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聚乙二醇修饰干扰素α2b的分离纯化和制备

中国药科大学学报 2001年第4期32卷 310-312页

作者：林碧蓉姚文兵沈子龙吴梧桐中国药科大学生物制药学院南京210009

目的　建立聚乙二醇修饰干扰素 α2 b的分离纯化方法。方法　运用 Superdex75 Highload制备型凝胶色谱柱 ,以含 0 .1 5 mol/L Na Cl的 0 .0 1 mol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱 ,流速为 1 .5 ml/min,检测波长为 2 1 5nm。结果　各洗脱组分经 S... 详细信息

目的　建立聚乙二醇修饰干扰素 α2 b的分离纯化方法。方法　运用 Superdex75 Highload制备型凝胶色谱柱 ,以含 0 .1 5 mol/L Na Cl的 0 .0 1 mol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱 ,流速为 1 .5 ml/min,检测波长为 2 1 5nm。结果　各洗脱组分经 SDS-PAGE检测呈单一条带。聚乙二醇修饰干扰素 α2 b的蛋白回收率为 3 6.5 % ,抗病毒活性回收率为 4 .3 % ,比活度为 4 .74× 1 0 7IU/mg,是原形干扰素 α2 b的 1 0 .4 %。结论　这种方法可以用于制备聚乙二醇修饰干扰素α2

关键词：干扰素α2b 聚乙二醇修饰干扰素α2b 分离纯化制备

首批重组人干扰素α2b活性测定国家标准品的研制

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中国生物制品学杂志 2014年第9期27卷 1173-1175,1180页

作者：裴德宁郭莹丁有学史新昌韩春梅毕华饶春明中国食品药品检定研究院重组药物室北京100050

目的研制首批重组人干扰素α2b（rhIFNα2b）活性测定国家标准品。方法按《中国药典》三部（2010版）相关要求,进行rhIFNα2b活性测定标准品的制备、检验,以rhIFNα2b国际标准品为标准进行协作标定,并使用热加速试验进行稳定性考察。结... 详细信息

目的研制首批重组人干扰素α2b（rhIFNα2b）活性测定国家标准品。方法按《中国药典》三部（2010版）相关要求,进行rhIFNα2b活性测定标准品的制备、检验,以rhIFNα2b国际标准品为标准进行协作标定,并使用热加速试验进行稳定性考察。结果制备的rhIFNα2b活性测定标准品外观、无菌检查合格,水分含量为0.6%,分装精度为0.3%;经5个实验室协作标定共25次,几何平均生物学活性为4.27×105 IU/支,平均生物学活性的95%置信区间为4.13×105-4.42×105 IU/支,单次测定的95%参考值范围为3.65×105-5.00×105 IU/支,平均可信限率为3.32%;在-20℃下,生物学活性降低10%需19.6年,稳定性较高。结论该批rhIFNα2b活性测定标准品各项指标均符合《中国药典》三部（2010版）相关要求,已被批准为国家标准品,规格为：4.27×105 IU/支。

关键词：干扰素α2b 国家标准品生物学活性

高效液相色谱法检测重组人干扰素α2b注射液中组氨酸含量

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中国生物制品学杂志 2014年第10期27卷 1338-1341页

作者：陆春燕李增礼周乐春王荣海宋礼华安徽安科生物工程(集团)股份有限公司安徽合肥230088 安徽省生物研究所安徽合肥230088

目的建立检测重组人干扰素α2b（recombinant human interferonα2b,rhIFNα2b）注射液中组氨酸含量的高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法,并对方法进行验证及初步应用。方法按设定的色谱条件对检测rhIFN... 详细信息

目的建立检测重组人干扰素α2b（recombinant human interferonα2b,rhIFNα2b）注射液中组氨酸含量的高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法,并对方法进行验证及初步应用。方法按设定的色谱条件对检测rhIFNα2b注射液中组氨酸含量的HPLC法进行专属性、系统适应性、试验内和日间精密性、准确性验证,确定方法的线性范围和最低检测限,并用建立的方法检测6批rhIFNα2b注射液中的组氨酸含量。结果该方法专属性、系统适应性、试验内精密性、日间精密性和准确性良好;线性范围为6.0645-775μg/ml（R2=0.999 8）;最低检测限为50ng/ml;用建立的方法检测6批rhIFNα2b注射液中组氨酸含量与标示浓度接近。结论建立的HPLC法准确可靠,可用于rhIFNα2b注射液中组氨酸含量的测定。

关键词：高效液相色谱法组氨酸干扰素α2b

拉米夫定和干扰素α2b体外细胞毒性与抗乙型肝炎病毒作用比较

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医药导报 2012年第10期31卷 1294-1297页

作者：马艳金小宝黄演婷卢雪梅广东药学院广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

目的体外比较拉米夫定和α-干扰素的细胞毒性和抗乙型肝炎病毒作用。方法体外培养L-02和HepG2.2.15细胞,给予不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b,作用72 h后,噻唑蓝(MTT)法检测L-02和HepG2.2.15细胞的生存率;收集不同浓度的拉米夫定和干扰... 详细信息

目的体外比较拉米夫定和α-干扰素的细胞毒性和抗乙型肝炎病毒作用。方法体外培养L-02和HepG2.2.15细胞,给予不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b,作用72 h后,噻唑蓝(MTT)法检测L-02和HepG2.2.15细胞的生存率;收集不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b处理的HepG2.2.15细胞上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HbsAg、HbeAg的分泌。结果拉米夫定对L-02和HepG2.2.15有一定的毒性作用,而干扰素α2b对细胞无毒性作用,甚至能促进正常细胞的增殖;拉米夫定对HbsAg和HbeAg的抑制作用大于干扰素α2b,拉米夫定对HbsAg的抑制率较高,而干扰素α2b对HbeAg的抑制率较高。结论拉米夫定和α干扰素联合使用可提高抗HbV的作用和质量。

关键词：拉米夫定干扰素α2b 细胞毒性抗HbV

聚乙二醇化重组人干扰素α2b性质及冻干保护剂的研究

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聚乙二醇化重组人干扰素α2b性质及冻干保护剂的研究

作者：张雪梅吉林大学

学位级别：硕士

本文研究聚乙二醇化重组人干扰素α(PEG-IFNα)理化及生物学性质,筛选不含人血白蛋白的冻干保护剂配方。主要方法是采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱来测定PEG-IFNα 的相对分子质量;应用反向高效液相法(RP-HPLC)检测PEG-IFNα 的纯... 详细信息

本文研究聚乙二醇化重组人干扰素α(PEG-IFNα)理化及生物学性质,筛选不含人血白蛋白的冻干保护剂配方。主要方法是采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱来测定PEG-IFNα 的相对分子质量;应用反向高效液相法(RP-HPLC)检测PEG-IFNα 的纯度;采用胰蛋白酶裂解后反向高效液相法进行的肽图分析;采用等电聚焦电泳法测定PEG-IFNα 的等电点;PEG-IFNα 和IFNα 肌肉注射小鼠,不同时间采血以微量细胞病变抑制法(CPE)检测干扰素的生物学活性,分别做出血药浓度对时间变化的曲线,分析二者的差异;从几种组方中筛选出适合的冻干保护剂配方。结果表明,干扰素经聚乙二醇化学修饰后相对分子质量为62.6KD,约增加2 倍;紫外最大吸收无变化;肽图分析可见一流洗峰变化较大,提示PEG 化发生在此处;等电点在5.2-6.55 之间,与修饰前无明显差别;抗胰蛋白酶和热稳定性明显增加;抗病毒活性有所下降,约为修饰前的8.2%;药代动力学性质明显改善;所筛选的冻干保护剂使该制品在4℃和25℃放置一年性质无明显改变。通过上述实验,确定了PEG-IFNα 的上述性质,并在此基础上初步建立了PEG-IFNα 的质量控制方法。初步确定了适合PEG-IFNα 的无人血白蛋白冻干保护剂配方。

关键词：干扰素α2b 聚乙二醇化学修饰药代动力学

新型人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白的成药性研究

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新型人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白的成药性研究

作者：孙博沈阳药科大学

学位级别：硕士

慢性乙型病毒性肝炎以其发病率高,复发性高,成为目前很难治愈的疾病之一。干扰素a2b对其具有很好的疗效,但由于它在人体内的半衰期短,必须多次大剂量给药才能达到一定的效果,使其临床应用受到限制。本实验是基于目前进入临床Ⅲ期实验的... 详细信息

慢性乙型病毒性肝炎以其发病率高,复发性高,成为目前很难治愈的疾病之一。干扰素a2b对其具有很好的疗效,但由于它在人体内的半衰期短,必须多次大剂量给药才能达到一定的效果,使其临床应用受到限制。本实验是基于目前进入临床Ⅲ期实验的长效干扰素HSA-IFN-α2b (Albuferon)为研究对象,研究发现该融合蛋白有不均一性、不稳定性以及回收率低等分子缺陷,在此基础上对其进行分子结构改造而构建出新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S),并对其成药性(药物代谢动力学,免疫原性等)进行了初步研究。本实验通过改变融合蛋白相位和基因点突变等技术构建了新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S);通过对新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S)和Albuferon融合蛋白HSA-IFN-α2b进行还原与非还原SDS-PAGE电泳比较;考察两种纯化样品在4℃储存条件下的稳定性差异;将新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)进行125I标记,通过对SD大鼠的皮下和静脉注射考察其药代动力学价值;通过对三种品系小鼠(KM、C57、bLAb/C)注射新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)和Albuferon融合蛋白HSA-IFN-α2b,进而从小鼠收集得到相应的抗血清,采用ELISA间接法测抗体技术比较两种抗血清中产生抗体的差异,最终获得两种融合蛋白的免疫原性、抗原性和抗原表位产生等对比结果。结果显示,通过改变融合蛋白相位和基因点突变等技术构建的新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)具有更高的稳定性和均一性;并且新型融合蛋白IFN-α2b-HSA (C34S)具有更低的免疫原性,并消除了Albuferon融合蛋白的一些抗原表位,药代动力学研究的结果为今后的临床研究提供准确的参照标准。最终,本实验成功的构建了新型长效人血清白蛋白和干扰素a2b融合蛋白：IFN-α2b-HSA(C34S),该新型融合蛋白不仅克服了Albuferon融合蛋白稳定性和均一性差的缺陷,而且具有类似的半衰期和更低的免疫原性,摒弃了Albuferon融合蛋白的生产工艺复杂、工艺周期长及采用生产费用高昂的冻干剂型等不利条件,使得液体制剂成为可能,大大降低了生产成本。’较长的半衰期改变了干扰素α2b需要多次反复给药的尴尬局面。最重要的是,该新型融合蛋白还可以避开现有的专利保护,有望开发成为具有自主知识产权的新型长效IFN-α2b。

关键词：干扰素α2b 人血清白蛋白药物代谢动力学免疫原性抗原性抗原表位

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重组人干扰素α2b的纯化和冻干新方法

重组人干扰素α2b的纯化和冻干新方法

作者：徐仁华吉林大学

学位级别：硕士

干扰素α2b(IFNα2b)是干扰素(IFN)家族的重要成员,IFN是在一定的干扰素诱导剂作用下,由细胞基因控制所产生的,具有抗病毒、抗肿瘤和调节免疫反应等作用的一类高活性、多功能性的诱生糖蛋白。在临床上,IFNα2b主要用于治疗恶性肿瘤和病... 详细信息

干扰素α2b(IFNα2b)是干扰素(IFN)家族的重要成员,IFN是在一定的干扰素诱导剂作用下,由细胞基因控制所产生的,具有抗病毒、抗肿瘤和调节免疫反应等作用的一类高活性、多功能性的诱生糖蛋白。在临床上,IFNα2b主要用于治疗恶性肿瘤和病毒感染。由于过去的rhIFNα2b(重组人干扰素α2b)纯化工艺存在蛋白收率低、蛋白生物活性低、工艺复杂等缺点。本实验针对其缺点,通过对IFNα2b纯化方法的改良,摸索出一套纯化收率高、生物活性高、工艺流程简单、适合大规模生产的rhIFNα2b纯化新工艺。目前,在rhIFNα2b冻干过程中普遍加入人血白蛋白作为冻干保护剂,给rhIFNα2b冻干粉质量增加不确定因素,而且增加了产品成本,本实验室摸索出不添加人血白蛋白的新的辅料配方,确保产品质量,降低生产成本。针对包涵体型蛋白质的特点,进行了rhIFNα2b的纯化工艺的实验研究。通过细胞裂解、超声破碎菌体、包涵体洗涤、包涵体蛋白变性、蛋白复性、SP流穿、DEAE流穿等八个工业化步骤,获得了大量的rhIFNα2b,纯度在97%以上,生物活性在1.4×108IU/mg以上。通过对rhIFNα2b冻干工艺的研究,生产出的产品生物活性在1.3×108IU/mg以上,且在4℃、6个月的环境下具有良好的稳定性。

关键词：干扰素α2b 纯化包涵体蛋白冷冻干燥

干扰素α2b联合等渗葡萄糖治疗急性带状疱疹的疗效及其对血清炎症因子的影响

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中国临床医学 2023年第6期30卷 1005-1009页

作者：殷琴陈立平许恒袁燕梁栋申文徐州医科大学附属医院疼痛科徐州221002

目的探讨干扰素α2b(interferon-α2b,IFN-α2b)联合等渗葡萄糖治疗急性带状疱疹的疗效和对血清炎症因子的影响。方法前瞻性选择2019年9月至2022年12月在徐州医科大学附属医院就诊的急性带状疱疹患者88例,采用随机数字表法分为干扰素组(... 详细信息

目的探讨干扰素α2b(interferon-α2b,IFN-α2b)联合等渗葡萄糖治疗急性带状疱疹的疗效和对血清炎症因子的影响。方法前瞻性选择2019年9月至2022年12月在徐州医科大学附属医院就诊的急性带状疱疹患者88例,采用随机数字表法分为干扰素组(IFN组,n=44)和传统治疗组(C组,n=44)。所有患者接受基础药物治疗和椎旁神经阻滞。C组神经阻滞药物为利多卡因、甲钴胺和复方倍他米松(用生理盐水稀释);IFN组在C组基础上增加IFN-α2b(用5%葡萄糖稀释)。比较两组患者治疗前后疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分,免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、IgA、白细胞介素(interleukin,IL)-17、IL-10、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平,治疗有效率及不良反应发生率。结果与治疗前相比,两组患者治疗后VAS评分均降低(P2周、4周、8周、12周VAS评分低于C组(P24)。两组不良反应发生率差异无统计学意义。结论IFN-α2b联合等渗葡萄糖神经阻滞治疗急性带状疱疹的效果优于传统治疗,改善血清炎症因子水平的效果更优。

关键词：带状疱疹干扰素α2b 等渗葡萄糖炎症因子

干扰素α2b联合迈普新治疗慢性乙型肝炎的临床疗效分析

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吉林医学 2005年第10期26卷 1030-1031页

作者：赵艳娟高歌吉林北方肝胆医院吉林长春130062 吉林大学中日联谊医院吉林长春130031

目的:了解干扰素α2b和迈普新(胸腺肽α1)联合治疗的临床疗效。方法:68例HbeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组。治疗组34例,同时使用干扰素α2b及迈普新26周,随后单用干扰素α2b26周;对照组34例,单用干扰素52周。疗程中... 详细信息

目的:了解干扰素α2b和迈普新(胸腺肽α1)联合治疗的临床疗效。方法:68例HbeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组。治疗组34例,同时使用干扰素α2b及迈普新26周,随后单用干扰素α2b26周;对照组34例,单用干扰素52周。疗程中定期检测谷丙转氨酶(ALT)、HbeAg、抗-Hbe、HbVDNA、透明质酸酶(HA)。结果:全部患者完成1年治疗。治疗组ALT、HbVDNA、HA下降幅度、HbeAg/抗-Hbe血清转换率明显高于对照组(分别为52.1%和24.9%,P=0.04;46.1%和9.4%,P=0.03;62.1%和27.6%,P=0.03;55.6%和27.9%,P=0.04)。结论:干扰素α2b联合迈普新治疗慢性乙型肝炎ALT、HbVDNA、HA下降幅度、HbeAg/抗-Hbe血清转换率疗效优于单用干扰素α2b。

关键词：肝炎病毒乙型干扰素α2b 迈普新药物联合