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肌腱干细胞与骨髓间充质干细胞促进髌腱愈合的对比研究

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浙江大学学报（医学版） 2016年第2期45卷 112-119页

作者：孔祥朋倪明张国强柴伟李想李於聪王岩解放军总医院骨科

目的：观察肌腱干细胞（TDSC）和骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠缺损髌腱的修复作用。方法：从SD大鼠的髌腱及骨髓组织中，分离出TDSC和BMSC并培养，分别联合纤维蛋白胶移植到大鼠髌腱缺损模型中。60只SD大鼠分为以下三组：TDSC组采用T... 详细信息

目的：观察肌腱干细胞（TDSC）和骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠缺损髌腱的修复作用。方法：从SD大鼠的髌腱及骨髓组织中，分离出TDSC和BMSC并培养，分别联合纤维蛋白胶移植到大鼠髌腱缺损模型中。60只SD大鼠分为以下三组：TDSC组采用TDSC＋纤维蛋白胶；BMSC组采用BMSC＋纤维蛋白胶；对照组采用纤维蛋白胶。术后1、2、4、6、8周检测移植物的大体外观形态、组织学变化及生物力学指标。结果：术后8周TDSC组、BMSC组髌腱缺损基本消失，对照组仍可见髌腱缺损边界。术后8周TDSC组、BMSC组均可见类似肌腱样组织；对照组见肉芽组织增生，细胞排列紊乱，组织杂乱无序。随着时间增长各组的最大应力、最大应力百分比和弹性模量、弹性模量百分比均增加（均P〈0．05）；在各个时间点，TDSC组、BMSC组的最大应力和弹性模量均高于对照组（均P〈0．05）。在2周时，TDSC组的最大应力百分比和弹性模量百分比均高于对照组（均P〈0．05）；TDSC组、BMSC组在4、6、8周时最大应力百分比和弹性模量百分比均高于对照组（均P〈0．05），TDSC组与BMSC组差异无统计学意义（P〉0．05）。8周时，TDSC组与BMSC组的弹性模量百分比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：同种异体TDSC联合纤维蛋白胶可促进肌腱早期愈合、改善肌腱的生物力学特性，并且其弹性模量优于BMSC联合纤维蛋白胶，提示TDSC能更好地促进肌腱损伤的早期修复。

关键词：干细胞/细胞学腱间质干细胞/细胞学骨髓腱损伤生物力学对比研究模型,动物

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结膜上皮干细胞研究进展

中华实验眼科杂志 2015年第9期33卷 840-843页

作者：姚钦科傅瑶上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科 200011

结膜上皮干细胞是结膜上皮细胞和杯状细胞的共同祖细胞,具有较强的自我更新、增生和分化能力,在维持眼表稳态和损伤修复中起关键作用.随着对结膜上皮干细胞研究的不断深入,我们对眼表稳态的调节机制更加了解,并且为组织工程技术重建结... 详细信息

结膜上皮干细胞是结膜上皮细胞和杯状细胞的共同祖细胞,具有较强的自我更新、增生和分化能力,在维持眼表稳态和损伤修复中起关键作用.随着对结膜上皮干细胞研究的不断深入,我们对眼表稳态的调节机制更加了解,并且为组织工程技术重建结膜上皮提供了种子细胞.本文就结膜上皮干细胞的概念、生物学特性、解剖学部位、鉴别、体外培养及其检测方法、分化、临床应用等的研究进展进行综述。

关键词：干细胞/细胞学结膜上皮杯状细胞细胞培养

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组织工程角膜上皮种子细胞的研究进展

中华实验眼科杂志 2015年第9期33卷 857-860页

作者：曹静洁张琛赵少贞天津医科大学眼科医院眼科研究所屈光与角膜科 300384

对于角膜缘干细胞（LSCs）缺乏导致的眼表疾病,角膜移植是较好的治疗方法,传统角膜移植术的开展受供体来源匮乏、术后排斥反应等因素的影响.构建组织工程角膜上皮进行移植很大程度上解决了供体来源和术后免疫排斥的问题,成为重要和有效... 详细信息

对于角膜缘干细胞（LSCs）缺乏导致的眼表疾病,角膜移植是较好的治疗方法,传统角膜移植术的开展受供体来源匮乏、术后排斥反应等因素的影响.构建组织工程角膜上皮进行移植很大程度上解决了供体来源和术后免疫排斥的问题,成为重要和有效的治疗方法,而种子细胞的选择是手术成功的关键.随着组织工程技术和细胞培养技术的不断发展,组织工程角膜种子细胞方面的研究越来越多,种子细胞的可选择性也越来越大,如胚胎干细胞（ESCs）、LSCs等研究已经逐步展开.就目前体外重建组织工程角膜上皮研究中使用的种子细胞及其近年来的相关研究进展进行综述。

关键词：角膜上皮/移植组织工程/方法学干细胞/细胞学细胞分化细胞培养组织工程角膜上皮

单细胞反转录酶聚合链式反应技术对胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子的鉴别

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中国临床康复 2006年第5期10卷 50-52页

作者：耿东进陈军浩陈蕾蕾张乐刘勇周锦勇顾香芳韩鹂南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心医学检验中心南京市210008

目的:利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法,实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子,以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法。方法:实验于2001-10/2005-08在加拿大多伦多大学和... 详细信息

目的:利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法,实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子,以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法。方法:实验于2001-10/2005-08在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成。①将收集培养2～4周的单个胰岛干细胞用于实验。②胰岛活性测定实验中,选择1×106分化的胰腺干细胞,用低浓度和高浓度葡萄糖分别刺激1～4h,检测12,14,24d培养液中胰岛素的浓度。③单细胞反转录酶聚合链式反应检测胰岛素促进因子基因实验中,选择12个单个胰腺干细胞进行检测,另取12个单个未分化的干细胞作为对照。聚合链式反应体系为20μL。聚合链式反应扩增反应条件为94℃预变性4min,94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸2min条件下循环35次。聚合链式反应产物以质量浓度为20g/L的琼脂糖凝胶电泳。结果:①分化的胰腺干细胞培养液中胰岛素浓度的检测:培养12,14,24d时培养液中胰岛素的浓度分别为42.6,68.2,73.5IU/L,随着时间的延长,呈逐渐升高的趋势。②单个胰岛干细胞胰岛素促进因子反转录酶聚合链式反应检测结果:12个单个胰岛干细胞中有7个胰岛素促进因子表达呈阳性,而作为对照的12个未分化干细胞均未检出,两者差异显著(P细胞反转录酶聚合链式反应检测方法为胰腺干细胞的鉴定和纯化提供了技术保障,证明单细胞反转录酶聚合链式反应是一种检测胰腺干细胞标记物的有效方法。

关键词：干细胞/细胞学聚合酶链反应细胞分化细胞分离胰岛素基因细胞,培养的胰腺/细胞学免疫组织化学

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海马神经干细胞在抑郁症治疗中的可能作用

中国组织工程研究 2005年第20期9卷 154-155页

作者：郑晓霓单德红季颖王德山辽宁省沈阳市东陵区中医院内科辽宁中医学院基础医学院生理心理教研室辽宁省沈阳市110015 辽宁省沈阳市110032 辽宁中医学院基础医学院生理心理教研室

目的:从国外神经干细胞和抑郁症的相关研究出发,探讨海马神经干细胞在抑郁症治疗中的可能作用。资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2005-04与神经干细胞和抑郁症相关文献,检索词分别为“neuralstemcell,hippocampus,rat”和“depre... 详细信息

目的:从国外神经干细胞和抑郁症的相关研究出发,探讨海马神经干细胞在抑郁症治疗中的可能作用。资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2005-04与神经干细胞和抑郁症相关文献,检索词分别为“neuralstemcell,hippocampus,rat”和“depression,hippocampus,rat”,并限定语种为英文;并手工检索2003-01/2005-02《中国临床康复》相关文献,检索词为″海马,神经干细胞,大鼠″并限定语种为中文。资料选择:从资料中选取有关神经干细胞、抑郁症实验研究的相关文章,纳入标准:①实验中涉及激素、神经递质和各种营养因子诱导海马神经干细胞增殖的研究。②实验中涉及抑郁症时海马损伤的研究,如糖皮质激素、谷氨酸、一氧化氮等。③实验涉及中神经营养因子对抑郁症的治疗作用。排除综述类文献,对剩余文献查阅全文。资料提炼:共收集到相关文献106篇,42篇纳入标准。排除相似或重复文献27篇,共15篇文献选定为参考文献。15篇文献涉及诱导海马神经干细胞的内容有10篇,探讨抑郁症海马损伤的研究有5篇。资料综合:海马损伤是抑郁症的中枢神经系统的主要病理表现,这与下丘脑-腺垂体-肾上腺轴-谷氨酸-N-甲基-D-天冬氨酸受体-一氧化氮途径亢进有关;由于该途径还能够抑制海马神经干细胞的增殖分化,导致海马的自身修复能力下降,引起海马萎缩。因此抑制其亢进是预防和控制抑郁症的重要手段,促进海马神经干细胞增殖分化是抑郁症治疗的关键措施。目前,利用原位诱导神经干细胞的方法治疗抑郁症更有实际意义。结论:原位诱导神经干细胞,促进海马神经干细胞增殖分化将可能成为治疗抑郁症的关键措施。

关键词：抑郁症/病因学干细胞/细胞学神经系统/细胞学海马/细胞学

电针对成年脑缺血大鼠缺血侧神经干细胞巢蛋白表达的影响

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中国临床康复 2005年第26期9卷 89-91页

作者：刘喆赖新生浙江中医学院针灸推拿系浙江省杭州市310053 广州中医药大学针灸推拿学院广东省广州市510405

目的:观察电针治疗对成年大鼠脑缺血后缺血侧神经干细胞特异性标记物巢蛋白表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-03在广州中医药大学实验动物中心进行。取清洁级SD雄性大鼠72只,随机分为两组,即模型组(n=36)与电针组(n=36),均采用开颅... 详细信息

目的:观察电针治疗对成年大鼠脑缺血后缺血侧神经干细胞特异性标记物巢蛋白表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-03在广州中医药大学实验动物中心进行。取清洁级SD雄性大鼠72只,随机分为两组,即模型组(n=36)与电针组(n=36),均采用开颅热凝闭法制作大鼠局灶性脑缺血模型,按缺血时间3,7,14和21d将模型组与电针组又各分为4组,即8个亚组(n=9)。对电针组采用1寸毫针针刺大椎、百会,联接G6805-1型电针治疗仪,选择5～10Hz频率的等幅疏密波,刺激强度以大鼠身体轻微颤动为宜,持续30min。模型组大鼠只予以同等条件抓取,但不实施电针治疗处理。观察不同时相脑缺血情况,采用巢蛋白免疫组化法记录大鼠巢蛋白表达阳性细胞的数量,其数量增加表明神经干细胞的增殖。结果:①模型组脑缺血后不同时相(3,7,14和21d)巢蛋白在缺血侧脑皮质、海马齿状回均有阳性表达细胞犤(5.20±1.70,14.16±3.95,9.26±3.29,6.70±2.27),(13.58±2.33,20.34±2.73,13.12±2.25,8.64±1.56)犦,其中7d的阳性细胞数量比其他时相明显增加,差异显著(P细胞数量均较同时相模型组有明显的增加(缺血侧脑皮质:11.50±3.39,26.40±4.65,18.16±3.03,12.66±2.57;海马齿状回:20.04±3.60,29.26±3.16,18.78±2.24,13.52±2.10),差异显著(P<0.05)。结论:电针具有促进大鼠脑缺血后巢蛋白在缺血侧阳性表达保持在较高水平的作用。

关键词：脑缺血电针干细胞/细胞学大鼠,Sprague—Dawky 免疫组织化学/方法细胞巢蛋白表达电针治疗仪神经干细胞缺血大鼠大鼠脑

不同种类干细胞巢的有序分布构成中医经络系统(英文)

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中国临床康复 2006年第21期10卷 189-192页

作者：张建新江苏省兴化冷冻厂江苏省兴化市225700

目的:从中医经络学说方向探讨被认为是绝大部分组织再生的本源组织特异性干细胞与中医经络系统的联系。方法:参阅《黄帝内经》、《难经》、《奇经八脉考》等中医经典理论著作及现代经络理论著作,从中医经络学说方向揭示干细胞巢在组织... 详细信息

目的:从中医经络学说方向探讨被认为是绝大部分组织再生的本源组织特异性干细胞与中医经络系统的联系。方法:参阅《黄帝内经》、《难经》、《奇经八脉考》等中医经典理论著作及现代经络理论著作,从中医经络学说方向揭示干细胞巢在组织中的分布规律,用实验动物验证中医经络学说。结果:不同种类干细胞巢的有序分布构成中医经络系统:①唯有不同种类的成体干细胞等所在的干细胞巢,才具有高度统一的、高度稳定性的细胞团结构,也就是说干细胞自我增殖形成的细胞团结构是相同相似的。②治本时所需的较长时间与成体干细胞自我复制及其产生健康的各级分化细胞所需的较长时间是一致的。③《黄帝内经》中经脉、络脉的分类即是成体干细胞巢的分类。人体成体干细胞分化产生3个等级的定向干细胞。国外众多的研究报告称少数的癌症干细胞才是肿瘤的来源,大多数的癌细胞并不能生长成为新的肿瘤。④胚胎发育的早期,干细胞与祖细胞彼此协同地增殖分化,不存在3个等级的定向干细胞,不存在普适统一的干细胞巢结构。此后,干细胞巢中的成体干细胞成为组织再生的本源,经络系统中有规律性迁移的细胞主要是定向干细胞,其次为成体干细胞,其中,易变异成为癌细胞的定向干细胞为最少。⑤针灸必然会破坏乃至驱散干细胞巢,但诸细胞组分将重新形成新的干细胞巢,其中的成体干细胞一般会出现超补偿性自我增殖,分化产生更多的健康的定向干细胞,后者分化产生更多的健康的分化细胞,使得相应组织的结构与功能恢复至良性状态。结论:经络学说深刻地揭示了干细胞巢是一个复杂开放的微系统,即外来的定向干细胞和成体干细胞的种类不是固定不变的,不是局域性的,而是既有基本稳定不变的静态成分,又有复杂可变的动态成分,是整体性的,并且两者在物种进化史上是可以相互转化的。

关键词：干细胞/细胞学经络实质经脉穴,输(五输) 中医基础理论研究经络现象针刺疗法整体观

类缺血损伤的皮质神经元对外源性神经干细胞分化的影响及其可能机制

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中国临床康复 2005年第1期9卷 74-76,i001页

作者：李力万琪刘勇红张瑞国解放军第四军医大学西京医院神经内科陕西省西安市710032

目的:研究类缺血损伤的皮质神经元对外源性神经干细胞分化的影响作用,并初步探讨其中可能的机制。方法:2002-09/2003-03在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室和解放军第四军医大学全军神经生物研究所进行。类缺血处理后的小鼠皮... 详细信息

目的:研究类缺血损伤的皮质神经元对外源性神经干细胞分化的影响作用,并初步探讨其中可能的机制。方法:2002-09/2003-03在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室和解放军第四军医大学全军神经生物研究所进行。类缺血处理后的小鼠皮质神经细胞与同种异体神经干细胞共培养,通过特异性细胞染色、计数的方法观察神经干细胞分化情况。结果:与缺血处理后的皮质神经细胞共培养的神经干细胞在共培养6～8d后,其分化趋势以及其向神经元分化的趋向均有增强P(干细胞的分化有促进作用,并能促进其向神经元分化。

关键词：干细胞/细胞学神经系统/细胞学移植细胞分化脑缺血

小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性和相关基因的表达

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中国临床康复 2006年第5期10卷 19-21,i0002页

作者：山爱景郭国庆孙艳沈伟哉暨南大学医学院解剖教研室广东省广州市510630 暨南大学血液病研究所广东省广州市510630

目的:观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法:实验于2005-02/06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13.5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞,用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外... 详细信息

目的:观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法:实验于2005-02/06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13.5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞,用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外培养,取培养3d的神经球接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶,用含血清的培养基诱导分化。②免疫细胞化学检测细胞表面抗原。③四甲基偶氮唑盐法绘制生长曲线。④流式细胞术检测细胞周期。⑤反转录-聚合酶链反应和免疫细胞化学技术对神经干细胞进行鉴定。结果:①胚胎神经干细胞及其分化细胞的抗原表达:血清诱导8h,分化细胞中(8.9±5.6)%细胞呈Tubulin阳性,(87.5±7.4)%细胞胞浆呈胶质纤维酸性蛋白阳性表达。未诱导细胞近100%呈巢蛋白阳性,仅有极少数细胞Tubulin阳性或胶质纤维酸性蛋白阳性。②胚胎神经干细胞的细胞周期:从小鼠胚胎大脑获取的神经干细胞3d左右进入指数生长期;原代培养细胞83.8%处于静止期/DNA合成前期。③原代与传代细胞均表达巢蛋白mRNA,聚集形成的神经球巢蛋白阳性。血清诱导4h胚胎神经干细胞开始转录神经元相关基因Tau和胶质细胞相关基因胶质纤维酸性蛋白。结论:从小鼠胚胎大脑可成功分离获得大量胚胎神经干细胞,并在含碱性成纤维细胞生长因子的条件培养基中迅速增殖,血清诱导下分化生成神经元和星型胶质细胞。

关键词：干细胞/细胞学细胞分化脑/胚胎学细胞培养的流式细胞术逆转录聚合酶链反应