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巴西苏木素通过抑制SarA以PIA依赖性方式减少MRSA生物膜形成的研究

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中国抗生素杂志 2024年第5期49卷 527-534页

作者：李明哲杨智芳周小仙刘和兰黎瑞周永雯陈泽慧遵义医科大学附属医院医学检验科遵义563003 遵义医科大学检验医学院遵义563006 遵义医科大学第二附属医院遵义563000

目的探究巴西苏木素(brazilin,BN)抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜形成的机制,为开展中医药防治MRSA感染提供新思路。方法建立MRSA ATCC43300菌株生物膜模型,试验分为BN 8、16... 详细信息

目的探究巴西苏木素(brazilin,BN)抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜形成的机制,为开展中医药防治MRSA感染提供新思路。方法建立MRSA ATCC43300菌株生物膜模型,试验分为BN 8、16和32μg/mL组及对照组;通过结晶紫法测定BN对MRSA生物膜的抑制作用;刚果红平板法、硫酸-苯酚法检测BN对细胞间多糖黏附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)合成的影响;使用real-time PCR(qRT-PCR)方法验证胞间黏附素操纵子icaA和icaD转录水平;分析高通量转录组测序可能存在的生物膜抑制基因;通过qRT-PCR、Western blot方法对相关基因及蛋白加以验证;通过皮下埋植静脉导管建立MRSA生物膜感染小鼠模型进一步验证BN疗效。结果与对照组相比,不同浓度的BN组均能显著减少MRSA生物膜及PIA生成,其中在最低剂量8μg/mL BN作用下,MRSA生物膜形成量下降40.17%(P<0.01)、PIA减少55.56%(P<0.01);通过qRT-PCR验证不同浓度的BN组均能显著抑制icaA和icaD基因的表达,其中在8μg/mL浓度下,icaA和icaD基因的表达量分别比对照组降低了59.03%(P<0.01)、48.33%(P<0.05);高通量测序显示sarA下调-1.458 log2;qRTPCR、Western blot结果显示,BN能显著抑制sarA转录及其蛋白表达;通过体内实验显示,BN能有效抑制小鼠体内MRSA生物膜的形成。结论 BN通过抑制SarA的表达,减少PIA的合成,进而干预生物膜的形成。

关键词：巴西苏木素耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜 PIA sarA

巴西苏木素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄黄质的抑制作用及其机制

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中华医院感染学杂志 2024年第5期34卷 652-657页

作者：周永雯陈泽慧周小仙杨智芳余孟飞刘和兰黎瑞李明哲遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563003 遵义医科大学检验医学院贵州遵义563006 遵义医科大学第二附属医院医学检验科贵州遵义563000 遵义医科大学附属医院输血科贵州遵义563003

目的探究巴西苏木素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄黄质(STX)的抑制作用及其机制。方法基于转录组学数据,分析巴西苏木素作用于MRSA后编码STX合成的操纵子crtOPQMN基因变化情况;将不同浓度巴西苏木素(16、32、64μg/ml)与MRSA... 详细信息

目的探究巴西苏木素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄黄质(STX)的抑制作用及其机制。方法基于转录组学数据,分析巴西苏木素作用于MRSA后编码STX合成的操纵子crtOPQMN基因变化情况;将不同浓度巴西苏木素(16、32、64μg/ml)与MRSA共培养:转平板观察菌落、离心沉淀观察菌体颜色变化及酶标仪检测STX含量;逆转录实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测STX合成中主要影响颜色的基因表达水平变化;光谱定量检测STX代谢中间产物变化情况;过氧化氢敏感性试验观察抑菌圈大小及存活菌数量;全血杀伤试验观察存活菌数量。结果调控STX生成的操纵子基因表达均下调,其中主要影响颜色的基因crtM和crtN分别为-6.542479954、-6.107726632;随药物浓度增加,平板菌落及菌沉淀黄色变浅变白,STX含量减少,其中64μg/ml药物对STX抑制率最大,达50%;qRT-PCR结果显示随药物浓度增加crtM和crtN表达量下降;光谱定量结果显示STX代谢中间产物含量随药物浓度增加而减少;过氧化氢敏感性试验结果显示随药物浓度增大,抑菌圈直径增大,存活菌数量减低(P巴西苏木素通过抑制crtM和crtN的表达减少MRSASTX生成;巴西苏木素抑制STX后可降低细菌抗氧化及抗宿主免疫杀伤能力,为开发新型抗毒力药物提供参考。

关键词：巴西苏木素耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄黄质 crt M基因 crt N基因抗氧化抗杀伤

巴西苏木素对MRSA丙氨酸消旋酶抑制作用的初步研究

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遵义医科大学学报 2024年第1期47卷 47-52,61页

作者：黎瑞陈泽慧周小仙余孟飞杨智芳李明哲遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563099 遵义医科大学检验医学院贵州遵义563099

目的探讨巴西苏木素(BN)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)丙氨酸消旋酶(Alr)的抑制作用。方法 PCR扩增MRSA丙氨酸消旋酶基因Alr,通过使用酶切和连接技术构建重组表达质粒pET-28a-Alr,然后将其转化至*** BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达A... 详细信息

目的探讨巴西苏木素(BN)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)丙氨酸消旋酶(Alr)的抑制作用。方法 PCR扩增MRSA丙氨酸消旋酶基因Alr,通过使用酶切和连接技术构建重组表达质粒pET-28a-Alr,然后将其转化至*** BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达Alr,并通过镍离子亲和层析法进行纯化;试验分为对照组MOCK(不作任何处理)、不同浓度BN组(8、16、32、64μg/mL),分别测定不同浓度BN对Alr活性的影响;通过细胞热位移分析(CETSA)实验测定BN对Alr蛋白热稳定性的影响;利用软件AutoDock Vina将BN与Alr进行分子对接,预测两者之间的结合模式。结果成功诱导表达纯化Alr蛋白,且其具备将L-丙氨酸外消旋为D-丙氨酸的活性。与对照组相比,不同浓度的BN均能够抑制Alr的活性,其中在64μg/mL BN作用下,抑制率达到50%(P<0.0001)。CETSA实验结果显示,在55.9~59.5℃下BN处理后的Alr蛋白热稳定性明显高于Mock组(P<0.0001)。分子对接结果显示BN与Alr之间的结合能为-8.0 kcal/mol,与Alr活性位点内的Gly221、Phe169、Arg219、Ser204、Ile222和Tyr43形成氢键,与其活性位点通道的Ile352、Tyr354形成π-π键及疏水作用,与Asn203形成疏水作用。结论 BN对Alr的活性具有抑制作用,可能是因为BN与Alr蛋白活性位点处的结合能力相关。

关键词：巴西苏木素耐甲氧西林金黄色葡萄球菌丙氨酸消旋酶分子对接

巴西苏木素对舌癌Tca8113细胞凋亡和自噬的影响及分子机制

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南方医科大学学报 2019年第3期39卷 351-356页

作者：贾亚萌佟晓哲范敬炎锦州医科大学附属第一医院中医针灸科辽宁锦州121000 锦州医科大学第一临床医学院辽宁锦州121000

目的探讨巴西苏木素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制,为临床用药提供理论依据。方法用MTT法检测巴西苏木素对Tca8113细胞的增殖作用;Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;Annexin V/PI双染色检测巴西苏... 详细信息

目的探讨巴西苏木素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制,为临床用药提供理论依据。方法用MTT法检测巴西苏木素对Tca8113细胞的增殖作用;Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;Annexin V/PI双染色检测巴西苏木素对Tca8113细胞凋亡程度的影响;Western blot法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase3及自噬相关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B、p62的表达;使用AMPK通路抑制剂与巴西苏木素共同作用于Tca8113细胞,并检测通路相关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B的表达。结果 MTT结果表明,巴西苏木素能明显抑制Tca8113细胞的增殖,24 h时IC50为31.17μmol/L;Hoechst33342染色结果显示,巴西苏木素能使Tca8113细胞发生凋亡形态学改变,且与浓度正相关;Annexin V/PI染色结果显示,不同浓度巴西苏木素作用24 h后,细胞凋亡数和凋亡率均高于空白对照组;Western blot检测相关蛋白表达结果表明,巴西苏木素可抑制抗凋亡蛋白bcl-2,促进凋亡关键蛋白bax和cleaved-caspase3的表达,同时增加LC3B和p-AMPK的表达,降低p62和p-mTOR表达。在与抑制剂合用后,p-AMPK与LC3B表达量虽仍略高于空白对照组,但与单纯使用巴西苏木素相比均明显降低,而p-mTOR的表达较巴西苏木素组则明显升高(P巴西苏木素能抑制Tca8113细胞增殖并促进其凋亡,同时可通过AMPK/mTOR通路诱导细胞发生自噬。

关键词：巴西苏木素凋亡自噬 Tca8113

巴西苏木素逆转耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对阿米卡星和庆大霉素的耐药性

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中国医院药学杂志 2014年第18期34卷 1533-1537页

作者：韩宗其左国营郝小燕王根春成都军区昆明总医院天然药物研究中心云南昆明650032 邢台医学高等专科学校基础部河北邢台054000 贵阳医学院药学院贵州贵阳550004

目的：研究巴西苏木素（BN）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外抗菌活性及其与阿米卡星和庆大霉素的联合杀菌效果。方法：采用色谱法从中药材苏木（Caesalpinia sappan L.）中分离BN。微量稀释法测定BN对10株临床MRSA的最低抑... 详细信息

目的：研究巴西苏木素（BN）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外抗菌活性及其与阿米卡星和庆大霉素的联合杀菌效果。方法：采用色谱法从中药材苏木（Caesalpinia sappan L.）中分离BN。微量稀释法测定BN对10株临床MRSA的最低抑菌浓度（MIC）。采用棋盘法和时间-杀菌曲线评价其与阿米卡星和庆大霉素联合杀菌的效果。结果：BN单用的MIC为16～32μg·ml-1,MBC为16～128μg·ml-1。BN与阿米卡星和庆大霉素合用的部分抑菌浓度指数（FICI）为0.25～2,合用效果均以协同或相加为主,无拮抗作用。同时,合用使二者的MIC值大多降低至单用的1/8～1/4,从而逆转了MRSA菌株的耐药性。时间-杀菌曲线法,结果显示BN与阿米卡星和庆大霉素合用在24 h时的活菌菌落计数下降最大分别为2.62和2.85 log10CFU·ml-1,亦均呈现协同杀菌作用。结论：巴西苏木素具有剂量依赖性协同阿米卡星和庆大霉素抗MRSA的作用,且能够逆转MRSA对阿米卡星和庆大霉素的耐药性。

关键词：巴西苏木素耐甲氧西林金黄色葡萄球菌协同作用阿米卡星庆大霉素

巴西苏木素通过激活Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的研究

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中国临床药理学杂志 2023年第9期39卷 1237-1241页

作者：贾晓晴佟晓哲锦州医科大学附属第一医院中医针灸科辽宁锦州121000

目的探讨巴西苏木素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,随机分为空白组及低、中、高剂量实验组和联合组。低、中、高剂量实验组分别用20、30和40μmol·L-1巴西苏木素处理细... 详细信息

目的探讨巴西苏木素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,随机分为空白组及低、中、高剂量实验组和联合组。低、中、高剂量实验组分别用20、30和40μmol·L-1巴西苏木素处理细胞,联合组用40μmol·L-1巴西苏木素和10 ng·mL-1DKK1共同处理细胞,空白组给予常规培养。用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用细胞划痕、Transwell小室实验分别检测细胞的迁移、侵袭能力,用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达水平。结果中、高剂量实验组和空白组的凋亡率分别为(15.24±1.20)%、(25.13±1.46)%和(3.26±0.78)%,划痕愈合率分别为(20.55±3.16)%、(9.58±1.92)%和(45.76±2.24)%,侵袭细胞数分别为(100.00±4.00)、(44.66±10.44)和(207.66±15.11)个,Bax蛋白相对表达水平分别为0.78±0.03、1.32±0.09和0.25±0.11,Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.76±0.05、0.48±0.02和1.02±0.01,E-carderin蛋白相对表达水平分别为0.80±0.05、1.19±0.02和0.30±0.03。中、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P巴西苏木素能够抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

关键词：巴西苏木素 SKOV3 凋亡上皮间质转化 Wnt/β-catenin

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巴西苏木素对肝癌细胞增殖能力的影响

中国临床药理学杂志 2021年第15期37卷 2027-2029,2047页

作者：李鲜丽韦嘉范晶华晁春梅杨春霞迟晓伟陈昕婷昆明医科大学第一附属医院感染与肝病科云南昆明650032 云南省第二人民医院肝脏疾病研究中心云南昆明650021

目的探索巴西苏木素对人肝癌细胞MHCC97H增殖能力的影响。方法把人肝癌细胞MHCC97H分为对照组和实验组。对照组在DMEM培养基中加入与巴西苏木素等体积的无水乙醇进行培养;实验组给予含60μg·mL^(-1)巴西苏木素的DMEM培养基进行培养。用... 详细信息

目的探索巴西苏木素对人肝癌细胞MHCC97H增殖能力的影响。方法把人肝癌细胞MHCC97H分为对照组和实验组。对照组在DMEM培养基中加入与巴西苏木素等体积的无水乙醇进行培养;实验组给予含60μg·mL^(-1)巴西苏木素的DMEM培养基进行培养。用CCK8检测细胞的增殖能力,用蛋白质印迹法检测多肿瘤抑制基因1(P16)和周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)的表达水平。结果实验组和对照组的第5天细胞活力(光密度)分别为1.39±0.08和2.21±0.11,P16蛋白相对表达量分别为1.18±0.21和0.43±0.05,CDK4蛋白相对表达量分别为0.87±0.12和1.46±0.17,CDK6蛋白相对表达量分别为0.90±0.11和1.53±0.21,差异均有统计学意义(均P巴西苏木素能通过上调肝癌细胞MHCC97H中P16的表达,降低CDK4/6的表达,从而抑制其增殖能力。

关键词：巴西苏木素肝癌增殖

巴西苏木素下调膀胱癌T24细胞和BIU87细胞细胞质分裂调控蛋白1的表达及抑制细胞增殖的研究

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肿瘤研究与临床 2022年第9期34卷 661-664页

作者：杨喜花赵莉莉陈丽霞杨永明王靖阎磊韩雪冰山西省肿瘤医院中国医学科学院肿瘤医院山西医院山西医科大学附属肿瘤医院实验动物中心太原030013 山西省肿瘤医院中国医学科学院肿瘤医院山西医院山西医科大学附属肿瘤医院泌尿外科太原030013

目的探讨巴西苏木素对膀胱癌细胞的抑制作用及其机制。方法采用化学合成法制备巴西苏木素。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测合成的巴西苏木素对膀胱癌T24细胞和BIU87细胞增殖的抑制作用, 采用蛋白质组学技术检测巴西苏木素对两种细胞蛋... 详细信息

目的探讨巴西苏木素对膀胱癌细胞的抑制作用及其机制。方法采用化学合成法制备巴西苏木素。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测合成的巴西苏木素对膀胱癌T24细胞和BIU87细胞增殖的抑制作用, 采用蛋白质组学技术检测巴西苏木素对两种细胞蛋白表达水平的影响, 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法验证巴西苏木素对两种细胞的细胞质分裂调控蛋白1(PRC1)基因水平和蛋白水平表达的影响。结果 MTT法检测显示, 巴西苏木素可明显抑制膀胱癌T24和BIU87细胞的增殖, 其对T24细胞和BIU87细胞的半抑制浓度(IC50)分别为9.9 μg/ml和5.1 μg/ml;蛋白质组学检测结果显示, 巴西苏木素可下调两种细胞中PRC1蛋白的表达, 并经qRT-PCR及蛋白质印迹法得到了验证。结论巴西苏木素可能通过下调PRC1表达抑制膀胱癌细胞的增殖。

关键词：膀胱肿瘤巴西苏木素细胞质分裂调控蛋白1 蛋白质组学细胞增殖

巴西苏木素在大鼠体内的代谢产物与代谢途径分析

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中国实验方剂学杂志 2018年第1期24卷 67-73页

作者：梁光焰吴云山陈伟英刘博果德安广东药科大学中药学院广州510006 广州中医药大学附属第二医院广东省中医药科学院广州510006 中国科学院上海药物研究所上海中药现代化研究中心上海201203

目的：通过研究巴西苏木素在大鼠体内的代谢产物,探析其代谢途径。方法：采用UPLC-Q-TOF-MS/MS对灌胃巴西苏木素（30 mg·kg^-1）后大鼠的生物样品（粪便、尿液、血浆、胆汁）进行分析,流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 m L m... 详细信息

目的：通过研究巴西苏木素在大鼠体内的代谢产物,探析其代谢途径。方法：采用UPLC-Q-TOF-MS/MS对灌胃巴西苏木素（30 mg·kg^-1）后大鼠的生物样品（粪便、尿液、血浆、胆汁）进行分析,流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 m L min^-1,电喷雾离子源,负离子模式,信息依赖性采集模式进行检测,离子喷雾电压-4.5 k V,离子源温度500℃,碰撞电压100 e V,碰撞能量-35 e V,锥孔气流50 L·h^-1,m/z 100-1 100,使用Peak View 1.2软件进行数据处理,提取给药样品的总离子流图谱与空白生物样品对比,通过保留时间、精确相对分子质量及二级质谱的比较与分析,筛选并鉴定其可能的代谢产物。结果：共检测出23个代谢产物,这23个代谢产物是巴西苏木素在大鼠体内甲基化、脱氧、缩氢、羧酸化、水合作用、硫酸化、葡糖糖醛酸化后产生的,其中以硫酸化、葡糖糖醛酸化为主。结论：本实验首次对巴西苏木素在大鼠体内的代谢情况进行研究,能够为该药物的药效学和药理学研究提供一定的物质基础。

关键词：巴西苏木素苏木代谢硫酸化葡萄糖醛酸化尿液胆汁