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‘凤丹’牡丹幼胚愈伤组织诱导的优化和再生体系的建立

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园艺学报 2022年第1期49卷 166-174页

作者：刘蓉慈惠婷任秀霞高洁王顺利张秀新中国农业科学研究院蔬菜花卉研究所国家花卉改良中心中国农业科学院牡丹研究中心农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室北京100081

以‘凤丹’牡丹的幼胚为材料,从取样时期、切割接种方式、基本培养基和植物生长调节剂选择等方面进行再生体系优化。结果表明:授粉后60 d为‘凤丹’牡丹幼胚诱导愈伤的最佳取材时期;完全破碎切割成幼胚薄片比完整胚、1/2胚和1/4胚更容... 详细信息

以‘凤丹’牡丹的幼胚为材料,从取样时期、切割接种方式、基本培养基和植物生长调节剂选择等方面进行再生体系优化。结果表明:授粉后60 d为‘凤丹’牡丹幼胚诱导愈伤的最佳取材时期;完全破碎切割成幼胚薄片比完整胚、1/2胚和1/4胚更容易获得高质量的愈伤组织,且褐化率较低;MS基本培养基添加0.162μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)可提高幼胚愈伤组织诱导率,但会增加褐化率,而在WPM基本培养基中添加不同浓度的H_(2)O_(2),对愈伤诱导率和褐化率的影响不大;WPM基本培养基比MS更适于‘凤丹’牡丹幼胚再生;WPM+2.5 mg·L^(-1)2,4-D+0.1 mg·L^(-1)6-BA是诱导愈伤的最佳植物生长调节剂组合,诱导率可达93.33%;不定芽和不定根诱导的最佳组合分别为WPM+30 g·L^(-1)蔗糖+3 g·L^(-1)植物凝胶+0.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1) GA_(3)和1/2 WPM+30 g·L^(-1)蔗糖+2.5 g·L^(-1)植物凝胶+2 mg·L^(-1) IBA+1 mg·L^(-1) IAA。

关键词：牡丹幼胚愈伤诱导褐化离体再生

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马蔺幼胚高效再生体系的建立

植物研究 2023年第3期43卷 333-339页

作者：安文杰王银杰刘清泉杨永恒张婷范少茹张永侠原海燕山西林业职业技术学院太原030009 江苏省中国科学院植物研究所南京210014

以马蔺(Iris lacteal ***)幼胚为外植体,探究不同时期幼胚及不同植物生长调节剂对愈伤组织、体胚和不定芽诱导的影响。结果表明:在本试验条件下最佳取材时间为授粉后35~45 d,此时,幼胚发育完全但胚乳尚未完全硬化,幼胚剥取容易;愈伤组... 详细信息

以马蔺(Iris lacteal ***)幼胚为外植体,探究不同时期幼胚及不同植物生长调节剂对愈伤组织、体胚和不定芽诱导的影响。结果表明:在本试验条件下最佳取材时间为授粉后35~45 d,此时,幼胚发育完全但胚乳尚未完全硬化,幼胚剥取容易;愈伤组织最适诱导培养基为MS+1.0 mg·L^(-1)2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.2 mg·L^(-1)6-苄氨基嘌呤(6-BA),诱导率为83.33%;最适体胚诱导培养基为MS+0.25 mg·L^(-1)2,4-D+0.05 mg·L^(-1)6-BA,诱导率71.67%;最佳不定芽诱导和增殖培养基为MS+1.0 mg·L^(-1)噻苯隆(TDZ)+0.2 mg·L^(-1)萘乙酸(NAA),诱导率为78.33%,增殖系数为3.65;在添加0.1 mg·L^(-1)NAA的MS培养基上诱导生根,4周后的生根率达95%以上;生根培养4周的植株清洗掉根部培养基后,移栽至经高温消毒的蛭石中培养,成活率达95%以上。该研究建立了高效的马蔺再生体系,可为马蔺的遗传改良和基因功能研究奠定基础。

关键词：马蔺幼胚离体培养愈伤诱导高效再生

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农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系

浙江农林大学学报 2022年第1期39卷 13-21页

作者：周佳君胡恒康龚丽干安格喻卫武吴家胜黄坚钦张启香浙江农林大学林业与生物技术学院浙江杭州311300 浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室浙江杭州311300

【目的】以香榧Torreya grandis‘Merrillii’幼胚为受体材料,开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究,揭示影响香榧遗传转化的关键因素,以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系。【方法】以香榧种子突破种鳞后第8周至... 详细信息

【目的】以香榧Torreya grandis‘Merrillii’幼胚为受体材料,开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究,揭示影响香榧遗传转化的关键因素,以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系。【方法】以香榧种子突破种鳞后第8周至第11周的幼胚作为转基因受体材料,比较受体胚龄、农杆菌菌液浓度、侵染时间、抗生素质量浓度对遗传转化效率的影响,并采用潮霉素、绿色荧光蛋白GFP表达及GFP基因聚合酶链式反应对遗传转化香榧幼胚培养物进行阳性筛选。【结果】随着胚龄的增加,香榧幼胚抗逆性增强,污染率降低,成活率提高,第10周和第11周幼胚成活率分别为52.1%和52.3%。农杆菌菌液浓度和侵染时间均对香榧幼胚的污染率、成活率、愈伤组织诱导率以及体胚发生率具有显著影响(P幼胚愈伤组织诱导率和体胚发生率最高,分别为17.9%和17.3%;侵染时间为10 min时,愈伤组织诱导率和体胚发生率为最高,分别达17.5%和17.1%。羧苄青霉素对于受体材料的农杆菌脱除具有显著影响(P胚发生率均最高,分别为60.5%、15.8%和17.5%。潮霉素对于香榧幼胚培养物的阳性筛选具有良好的效果,当潮霉素质量浓度为100 mg·L^(-1)时,成活率为30.5%。【结论】不同胚龄香榧幼胚遗传转化效果不同,突破种鳞后第10周香榧幼胚遗传转化效果良好;当农杆菌菌液D(600)为0.5,侵染时间为10 min时,转化效果最佳;300 mg·L^(-1)为羧苄青霉素脱除农杆菌的最佳质量浓度;100 mg·L^(-1)是潮霉素阳性香榧幼胚筛选的最佳质量浓度。图3表5参37。

关键词：香榧幼胚农杆菌介导的遗传转化羧苄青霉素潮霉素

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水稻幼胚电激转化及转基因植株再生(英文)

Acta Botanica Sinica 2002年第7期44卷 827-831页

作者：王胜华赵洁杨弘远武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室武汉430072

幼胚的遗传转化对研究植物胚胎发育相关基因的表达与调控具有重要意义 ,也为植物遗传改良提供新的技术。本研究借助一种自制的特殊装置 ,采用电激法将GFP基因转入 2 - 3天水稻幼胚 ,得到瞬时表达 ,4- 6天水稻幼胚经电激后再生了植株 ,... 详细信息

幼胚的遗传转化对研究植物胚胎发育相关基因的表达与调控具有重要意义 ,也为植物遗传改良提供新的技术。本研究借助一种自制的特殊装置 ,采用电激法将GFP基因转入 2 - 3天水稻幼胚 ,得到瞬时表达 ,4- 6天水稻幼胚经电激后再生了植株 ,并在愈伤组织阶段及R0植株中检测到GFP荧光的转基因植株 ,从而建立了水稻幼胚的遗传转化实验系统。在电容为 5 0 0 μF、电压为 30 0V/cm ,浓度为 10 0 μg/mL的条件下 ,幼胚GFP的电激转化频率可达 35 %。在pH 5 .8的电激缓冲液中 ,最高转化频率可达 40 %。在三种不同的启动子实验中 ,以Ubi启动子的转化频率最高。

关键词：水稻幼胚电激转化转基因植株再生

刺葡萄幼胚愈伤组织诱导及其高产原花青素细胞系筛选

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植物生理学报 2014年第11期50卷 1683-1691页

作者：赖呈纯范丽华黄贤贵谢鸿根福建省农业科学院农业工程技术研究所福州350003

以刺葡萄幼胚为材料,研究不同培养方式、培养基配方和培养条件对其愈伤组织诱导的影响,采用正交试验设计法筛选刺葡萄愈伤组织继代增殖的培养基配方,并对继代保持的培养条件和方式进行优化,同时进行了高产原花青素刺葡萄愈伤组织细胞系... 详细信息

以刺葡萄幼胚为材料,研究不同培养方式、培养基配方和培养条件对其愈伤组织诱导的影响,采用正交试验设计法筛选刺葡萄愈伤组织继代增殖的培养基配方,并对继代保持的培养条件和方式进行优化,同时进行了高产原花青素刺葡萄愈伤组织细胞系的筛选研究。结果表明,刺葡萄幼胚以平放的方式接种到MS+1.0 mg·L-1 2,4-D或MS+1.0 mg·L-1 2,4-D+0.5mg·L-1 KT的固体培养基上,在黑暗的条件下,能有效的诱导出愈伤组织,诱导效率为80%;刺葡萄愈伤组织继代增殖以MS+1.5 mg·L-1 2,4-D或MS+1.5 mg·L-1 2,4-D+0.5 mg·L-1 KT的固体培养基为佳,并且采用此两种培养基交替继代培养,在光照条件下能长期保持旺盛且生长一致的刺葡萄愈伤组织;筛选出了紫红色松脆状的高产原花青素的刺葡萄愈伤组织细胞系,培养35 d后每克鲜样的原花青素含量可达1 671.16μg。

关键词：刺葡萄幼胚愈伤组织花青素原花青素

广东不同玉米基因型幼胚愈伤组织诱导差异研究

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安徽农业科学 2022年第5期50卷 85-89页

作者：何慧怡陈勇生崔方庆齐永文劳方业广东省科学院南繁种业研究所广东广州510316

[目的]针对广东玉米品种建立高效遗传再生技术体系。[方法]以穗甜1号、广糯1号和广黑甜3个玉米品种的幼胚为外植体,研究N_(6)培养基中不同浓度的L-Pro、AgNO_(3)、2,4-D对愈伤组织诱导率和胚性愈伤率的影响。[结果]较高浓度的Pro(1000~1... 详细信息

[目的]针对广东玉米品种建立高效遗传再生技术体系。[方法]以穗甜1号、广糯1号和广黑甜3个玉米品种的幼胚为外植体,研究N_(6)培养基中不同浓度的L-Pro、AgNO_(3)、2,4-D对愈伤组织诱导率和胚性愈伤率的影响。[结果]较高浓度的Pro(1000~1300 mg/L)有利于玉米愈伤组织诱导,而继代时在N_(6)培养基中添加29.43μmol/L AgNO_(3)则可获得较多高质量的胚性愈伤组织;对3个玉米品种而言,培养基中2,4-D的适宜浓度为1~2 mg/L。3种基因型的外植体均可诱导出愈伤组织,但基因型和激素种类与浓度均影响愈伤组织诱导效率。[结论]在实际应用中,应根据不同基因型选择最佳的L-Pro、AgNO_(3)和2,4-D浓度配比,以获得较多高质量的胚性愈伤组织。

关键词：玉米幼胚愈伤组织诱

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ABA在小麦幼胚培养中的应用研究

安徽农业科学 2023年第6期51卷 18-20页

作者：何盛莲河南省农业科学院小麦研究所河南郑州450002

为提高小麦幼胚体细胞再生频率,以豫麦49、豫麦18、兰考906为试验材料,研究不同浓度ABA对小麦幼胚离体培养特性和草酸盐氧化酶活性的影响。结果表明,不同基因型间、ABA浓度间小麦幼胚愈伤组织诱导率、分化率和草酸盐氧化酶活性差异均达... 详细信息

为提高小麦幼胚体细胞再生频率,以豫麦49、豫麦18、兰考906为试验材料,研究不同浓度ABA对小麦幼胚离体培养特性和草酸盐氧化酶活性的影响。结果表明,不同基因型间、ABA浓度间小麦幼胚愈伤组织诱导率、分化率和草酸盐氧化酶活性差异均达到极显著水平,基因型间以豫麦18最高,兰考906最低;不同ABA浓度间以0.10 mg/L处理对幼胚愈伤组织形成和分化最为有利;不同浓度ABA条件下小麦幼胚胚性愈伤组织诱导率与草酸盐氧化酶活性存在极显著相关。

关键词：小麦幼胚 ABA 胚性愈伤组织培养特性草酸盐氧化酶

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二穗短柄草幼胚再生体系及农杆菌介导转化的初步研究

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草业学报 2010年第5期19卷 9-16页

作者：吴雪莉刘金星 Klaus K Nielsen 杨志民高彩霞南京农业大学园艺学院江苏南京210095 中国科学院遗传与发育生物学研究所植物细胞与染色体工程国家重点实验室北京100101 Research Division DLF-TRIFOLIUM A/S丹麦466060

以二穗短柄草3个品系BDR018,BD21,BD21-3的幼胚为外植体,研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导和再生的影响。采用携带gus和bar基因双元表达载体(pDM805)的根癌农杆菌菌株AGL1对BDR018品系的幼胚愈伤组织进行了遗传转化。本实验探讨了影响... 详细信息

以二穗短柄草3个品系BDR018,BD21,BD21-3的幼胚为外植体,研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导和再生的影响。采用携带gus和bar基因双元表达载体(pDM805)的根癌农杆菌菌株AGL1对BDR018品系的幼胚愈伤组织进行了遗传转化。本实验探讨了影响幼胚愈伤组织诱导再生及遗传转化的几个因素。结果发现,幼胚大小介于0.5～1.0mm之间的愈伤组织诱导率最高。随愈伤组织年龄的增加,BDR018,BD21,BD21-3愈伤组织的再生率下降,白化率上升。愈伤组织年龄在5～8周范围内转化效率较高,平均转化效率为38.5%。真空处理5min和0.01%的Silwet L-77处理均可提高转化效率。对转化植株进行GUS基因化学组织检测和PCR鉴定,初步证明外源基因已整合再生植株基因组中。

关键词：二穗短柄草幼胚愈伤组织农杆菌遗传转化

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冬枣极早期幼胚培养成苗技术研究

园艺学报 2014年第10期41卷 2115-2124页

作者：梁春莉赵锦刘孟军河北农业大学中国枣研究中心河北保定071001 辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009 河北农业大学生命科学学院河北保定071001

以胚龄15~20 d的球形期后期‘冬枣’幼胚为试材,对培养基种类、种皮保留与否、接种方式、生长调节剂种类、水解乳蛋白(LH)和活性炭(AC)用量、蔗糖浓度等影响极早期幼胚培养的诸因素进行了系统研究。结果表明,采用MS+3.0 mg·L-1 IAA+0.5... 详细信息

以胚龄15~20 d的球形期后期‘冬枣’幼胚为试材,对培养基种类、种皮保留与否、接种方式、生长调节剂种类、水解乳蛋白(LH)和活性炭(AC)用量、蔗糖浓度等影响极早期幼胚培养的诸因素进行了系统研究。结果表明,采用MS+3.0 mg·L-1 IAA+0.5 mg·L-1 6-BA+1 g·L-1 AC+0.8 g·L-1LH+30 g·L-1蔗糖的培养基,去除种皮后将带有胚乳的幼胚合点端接入培养基,在21℃下进行培养,胚萌发率和正常胚比率最高可分别达到93%和84%。萌发后的幼胚在MS+IBA 0.4 mg·L-1的培养基中继续培养,生根率可达40%。其中,去除种皮带胚乳培养和幼胚合点端朝下接种对极早期幼胚的培养至关重要。

关键词：枣幼胚培养萌发成苗