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小麦幼胚愈伤组织的诱导

湖北农业科学 2014年第16期53卷 3930-3932页

作者：李洁于月华加得拉李春明王青陈万昌高文伟新疆农业大学农学院乌鲁木齐830052

为建立小麦(Triticum aestivum Linn.)幼胚的转化体系,获得转基因的小麦再生植株,对小麦幼胚进行愈伤组织诱导。以新春6号和新春9号小麦幼胚为试验材料,选择不同诱导培养基对幼胚进行愈伤组织诱导。结果表明,4种培养基诱导的愈伤组织质... 详细信息

为建立小麦(Triticum aestivum Linn.)幼胚的转化体系,获得转基因的小麦再生植株,对小麦幼胚进行愈伤组织诱导。以新春6号和新春9号小麦幼胚为试验材料,选择不同诱导培养基对幼胚进行愈伤组织诱导。结果表明,4种培养基诱导的愈伤组织质量和诱导率有明显的差异,其中MCIMA+KT高于其他3种培养基,新春6号和新春9号诱导率分别为53.80%和52.25%,愈伤组织的质量级别为A级,属于极适宜进行遗传转化状态。SD2培养基上诱导出的2个小麦品种愈伤组织分别为0.002%和0.59%,是不适宜进行遗传转化的培养基。新春6号和新春9号2个基因型诱导的愈伤组织数量和质量之间没有明显差异,适于进行遗传转化。

关键词：小麦(Triticum aestivum Linn.) 幼胚愈伤组织诱导

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农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立

湖北农业科学 2014年第12期53卷 2743-2746,2762页

作者：孙传波郭嘉袁英吉林省农业科学院生物技术研究所长春130033

以玉米（Zea mays L.）HiII的幼胚为外植体，β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS）为报告基因，通过农杆菌介导转化法对影响遗传转化体系的外植体大小、农杆菌浓度、热预处理温度、侵染时间、共培养及恢复培养时间、抗生素、筛选剂等因素进行优... 详细信息

以玉米（Zea mays L.）HiII的幼胚为外植体，β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS）为报告基因，通过农杆菌介导转化法对影响遗传转化体系的外植体大小、农杆菌浓度、热预处理温度、侵染时间、共培养及恢复培养时间、抗生素、筛选剂等因素进行优化，以建立农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系。结果表明，幼胚大小为1.0~1.5 mm，农杆菌菌液的OD600 nm为0.5，40℃热处理3 min，侵染8 min，共培养3 d和恢复培养4 d，100 mg/L羧苄青霉素作为抑菌剂，双丙氨膦作为筛选剂时为最佳遗传转化条件。通过该优化体系已获得多种转基因玉米材料，表明该体系具有较高的可重复性和可靠性。

关键词：农杆菌介导转化法玉米(Zea mays L ) 幼胚遗传转化 maize(Zea maysL )

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山核桃幼胚不定芽的诱导

浙江林学院学报 2009年第5期26卷 762-766页

作者：万俊丽黄坚钦夏国华张启香黄丽春浙江林学院浙江省现代森林培育重点实验室浙江临安311300

以山核桃Carya cathayensis花后60,75和100d的幼胚为外植体,金属硫蛋白(MT)复合维生素+20g·L-1葡萄糖+10mg·L-1腺嘌呤+500mg·L-1水解酪蛋白作为基本培养条件,研究山核桃幼胚的不同发育时期,不同植物生长调节物质及基本培养基对山核... 详细信息

以山核桃Carya cathayensis花后60,75和100d的幼胚为外植体,金属硫蛋白(MT)复合维生素+20g·L-1葡萄糖+10mg·L-1腺嘌呤+500mg·L-1水解酪蛋白作为基本培养条件,研究山核桃幼胚的不同发育时期,不同植物生长调节物质及基本培养基对山核桃不定芽诱导的影响。结果表明,山核桃花后60d的幼胚培养56d后未形成不定芽,花后100d的幼胚比花后75d的幼胚诱导产生的不定芽多而且长;植物生长调节物质对山核桃不定芽诱导以0.0100mg·L-14-氨基-3,5,6-三氯吡啶羧-酸(Picloram)+3.0mg·L-16-苄氨基腺嘌呤(6-BA)为启动培养基较佳;当6-BA质量浓度一定时,随Picloram质量浓度增加不定芽数量差异不显著;当Picloram质量浓度一定时,随6-BA质量浓度增加,产生不定芽数逐渐上升,但当6-BA达10mg·L-1时,不定芽出现明显玻璃化现象;2,4-D的添加不利于外植体不定芽产生;MS(Murashige and Skoog)是最佳基本培养基。

关键词：植物学山核桃幼胚组织培养不定芽

不同杂种优势类群玉米幼胚愈伤组织的诱导及植株再生特性的评价

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植物遗传资源学报 2004年第2期5卷 117-122页

作者：张红伟张红梅郑祖平刘汉梅刘亚娟谭振波陈刚北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100089 山西省农业科学院玉米研究所忻州034000

以Reid、唐四平头和其他种质等 3个杂种优势类群共 30份玉米自交系为实验材料 ,以玉米幼胚作为外植体 ,研究基因型、培养基、激素、继代培养次数对玉米幼胚愈伤组织诱导及植株再生的影响。研究结果表明供试材料均能进行愈伤组织诱导 ,... 详细信息

以Reid、唐四平头和其他种质等 3个杂种优势类群共 30份玉米自交系为实验材料 ,以玉米幼胚作为外植体 ,研究基因型、培养基、激素、继代培养次数对玉米幼胚愈伤组织诱导及植株再生的影响。研究结果表明供试材料均能进行愈伤组织诱导 ,但是只有部分自交系能再生植株。通过对不同杂种优势类群自交系玉米幼胚培养特性的分析 ,从Reid、唐四平头和其他种质类群的供试自交系中 ,筛选出了胚性愈伤组织诱导频率和绿苗分化率均较高、适合于遗传转化的受体材料 ,如黄野四 /京 2 4 / /C10 8/黄野四选系、黄早四 /先早 17/ /吉 85 3选系、R4 3/ /黄野四 / 711选系、京 7、京 7黄、3189/ 4 380选系、4 380 /陕综 5选系、810 3、先早 17、18 5 99红、5 0 1、178和冀 5 3。

关键词：杂种优势玉米幼胚愈伤组织植株再生遗传转化

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甜玉米幼胚愈伤组织诱导及植株再生研究

江苏农业科学 2009年第6期37卷 70-71页

作者：陈莉窦秉德程朝霞郝浩永张伟峰运城学院生命科学系山西运城044000 淮阴师范学院植物生物技术研究所/江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室江苏淮安223300

以21种基因型甜玉米为试材,以幼胚为外植体,研究甜玉米愈伤组织诱导和植株再生技术。21种基因型的幼胚均可诱导愈伤组织发生,但不同基因型材料之间愈伤组织诱导率差异较大,变异范围为0～100%。不同基因型材料的愈伤组织增殖能力也有显... 详细信息

以21种基因型甜玉米为试材,以幼胚为外植体,研究甜玉米愈伤组织诱导和植株再生技术。21种基因型的幼胚均可诱导愈伤组织发生,但不同基因型材料之间愈伤组织诱导率差异较大,变异范围为0～100%。不同基因型材料的愈伤组织增殖能力也有显著差异,转入分化培养后,仅选系A23-2-3[3]再生出完整植株。

关键词：甜玉米幼胚愈伤组织诱导植株再生

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玉米幼胚组织培养体系优化

玉米科学 2013年第2期21卷 58-61页

作者：吕颖颖王宏伟李凤海史振声王志斌朱敏吕香玲沈阳农业大学特种玉米研究所沈阳110866

以5个骨干玉米自交系幼胚为材料,研究幼胚大小、2,4-D浓度、KT浓度对幼胚愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,5个骨干玉米自交系均可诱导出愈伤组织,但不同条件下诱导率存在显著差异。最适幼胚大小为2.0～3.0 mm,因基因型不同而有所变... 详细信息

以5个骨干玉米自交系幼胚为材料,研究幼胚大小、2,4-D浓度、KT浓度对幼胚愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,5个骨干玉米自交系均可诱导出愈伤组织,但不同条件下诱导率存在显著差异。最适幼胚大小为2.0～3.0 mm,因基因型不同而有所变化;2,4-D浓度在1.0～3.0 mg/L有利于愈伤组织诱导,同一材料不同2,4-D浓度对胚性愈伤组织诱导率的影响具有显著差异,不能以初级愈伤诱导率高低作为选择胚性愈伤诱导率的标准;KT可显著提高愈伤组织的分化率,随着KT浓度的增加分化率呈先上升后下降的趋势,最适KT浓度为1.0～2.5 mg/L。

关键词：玉米幼胚组织培养幼胚大小 2,4-D浓度 KT浓度

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紫斑牡丹幼胚离体培养试验

甘肃农业大学学报 2009年第6期44卷 63-68页

作者：安阿莉苏小玲毛娟陈佰鸿甘肃农业大学农学院甘肃兰州730070

以紫斑牡丹离体幼胚为试材,研究了胚龄分别为盛花后30 d、45 d6、0 d7、5 d的幼胚萌发率,选取萌发率高的盛花后75 d胚龄的种子于4℃下低温预处理,观察低温预处理对幼胚萌发的影响,并筛选较为适合的紫斑牡丹幼胚初代培养和增殖培养的培... 详细信息

以紫斑牡丹离体幼胚为试材,研究了胚龄分别为盛花后30 d、45 d6、0 d7、5 d的幼胚萌发率,选取萌发率高的盛花后75 d胚龄的种子于4℃下低温预处理,观察低温预处理对幼胚萌发的影响,并筛选较为适合的紫斑牡丹幼胚初代培养和增殖培养的培养基成分。结果表明:胚龄为盛花后75 d的种胚易萌发,萌发率为58.3%,经4℃低温预处理后萌发率可达到68.3%;诱导幼胚萌发与成苗的适宜培养基为MS(微量元素3/2)+1.0 mg.L-16-BA+0.2 mg.L-1IAA+20 g.L-1蔗糖+10 g.L-1葡萄糖+300 mg.L-1CH+0.1 g.L-1琼脂,萌发率和成苗率分别达到100%、98.3%;培养基MS+1.0 mg.L-16-BA+0.01 mg.L-1NAA+30 g.L-1蔗糖+0.1 g.L-1琼脂的增殖培养效果较好,增殖倍数可达5.7。

关键词：紫斑牡丹幼胚离体培养萌发增殖

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小麦幼胚农杆菌转化体系优化

小麦幼胚农杆菌转化体系优化

作者：武海娜河北农业大学

学位级别：硕士

小麦幼胚培养能力高、植株再生能力强,被认为是转基因最理想的外植体材料,利用农杆菌介导法进行小麦幼胚遗传转化研究有助于推动小麦基因工程育种的进程。本研究以不同小麦基因型的幼胚为受体材料,通过筛选高培养力基因型,改良诱导培养... 详细信息

小麦幼胚培养能力高、植株再生能力强,被认为是转基因最理想的外植体材料,利用农杆菌介导法进行小麦幼胚遗传转化研究有助于推动小麦基因工程育种的进程。本研究以不同小麦基因型的幼胚为受体材料,通过筛选高培养力基因型,改良诱导培养基和愈伤分化再生等途径,优化了小麦幼胚组织培养高频再生体系。在此基础上采用农杆菌介导的方法对小麦幼胚愈伤组织进行EeAP2-1.1、OsDREB2.2等抗逆转录因子的遗传转化,并对影响遗传转化效率的因素进行了研究,优化了农杆菌介导的小麦幼胚遗传转化体系。获得的主要研究结果如下: 1.通过对不同基因型小麦材料进行幼胚愈伤组织诱导及分化再生试验,明确了小麦的胚龄、基因型、幼胚愈伤诱导培养基、生长素和细胞分裂素是影响小麦幼胚愈伤组织形成和分化再生的重要因素,确定了在保定地区河农827等4个冬小麦品种幼胚的最佳培养时期为胚龄126 d;NO.1ˊ、DIC、W1、W2四种改良培养基诱导愈伤效果较好;最佳分化培养基激素配比:1.0 mg/L KT+0.2-0.4 mg/L NAA;筛选出4个适合小麦幼胚培养和植株再生的基因型材料,初步优化了小麦幼胚愈伤组织再生体系。 2.对14个小麦基因型进行农杆菌敏感性检测分析,组织化学染色结果表明,河农827的愈伤对农杆菌侵染比较敏感,GUS基因瞬时表达率达91.91%。利用混合正交设计L(4×2)对河农827进行遗传转化研究,得到最佳转化条件为愈伤组织在诱导培养基W2上诱导培养6 d,农杆菌OD=1时进行侵染3 h。明确了筛选体系中抗生素的适宜添加浓度为25 mg/L G418+250 mg/L carb;用含有抗生素的PCM液体培养基洗涤共培养后的愈伤,能够减小对愈伤造成的损伤,获得较多的抗性愈伤;采用22℃条件下滤纸上培养3 d的共培养方式以及农杆菌侵染液中加入0.01%的表面活性剂聚醚F68,能够减小愈伤褐化率,有助于提高小麦愈伤组织的转化效率;在生根培养基上添加1mg/L IBA,解决了农杆菌侵染后再生苗不易生根的难题,初步优化了农杆菌介导的小麦幼胚遗传转化体系。 3.利用优化的小麦幼胚遗传转化体系将EeAP2-1.1、OsDREB2.2抗逆转录因子转入小麦幼胚愈伤组织中,获得了47株T抗性再生植株,经PCR初步鉴定筛选出7株阳性转基因植株。

关键词：小麦幼胚组织培养 EeAP2-1.1 OsDREB2.2 农杆菌介导

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节节麦幼胚和成熟胚再生体系建立

节节麦幼胚和成熟胚再生体系建立

作者：徐凤西北农林科技大学

学位级别：硕士

节节麦(Aegilops tauschii Cosson),属于禾本科小麦族山羊草属,是普通小麦(Triticum aestivum L.)D基因组的供体种。本研究以节节麦幼胚为外植体材料,进行了4因素不同水平的正交设计试验,探索了基本培养基、碳源、2,4-D、KT等因素对节... 详细信息

节节麦(Aegilops tauschii Cosson),属于禾本科小麦族山羊草属,是普通小麦(Triticum aestivum L.)D基因组的供体种。本研究以节节麦幼胚为外植体材料,进行了4因素不同水平的正交设计试验,探索了基本培养基、碳源、2,4-D、KT等因素对节节麦幼胚愈伤组织诱导、分化及成苗等组培特性的影响;以节节麦成熟胚为外植体,探索了2,4-D、转分化时间、KT、6-BA和IAA复配对成熟胚愈伤组织诱导、分化及成苗等组培特性的影响,以寻求建立高效的节节麦幼胚和成熟胚再生体系。研究结果如下:1.研究了基本培养基、碳源及2,4-D等因素对节节麦幼胚愈伤组织诱导效果的影响。结果表明,基本培养基对出愈率有显著影响,且MS培养基对应出愈率最高;而碳源种类及2,4-D浓度对幼胚出愈情况无显著影响,出愈率均在83.41-94.38%之间。基本培养基和2,4-D浓度对节节麦幼胚胚性愈伤率具有显著的影响,3种培养基中,MS培养基对应的胚性愈伤率最高,平均胚性愈伤率为74.41%;在添加2.0 mg﹒L-12,4-D的培养基上获得的胚性愈伤率最高,平均胚性愈伤率为75.26%;而碳源种类对节节麦幼胚胚性愈伤率的影响不显著。2.研究了基本培养基、碳源、2,4-D及KT等因素对节节麦幼胚愈伤组织分化效果的影响。结果表明,基本培养基、2,4-D和碳源等三个因素对节节麦幼胚愈伤分化率的影响不显著,但KT对幼胚愈伤分化率和成苗率具有显著影响,当KT浓度为1.0mg﹒L-1时愈伤分化率和成苗率均最高,平均愈伤分化率和平均成苗率分别为64.44%和7.34%。综合各因素对节节麦幼胚植株再生的影响,研究认为,节节麦幼胚最佳的愈伤诱导培养基为:MS培养基+3.0 mg﹒L-12,4-D+15 g﹒L-1蔗糖+15 g﹒L-1甘露醇,愈伤分化培养基为:MS培养基+1.0 mg﹒L-1KT+15 g﹒L-1蔗糖+15 g﹒L-1甘露醇。3.研究了2,4-D浓度、转分化时间对节节麦成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。发现不同2,4-D浓度对节节麦成熟胚的出愈率、胚性愈伤率、愈伤分化率和成苗率均有显著影响,且这四个指标均随着2,4-D浓度的增加呈先升高后下降的趋势,当浓度为2.0 mg﹒L-1时均达到最大值,分别为:62.17%、39.96%、49.45%和4.20%。转分化时间从25天到40天的处理均对节节麦成熟胚愈伤分化率和成苗率无显著影响,但转分化时间为25天和30天的愈伤组织大部分较为干燥,愈伤质量比35天和40天的质量高。4.研究了KT(附加0.05 mg﹒L-1 NAA)对节节麦成熟胚愈伤组织分化和成苗效果的影响。结果表明,KT对节节麦成熟胚愈伤分化率和成苗率均具有显著影响,愈伤分化率和成苗率均随着KT浓度的升高呈单峰变化,当KT浓度为2.0 mg﹒L-1时均达到最大值(64.44%和2.22%)。6-BA和IAA复配对节节麦成熟胚愈伤组织分化和成苗的影响表现为:固定IAA浓度为0.25 mg﹒L-1时,节节麦成熟胚愈伤分化率和成苗率随着6-BA浓度的增加呈先升高后下降的趋势,6-BA浓度为1.5 mg﹒L-1时二者均达到最大值,分别72.03%和6.35%;当6-BA的浓度为1.0 mg﹒L-1,愈伤分化率和成苗率随IAA浓度的增加同样呈先升高后下降的趋势,IAA浓度为0.25 mg﹒L-1时愈伤分化率和成苗率均达到最大值,分别为64.80%和5.56%。

关键词：节节麦幼胚成熟胚愈伤组织植株再生