检索结果-南通市图书馆

作者：牛天第西南大学

学位级别：硕士

利用生防天敌携带病原真菌协同控害是促进生防产品高效利用的重要模式。然而生防真菌作用于靶标害虫的同时也会对天敌造成不利影响,因此亟需明确天敌对病原真菌的耐受性及耐受机制。病原真菌的侵染会激活昆虫的先天性免疫应答系统。先... 详细信息

利用生防天敌携带病原真菌协同控害是促进生防产品高效利用的重要模式。然而生防真菌作用于靶标害虫的同时也会对天敌造成不利影响,因此亟需明确天敌对病原真菌的耐受性及耐受机制。病原真菌的侵染会激活昆虫的先天性免疫应答系统。先天性免疫系统中重要的信号转导途径Toll信号通路在昆虫抵御外源刺激过程中对抗菌因子的生理调控作用备受关注,但其在天敌捕食螨中的应答调控机制仍不清楚。因此,本学位论文以商品化天敌巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri为研究对象,综合运用生物信息学及分子生物学手段对巴氏新小绥螨Toll通路调控网络进行探究;明确其Toll通路基本构成;解析其受球孢白僵菌Beauveria bassiana侵染后Toll通路相关基因的应答模式;阐明其关键响应基因的功能特性及调控模式;对下游抗菌因子进行功能验证,构建Toll通路对下游抗菌因子的调控网络。研究旨在阐明巴氏新小绥螨Toll通路应答球孢白僵菌感染的分子机制,完善天敌昆虫(螨类)免疫应答研究基础,为利用巴氏新小绥螨携带球孢白僵菌作为“生物导弹”联合防控靶标害虫害螨提供理论支撑。主要研究内容与结果如下:1巴氏新小绥螨Toll通路信号因子鉴定及序列分析通过转录组数据筛选获得10条巴氏新小绥螨Toll通路相关基因,经分子克隆及序列分析显示所选基因均具有各自的保守结构域和特征序列,符合Toll通路基因特征,表明巴氏新小绥螨Toll通路结构完整,且功能保守。系统发育分析发现巴氏新小绥螨Toll通路各基因均与西方盲走螨聚为一支,且相似度较高。进化选择压分析表明Toll通路基因总体处于负选择状态,消除有害突变,结构趋于保守。利用q PCR解析Toll通路基因在巴氏新小绥螨不同发育阶段的表达模式,结果表明Toll通路基因整体于幼螨和若螨期高表达,暗示Toll通路在巴氏新小绥螨生长发育阶段发挥重要调控作用。2巴氏新小绥螨Toll通路信号因子调控模式及功能分析利用q PCR检测了球孢白僵菌长时间侵染后巴氏新小绥螨Toll通路基因的应答模式(2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h和120h),结果表明Toll通路基因均会被球孢白僵菌诱导上调表达,且应答持续时间较长,应答程度剧烈。而白僵菌侵染120h后Toll通路基因均下调表达推测与球孢白僵菌衍生的免疫逃逸机制或抑制螨体免疫系统有关。利用RNAi沉默了5条Toll通路应答显著的关键基因(Nb Spz-3、Nb Toll-4、Nb Myd88-1、Nb Cactus与Nb Dorsal),检测其对Toll通路相关基因的调控模式,结果表明5条Toll通路关键基因通过线性化调节模式进行信号传导。同时测定了Toll通路关键基因沉默后巴氏新小绥螨对球孢白僵菌侵染的耐受性,结果显示沉默Nb Spz-3、Nb Myd88-1、Nb Cactus与Nb Dorsal均会导致巴氏新小绥螨生存率显著性降低。据此明确了Toll通路关键基因长时间稳定上调表达,并以线性化调节模式进行信号传导是巴氏新小绥螨具有球孢白僵菌耐受性的重要因素。3巴氏新小绥螨抗菌蛋白基因的鉴定及表达模式分析克隆得3条c型溶菌酶家族基因、1条i型溶菌酶家族基因、2条新型防御素家族基因及1条Reeler结构域蛋白基因,并分析其在巴氏新小绥螨不同发育阶段的表达模式,研究结果表明7条抗菌蛋白基因整体于幼螨和若螨期高表达,卵期表达量较低,与Toll通路基因的螨期表达模式类似。进一步研究抗菌蛋白基因对球孢白僵菌的应答模式,结果显示溶菌酶家族基因与Reeler结构域蛋白均在短时间内迅速上调表达,且上调表达持续时间较长;而新型防御素家族基因虽短时间内上调表达,但持续时间较短,在侵染后期再一次上调表达。这暗示溶菌酶与Reeler蛋白家族在巴氏新小绥螨抵御球孢白僵菌侵染过程中发挥主要作用,而新型防御素家族可能发挥补充作用。4巴氏新小绥螨抗菌因子功能分析及Toll通路关键基因对抗菌因子的调控模式利用RNAi验证了应答显著的4条溶菌酶基因对巴氏新小绥螨球孢白僵菌耐受性的影响,结果显示抗菌蛋白基因表达量的抑制会显著性降低巴氏新小绥螨的生存率,表明所选抗菌蛋白基因的表达增强了巴氏新小绥螨对球孢白僵菌的耐受性。此外,沉默Toll通路关键基因后检测下游抗菌蛋白基因的表达量变化结果显示Nb Spz-3与Nb Dorsal对7条抗菌因子均有较强的调控作用,而Nb Toll-4、Nb Cactus与Nb Myd88-1对抗菌因子的调控则互相补充,各有侧重。总之,通过上述实验,本研究解析了巴氏新小绥螨Toll信号途径的基本构成,阐明了Toll通路关键基因通过长时间稳定表达,并以线性化调节模式进行信号传导从而调控下游抗菌因子抵御球孢白僵菌侵染的分子机制。

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巴氏新小绥螨生殖滞育解除的最适条件和相关生理学分析

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作者：李玲安徽农业大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨（Neoseiulus barkeri）是自然界中多种害虫、害螨的重要天敌,是生物防治中极具应用潜力的一种捕食螨。但在农业生产中,如何保障长距离运输中巴氏新小绥螨的存活率以及相关生理指标的稳定,一直是捕食螨产品应用的难题。为此... 详细信息

巴氏新小绥螨（Neoseiulus barkeri）是自然界中多种害虫、害螨的重要天敌,是生物防治中极具应用潜力的一种捕食螨。但在农业生产中,如何保障长距离运输中巴氏新小绥螨的存活率以及相关生理指标的稳定,一直是捕食螨产品应用的难题。为此,本课题组前期培育出巴氏新小绥滞育处理,通过延长寿命、增强抗逆性,降低远途运输中的死亡率。为探讨温度和光周期对巴氏新小绥螨滞育的影响,使滞育处理田间释放后迅速解除滞育、恢复生殖能力,本文明确了促进巴氏新小绥螨滞育解除的最适温度和光周期组合,研究了经不同温度和光周期处理的成螨在发育历期、耐热性和捕食能力等方面的变化。主要研究结果如下:（1）研究明确了滞育解除的最适温度光周期组合。本研究发现,在28℃,L:D=14 h:10 h条件下,巴氏新小绥螨的滞育解除率为100%,产卵前期为（59.31±2.88）h,存活率为100%,日均产卵量为（1.35±0.02）粒。综合考虑以上四项指标,在该培养环境下巴氏新小绥螨滞育解除率与存活率最高,日均产卵量较高,产卵前期较短,因此,28℃、L:D=14 h:10 h可以作为巴氏新小绥螨滞育解除的最适温度光周期组合。（2）巴氏新小绥螨普通、滞育、滞育解除处理的发育历期有显著性差异。滞育处理总未成熟期最长,为（9.97±0.2）d;滞育解除处理总未成熟期最短,为（6.06±0.15）d。卵～前若螨期在普通处理与滞育解除处理之间无显著差异,普通处理比滞育解除处理有着更长的前若螨～成螨期。普通处理与滞育解除处理成螨历期无显著差异,滞育处理最长可达到69 d。巴氏新小绥螨普通处理、滞育处理、滞育解除处理对高温的耐受性不同,滞育解除处理存活时间最长,有着更强的耐受力。（3）巴氏新小绥螨普通处理与滞育解除处理之间对替代猎物腐食酪螨（Tyrophagus putrescentiae）偏好性一致,对腐食酪螨的幼螨与卵均表现出嗜食性,且对幼螨的选择系数大于卵。滞育处理只对腐食酪螨的幼螨表现出嗜食性,对卵、若螨、成螨均为非嗜食性。滞育解除处理对于替代猎物腐食酪螨卵、幼螨、若螨和成螨的日均捕食量高于滞育处理和普通处理。巴氏新小绥螨对害虫的控制能力的大小依次为:滞育解除处理＞普通处理＞滞育处理。综上实验表明,28℃、L:D=14 h:10 h为巴氏新小绥螨滞育解除最适温度光照组合;滞育解除后巴氏新小绥螨总未成熟期最短,能迅速恢复生长发育,耐热性最高,捕食能力迅速恢复,且对害虫、害螨不同时期的捕食选择性无明显差异。本实验阐明了温度和光周期对巴氏新小绥螨生长发育、生殖滞育及捕食能力的调控作用,对捕食螨天敌产品的生产应用、提高生物防治效果具有重要意义,为进一步研究巴氏新小绥螨滞育相关生理学分析奠定基础。

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巴氏新小绥螨章鱼胺受体基因鉴定与功能分析

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作者：程明明西南大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri(Hughes),隶属寄螨目(Paratiformes),植绥螨科(Phytoseiidae),该螨世界分布范围广,可捕食叶螨、跗线螨、瘿螨等害螨以及蓟马、粉虱、蚜虫等微小昆虫,是目前我国应用最广泛的捕食螨之一。章鱼胺(Octopamin... 详细信息

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri(Hughes),隶属寄螨目(Paratiformes),植绥螨科(Phytoseiidae),该螨世界分布范围广,可捕食叶螨、跗线螨、瘿螨等害螨以及蓟马、粉虱、蚜虫等微小昆虫,是目前我国应用最广泛的捕食螨之一。章鱼胺(Octopamine,OA)通过结合特异性的章鱼胺受体(Octopamine receptors,OARs),调控昆虫生长发育等多种生理过程,OARs也因此备受研究学者关注。已报道在多种昆虫体内克隆得到OARs并开展功能等相关研究,同时OARs也是良好的药剂如双甲脒(Amitraz,AMZ)靶标位点。开展巴氏新小绥螨OARs研究,在明确其生物学特性以及生理功能的基础上,可为培育以OARs为作用靶标的杀虫/螨剂抗性天敌提供理论基础。本研究根据巴氏新小绥螨转录组筛选得到6个章鱼胺受体基因,利用q PCR技术分析了这6个基因在巴氏新小绥螨不同发育阶段、不同温度和饥饿胁迫下的表达模式;通过高通量测序技术,对双甲脒LC剂量处理后巴氏新小绥螨进行表达谱测定,分析激动剂刺激下章鱼胺受体相关基因表达差异情况;在测定的转录组基础上,获得响应双甲脒胁迫的章鱼胺受体NbOctβ3R,通过RNAi技术分析生理功能。本研究取得如下成果:1.巴氏新小绥螨章鱼胺受体基因克隆与序列分析通过高通量测序技术,构建巴氏新小绥螨转录组数据库。测序结果组装去冗后得到44,279个Unigene,总长度55,332,274 bp。长度在1 kb以上的Unigene有13,667个,占比30.86%。通过与NR、COG、GO、KEGG、KOG、Pfam、Swiss-Prot和egg NOG数据库比对,得到17,336个有效注释。利用PCR技术,克隆得到巴氏新小绥螨OARs基因NbOctα1R1、NbOctα1R2、NbOct Tyr R、NbOctβ2R1、NbOctβ2R2、NbOctβ3R的cDNA序列。通过TMHMM网站在线预测6个蛋白序列的结构特征,除NbOctβ2R2外,其余5个基因的氨基酸序列均具有7个跨膜结构域,符合G蛋白偶联受体的典型特征。氨基酸同源性分析表明巴氏新小绥螨章鱼胺受体家族基因与其他无脊椎动物同源基因同源性较高。系统发育分析结果显示NbOctα1R1、NbOctα1R2、NbOct Tyr R与其他无脊椎动物的α-adrenergic-like octopamine receptors聚为一枝,NbOctβ2R1、NbOctβ2R2、NbOctβ3R与β-adrenergic-like octopamine receptors聚为一枝,亲缘关系非常近。2.巴氏新小绥螨章鱼胺受体基因表达模式分析利用RT-qPCR技术,解析巴氏新小绥螨章鱼胺受体基因在不同发育阶段、不同温度下和饥饿胁迫下的表达模式。结果发现,6条基因在巴氏新小绥螨各个螨态中均有表达,在幼螨和若螨中表达水平较高。成螨中NbOctα1R2、NbOctβ2R1、NbOctβ2R2在30℃表达量上调,低温则诱导表达量下调。NbOctα1R1和NbOct Tyr R随着温度升高或降低表达下调,15℃时较20℃表达上调。NbOctβ3R在35℃时表达量最高。各基因在成螨和幼螨中受温度影响变化存在差异。幼螨中NbOctα1R1在20℃表达量最低,25℃最高。NbOctα1R2、NbOctβ2R2、NbOctβ2R1和NbOctβ2R2在20℃和30℃表达量高于对照,在15℃表达下调。NbOctβ3R受温度影响较大,25℃时表达量最高,15℃表达最低。饥饿胁迫诱导NbOctβ2R2表达上调,NbOctβ3R受饥饿胁迫影响较大,表达量持续下调。3.激动剂处理后章鱼胺受体与相关基因表达差异分析本章通过喷雾塔药膜法测定了双甲脒乳油对巴氏新小绥螨敏感品系的毒力方程,LC为1.24 mg·L。激动剂双甲脒LC剂量处理巴氏新小绥螨6 h和12 h后进行表达谱测序。结果表明,6 h处理组与对照差异表达上调基因226个,下调137个,其中获得注释基因249条。12 h处理组与对照差异表达上调基因313个,下调186个,其中获得注释基因353条。涉及翻译后修饰、蛋白质周转、伴侣蛋白相关,翻译核糖体结构,重组和修复,信号转导机制,细胞内运输、分泌和囊泡运输等相关基因。在差异表达基因中比对得到一条章鱼胺受体基因NbOctβ3R,受双甲脒胁迫表达量上调,其信号转导通路上腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)表达上调,蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)表达下调;共10条差异表达细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)基因,上、下调各5个;1条谷胱甘肽S转移酶(glutathione S transf

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巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性选育及抗性分子机理研究

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作者：王莉西南大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri属蛛形纲(Arachnida)蜱螨亚纲(Acari)寄螨目(Paratiformes)革螨亚目(Gamasida)植绥螨科(Phytoseiidae),是一类被广泛应用于害虫生物防治的捕食性。目前,田间应用的捕食螨多为敏感品系,需要在释放捕食螨期... 详细信息

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri属蛛形纲(Arachnida)蜱螨亚纲(Acari)寄螨目(Paratiformes)革螨亚目(Gamasida)植绥螨科(Phytoseiidae),是一类被广泛应用于害虫生物防治的捕食性。目前,田间应用的捕食螨多为敏感品系,需要在释放捕食螨期间,停用或减少使用化学农药,这难免影响其它害虫的防治。鉴于此,本文针对巴氏新小绥螨在生产应用中所面临的实际问题,在室内应用毒死蜱对巴氏新小绥螨敏感品系进行持续抗性筛选,以期获得抗性品系,在此基础上,比较巴氏新小绥螨毒死蜱抗性品系和敏感品系的生物学特性,分析巴氏新小绥螨抗性获得后对其生长发育、繁殖及捕食功能的影响;进一步对巴氏新小绥螨毒死蜱抗性品系和敏感品系进行转录组测序,鉴定与抗药性相关的基因,应用实时荧光定量PCR技术检测候选基因的表达量,并通过RNAi技术深入分析候选基因的功能,以明确巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子机理。1.巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性选育及其生物学特性评价在室内采用药膜法测定毒死蜱对巴氏新小绥螨的毒力,以半致死浓度(lethal medium concentration,LC)为选择压力,对巴氏新小绥螨敏感种群进行逐代汰选。经过毒死蜱21代持续筛选,获得了抗性倍数为34.77倍的巴氏新小绥螨中抗品系,LC值由44.41 mg/L提高到了1,544.02 mg/L。在此基础上,应用生命表法分析抗性获得对巴氏新小绥螨相对适合度(relative fitness,R)的影响,并采用Holling II模型拟合分析不同温度条件下(15,20,25,30和35℃)巴氏新小绥螨敏感品系和抗性品系对柑橘全爪螨Panonychus citri卵和雌成螨的捕食功能反应差异。结果表明,巴氏新小绥螨毒死蜱抗性品系各螨态发育历期、子代雌性比率、每雌单日产卵量、平均世代周期(T)和捕食功能反应等参数较敏感品系无显著差异(P>0.05)。在25和30℃条件下时,巴氏新小绥螨抗性品系的相对适合度略有所下降,而20和35℃条件下时相对适合度略有上升。总体而言,巴氏新小绥螨毒死蜱抗性获得对其在不同温度条件下生物学特性的影响较小。2.巴氏新小绥螨毒死蜱抗性与敏感品系转录组测序利用高通量测序技术对巴氏新小绥螨毒死蜱抗性品系和敏感品系进行转录组测序分析。通过组装最终获得了110,575个转录本和49,414个Unigene,利用Blast软件将组装获得的Unigene比对到8大数据库(COG、GO、KEGG、KOG、NR、Pfam、Swiss-Prot、egg NOG)中,共有14,927条获得信息注释(占比30.21%)。在转录组测序的基础上对巴氏新小绥螨毒死蜱抗性品系和敏感品系进行表达谱分析,在获得的77个差异表达基因中,有42个基因上调,35个基因下调。在上调基因中,***＿c0,***＿c0和***＿c0可能与抗性产生有关。3.巴氏新小绥螨候选基因的表达模式分析通过实时荧光定量PCR对巴氏新小绥螨3个候选基因在不同发育阶段的m RNA水平进行检测,结果表明,NbAkt、NbCYP3A16和NbCYP3A6基因在抗性品系不同发育阶段的表达具有特定差异。NbCYP3A16基因在卵期时表达量最高,上调倍数为22.14倍;而NbCYP3A6和NbAkt基因则均在成螨期时表达量最高,上调倍数分别为19.70倍和11.45倍。对巴氏新小绥螨进行药剂胁迫处理,结果发现,巴氏新小绥螨抗性和敏感品系经过毒死蜱胁迫处理6,12和24 h后,NbAkt、NbCYP3A16和NbCYP3A6基因的表达量在巴氏新小绥螨敏感品系中的无显著变化,但在抗性品系中均能被显著诱导,并且表达量的变化具有时间效应。4.候选基因RNAi分析利用RNAi技术对上调的1个蛋白激酶基因(NbAkt)和2条P450基因(NbCYP3A16、NbCYP3A6)进行功能分析。以取食ds:e GFP作为对照,巴氏新小绥螨毒死蜱抗性品系饲喂dsRNA处理12,24和48 h后,NbAkt基因的相对表达量显著低于对照(P巴氏新小绥螨3个基因后,使用毒死蜱进行敏感性测定。结果显示,NbAkt、NbCYP3A16和NbCYP3A6基因沉默后,巴氏新小绥螨的校正死亡率均有不同程度的上升,表明NbAkt、NbCYP3A16和NbCYP3A6基因上调与巴氏新小绥螨对毒死蜱的抗性形成有关。

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巴氏新小绥螨NPC2基因的克隆与功能分析

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作者：傅云梅西南大学

学位级别：硕士

在昆虫中,主要依靠触角以及足、中肠、口器等组织进行嗅觉感知。已有报道指出,除气味结合蛋白外,Niemann-Pick type C2（NPC2）蛋白也参与节肢动物气味识别过程。而螨类主要依赖前足I跗节进行嗅觉识别。巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri... 详细信息

在昆虫中,主要依靠触角以及足、中肠、口器等组织进行嗅觉感知。已有报道指出,除气味结合蛋白外,Niemann-Pick type C2（NPC2）蛋白也参与节肢动物气味识别过程。而螨类主要依赖前足I跗节进行嗅觉识别。巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri是一种常见的小型害虫捕食性天敌,具有广泛的应用前景。本文以巴氏新小绥螨为研究对象,通过PCR技术,克隆获得NPC2基因全长,对其进行三级结构预测,以及对其特征序列进行比对并确定其系统发育关系;在此基础上,利用qPCR技术和生测试验分析NPC2基因的表达情况和双侧足I跗节对捕食量的影响;同时,利用RNAi手段,分析其对捕食量的影响,并对NbarNPC2进行原核表达;此外,还利用GC-MS测定柑橘全爪螨的体表挥发物主要成分,为进一步明确巴氏新小绥螨的猎物识别机制提供参考依据。本研究获得的主要结果如下:1.巴氏新小绥螨NPC2（NbarNPC2）基因的克隆及表达模式分析基于转录组数据分析,通过PCR技术,克隆获得巴氏新小绥螨两个NPC2基因的开放阅读框Open Reading Frame（ORF）,分别命名为NbarNPC2a和NbarNPC2b,其中ORF长度分别为474和462bp,编码157和153个氨基酸残基（Amino acid,aa）,信号肽长度分别为27和19aa。三级结构预测表明,两者均主要由β-折叠片组成,多重序列比较发现,两者均具有6个保守的半胱氨酸残基,与节肢动物中其它物种NPC2基因的序列相似性为47.99%。系统发育分析表明,NbarNPC2a和NbarNPC2b均属于NPC2基因家族,属于同一进化分支。利用切足试验和qPCR技术,初步明确NbarNPC2a和NbarNPC2b在巴氏新小绥螨不同部位、发育阶段表达特异性,及对巴氏新小绥螨捕食能力的影响。切足试验表明,仅切除单侧足Ⅰ跗节或单侧足Ⅳ附节后,其捕食量与对照组并无显著性差异;但当切除双侧足Ⅰ跗节后,其捕食量显著低于切除双侧足Ⅳ跗节以及对照组,其24h捕食量分别为5.00±0.69头、6.91±0.65头和6.91±0.51头,说明巴氏新小绥螨双侧足Ⅰ附节对其捕食能力有显著影响。定量试验表明,双侧足Ⅰ跗节切除后,NbarNPC2a表达量略低于对照组,而NbarNPC2b则显著高于对照组。在不同发育阶段表达模式的研究中发现,NbarNPC2a在巴氏新小绥螨的卵期、幼螨期、若螨期的表达量分别是成螨期的0.01、0.13、0.44倍,出现显著上调趋势。而NbarNPC2b则在幼螨和若螨阶段显著高表达,其表达量分别是成螨的4.36和3.59倍,而在卵期的表达量则显著低于其他各个螨态,说明NbarNPC2a可能在捕食过程中发挥作用。***2沉默对巴氏新小绥螨的捕食量的影响利用饲喂法,对NbarNPC2a和NbarNPC2b基因的功能进行研究发现,和对照相比,目的基因NbarNPC2a和NbarNPC2b的表达量分别下降59%和44%,达到显著水平。在此基础上,还利用生测技术,评价RNAi处理对巴氏新小绥螨在不同温度条件下捕食能力的变化。结果表明,在16和24℃条件下,dsNbarNPC2a、dsNbarNPC2b、dsNbarNPC2a＆dsNbarNPC2b处理组日捕食量均显著低于对照组,而在20和28℃条件下,上述3个处理组与对照组间不存在显著性差异。此外,NbarNPC1基因在NbarNPC2a、NbarNPC2b干扰后显著上升了 39%和30%,而蜕皮激素受体EcR基因的表达量也出现上调,分别为21%和25%。***2a基因的原核表达研究利用pCold Ⅱ载体和pET28a（+）载体对NbarNPC2a进行原核表达,通过SDS-PAGE电泳技术对重组蛋白进行分析,电泳结果表明分别具有重组表达载体pColdⅡ::NbarNPC2a和Pet-28a（+）::NbarNPC2a的表达菌株表达出的蛋白,在超声波声波破碎菌体的上清中均没有观察到目的蛋白,而目的蛋白以包涵体的形式存在于破碎菌体的沉淀中,结果表明没有表达出可溶性的目的蛋白。4.柑橘全爪螨体表挥发物分析本章通过GC-MS技术,对柑橘全爪螨的体表挥发物进行了分析,初步明确柑橘全爪螨体表挥发物质。在柑橘全爪螨成螨的正己烷和乙酸乙酯洗脱液中都分别测出了4大类挥发性的化合物,分别是烷烃类、烯烃类、酯类和酚类,两种洗脱液中共计测出四大类17种挥发性的化合物成分,其中烷烃6种、烯烃2种、酯类5种、酚类4种。

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巴氏新小绥螨对二种植物寄生线虫的捕食和控制作用

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作者：李曼华南农业大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨(Neoseiulus barkeri)隶属蜱螨亚纲(Acari)、植绥螨科(Phytoseiidae)、新小绥螨属(Neoseiulus),是一种生活在土壤或者植物根际附近的捕食性螨类,能够以植物线虫为食。本文分别将水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)和南... 详细信息

巴氏新小绥螨(Neoseiulus barkeri)隶属蜱螨亚纲(Acari)、植绥螨科(Phytoseiidae)、新小绥螨属(Neoseiulus),是一种生活在土壤或者植物根际附近的捕食性螨类,能够以植物线虫为食。本文分别将水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)和南方根结线虫(Meloidogyne incognita)作为巴氏新小绥螨的食物,研究巴氏新小绥螨对水稻干尖线虫的捕食功能以及环境温度和饥饿时间对其捕食功能的影响。测定了阿维菌素对巴氏新小绥螨的亚致死浓度LC10、LC30和LC50,以及三个亚致死浓度的阿维菌素对巴氏新小绥螨功能反应的影响。在使用阿维菌素一段时间后释放耐药性巴氏新小绥螨,探究耐药性巴氏新小绥螨与阿维菌素间隔协同使用对盆栽空心菜根结线虫的防控效果。主要研究结果如下:1、确定了巴氏新小绥螨对水稻干尖线虫具有捕食性,并可通过捕食水稻干尖线虫完成整个生活史。巴氏新小绥螨以水稻干尖线虫为食时,其生长发育各个历期与取食腐食酪螨相比无显著差异,但内禀增长率和周限增长率均升高,种群倍增时间减少,增殖能力增强。表明巴氏新小绥螨取食水稻干尖线虫比取食腐食酪螨更有利于其各项生命活动,可以作为水稻干尖线虫的天敌捕食性螨。2、确定了巴氏新小绥螨捕食水稻干尖线虫时的功能反应类型属于Holling-II型,对水稻干尖线虫的寻找效应与线虫密度呈反比例关系。饥饿时间与环境温度都使巴氏新小绥螨的功能反应参数发生改变,但功能反应类型不发生变化。在环境温度25℃和饥饿时间96h条件下,对水稻干尖线虫的捕食能力最强。温度过低或过高,饥饿时间过长都会导致巴氏新小绥螨的捕食能力下降。证实了巴氏新小绥螨具有较强取食水稻干尖线虫的能力,是水稻干尖线虫的理想捕食性天敌。3、确定了阿维菌素对巴氏新小绥螨的亚致死浓度LC10、LC30和LC50,以及三个亚致死浓度的阿维菌素均可降低巴氏新小绥螨对南方根结线虫的捕食功能,改变其功能反应参数,但功能反应类型不发生变化。4、确定了在植物根际释放巴氏新小绥螨能有效控制盆栽空心菜根部南方根结线虫的发生,证实了具有耐药性的巴氏新小绥螨与阿维菌素间隔协同使用,可以明显提高对南方根结线虫的控制效果。本研究首次明确了巴氏新小绥螨能够捕食水稻干尖线虫完成生活史和增殖,是水稻干尖线虫的天敌捕食螨,具有作为植物线虫生防资源的价值;明确了在植物根际释放一定数量的巴氏新小绥螨能有效控制南方根结线虫的发生,使用阿维菌素会降低其捕食功能和防控效果,而耐药性巴氏新小绥螨与阿维菌素间隔协同使用,可明显提升对南方根结线虫的控制效果。试验结果为利用巴氏新小绥螨防控植物线虫病害,进一步探索生物防控与农药防控协同配合更有效的防控植物线虫病提供了科学依据。

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巴氏新小绥螨蜕皮的影响因子和滞育相关基因的生物信息学分析

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作者：陈凌子安徽农业大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri是目前广泛应用于害虫、害螨防治的天敌,其规模化饲养和长距离运输中种群数量的稳定性一直都是影响其利用效果的因素之一,因此研究一种货架期长、存活率高的饲养方法显得尤为重要。本实验通过探究温度和... 详细信息

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri是目前广泛应用于害虫、害螨防治的天敌,其规模化饲养和长距离运输中种群数量的稳定性一直都是影响其利用效果的因素之一,因此研究一种货架期长、存活率高的饲养方法显得尤为重要。本实验通过探究温度和食物对巴氏新小绥螨蜕皮过程的影响,分析了EcR、Met等滞育相关基因的序列及表达模式,为进一步探究多种激素受体与巴氏新小绥螨生殖滞育的关系提供了基础。主要研究结果如下:(1)温度对巴氏新小绥蟥蜕皮影响测定表明:在各实验温度下全世代共蜕皮4次,温度的变化不影响该螨的蜕皮次数;温度同该螨的发育历期呈负相关,随着温度的降低,发育历期延长。25℃下从卵孵化至发育为成螨历时8.42d,而在18℃下长达 18.57d。(2)食料和猎物密度对蜕皮的影响结果显示:猎物密度除了会影响其捕食能力外对蜕皮过程并没有产生显著影响;而浓度为20%的蔗糖并不能使巴氏新小绥螨在进入若螨期后成功蜕皮为成螨,不能完成整个发育历期。(3)通过对***的EcR、Met等基因进行生物信息学分析发现其与西方盲走螨的氨基酸序列相似性最高。同其他物种的序列进行比对后发现EcR具有核受体超家族的特征,在序列中存在LBD结构域,Met也同样有bHLH-PAS转录因子家族的PAS结构域和HLH结构域。对不同发育阶段的巴氏新小绥螨和生殖滞育的雌成螨进行荧光定量分析发现,FoxO在滞育雌成螨中显著表达,Met在前若螨时期表达量最高,而EcR、E75、Ftz-f1在幼螨时期表达量最高,在滞育螨态表达量最低,说明这些基因与该螨滞育调控有关。本研究结果表明温度是影响巴氏新小绥螨蜕皮的因素之一,并且随着温度的降低蜕皮次数不变但总未成熟期延长;EcR和Met在生殖滞育雌成螨中表达量最低,这为后续开展RNAi探究巴氏新小绥螨生殖滞育的激素调控奠定了基础。

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巴氏新小绥螨对芒果茶黄蓟马的控制作用及适应性评价

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作者：周炀海南大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨（Neoseiulus barkeri Hughes）隶属于植绥螨科（Phytoseiidae）新小绥螨属（Neoseiulus）。经实验初步研究发现,巴氏新小绥螨对芒果上的茶黄蓟马（Scirtothrips dorsalis H ood）具有一定的控害能力。在室内温度27±1℃、R... 详细信息

巴氏新小绥螨（Neoseiulus barkeri Hughes）隶属于植绥螨科（Phytoseiidae）新小绥螨属（Neoseiulus）。经实验初步研究发现,巴氏新小绥螨对芒果上的茶黄蓟马（Scirtothrips dorsalis H ood）具有一定的控害能力。在室内温度27±1℃、RH75%±5%的条件下,研究了不同虫态巴氏新小绥螨对茶黄蓟马的捕食效能,并通过其瞬时攻击率（a）、处理时间（Th）和捕食效能（a/Th）等参数进行综合评价;在室内温度27±1℃、RH75%±5%的条件下,进行巴氏新小绥螨以茶黄蓟马为食物的种群生命表研究,明确巴氏新小绥螨以茶黄蓟马为食物是否能正常完成其世代发育;通过控制变量法,分别控制温度、湿度、光强的不同来研究不同条件对巴氏新小绥螨在24h内向外扩散的数量的多少,来评价不同条件对巴氏新小绥螨的影响;在田间采取挂袋、挂瓶、撒施三种方式,通过调查防效和田间种群数量来比较三种释放方式的优劣;在梅山、乐东、儋州三地采取1500、3000、4500头/树的挂袋释放方式和施药防治,通过比较防效来明确最佳防治方式:1.巴氏新小绥螨对芒果茶黄蓟马的功能反应研究:巴氏新小绥螨对茶黄蓟马的成虫、1龄和2龄若虫均可捕食。随着猎物密度的增加,捕食螨日取食量逐渐增加,其中,巴氏新小绥螨雌成螨和第2若螨对茶黄蓟马1龄若虫的捕食效能最大,分别达10.35和12.82头/d,而雄成螨对茶黄蓟马2龄若虫的捕食效能最大,为12.48头/d。巴氏新小绥螨的雌成螨和雄成螨均对茶黄蓟马的2龄若虫表现出最强的瞬时攻击率,分别为1.0227和1.1208,第2若螨则对茶黄蓟马的雌成虫表现出最大攻击率,为1.5774。巴氏新小绥螨对芒果茶黄蓟马具有一定的控害能力。2.巴氏新小绥螨以芒果茶黄蓟马为食物的室内种群生命表的研究:以芒果茶黄蓟马为食物巴氏新小绥螨的世代历期为7.91d,其中第2若螨历期最长,为3.42d,占世代历期的43.24%,幼螨期最短为0.70d,占世代历期的8.85%,平均每雌产卵量37.00粒,世代总存活率为73.33%,净生殖率R0为27.25,平均世代历期T为15.85d,内禀增长率rm为0.21,周限增长率λ为1.23,种群加倍时间t为3.30d,种群趋势指数I为20.82。综合以上结果,以茶黄蓟马为食物,巴氏新小绥螨可完成其世代生长发育和繁殖,可以作为茶黄蓟马的有效天敌,应用于茶黄蓟马的田间生物防治。3.光强、温度和湿度对巴氏新小绥螨活动能力的影响:在室内温度和湿度分别为27±1℃、60%±5%的条件下,巴氏新小绥螨的扩散速度随光强的增强先增加后下降,之后又呈现上升趋势。在完全黑暗的条件下,巴氏新小绥螨的向外扩散的数量较少为144.44头,之后随着光强增加,到500lx光强时,巴氏新小绥螨的向外扩散数量达到最大值为1211.11头,之后逐渐下降至1500lx时的633.33头,随后向外扩散数量再次呈现上升趋势。在室内光强和湿度分别为300lx、80%±5%的条件下,巴氏新小绥螨的向外扩散数量随温度的升高而上升,在25℃左右时达到最大值,之后随着温度继续上升向外扩散数量逐渐下降,在34℃时向外扩散数量达到较低值为144.44头。在室内光强和温度分别为300lx、27℃的条件下,在湿度为40%-95%时,巴氏新小绥螨的活动能力随湿度增大而呈现不断上升的趋势,整体的上升曲线呈“S”形曲线。在40%时,巴氏新小绥螨从袋内扩散出来的数量为144.44头,在95%时,巴氏新小绥螨从袋内扩散出来的数量为1511.11头。由此表明巴氏新小绥螨在光强、温度、湿度分别为500lx、25℃、95%RH时向外扩散速度最快,适于在田间释放。4.不同释放方式对巴氏新小绥螨田间种群的建立及防效的影响:在大田采用挂袋、挂瓶、撒施3种释放方式中,挂袋、挂瓶的释放方式产生的防效之间总体上并无明显差异。其中,在第21d时挂袋和挂瓶释放的方式的防效均达到最大值,分别为71.38%和56.03%,撒施产生的防效明显低于上述其他两种释放方式产生的防效,且防效最好的时候是在释放后第35d,防效为47.69%。在大田种群建立上,3种释放方式下,巴氏新小绥螨在田间种群建立上的差异并不明显,均呈现为在释放初期种群数量快速上升,随后巴氏新小绥螨种群数量均呈现下降趋势,之后呈现动态平衡。3种释放方式中应优先采用挂袋和挂瓶的释放方式。5.巴氏新小绥螨对芒果茶黄蓟马的田间防效:在梅山地区的有机果园释放不同密度巴氏新小绥螨,调查结果显示1500、3000、4500头/树3种密度的释放方式在防效上差异不显著,后期均趋近于1 0.00%。但是巴氏新小绥螨的田间种群建立上,4500头/树密度下的种群数量后期最多,1500头/树密度下的巴氏新小绥螨种群数量最少;在乐东和儋州的

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巴氏新小绥螨对甲氰菊酯抗性分子机理研究

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作者：陈飞西南大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri是当前控制橘园柑橘全爪螨的一种有效生防物。通过选育巴氏新小绥螨的抗性品系,可以较好的解决化学防治和生物防治之间的矛盾,有助于田间的害虫综合治理。因此,本研究以巴氏新小绥螨为研究对象,在室内使... 详细信息

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri是当前控制橘园柑橘全爪螨的一种有效生防物。通过选育巴氏新小绥螨的抗性品系,可以较好的解决化学防治和生物防治之间的矛盾,有助于田间的害虫综合治理。因此,本研究以巴氏新小绥螨为研究对象,在室内使用甲氰菊酯对其进行长时间汰选,并获得抗性品系;在此基础上,利用高通量测序技术,对其转录组进行深度测序;在筛选获得抗性相关基因的基础上,利用克隆和qPCR手段对上述基因进行基因突变及表达水平的检测,明确其变化规律,以期从分子水平阐明其抗性机理,为天敌的分子改造,特别是抗性的获得提供理论基础。本研究所获得的主要研究成果如下： 1.巴氏新小绥螨甲氰菊酯抗性选育及其生态适合度评价在室内测定不同药剂对巴氏新小绥螨毒力,发现菊酯类农药对巴氏新小绥螨的毒力较大,因此本实验选择甲氰菊酯为筛选试剂进行抗性选育。我们在室内以甲氰菊酯LC50的50%浓度对巴氏新小绥螨连续处理多代,其LCso出现显著上升,由35.79mg/L提高到了22190.91mg/L,最终得到了抗性倍数为619.96倍的巴氏新小绥螨甲氰菊酯抗性品系。在此基础上,研究了巴氏新小绥螨甲氰菊酯抗性品系的交互抗性,结果表明,巴氏新小绥螨甲氰菊酯抗性品系对高效氟氯氰菊酯、毒死蜱、乙螨唑和噻虫嗪存在中等交互抗性,其抗性倍数分别为45.89、19.10、11.45和10.32倍。进一步研究甲氰菊酯抗性获得对巴氏新小绥螨的发育历期、繁殖力与捕食量的影响。结果表明：甲氰菊酯抗性的获得对巴氏新小绥螨的发育历期、每雌总产卵量均有较为明显的影响,而在每雌日产卵量、捕食量及孵化率方面均没有明显影响。研究不同药剂对抗敏品系孵化率的影响发现,多数药剂对巴氏新小绥螨抗敏品系的孵化率影响较小。而经哒螨灵、丁氟螨酯、高效氟氯氰菊酯处理后,其抗敏品系间会产生显著性差异(P巴氏新小绥螨转录组测序及抗性相关基因分析本实验通过利用下一代测序技术得到了巴氏新小绥螨的转录组数据库。共得到50,462条Transcripts和34,211条Unigenes.将得到的Unigenes提交NCBI蛋白质数剧库(Nr)进行BLASTP比对,设阈值为E=10-3,34,211个Unigenes中,共有15,987个返回有效结果。此外,还在其它数据库中进行了Unigenes的注释工作,其中在Swiss-Prot数据库比对成功的Unigenes为10,486个,在KEGG数据库中比对成功的Unigenes为5,445个,在GO数据库中比对成功的Unigenes为8,707个,在COG数据库中比对成功的Unigenes为5,673个。综合以上所有数据库的比对结果,共有15,987个Unigenes得到成功注释。 3.巴氏新小绥螨电压门控钠离子通道的基因克隆及差异性分析在巴氏新小绥螨转录组数据库中找到了3条与钠离子通道基因相关的Unigenes,分别是comp289312、comp289313和comp286960.利用PCR技术和相关分子生物学软件对其序列进行生物信息学特性进行注释。我们最终克隆得到了1条长度为6175bp,编码2058个氨基酸的钠离子通道基因。同源性比对发现,巴氏新小绥螨与西方盲走螨(GenBank Accession No. XP03741737)和狄氏瓦螨(GenBank Accession No. AAP13992)的钠离子通道基因的同源性高达91.04%和80.48%,而与果蝇(GenBank Accession No. AAB59195)和人类(GenBank Accession No. NP66287)钠离子通道基因的同源性也分别达到了55.09%和41.98%。克隆得到的序列包含钠离子通道全部相关序列的所有典型特征。通过比较巴氏新小绥螨甲氰菊酯抗敏品系间钠离子通道基因的差异,我们共获得了5个SNPs (single nucleotide polymorphisms)位点,它们主要是A和G的互换。其中由G突变为A的分别位于3228和3243,由A突变G为的分别位于3844、4730和4874三个位点。通过翻译发现钠离子通道基因共有3处氨基酸突变,分别为S1282G、H1577R和E1665G,表明钠离子通道基因的突变可能是甲氰菊酯抗性产生的主要原因。 4.巴氏新小绥螨内参基因筛选及代谢相关基因表达差异分析选取β肌动蛋白(ACTB),微管蛋白α链(TUBA),延伸因子α链(ELF1A),核糖核酸聚合酶Ⅱ亚组(RNAP Ⅱ),28S核糖体核糖核酸(28S rRNA),热激蛋白90(Hsp90),热激蛋白70(Hsp70),热激蛋白40(Hsp40),甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH),泛素结合酶(UBC)作为候选内参基因,以GeNorm、NormFi

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巴氏新小绥螨的捕食功能反应及保护利用

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作者：刘平甘肃农业大学

学位级别：硕士

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri隶属珠形纲Arachnida寄型螨目Parasitiformes植绥螨科Phytoseiidae，属多食性捕食螨，主要捕食叶螨和蓟马等小型吸汁类害虫螨，是一类优良的生物天敌，具有很好的应用前景。本文以巴氏新小绥螨为研究对... 详细信息

巴氏新小绥螨Neoseiulus barkeri隶属珠形纲Arachnida寄型螨目Parasitiformes植绥螨科Phytoseiidae，属多食性捕食螨，主要捕食叶螨和蓟马等小型吸汁类害虫螨，是一类优良的生物天敌，具有很好的应用前景。本文以巴氏新小绥螨为研究对象，在室内条件下测定巴氏新小绥螨对二斑叶螨Tetranychusurticae不同螨态和西花蓟马Frankliniella occidentalis初孵若虫的捕食能力，同时测定了甘肃省保护地常用的9种杀虫、螨剂对巴氏新小绥螨和二斑叶螨的毒力选择性。此外，还通过小面积示范释放巴氏新小绥螨，调查其对保护地人参果和茄子植株上二斑叶螨种群的控制效果及益害昆虫种群增减情况。主要结果如下：1.巴氏新小绥螨对二斑叶螨的捕食功能及不同益害比对二斑叶螨种群的影响在室内设置5个温度梯度测定了巴氏新小绥螨对二斑叶螨各个螨态的功能反应和个体间的干扰反应，结果表明，对二斑叶螨各个螨态的捕食功能反应均属于HollingⅡ型。不同温度对捕食功能反应有一定影响，巴氏新小绥螨对二斑叶螨各螨态的攻击系数、捕食能力、最大日捕食量均随温度升高而增加，处理时间则缩短，28℃达到最适温度，此后随温度升高，捕食能力开始下降。在同一温度下，巴氏新小绥螨对二斑叶螨不同螨态捕食能力表现为卵＞若螨＞雌成螨。在二斑叶螨密度固定时，巴氏新小绥螨的平均捕食量随其自身密度的增加而减少，表明其个体间存在竞争或相互干扰作用;随温度的递增，个体间干扰系数逐渐增大。对二斑叶螨种群密度的影响，不同的益害比对二斑叶螨种群影响不同，益害比越大，二斑叶螨种群数量在一定的时间内下降越快。2.巴氏新小绥螨对西花蓟马初孵若虫的捕食功能反应实验室内16～32℃条件下测定了巴氏新小绥螨对西花蓟马初孵若虫的功能反应和个体间的干扰反应，结果表明，捕食功能反应拟合为HollingⅡ型，在16～28℃范围内攻击系数、捕食能力、最大日捕食量均随温度升高而增加，28℃时捕食能力最高。当温度达到32℃时，捕食能力下降。当西花蓟马初孵若虫的种群密度一定时，巴氏新小绥螨的捕食能力随其自身密度的增加而降低。3.9种常用杀螨剂对巴氏新小绥螨和二斑叶螨的毒力及毒力选择性研究为探索与生物防治相协调的化学防治措施，测定了哒螨灵、甲氰菊酯、阿维菌素、螺螨酯等9种杀螨剂对巴氏新小绥螨和二斑叶螨的LC50值，并计算各药剂的益害生物毒性选择指数(TSR)，大小依次为：毒死蜱＞螺螨酯＞哒螨灵＞炔螨特＞唑螨酯＞阿维菌素＞三唑锡＞甲氰菊酯＞噻螨酮。其中毒死蜱和螺螨酯对巴氏新小绥螨和二斑叶螨均有较高的正向选择性，毒性选择指数分别为10.8641和9.3613。因此，毒死蜱和螺螨酯可优先用于生产中害虫（螨）的防治，最大限度地保护了捕食螨。4.释放巴氏新小绥螨对温室作物上二斑叶螨种群影响及防治效果利用巴氏新小绥螨控制温室大棚内人参果和茄子上的二斑叶螨，结果表明，对二斑叶螨虫口密度的抑制作用较为明显，控害持效期约为150d。两种作物生防区二斑叶螨种群呈波浪形增长曲线，人参果上二斑叶螨种群密度在5～15头/叶的区间波动，茄子上的在15～25头/叶的区间波动;人参果和茄子生防区校正死亡率呈现出先上升后下降，再上升的规律，最高点校正虫口减退率达98.25%和96.95%，略微下降后连续两个月保持稳定。化防区人参果和茄子的虫口密度分别保持在2头/叶和15头/叶左右，其校正死亡率缓慢上升，达到最高点后基本保持稳定。对照区两种作物上二斑叶螨都呈S型曲线增长。巴氏新小绥螨在两种作物上种群数量呈现先增长后下降再缓慢增长的规律，人参果上种群最大平均12.44头/叶，最小平均4.44头/叶，茄子上种群最大平均15.67头/叶，最小平均5.79头/叶。

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