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异尖科线虫对长江刀鲚消化道组织损伤及免疫反应的影响

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异尖科线虫对长江刀鲚消化道组织损伤及免疫反应的影响

作者：王红篮上海海洋大学

学位级别：硕士

长江刀鲚(Coilia nasus)在近海生长育肥,常因摄入被感染的鱼虾等饵料而寄生异尖科线虫(Anisakidae)。由于异尖科线虫主要寄生在长江刀鲚消化道和腹腔,受外部水环境改变影响较小,其在长江刀鲚生殖洄游过程中会长期寄生于鱼体。本论文通... 详细信息

长江刀鲚(Coilia nasus)在近海生长育肥,常因摄入被感染的鱼虾等饵料而寄生异尖科线虫(Anisakidae)。由于异尖科线虫主要寄生在长江刀鲚消化道和腹腔,受外部水环境改变影响较小,其在长江刀鲚生殖洄游过程中会长期寄生于鱼体。本论文通过生物学解剖和显微观察技术获知异尖科线虫从长江刀鲚消化道进入腹腔的途径及造成的组织损伤,利用ELISA检测了异尖科线虫寄生对长江刀鲚多种免疫指标表达水平的影响,并基于蛋白质组学和代谢组学技术研究了异尖科线虫寄生对长江刀鲚蛋白及代谢物的影响,阐述了长江刀鲚应对异尖科线虫寄生的免疫通路。本研究为异尖科线虫与长江刀鲚间的免疫互作机制提供了基础资料,为后续研究异尖科线虫寄生对长江刀鲚生殖洄游及种群补充的影响提供理论依据。主要研究内容如下:1.进行异尖科线虫对长江刀鲚消化道组织损伤的观察:于汛期内在长江口采集寄生异尖科线虫的长江刀鲚消化道组织,并采集未寄生异尖科线虫的长江刀鲚消化道组织为对照组,进行解剖检查,扫描电镜和HE染色切片的观察,结果发现:异尖科线虫可穿透长江刀鲚胃体末端和肠组织进入腹腔,未在幽门盲囊组织中发现穿透现象。异尖科线虫寄生破坏长江刀鲚胃组织、肠组织和幽门盲囊组织的黏膜褶皱,导致柱状上皮细胞损伤并脱落,并造成肠黏膜层和黏膜下层间分离且聚集大量淋巴细胞,表明异尖科线虫寄生可能不利于长江刀鲚的健康。2.进行长江刀鲚免疫指标表达水平分析:利用ELISA分别测定了对照/寄生组长江刀鲚的脾脏、头肾和血清中7种免疫指标的表达水平。结果表明:(1)对照组脾脏、头肾和血清中免疫指标水平表达的趋势均为Ig D(PIg M(PIg T(PMIF(PTH1(P>0.05)>TNF-α(P>0.05)>IL-10,且血清中免疫指标水平显著高于脾脏和头肾(P异尖科线虫寄生会诱导长江刀鲚炎症指标和适应性免疫指标发生改变,且头肾、脾脏和血清中免疫指标的表达水平与异尖科线虫数量相关。3.进行长江刀鲚肝脏蛋白质组学分析:利用i TRAQ技术进行对照/寄生组长江刀鲚肝脏组织蛋白分析,共筛选出339种差异蛋白,其中上调共193个,下调共146个。与免疫相关的差异蛋白共37个,其中上调共9个,下调共28个。通过GO分析发现大多差异蛋白具有溶酶体和补体功能,pathway富集分析共筛选出吞噬体、溶酶体、内吞、自噬-动物、补体和凝血级联、Toll样受体信号通路等10条免疫相关通路,其中主要的7种免疫相关差异蛋白补体C3、C7和C1q、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、Ig、Rab-7a,这7种免疫相关蛋白在寄生组中均显著下调。推测异尖科线虫寄生会抑制长江刀鲚补体级联反应和吞噬过程,可能有利于异尖科线虫的存活。4.进行长江刀鲚肝脏代谢组学分析:利用LC/MS技术进行对照/寄生组长江刀鲚肝脏组织代谢物分析,共筛选88种差异代谢物,其中上调共60个,下调共28个。多元统计分析(PLS-DA和OPLS-DA)表明,异尖科线虫寄生对长江刀鲚肝脏代谢物表达产生显著影响(P异代谢物均显著下调,其余9种通路大多数代谢物表现为显著上调。反映了长江刀鲚与异尖科线虫之间复杂的互作机制,有待进一步深入研究。

关键词：长江刀鲚异尖科线虫组织学观察免疫反应组学研究

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禁捕初期长江刀鲚异尖科线虫寄生现状调查

海洋湖沼通报 2023年第2期45卷 142-149页

作者：程鑫杨彦平应聪萍马凤娇邓艳敏刘凯南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 水产科学国家级实验教学示范中心(上海海洋大学) 上海201396

为系统掌握长江“十年禁渔”初期长江刀鲚体内异尖科线虫寄生状况,本研究于2021年3—7月对长江下游及长江口水域的刀鲚开展系统采样调查。结果显示:刀鲚体内寄生异尖科线虫感染率为82.10%,感染强度为5.8±9.5条/尾,感染丰度为5.1±9.1条... 详细信息

为系统掌握长江“十年禁渔”初期长江刀鲚体内异尖科线虫寄生状况,本研究于2021年3—7月对长江下游及长江口水域的刀鲚开展系统采样调查。结果显示:刀鲚体内寄生异尖科线虫感染率为82.10%,感染强度为5.8±9.5条/尾,感染丰度为5.1±9.1条/尾,其中感染强度以1~10条/尾的样本占比最高(72.30%),且线虫在刀鲚胃、肠道、幽门盲囊、腹腔及肝脏等表面均有寄生,其中肠道和幽门盲囊寄生线虫数量最多(56.06%和25.65%)。刀鲚体内寄生异尖科线虫的情况与其规格、调查时间和上溯距离之间呈现相关性,随着刀鲚规格增大,感染强度呈先上升后下降,其中体长介于250~280 mm样本组的感染强度最高(p300 mm样本组的感染率最高;而随着调查时间的推移,感染强度先下降后上升,在7月样本的感染率和感染强度达到最高(p异尖科线虫共鉴定出7种,其中异尖属2种、宫脂属4种、针蛔属1种,另有针蛔属未定种。本研究较为系统地调查了禁捕初期刀鲚体内异尖科线虫的寄生状况,为研究其寄生对刀鲚生殖洄游及种群补充的影响积累了基础,同时也为刀鲚生物标志物筛选和鉴定提供新的参考。

关键词：长江刀鲚异尖科线虫寄生现状寄生强度物种鉴定

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锦州市售海水鱼异尖科线虫感染调查

中国人兽共患病学报 2012年第5期28卷 513-514,F0004页

作者：包敏史凯帅辽宁医学院畜牧兽医学院锦州121000 辽宁省锦州市松山新区动物卫生监督管理所锦州121O01

目的从锦州市场购买海水鱼16种共477尾,采用肉眼检查与显微镜观察的方法,调查异尖科线虫幼虫感染率和感染强度。结果有9种182尾海水鱼感染异尖科线虫,小黄鱼和带鱼的感染率为100%,感染强度最高的是鲐鱼为42.39条(1 314条/31尾)。

关键词：海水鱼异尖科线虫幼虫感染率感染强度

我国东海沿海鱼类异尖科线虫RPA检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 86-91页

作者：张春玲张媛媛邱阳元郝朔白雪刘明远刘晓雷吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

异尖科线虫病(Anisakiasis)是一种重要的食源性人兽共患线虫病,主要因食用生的或未煮熟的含异尖科线虫Ⅲ期活的幼虫的海鱼而引起。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA)建立了异尖科线虫RPA的检测方法,首先对东海沿海舟山、温州、宁波... 详细信息

异尖科线虫病(Anisakiasis)是一种重要的食源性人兽共患线虫病,主要因食用生的或未煮熟的含异尖科线虫Ⅲ期活的幼虫的海鱼而引起。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA)建立了异尖科线虫RPA的检测方法,首先对东海沿海舟山、温州、宁波、平潭、嘉兴市的九种鱼体内获得的线虫进行分离鉴定,获得了派氏异尖线虫、简单异尖线虫、典型异尖线虫、宫脂线虫和对盲囊线虫,然后根据获得的五种线虫的ITS区设计特异性引物。结果显示:本研究建立的RPA方法可特异性扩增出异尖科线虫340 bp左右的目的基因片段,可特异性检测出异尖科线虫,而对阔节裂头绦虫、华支睾吸虫、东方次睾吸虫、棘颚口线虫检测结果为阴性;优化后在35℃、25 min即可完成检测,其灵敏度可达1 pg/μL,人工污染实验结果显示呈阳性。此方法操作简单、便捷,对现场快速检测具有重要的意义。

关键词：异尖科线虫 RPA ITS 特异性灵敏性

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一种异尖科线虫rDNA-ITS序列的PCR扩增及分析

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畜牧与兽医 2012年第5期44卷 65-67页

作者：李孝军耿新辉唐行忠洪青林舟山出入境检验检疫局浙江舟山316000

以日本进境的冻鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,用保守引物PCR扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和5.8S序列,并进行克隆、转化和序列分析,对样品进行分子鉴定。结果获得2个异尖科线虫样品的ITS及5.8 S rDNA序列,总长为99... 详细信息

以日本进境的冻鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,用保守引物PCR扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和5.8S序列,并进行克隆、转化和序列分析,对样品进行分子鉴定。结果获得2个异尖科线虫样品的ITS及5.8 S rDNA序列,总长为991 bp,样品间序列相似性为99.0%。将序列与GenBank公布灰海鳗对盲囊线虫(Contracaecum muraenesoxi)的相关序列进行比较分析,结果显示与***的ITS1、5.8S和ITS2序列相似性高,分别98.0%～98.4%、100%和97.0%～98.0%,表明冻鳕鱼中分离的异尖科线虫属于***。

关键词：异尖科线虫内转录间隔区 PCR技术序列分析

进境太平洋鳕鱼寄生的异尖科线虫rDNA-ITS序列的PCR扩增及分析

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中国畜牧兽医 2012年第6期39卷 90-92页

作者：李孝军陈宇唐行忠洪青林舟山出入境检验检疫局浙江舟山316000

以日本进境的冻太平洋鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,采用寄生虫通用引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,进行克隆、转化、测序和序列分析,并对样品进行分子鉴定。结果表明,扩增的异尖科线虫样品的ITS... 详细信息

以日本进境的冻太平洋鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,采用寄生虫通用引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,进行克隆、转化、测序和序列分析,并对样品进行分子鉴定。结果表明,扩增的异尖科线虫样品的ITS序列片段大小为906bp,包含部分的18S、28S及全部的ITS1(353bp)、5.8S(157bp)和ITS2(299bp)序列,ITS1和ITS2序列与GenBank登录的伪新地蛔线虫(Pseudoterranova decipiens)同源性均为在99.7%以上,与其他线虫的相似性较低。由ITS1和ITS2序列构建的系统进化树可知,从鳕鱼中分离到的线虫ITS1和ITS2均与伪新地蛔线虫处于同一分支。本研究结果为异尖科线虫种属的确定及进一步的分子生物学研究奠定基础。

关键词：异尖科线虫内转录间隔区 PCR技术序列分析

鲭鱼中寄生的1种异尖科线虫rDNA-ITS序列的PCR扩增及分析

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黑龙江畜牧兽医 2013年第3期 91-93页

作者：李孝军施进陈宇唐行忠洪青林舟山出入境检验检疫局浙江舟山316000

为了对日本进境的冻鲭鱼体内分离出的异尖科线虫进行研究,试验采用寄生虫通用引物NC5和NC2 PCR扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,并进行克隆、转化、测序和序列分析。结果表明:扩增的异尖科线虫样品的ITS序列片段大小为900... 详细信息

为了对日本进境的冻鲭鱼体内分离出的异尖科线虫进行研究,试验采用寄生虫通用引物NC5和NC2 PCR扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,并进行克隆、转化、测序和序列分析。结果表明:扩增的异尖科线虫样品的ITS序列片段大小为900 bp,包含部分的18S、28S及全部的ITS1(373 bp)、5.8S(159 bp)和ITS2(272 bp)序列,ITS1和ITS2序列与GenBank中抹香鲸异尖线虫(Anisakis physeteris)同源性均为100%,与其他线虫的相似性较低;从鲭鱼中分离到的线虫ITS1和ITS2均与抹香鲸异尖线虫处于同一分支。

关键词：异尖科线虫内转录间隔区 PCR技术序列分析

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异尖科线虫诱导长江刀鲚免疫反应研究

安徽农业大学学报 2022年第4期49卷 595-602页

作者：王红篮应聪萍杨彦平郭文君徐跑刘凯上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院无锡214081

为探究长江刀鲚TH1细胞、MIF、IL-10、TNF-α、Ig M、Ig T和Ig D的常规水平及异尖科线虫寄生所导致的免疫变化,采用ELISA法分别测定了空白组和3个寄生组的脾脏、头肾和血清中7种免疫分子的表达水平。结果显示:(1)空白组脾脏、头肾和血... 详细信息

为探究长江刀鲚TH1细胞、MIF、IL-10、TNF-α、Ig M、Ig T和Ig D的常规水平及异尖科线虫寄生所导致的免疫变化,采用ELISA法分别测定了空白组和3个寄生组的脾脏、头肾和血清中7种免疫分子的表达水平。结果显示:(1)空白组脾脏、头肾和血清中免疫分子水平均表现为Ig D(PIg M(PIg T(PMIF(P TH1细胞(P>0.05)>TNF-α(P>0.05)>IL-10,且血清中免疫分子水平显著高于脾脏和头肾(P 异尖科线虫寄生可增加长江刀鲚免疫分子的表达水平,诱导炎症反应和适应性免疫反应的发生,脾脏、头肾和血清中部分免疫分子水平与异尖科线虫数量间的相关性显著,其中血清TH1细胞、脾脏中Ig T和TNF-α可作为长江刀鲚应对异尖科线虫寄生的免疫功能测定优选指标。

关键词：长江刀鲚异尖科线虫免疫分子酶联免疫测定

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台湾海峡鱼类寄生异尖科线虫幼虫形态和分子鉴定及感染状况分析

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台湾海峡鱼类寄生异尖科线虫幼虫形态和分子鉴定及感染状况分析

作者：文茜河北师范大学

学位级别：硕士

本研究对我国台湾海峡海域的鱼类寄生异尖科线虫进行了调查研究。于2011年5月在福建厦门和平潭检测190种，506尾鱼，有138种鱼感染有异尖线虫,本实验对其中的45种鱼的感染状况进行了调查研究。我们通过形态学结合分子学方法来对所检获... 详细信息

本研究对我国台湾海峡海域的鱼类寄生异尖科线虫进行了调查研究。于2011年5月在福建厦门和平潭检测190种，506尾鱼，有138种鱼感染有异尖线虫,本实验对其中的45种鱼的感染状况进行了调查研究。我们通过形态学结合分子学方法来对所检获的异尖科幼虫进行鉴定。首先依据在光学显微镜下观察到的异尖线虫形态特征将其进行筛选鉴定，然后对其进行DNA提取，应用PCR-RFLP技术及rDNAITS区序列测序将异尖科线虫鉴定到种。共发现有八种异尖线虫，如下：派氏异尖线虫Anisakis pegreffii，典型异尖线虫Anisakis typica，鮟鱇针蛔线虫Raphidascaris lophii，舟山宫脂线虫Hysterothylacium zhoushanensis，长唇宫脂线虫Hysterothylacium longilabrum，狮子鱼宫脂线虫Hysterothylacium liparis，宫脂线虫未定种Hysterothylacium ***-2012和厦门宫脂线虫Hysterothylacium amoyense。并对每一个种进行了形态描述，讨论和绘图。其中典型异尖线虫，舟山宫脂线虫，长唇宫脂线虫和狮子鱼宫脂线虫四种为在台湾海峡的首次报道。运用包括以上八个种的ITS区序列在内的23种不同的ITS区序列构建系统发育树，并对这些序列间的亲缘关系进行探讨。该系统树总体分为两大支，一支是由异尖属线虫种类组成的，另一支则包含宫脂属和针晶蛔属。宫脂线虫未定种Hysterothylacium ***-2012与宫脂属线虫聚类在一起，从而确定其属于宫脂属;灰海鳗对盲囊线虫***（Luo,1999）与舟山宫脂线虫和厦门宫脂线虫聚类在一起，也说明了将灰海鳗对盲囊线虫归为宫脂属更为合理;鮟鱇针蛔线虫Raphidascaris lophii与带鱼针蛔线虫Raphidascaris trichiuri聚类在一起，说明二者亲缘关系较近，这与我们对二者ITS区序列比对结果相吻合。本研究对这八种线虫在所采集样本鱼类的感染率及感染强度进行了调查研究，我们发现异尖线虫为台湾海峡鱼类寄生线虫的主要类群。其中，宫脂属线虫具有较高的感染率和较强的感染强度，为优势属，宫脂线虫未定种***-2012的宿主范围最广，感染强度高，为此海域的优势种。异尖线虫幼虫感染强度均较高的鱼类有：五点斑鲆Pseudorhombus quinquocellatus(平均每尾鱼感染132条异尖线虫)，其次是杂斑狗母鱼Synodus variegates(平均每尾鱼感染99条异尖线虫);本研究为当前台湾海峡鱼类寄生异尖线虫的感染状况提供了参考数据，对台湾海峡鱼类寄生线虫病的防治和人类异尖线虫病的防治有重要的理论和实际意义。

关键词：台湾海峡鱼类异尖科线虫 PCR-RFLP 感染状况