程研究中新的热点。借助于高活性特异表达的启动子提高外源基因的表达量,以及使外源基因只在特定的发育阶段在特定的组织或器官中表达,成为植物生物反应器研究的关键... 详细信息

近年来利用植物作为生物反应器生产目的产品成就瞩目,正成为基因工程研究中新的热点。借助于高活性特异表达的启动子提高外源基因的表达量,以及使外源基因只在特定的发育阶段在特定的组织或器官中表达,成为植物生物反应器研究的关键技术之一。 Rubisco即核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(E.C.4.***.1.39.),是叶绿体中光合CO2 固定的关键酶也是叶绿体中含量最为丰富的蛋白,约占叶片可溶性蛋白的50%以上。 ats1A基因和ats2B基因是拟南芥中编码Rubisco小亚基的两个基因,这两个基因位于细胞核中,对它们的调控元件、启动子活性和组织特异性的研究,为外源基因在植物中的特异高效表达提供一种新的途径。另外,利用叶绿体转运信号肽将外源基因产物定位到叶绿体中可提高其积累水平,因而也是提高外源基因表达量的一种有效策略。本研究利用 PCR克隆了拟南芥ats1A基因启动子和ats2B基因启动子(均包含叶绿体的转运信号肽), 并对其序列进行了分析,然后将ats1A基因启动子(包含叶绿体的转运信号肽)构建植物瞬时表达载体p18T-Gus,通过瞬时表达对其活性进行了分析。通过以上研究工作,得到的主要研究结果如下: 1. PCR 方法克隆到了 ats1A 基因和 ats2B 基因的 5′端上游片段(包含启动子部分和叶绿体转运肽),并分别构建了克隆载体 p18T1a 和 p18T2b。 2. 用植物顺式作用元件数据库分别对 ats1A 基因启动子和 ats2B 基因的启动子区的 DNA 顺式作用元件进行了分析。 3.将 ats1A 基因启动子连接在 Gus 报告基因的上游,构建了瞬时表达载体 p18T1a-gus。 4.通过基因枪法将瞬时表达载体p18T1a-gus分别导入到烟草的叶片,茎段,根段进行瞬时表达,Gus的组化染色分析表明,ats1A基因启动子能够启动外源基因在烟草叶片中高效表达,ats1A基因启动子是进行植物生物反应器研究的一个良好的候选启动子。

关键词： ats1A基因启动子 ats2B基因启动子叶绿体转运肽微弹轰击拟南芥烟草

1.高羊茅高频再生体系的建立和基因枪法介导的遗传转化研究 2.高羊茅几丁质酶基因Ⅰ保守片段的克隆及其序列分析

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1.高羊茅高频再生体系的建立和基因枪法介导的遗传转化研究 2.高...

作者：王健西北大学

学位级别：硕士

高羊茅（Festuca arundinacea）,又称苇状羊茅,系禾本科（Gramineae）羊茅属植物,原产西欧、北非,它具有抗旱、耐瘠薄、适应性广等特点,在城市绿化及运动场草坪铺设中应用十分广泛。但由于它也存在叶片粗糙、没有匍匐茎、夏季生长缓慢... 详细信息

高羊茅（Festuca arundinacea）,又称苇状羊茅,系禾本科（Gramineae）羊茅属植物,原产西欧、北非,它具有抗旱、耐瘠薄、适应性广等特点,在城市绿化及运动场草坪铺设中应用十分广泛。但由于它也存在叶片粗糙、没有匍匐茎、夏季生长缓慢、易遭病原体和杂草侵害等品质上的缺陷,因而需要对其进行品种改良。通过转基因技术培育出具有优良抗逆性状且美观的高羊茅品系近年来备受人们的重视。植物遗传转化的先决条件是高频再生体系的建立,故本研究首先以高羊茅成熟种子为外植体、以MS为基本培养基,研究了高羊茅胚性愈伤组织诱导和继代、再生植株分化和生根等培养基中各组分的最适配比,建立了高频再生体系。实验结果表明在附加9mg/L 2,4-D的MS培养基上愈伤组织诱导频率最高,初生愈伤组织在含有5mg/L 2,4-D、400mg/L CH、60g/L蔗糖和12g/L琼脂的MS继代培养基上可诱导出胚性愈伤组织和体细胞胚,在含2.0mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA的MS培养基上分化形成丛生苗,分化频率达到78.9%。再生苗在1/2MS+NAA 0.5mg/L生根培养基上生根率达100%。同时发现在继代培养基中将蔗糖和琼脂浓度提高、以及添加一定量的CH从而形成一个高渗环境能明显提高胚性愈伤组织的质量和诱导频率,十分有利于后期的分化,这是高羊茅高频再生体系形成的一个非常关键的因素。基因枪技术是禾本科植物遗传转化的常用方法,本工作利用PDS1000/He基因枪将质粒pARN6（克隆有水稻几丁质酶基因RC24）和质粒pD（克隆有β-葡糖醛酸糖苷酶基因gus和选择标记基因bar）导入高渗处理6h左右的高羊茅胚性愈伤组织,在分别附加2.0mg/L、3.0mg/L、5.0mg/L除草剂PPT（草丁膦）的分化培养基上对轰击材料进行梯度筛选和培养,结果在附加2.0mg/L的PPT培养基上愈伤组织基本上全部生长正常;在附加5.0mg/L PPT的培养基上,愈伤组织几乎全部死亡;而在附加3.0mg/L PPT的培养基上,大部分愈伤组织逐渐变为褐色而死亡,少部分能正常生长。由此可见,采用3mg/L的PPT筛选浓度较为合适。经筛选再生后共获得93株再生植株,用含有0.2%Tween-20的200mg/L PPT溶液对植株叶片进行喷洒,最终从93株再生植株中筛选出两株叶片始终未枯萎的再生苗,经PCR鉴定初步确定为转化植株。另外本工作根据几种禾本科植物Ⅰ类儿丁质酶氨基酸序列及其基因核苷酸序列的同

关键词：高羊茅高频再生体系微弹轰击 Ⅰ类几丁质酶同源性