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脾氨肽冻干粉联合干扰素α2b雾化吸入对呼吸道合胞病毒肺炎患儿疗效及免疫功能的影响观察

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现代医学与健康研究电子杂志 2024年第19期8卷 30-32页

作者：黄怡菡冯洁李宇欣无锡市第八人民医院儿科江苏无锡214011

目的探讨脾氨肽冻干粉联合干扰素α2b雾化吸入治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎患儿的临床疗效,并分析其对患儿免疫功能和炎症反应的影响。方法选取2020年1月至2023年8月无锡市第八人民医院收治的80例RSV肺炎患儿,按照随机数字表法分为常规... 详细信息

目的探讨脾氨肽冻干粉联合干扰素α2b雾化吸入治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎患儿的临床疗效,并分析其对患儿免疫功能和炎症反应的影响。方法选取2020年1月至2023年8月无锡市第八人民医院收治的80例RSV肺炎患儿,按照随机数字表法分为常规组(在退热、平喘、化痰止咳、抗感染等对症处理的基础上采取干扰素α2b雾化吸入治疗10 d)和联合组(在常规组的基础上采取脾氨肽冻干粉治疗10 d),各40例。比较两组患儿治疗后临床疗效,治疗前后免疫功能指标水平、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)]水平、血清细胞因子指标[半乳糖凝集素-3(Gal-3)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、可溶性b7-H3(sb7-H3)]水平,以及治疗期间不良反应发生情况。结果联合组患儿治疗效果优于常规组;与治疗前比,治疗后两组患儿CD3^(+)百分比、CD4^(+)百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值均升高,且联合组均高于常规组;两组患儿CD8^(+)百分比及血清TNF-α、IL-6、CRP、Gal-3、GM-CSF、sb7-H3水平均降低,且联合组均低于常规组(均P0.05)。结论采取脾氨肽冻干粉联合干扰素α2b雾化吸入治疗RSV肺炎可有效改善患儿免疫功能,减轻体内炎症反应程度,治疗效果显著,且安全性良好。

关键词：呼吸道合胞病毒肺炎脾氨肽冻干粉干扰素α2b 免疫功能炎症因子

干扰素α2b通过降低MDSC抑制小鼠肾癌生长的研究

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重庆医科大学学报 2017年第5期42卷 473-480页

作者：殷永健陈仕友罗春丽张尧吴小候重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016 重庆医科大学检验医学院重庆400016

目的:研究干扰素α2b抑制小鼠肾癌生长及其潜在的作用机制。方法:建立肾癌移植瘤模型,干扰素干预后将肾癌移植瘤模型分为对照组和干扰素α2b组,监测各组小鼠移植瘤体积与重量,切取移植瘤作HE染色,免疫组织化学检测移植瘤蛋白bCL-2表达;... 详细信息

目的:研究干扰素α2b抑制小鼠肾癌生长及其潜在的作用机制。方法:建立肾癌移植瘤模型,干扰素干预后将肾癌移植瘤模型分为对照组和干扰素α2b组,监测各组小鼠移植瘤体积与重量,切取移植瘤作HE染色,免疫组织化学检测移植瘤蛋白bCL-2表达;超滤加蔗糖重水密度梯度离心法提取外泌体,透射电镜鉴定外泌体形态及数量的变化;流式细胞术检测小鼠骨髓中髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)比例,小鼠脾脏CD4/CD8T淋巴细胞比例。建立bALb/c小鼠实验模型,将其分为生理盐水组、外泌体组和Renca细胞组,建模后第10、20、30天应用流式细胞仪检测各组小鼠骨髓MDSCs比例。结果:成功建立肾癌移植瘤模型与bALb/c小鼠实验模型,在肾癌移植瘤模型实验中,与对照组比较,干扰素α2b组重量与体积明显被抑制(P干扰素α2b组两组间bcl-2蛋白阳性表达率无统计学差异(P>0.05)。成功分离并纯化外泌体,对照组、干扰素组2组外泌体形态并无统计学差异(P>0.05);与对照组比较,干扰素α2b能明显减少Renca细胞分泌的外泌体数量(P干扰素α2b组MDSCs比例明显降低(P干扰素组荷瘤小鼠CD4/CD8T淋巴细胞比例(PbALb/c小鼠实验模型实验中,在第10天、20天和30天,与生理盐水组相比,外泌体组与Renca细胞组的MDSCs比例明显增高(P0.05)。外泌体组与Renca细胞组内,第20天和30天比第10天要明显增加MDSCs比例(P20天和30天之间MDSCs比例无明显变化(P>0.05)。而生理盐水组MDSCs比例在第10、20和30天之间比较无统计学差异(P>0.05)。结论:干扰素α2b通过抑制Renca细胞分泌外泌体,而Renca细胞来源外泌体在体内参与了小鼠MDSCs的活化、增殖,致使MDSCs的活化、增殖受限,从而抑制小鼠肾癌生长。

关键词：干扰素α2b 外泌体髓源性抑制细胞肾癌抑制生长

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干扰素α2b基因真核表达质粒的构建及表达

中国生物制品学杂志 2010年第11期23卷 1210-1213页

作者：陈奋则王妍朱一松高仁均深圳职业技术学院广东深圳518055 吉林大学分子酶学实验室长春130012

目的构建干扰素α2b(IFNα2b)基因真核表达质粒,并在CHO-dhfr-细胞中表达。方法从DH5α-pbv220-IFNα2b工程菌中扩增IFNα2b基因片段,克隆入psv-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒psv2-dhfr-IFNα2b,转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选... 详细信息

目的构建干扰素α2b(IFNα2b)基因真核表达质粒,并在CHO-dhfr-细胞中表达。方法从DH5α-pbv220-IFNα2b工程菌中扩增IFNα2b基因片段,克隆入psv-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒psv2-dhfr-IFNα2b,转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选,获得稳定生长的单克隆细胞株。采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFNα2b的抗病毒活性;提取细胞基因组DNA,进行PCR鉴定。结果重组真核表达质粒psv2-dhfr--IFNα2b经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;转染后的重组细胞表达的IFNα2b具有抗病毒活性,且活性较强;以转染细胞基因组DNA为模板,可扩增出IFNα2b基因条带。结论已成功构建IFNα2b基因真核表达质粒,并在CHO-dhfr-细胞中表达了具有生物学活性的IFNα2b蛋白,为进一步对IFNα2b进行真核表达的研究奠定了基础。

关键词：干扰素α2b 真核细胞基因表达 CHO细胞

人干扰素α2b和IgGFc片段融合蛋白显著延长体内半衰期

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生物工程学报 2008年第1期24卷 53-62页

作者：王磊何剑肖卫华合肥微尺度物质科学国家实验室中国科学技术大学生命科学学院合肥230027

重组人干扰素a(rHuIFNa)已被广泛用于临床治疗多种人类病毒性疾病和肿瘤。但IFNa在体内半衰期较短从而导致IFNa在用药后数小时即从血浆中被清除。目前常用化学修饰和构建融合蛋白的方法来延长IFNa的半衰期。在本研究中,构建了IFNa2b与人... 详细信息

重组人干扰素a(rHuIFNa)已被广泛用于临床治疗多种人类病毒性疾病和肿瘤。但IFNa在体内半衰期较短从而导致IFNa在用药后数小时即从血浆中被清除。目前常用化学修饰和构建融合蛋白的方法来延长IFNa的半衰期。在本研究中,构建了IFNa2b与人IgG免疫球蛋白Fc片段的融合基因(IFNa2b-Fcγ)并在毕赤酵母中以二聚体形式分泌表达,并有部分糖基化。不同亚型Fcγ片段的融合蛋白对IFNa2b抗病毒活性均有一定影响。其中IFNa2b-Fcγ2所受影响最小,较单纯的IFNa2b降低了2.3倍,抗病毒活性可达4.29x10^7 IU/mg,大鼠皮下注射后循环血液中半衰期达65 h,血液中存留时间120 h以上,比商品重组干扰素的体内半衰期延长约8倍,血液存留时间延长10倍,显示了其良好的临床应用前景。

关键词：干扰素α2b 免疫球蛋白融合蛋白半表期毕赤酵母

干扰素α 2b通过降低MDSC抑制小鼠肾癌生长的研究

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干扰素α 2b通过降低MDSC抑制小鼠肾癌生长的研究

作者：殷永健重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:研究小鼠肾癌生长被干扰素α2b抑制及其潜在的作用机制。方法:1.建立肾癌移植瘤模型,将肾癌移植瘤模型分为对照组和干扰素α2b组,分别给予空白处理和干扰素α2b干预处理。建模后两组荷瘤小鼠移植瘤体积与重量进行观察监测,切取移... 详细信息

目的:研究小鼠肾癌生长被干扰素α2b抑制及其潜在的作用机制。方法:1.建立肾癌移植瘤模型,将肾癌移植瘤模型分为对照组和干扰素α2b组,分别给予空白处理和干扰素α2b干预处理。建模后两组荷瘤小鼠移植瘤体积与重量进行观察监测,切取移植瘤作HE染色。2.外泌体通过超滤蔗糖密度梯度离心法提取,其形态及数量的变化通过透射电镜鉴定。3.在干扰素α2b组与对照组中,淋巴细胞应用FCM检测其所占百分比。4.在干扰素α2b组与对照组中,髓源性抑制性细胞应用FCM检测其所占百分比。***/c小鼠实验模型成功创建,将其分为生理盐水组、外泌体组和Renca细胞组,其后每隔10天荷瘤小鼠骨髓中骨髓源性抑制性细胞比例应用FCM检测。结果:1.肾癌移植瘤模型与bALb/c小鼠实验模型成功创建。在肾癌移植瘤模型实验中,与对照组相比,移植瘤的体积和重量经过干扰素α2b地处理后明显被抑制,HE染色检测结果显示:细胞核与细胞质比例失常,细胞核明显增大,细胞核染色加深,核分裂象明显异常,肿瘤组织中细胞无序,大小不一致,形态不均匀。2.成功分离并纯化外泌体,在对照组与干扰素组中,外泌体的形态并无明显差异;与对照组相比,干扰素α2b能使Renca细胞分泌的exosome数量明显减少。3.在干扰素α2b组中,MDSC与对照组比较,其所占百分比数明显下降。4.在对照组中,CD4/CD8与干扰素α2b组相比,其所占百分比数明显升高。5.在bALb/c小鼠实验模型实验中,与生理盐水组相比,外泌体组和Renca细胞组的荷瘤小鼠骨髓中的骨髓源性抑制性细胞百分比明显升高。外泌体组与Renca细胞组相比,荷瘤小鼠骨髓中的骨髓源性抑制性细胞比例无明显差异。外泌体组与Renca细胞组内,与前10天相比,后20天荷瘤小鼠骨髓中的骨髓源性抑制性细胞比例明显升高(P20天之间荷瘤小鼠骨髓中的骨髓源性抑制性细胞比例无明显变化(P>0.05)。NS组其百分比无明显变化(P>0.05)。结论:Renca细胞来源的外泌体在小鼠体内参与了骨髓源性抑制性细胞的激活、募集,renca细胞分泌外泌体被干扰素α2b抑制,从而致使MDSCs的活化、增殖受限,使得移植肿瘤的发展过程明显受限。

关键词：外泌体 MDSC 干扰素α2b 肾癌抑制生长

聚乙二醇修饰干扰素α2b抗肿瘤细胞增殖作用

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中国药科大学学报 2002年第4期33卷 348-350页

作者：杨晓兵姚文兵吴梧桐沈子龙中国药科大学生物制药学院南京210029

目的　研究基因工程干扰素 α2 b和聚乙二醇 (PEG)修饰干扰素 α2 b的抗肿瘤细胞增殖效应。方法　采用 MTT法将不同浓度的干扰素分别对几种肿瘤细胞进行生长抑制实验。结果　不同终浓度 (5 0 0 ng/ml,5 0 ng/ml,5 ng/ml,0 .5 ng/ml)干扰... 详细信息

目的　研究基因工程干扰素 α2 b和聚乙二醇 (PEG)修饰干扰素 α2 b的抗肿瘤细胞增殖效应。方法　采用 MTT法将不同浓度的干扰素分别对几种肿瘤细胞进行生长抑制实验。结果　不同终浓度 (5 0 0 ng/ml,5 0 ng/ml,5 ng/ml,0 .5 ng/ml)干扰素 α2 b和 PEG修饰干扰素 α2 b对人肝癌细胞 (SMMC-772 1 )、人红白血病细胞 (K5 62 )、人宫颈癌细胞 (He La)、人鼻咽癌细胞 (Kb)和人胃癌细胞 (bGC)的生长均有不同程度的抑制作用。结论　聚乙二醇修饰干扰素的抗肿瘤细胞增殖作用优于干扰素。

关键词：细胞增殖干扰素α2b 抗肿瘤效应聚乙二醇

层析法去除重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白的内毒素

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生物工程学报 2008年第1期24卷 159-163页

作者：徐向荣马国昌王昌梅单剑峰沈玲黄岩山周金宝浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006 浙江大学药学院杭州310031 杭州九源基因工程有限公司杭州310018

用柱层析方法在生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白过程中去除产品中的内毒素。所用柱层析组合为blue-sepharose亲和柱层析、SOURCE 15 ISO疏水柱层析、Q Sepharose F.F.离子交换柱层析、Sephadex G25 Coarse凝胶过滤柱。采用鲎试... 详细信息

用柱层析方法在生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白过程中去除产品中的内毒素。所用柱层析组合为blue-sepharose亲和柱层析、SOURCE 15 ISO疏水柱层析、Q Sepharose F.F.离子交换柱层析、Sephadex G25 Coarse凝胶过滤柱。采用鲎试剂法检测柱层析各阶段得到蛋白中的内毒素含量;并用RP-HPLC方法测定柱层析各阶段得到蛋白的纯度与浓度,求出每毫克蛋白的内毒素含量。结果为每步柱层析过程式均有去除内毒素的作用,最终所得蛋白的内毒素含量降为1 EU/mg,去除率达到99.9%。因而生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白所用分离纯化柱层析技术在纯化蛋白的同时能有效的去除产品中内毒素,所得产品内毒素的含量远低于药典对注射剂的内毒素含量要求。

关键词：人血清白蛋白干扰素α2b 柱层析内毒素

人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在CHO细胞中的表达

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中国生物工程杂志 2016年第7期36卷 7-14页

作者：李成媛张晶晶钱凯缪亚娜蔡燕飞杨剑峰何杨金坚江南大学药学院无锡214122 温州大学生命与环境科学学院温州325035 苏州大学唐仲英血液学研究中心苏州215123 苏州大学附属第一医院苏州215006

干扰素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子,因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用。将IFNα2b连接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,构建融合蛋白HSA-IFNα2b。构... 详细信息

干扰素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子,因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用。将IFNα2b连接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,构建融合蛋白HSA-IFNα2b。构建含融合蛋白的真核表达质粒p MH3/HSA-IFNa2b,经电转的方法转入中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞中。经G418抗性压力筛选和目的蛋白的表达量筛选,最终获得一株高表达的稳定细胞株(CHO/p MH3/HSA-IFNa2b)。表达的目的蛋白经Western blot验证显示,产物具有IFNα2b和HSA的双抗原性。经悬浮驯化稳定后,通过批次筛选得到一株稳定的高克隆表达株,产量约为65mg/L,进一步选取高表达克隆株在悬浮驯化中不同代数进行批次培养,不同代数之间蛋白质的表达量和生长情况没有明显的差异,获得一株稳定遗传表达的单克隆细胞株,3L摇瓶的流加培养结果显示,最佳发酵时间为15天,蛋白质表达量为121mg/L。经离心获得的发酵液,经两步纯化后获得蛋白质纯度高达96.8%的目的蛋白,总回收率为22.3%。参照《中国药典》2015版对IFNα2b的检测方法,结果显示,CHO表达的HSA-IFNα2b比活性为4.16×106IU/mg。首次将HSA-IFNα2b在哺乳动物细胞CHO中构建表达,表达获得高活性的HSA-IFNα2b融合蛋白。

关键词：人血清白蛋白干扰素α2b 中国仓鼠卵巢细胞

HPLC法测定重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量

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中国生物制品学杂志 2012年第5期25卷 623-624,629页

作者：赵辉李增礼周乐春储成风倪晓燕王荣海宋礼华安徽省生物研究所合肥230088 安徽安科生物工程集团股份有限公司合肥230088

目的采用HPLC法测定重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量。方法按设置的色谱条件对检测重组人干扰素α2b注射液中吐温80含量的HPLC方法进行专属性验证、系统适应性验证、线性范围测定、实验内重复性验证、日间重复性验证、最低检测限... 详细信息

目的采用HPLC法测定重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量。方法按设置的色谱条件对检测重组人干扰素α2b注射液中吐温80含量的HPLC方法进行专属性验证、系统适应性验证、线性范围测定、实验内重复性验证、日间重复性验证、最低检测限测定、准确性验证,并对3批重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量进行检测。结果该测定方法具有专属性;系统适应性良好;线性范围为0.031 25～2.5 mg/ml,R2=0.999 7,线性关系良好;实验内重复性,峰面积和浓度的RSD值分别为0.71%和0.56%;日间重复性,保留时间和峰面积的RSD值分别为0.47%和2.76%;最低检测限为10 mg/L;加样回收率分别为101.99%、99.96%和102.2%,RSD=1.16%;3批人干扰素α2b注射液中吐温80的相对含量分别为0.940、0.936和0.950 mg/ml,分别为标示量的94.0%、93.6%和95.0%。结论本方法准确、快速、可靠,可用于重组人干扰素α2b注射液中吐温80含量的测定。

关键词：色谱法,高压液相聚山梨醇酯类干扰素α2b