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布渣叶总黄酮的提取纯化及其抗氧化活性研究

布渣叶总黄酮的提取纯化及其抗氧化活性研究

作者：丘鸿浩吉林大学

学位级别：硕士

布渣叶（Microcos paniculata）,药食同源植物,主要产于广东、广西、福建等地,是椴树科植物的干燥叶。布渣叶具有黄酮类、生物碱类、萜类等多种化学成分,具有很强的降血脂、保护心血管、抗炎等的药理作用,在我国常用于清热消滞、利湿退... 详细信息

布渣叶（Microcos paniculata）,药食同源植物,主要产于广东、广西、福建等地,是椴树科植物的干燥叶。布渣叶具有黄酮类、生物碱类、萜类等多种化学成分,具有很强的降血脂、保护心血管、抗炎等的药理作用,在我国常用于清热消滞、利湿退黄等。布渣叶与其他的一些消炎降火效用的药食同源植物,被应用制作为上市的凉茶饮品,广为人知的有王老吉、加多宝等等,在医药领域广泛应用。但布渣叶成分的药理应用还不够充分,本文以布渣叶为原料提取黄酮,对其进行相应的提取优化、结构鉴定及其对H2O2诱导HK-2（Human kidney proximal tubular epithelial cell）细胞的氧化应激反应,探究布渣叶黄酮对氧化应激损伤模型的保护作用。本论文具体研究内容如下:1.采用超声-微波辅助提取法提取布渣叶黄酮,对超声功率、微波功率、乙醇浓度、粒径、液料比、提取时间进行单因素实验,选取对黄酮得率影响较大的因素进行响应面试验,进而得到最佳的提取条件。布渣叶黄酮的最佳提取条件为:超声功率250 W,微波功率400 W,乙醇浓度60%,粒径40目,液料比20∶1m L/g,提取时间30 min,在此条件下布渣叶黄酮的得率为5.98%。2.使用D101大孔吸附树脂纯化布渣叶黄酮,纯度由原来的20%提高至纯度71%。从紫外光谱和红外光谱的结果可得出,提取物中含有和黄酮相对应的紫外和红外特征吸收峰。采用液相色谱-质谱联用仪对布渣叶黄酮分析发现,其主要成分为:山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、异鼠李素-3-O-?-D-葡萄糖苷等。3.通过对纯化后的布渣叶黄酮进行体外抗氧化能力的测定,以Vc为对照,从DPPH·(radical-2,2-Diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl superoxide an-ion)、O2-·（superoxide anion）、ABTS·+(2,2'-Azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate）)和Fe3+还原能力的结果可看出,布渣叶黄酮对DPPH·与ABTS·+清除能力效果较好,具有较强的对Fe3+还原能力,但对超氧阴离子自由基的清除能力较弱,其抗氧化作用随着浓度的增大而增加,但布渣叶黄酮抗氧化能力低于Vc。4.用不同浓度的布渣叶黄酮对H2O2诱导HK-2细胞的氧化应激损伤模型进行细胞保护实验,结果表明,布渣叶黄酮能够很好地降低ROS（Reactive oxygen species）水平,显著地减少MDA（Malondialdehyde）和LDH（Lactate Dehydrogenase）的释放量,明显地提高一系列重要的抗氧化酶活性,使线粒体膜电位下降程度变弱,相关凋亡蛋白的表达降低,凋亡细胞减少。综上所述,布渣叶黄酮类化合物具有清除多种自由基的抗氧化活性,保护细胞免受氧化应激损伤的影响,表现出良好的抗氧化活性和药理活性。该论文的研究结果可为布渣叶黄酮类化合物的药用价值的进一步开发提供一定的理论依据。

关键词：布渣叶黄酮类化合物提取抗氧化活性 HK-2细胞氧化应激

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基于网络药理学探讨布渣叶的抗炎机制

广东化工 2024年第12期51卷 163-165页

作者：熊素琴刘诗韵刘艺莹广州华商职业学院广东广州511300 广州市南沙区第二人民医院广东广州511466

基于网络药理学方法研究布渣叶的抗炎作用机制。利用TCMSP数据库、SEA数据库收集布渣叶活性成分及相应靶点,从GeneCards数据库筛选抗炎靶点,将成分对应的靶点基因和疾病基因进行映射,获得交集抗炎靶点。将交集靶点导入STRING数据库,将... 详细信息

基于网络药理学方法研究布渣叶的抗炎作用机制。利用TCMSP数据库、SEA数据库收集布渣叶活性成分及相应靶点,从GeneCards数据库筛选抗炎靶点,将成分对应的靶点基因和疾病基因进行映射,获得交集抗炎靶点。将交集靶点导入STRING数据库,将所获得的结果经Cytoscape3.9.1软件进行可视化分析,构建PPI网络,得到布渣叶关键抗炎靶点。采用DAVID6.8数据库对关键抗炎靶点进行GO和KEGG富集分析。研究发现布渣叶可能通过槲皮素、山柰酚、异鼠李素、β-谷甾醇等活性成分作用于TP53、AKT1、JUN、TNF、EGFR、IL6等靶点调控多条信号通路发挥抗炎作用。

关键词：网络药理学布渣叶炎症活性成分

布渣叶总黄酮离子液体协同超声辅助提取工艺考察及其调血脂活性研究

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中草药 2019年第24期50卷 5995-6001页

作者：黄志恒宋延秋闫东升河南省中医药研究院附属医院药学部河南郑州450004 河南省南阳医学高等专科学校第二附属医院药剂科河南南阳473000 河南中医药大学第三附属医院急诊科河南郑州450000

目的探讨布渣叶总黄酮(total flavones from Microcos paniculata,MPTF)的高效绿色环保提取方法,并考察其调血脂活性。方法采用离子液体协同超声辅助提取MPTF,对提取工艺进行单因素实验及正交试验考察;采用高脂饲料造模,将Wistar大鼠随... 详细信息

目的探讨布渣叶总黄酮(total flavones from Microcos paniculata,MPTF)的高效绿色环保提取方法,并考察其调血脂活性。方法采用离子液体协同超声辅助提取MPTF,对提取工艺进行单因素实验及正交试验考察;采用高脂饲料造模,将Wistar大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组(瑞舒伐他丁钙片5.2 mg/kg)、高脂模型组和MPTF低、中、高剂量组(ig给药MPTF 300、600、900 mg/kg),每组各10只,测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平。结果离子液体超声辅助提取MPTF的最佳工艺条件:离子液体为[BMIM]Cl,浓度为0.30 mol/L,料液比为1∶40,提取溶剂为60%乙醇水溶液,提取时间为30 min,提取温度为50℃;验证实验结果表明,该提取工艺所得总黄酮提取率高,工艺稳定。调血脂实验结果表明,MPTF各剂量组均能够降低TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平(P<0.05),且随着MPTF剂量增加各指标变化趋势明显,具有一定的剂量依赖性。结论离子液体协同超声辅助提取MPTF工艺稳定可行,为离子液体协同超声辅助提取中药中难溶性有效成分提供参考;MPTF提取物具有较好的调血脂作用。

关键词：布渣叶总黄酮离子液体超声提取调血脂活性总胆固醇三酰甘油高密度脂蛋白低密度脂蛋白

布渣叶保护急性心肌缺血损伤有效部位化学成分研究

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中草药 2014年第23期45卷 3373-3376页

作者：李坤平陈艳芬岳春华杨超燕袁旭江广东药学院药科学院广东广州510006 广东药学院中药学院广东广州510006 广东药学院中药开发研究所广东广州510006

目的对布渣叶Microcos paniculata保护异丙肾上腺素致急性心肌缺血损伤有效部位化学成分进行研究。方法采用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱以及制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据其波谱数据鉴定结构。结果从布渣叶保护急性心肌缺血活性... 详细信息

目的对布渣叶Microcos paniculata保护异丙肾上腺素致急性心肌缺血损伤有效部位化学成分进行研究。方法采用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱以及制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据其波谱数据鉴定结构。结果从布渣叶保护急性心肌缺血活性部位分离得到11个化合物,分别鉴定为牡荆苷(1)、异牡荆苷(2)、异鼠李素(3)、山柰酚(4)、槲皮素(5)、5,6,7,8,4′-五甲氧基黄酮(6)、5,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮(7)、香草酸(8)、咖啡酸(9)、阿魏酸(10)、芥酸酰胺(11)。结论化合物6、7、9、11均为首次从该属植物中分离得到,其中化合物11为首次从该属植物中分离得到的脂肪酰胺类化合物,化合物6、7为首次从该属植物中分离得到的多甲氧基黄酮类化合物。

关键词：布渣叶急性心肌缺血牡荆苷 5,6,7,8,4′-五甲氧基黄酮咖啡酸芥酸酰胺

布渣叶查耳酮合酶基因全长cDNA克隆及其表达模式分析

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中草药 2018年第17期49卷 4118-4124页

作者：岳春华张初梅林爽黄奕辉李坤平广东药科大学药学院广东广州510006

目的克隆布渣叶查耳酮合酶基因(Mp CHS)全长c DNA,并对其在不同部位和不同生长阶段叶片中的表达模式进行分析。方法以布渣叶叶片总RNA逆转录合成c DNA为模板,根据其转录组数据设计特异引物序列,PCR扩增Mp CHS基因全长c DNA,经质粒连接... 详细信息

目的克隆布渣叶查耳酮合酶基因(Mp CHS)全长c DNA,并对其在不同部位和不同生长阶段叶片中的表达模式进行分析。方法以布渣叶叶片总RNA逆转录合成c DNA为模板,根据其转录组数据设计特异引物序列,PCR扩增Mp CHS基因全长c DNA,经质粒连接、转化、扩培,挑选阳性克隆测序、分析并构建原核表达载体。同时,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对Mp CHS基因的表达模式进行分析。结果成功克隆得到Mp CHS基因全长c DNA(Gen Bank:KY472608)。生物信息学分析表明其开放阅读框为1 176 bp,编码含391个氨基酸的蛋白,其相对分子质量为42 700,理论等电点6.11,具有CHS家族蛋白3个保守的功能活性位点(165 C、304 H和337 N)和特征多肽标签序列RLMMYQQGCFAGGTVLR和GVLFGFGPGL。系统进化树分析发现Mp CHS与可可、陆地棉等木本植物的亲缘关系比较近。RT-q PCR结果表明,Mp CHS基因在不同部位均有表达,在叶片中的表达量随着生长过程逐步降低。结论首次克隆得到Mp CHS基因,并分析了Mp CHS基因在布渣叶不同部位和不同生长阶段叶片中的表达模式,为Mp CHS基因的原核表达和功能验证奠定了基础,也为进一步解析布渣叶黄酮类生物合成途径提供了参考。

关键词：布渣叶查耳酮合酶基因克隆基因表达模式原核表达载体

布渣叶黄烷酮-2-羟化酶基因cDNA克隆及其生物信息学和表达分析

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中草药 2018年第1期49卷 188-193页

作者：李坤平林爽张初梅潘天玲袁旭江广东药科大学药学院广东广州510006 广东药科大学中药学院广东广州510006 广东药科大学中药开发研究所广东广州510006

目的从布渣叶中克隆黄酮碳苷合成途径关键酶黄烷酮-2-羟化酶(flavanone 2-hydroxylase,F2H)基因,构建原核表达载体,对其进行生物信息学和表达模式分析。方法根据布渣叶转录组数据中注释为F2H的Unigene设计特异性引物,利用PCR法扩增Mp F2... 详细信息

目的从布渣叶中克隆黄酮碳苷合成途径关键酶黄烷酮-2-羟化酶(flavanone 2-hydroxylase,F2H)基因,构建原核表达载体,对其进行生物信息学和表达模式分析。方法根据布渣叶转录组数据中注释为F2H的Unigene设计特异性引物,利用PCR法扩增Mp F2H基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),基于在线工具对c DNA序列进行生物信息学分析。同时,依据F2H序列,设计特异引物,采用RT-q PCR方法对其在芽、叶、枝、花、果等组织中的表达进行测定。结果 Mp F2H基因ORF全长为1 557 bp(Genbank登录号KY652921),编码518个氨基酸;相对分子质量54 500,理论等电点5.49,含有信号肽,不含跨膜域,可能定位于叶绿体。同时,Mp F2H基因在不同组织中均有表达,其中在叶中表达量最高,在枝和花中表达量最低。结论 Mp F2H基因在不同组织中表达量差异较大。克隆了Mp F2H基因c DNA,构建了其原核表达载体p ET30a-Mp F2H,为Mp F2H基因的原核表达和功能验证奠定了基础。

关键词：布渣叶黄烷酮-2-羟化酶黄酮碳苷类黄酮生物合成基因克隆原核表达载体

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布渣叶的生物碱类成分研究

药学学报 2009年第2期44卷 150-153页

作者：罗集鹏张丽萍杨世林 M.F.Roberts J.D.Phillipson 广东药学院广东广州510006 江西中医学院江西南昌330000 School of Pharmacy London University

布渣叶的氯仿提取物经硅胶柱色谱分离得到4个生物碱,其结构经MS、1HNMR、13CNMR波谱解析分别鉴定为N-甲基-6α-癸间三烯[1′,3′,5′]-2β-甲基-3β-甲氧基哌啶(N-methyl-6α-(deca-l′,3′,5′-trienyl)-3β-methoxy-2β-methylpiperidine,1),6-癸间三烯[1′,3′,5′]-2-甲基-3-甲氧基哌啶(6-(deca-l′,3′,5′-trienyl)-3-methoxy-2-methylpiperidine,2),N-甲基-6-癸间三烯[1′,3′,5′]-2,3-二甲基哌啶(N-methyl-6-(deca-l′,3′,5′-trienyl)-2,3-dimethylpiperidine,3),N-甲基-6-癸间三烯[1′,3′,5′]-2-甲基哌啶(N-methyl-6-(deca-l′,3′,5′-trienyl)-2-methylpiperidine,4),化合物2,3和4为新化合物。4个化合物分别命名为布渣叶碱Ⅰ(micropiperidine A)、布渣叶碱Ⅱ(micropiperidine B)、布渣叶碱Ⅲ(micropiperidine C)和布渣叶碱Ⅳ(micropiperidine D)。

关键词：布渣叶生物碱布渣叶碱Ⅰ 布渣叶碱Ⅱ 布渣叶碱Ⅲ 布渣叶碱Ⅳ

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布渣叶的化学成分研究

中草药 2012年第5期43卷 844-846页

作者：胡姱李军屠鹏飞北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室北京100191

目的研究布渣叶Microcos paniculata的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、大孔树脂等柱色谱及制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱数据等鉴定结构。结果从布渣叶的醋酸乙酯和正丁醇萃取部位分离并鉴定了1... 详细信息

目的研究布渣叶Microcos paniculata的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、大孔树脂等柱色谱及制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱数据等鉴定结构。结果从布渣叶的醋酸乙酯和正丁醇萃取部位分离并鉴定了12个化合物,分别为异鼠李素(1)、表儿茶素(2)、黑麦草内酯(3)、去氢吐叶醇(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、咖啡酸甲酯(7)、对羟基苯甲酸(8)、对香豆酸(9)、木栓醇(10)、豆甾醇(11)、β-谷甾醇(12)。结论化合物3～7、9～12均为首次从该属植物中分离得到,其中化合物3和4为首次从该属植物中分离得到的单萜类化合物。

关键词：布渣叶单萜黑麦草内酯去氢吐叶醇对香豆酸

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布渣叶中三萜和黄酮类成分的研究

热带亚热带植物学报 2008年第1期16卷 51-56页

作者：冯世秀刘梅芳魏孝义林立东中国科学院华南植物园广州510650

从布渣叶(Microcos paniculataL.)的叶中分离得到10个化合物。通过光谱和波谱分析,分别鉴定为无羁萜(1)、阿江榄仁树葡糖苷Ⅱ(2)、山柰酚-3-O-β-D-[3,6-二-(对羟基桂皮酰)]-葡萄糖苷(3)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、异鼠李素3-O-β... 详细信息

从布渣叶(Microcos paniculataL.)的叶中分离得到10个化合物。通过光谱和波谱分析,分别鉴定为无羁萜(1)、阿江榄仁树葡糖苷Ⅱ(2)、山柰酚-3-O-β-D-[3,6-二-(对羟基桂皮酰)]-葡萄糖苷(3)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷(5)、异鼠李素3-O-β-D-芸香糖苷(6)、牡荆苷(7)、佛来心苷(8)、异佛来心苷(9)、异牡荆苷(10)。10个化合物均为首次从布渣叶中分离得到。

关键词：布渣叶三萜黄酮苷