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广地龙化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物(Q-Marker)的预测分析

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中草药 2022年第8期53卷 2560-2571页

作者：李思维郝二伟杜正彩韦玮王星圆陈静梅侯小涛邓家刚广西中医药大学药学院广西南宁530200 广西中药药效研究重点实验室广西南宁530200 广西农作物废弃物功能成分研究协同创新中心广西南宁530200 广西中医药大学广西中医药科学实验中心广西南宁530200

广地龙Pheretima aspergillum为我国常用传统中药材,主要分布于广西、广东,为岭南地区道地药材。广地龙中化学成分包括蛋白质及多肽类、酶类、氨基酸及二肽类、核苷类、脂肪酸类、甾体化合物、溶血磷脂、无机元素等。传统认为广地龙蚓... 详细信息

广地龙Pheretima aspergillum为我国常用传统中药材,主要分布于广西、广东,为岭南地区道地药材。广地龙中化学成分包括蛋白质及多肽类、酶类、氨基酸及二肽类、核苷类、脂肪酸类、甾体化合物、溶血磷脂、无机元素等。传统认为广地龙蚓激酶、次黄嘌呤和琥珀酸为其主要药效成分。对广地龙化学成分、药理作用的研究进展进行总结,并在此基础上,分析酶类、核苷类、脂肪酸类等成分与药效的关联,基于传统功效与现代药理作用预测其质量标志物(quality marker,Q-Marker),初步确定纤溶活性蛋白、蚓激酶、蚯蚓纤溶酶、次黄嘌呤、肌苷、琥珀酸、多不饱和脂肪酸、氨基酸及二肽类成分为其可能的Q-Marker。建议聚焦其有效成分,结合成分化学物质组入血后的协同作用以及化学成分可测性,建立专属性的测定方法,为明确广地龙Q-Marker和制定科学的质量评价体系提供基础。

关键词：广地龙药效物质基础质量标准质量标志物纤溶活性蛋白蚓激酶蚯蚓纤溶酶次黄嘌呤肌苷琥珀酸多不饱和脂肪酸氨基酸及二肽类

广地龙特异性引物序列的设计及其混伪品的鉴别

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南京中医药大学学报 2020年第3期36卷 408-413页

作者：张前程文红梅刘娜袁琪刘睿崔小兵李松陈盛君南京中医药大学药学院江苏南京210023 江阴天江药业有限公司江苏江阴214434

目的通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出... 详细信息

目的通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定。对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察。结果COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750 bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r。在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574 bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带。结论设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法。

关键词：广地龙 DNA 特异性引物鉴别混伪品

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广地龙的X射线衍射Fourier谱鉴定

中成药 2002年第5期24卷 380-382页

作者：李兰燕王树春吴云山朱志峰郑启泰吕扬中国医学科学院药物研究所北京100050 陕西医学高等专科学校陕西西安710068 陕西省药品检验所陕西西安710061

目的 :建立中药材广地龙的鉴定新分析方法。方法 :采用粉末X射线衍射Fourier谱鉴定法。结果 :通过对 1个广地龙药材对照品、4个广地龙中药材进行实验、分析 ,获得了广地龙的标准X射线衍射Fourier图谱及特征标记峰值。结论 :表明X射线衍... 详细信息

目的 :建立中药材广地龙的鉴定新分析方法。方法 :采用粉末X射线衍射Fourier谱鉴定法。结果 :通过对 1个广地龙药材对照品、4个广地龙中药材进行实验、分析 ,获得了广地龙的标准X射线衍射Fourier图谱及特征标记峰值。结论 :表明X射线衍射Fourier谱鉴定法可用于中药材广地龙的鉴定。

关键词：广地龙中药材鉴定 X射线衍射Fourier图谱

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广地龙中促进子宫收缩的成分

药学学报 1964年第11期11卷 729-734页

作者：徐叔云孙鼎兴尹留康邢文(金荣) 安徽医学院药理学教研组安徽医学院药理学教研组安徽医学院药理学教研组安徽医学院药理学教研组合肥合肥安徽省医学研究所合肥合肥

本文研究了自广地龙中提出来的一种引湿性、淡黄色針状結晶（含量約0.2％）对平滑肌器官（特别是对子宮）的作用。介紹了該結晶的提取方法。該結晶0.1毫克加入25毫升Locke液中,能使已孕和未孕大鼠或豚鼠离体子宮角紧张度明显升高,0.3毫... 详细信息

本文研究了自广地龙中提出来的一种引湿性、淡黄色針状結晶（含量約0.2％）对平滑肌器官（特别是对子宮）的作用。介紹了該結晶的提取方法。該結晶0.1毫克加入25毫升Locke液中,能使已孕和未孕大鼠或豚鼠离体子宮角紧张度明显升高,0.3毫克可使之呈痙攣收縮状态。按1毫克/公斤給已孕和未孕麻醉家兔靜脉注射后15—30分钟,在位子宮紧张度升高,作用維持1.5—3小时。按8—10毫克/公斤注射,子宮紧张度立卽升高和血压急剧下降到零而死亡。9只慢性子宫瘻家兔靜脉注射（3—6毫克/公斤）或灌胃給药（10—20毫克/公斤）后15—45分钟,子宮收縮明显增强,作用維持1.5—3小时（注射給药）和7小时以上（灌胃給药）。多数实驗家兔在子宮兴奋同时有排便現象。該結晶对家兔在位腸管和大鼠后肢血管均有强烈兴奋作用,但对豚鼠支气管肌作用极弱。当給小鼠靜脉注射时,LD50为38.7毫克/公斤。

关键词：子宫孕大鼠女生殖器广地龙豚鼠荷兰猪紧张度灌胃胰蛋白酶

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广地龙药材氨基酸类成分指纹图谱研究

中药材 2009年第9期32卷 1350-1353页

作者：詹云丽黄璐敏黄丹莹翁嘉裘建社广东省惠州市药品检验所广东惠州516003 广东省博罗先锋药业集团有限公司广东博罗516100

目的:建立广地龙药材游离氨基酸类成分的HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生化法,色谱柱为Kromasil C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)与N,N-二甲基甲酰胺-0.025 mol/L醋酸钠(1∶100,乙酸调pH6.0)(B)为流动... 详细信息

目的:建立广地龙药材游离氨基酸类成分的HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生化法,色谱柱为Kromasil C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)与N,N-二甲基甲酰胺-0.025 mol/L醋酸钠(1∶100,乙酸调pH6.0)(B)为流动相,梯度洗脱,在360 nm波长下检测,柱温为40℃,流速为1.0 mL/min。结果:对15个批次的广地龙药材进行了分析,确定了18个共有峰,不同批次药材相似度均大于0.87,建立了广地龙药材氨基酸类成分的HPLC指纹图谱。结论:建立了广地龙指纹图谱检测标准,为广地龙药材的鉴别和质量控制提供了依据。

关键词：广地龙氨基酸指纹图谱高效液相色谱

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广地龙对重金属富集特性的初步研究

中药材 2007年第5期30卷 519-521页

作者：李薇沈克杨洁瑜莫嘉婧吴文如广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的:探讨三种重金属镉(Cd)、汞(Hg)、铅(Pb)在广地龙体内的富集特性。方法:应用半静态条件下的双箱动力学模型,将不同浓度重金属饲养过的广地龙经浓硝酸-过氧化氢低温消解处理后测定重金属含量。结果:地龙在Pb高、中、低浓度的富集速... 详细信息

目的:探讨三种重金属镉(Cd)、汞(Hg)、铅(Pb)在广地龙体内的富集特性。方法:应用半静态条件下的双箱动力学模型,将不同浓度重金属饲养过的广地龙经浓硝酸-过氧化氢低温消解处理后测定重金属含量。结果:地龙在Pb高、中、低浓度的富集速率分别为k1=1.232,K2=1.325,K3=1.058;对Cd的高、中、低浓度富集速率分别为k1=0.1792,K2=0.1753,K3=0.1382;对Hg的富集呈现出波动性。结论:广地龙从土壤中富集Pb的能力明显高于Cd,且随着时间的推移而增大;对Hg的富集作用是先快速吸收,积累到一定浓度时,再快速排出,而后再度吸收。

关键词：广地龙重金属富集特性

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的广地龙化学成分分析

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中草药 2017年第2期48卷 252-262页

作者：张玉董文婷霍金海王伟明黑龙江省中医药科学院黑龙江哈尔滨150036

目的建立广地龙药材中化学成分的超高液相色谱-质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温35℃,正负... 详细信息

目的建立广地龙药材中化学成分的超高液相色谱-质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温35℃,正负离子模式扫描。结果共鉴定出广地龙药材中84个化学成分,包括11种游离氨基酸、26种有机酸类、11种核苷类、5种二肽及环二肽类、21种含氮类物质和10种其他类。结论该法准确、快速、灵敏,为进一步阐明其药效物质基础和后期质量控制指标的选择提供科学依据。

关键词：广地龙超高液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱氨基酸有机酸类核苷类

HPLC法测定各沪产地龙和广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶和尿苷的含量

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第二军医大学学报 2015年第4期36卷 443-446页

作者：季倩高守红张汉明张磊第二军医大学药学院药用植物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院药材科上海200003

目的测定各种沪产地龙与广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷的含量,建立地龙药材质量评价的方法。方法用0.9%生理盐水超声提取地龙,SORBAX SB-Aq色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm,Aglient Co.,Ltd）,流动相：5mmol/L磷酸二氢钾（pH 2.9... 详细信息

目的测定各种沪产地龙与广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷的含量,建立地龙药材质量评价的方法。方法用0.9%生理盐水超声提取地龙,SORBAX SB-Aq色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm,Aglient Co.,Ltd）,流动相：5mmol/L磷酸二氢钾（pH 2.9）,流速1mL/min,检测波长254nm,柱温30℃,进样量10μL,采用HPLC法,同时测定次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷4种核苷类成分的含量。结果次黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率99.37%,RSD=1.36%（n=6）;黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.993 1）,平均回收率91.57%,RSD=1.40%（n=6）;尿嘧啶的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率95.31%,RSD=1.64%（n=6）;尿苷的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率100.21%,RSD=1.98%（n=6）。结论该方法重复性、回收率好,可用于测定地龙与广地龙中次黄嘌呤等4种核苷类成分的含量。

关键词：沪地龙广地龙次黄嘌呤黄嘌呤尿嘧啶尿苷高压液相色谱法

基于纳升高效液相色谱-四极杆-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱技术研究广地龙中的蛋白质

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中国中药杂志 2019年第2期44卷 324-331页

作者：董洪霜张静娴胡青王艳春孙健张甦于泓冯睿毛秀红季申上海食品药品检验所上海201203 上海医药工业研究院上海201203 上海康桥中药饮片有限公司上海201315

该文以新鲜广地龙(来源钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum)为研究对象,采用SDS-PAGE法对广地龙总蛋白进行分离,并进行胶内酶切,利用纳升高效液相色谱-四极杆-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱技术研究广地龙中的蛋白质。采用Pr... 详细信息

该文以新鲜广地龙(来源钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum)为研究对象,采用SDS-PAGE法对广地龙总蛋白进行分离,并进行胶内酶切,利用纳升高效液相色谱-四极杆-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱技术研究广地龙中的蛋白质。采用Proteome Discoverer软件,检索环节动物门蛋白数据库(Annelida. fasta)鉴定蛋白。结果共鉴定到386个蛋白质,包括珠蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、纤溶活性蛋白等,大多数蛋白质与细胞结构、能量供给有关,纤溶活性蛋白、胍乙基磷酸丝氨酸蛋白酶可能与抗凝血或溶栓活性有关。利用PANTHER对蛋白进行基因本体功能分类,KEGG进行代谢通路富集分析,发现涉及多种信号转导通路,包括代谢途径、碳代谢通路,氨基酸的生物合成通路,糖酵解/糖异生通路,柠檬酸循环等54种。该研究为阐明广地龙的蛋白物质基础以及其功能研究提供了实验依据。

关键词：广地龙蛋白质 SDS-PAGE orbitrap fusion lumos