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基于UPLC指纹图谱结合化学模式识别的不同产地与不同部位川牛膝及其混淆品差异性分析

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中草药 2024年第16期55卷 5639-5648页

作者：徐微高必兴齐景梁苟琰汤敏邓科李倩兰志琼成都中医药大学药学院现代中药产业学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137 四川省药品检验研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室四川成都611731

目的建立不同产地川牛膝Cyathula officinalisUPLC指纹图谱,并与不同部位川牛膝及混淆品进行对比分析。方法采用Waters acquity UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min... 详细信息

目的建立不同产地川牛膝Cyathula officinalisUPLC指纹图谱,并与不同部位川牛膝及混淆品进行对比分析。方法采用Waters acquity UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,波长为210 nm,柱温为30℃,进样量为4μL。结合相似度评价、聚类分析(cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别式分析(orthogonal partial least squares methoddiscriminant analysis,OPLS-DA)比较不同产地、不同部位川牛膝及其混淆品的差异。结果UPLC指纹图谱共标定了川牛膝19个特征峰,并指认了2-羟基-3-[(4-羟基-3-甲氧基苯甲酰)氧基]琥珀酸、杯苋甾酮、滨蒿内酯、2-(苯甲酰基)-3-[(4-羟基-3-甲氧基苯甲酰)氧基]琥珀酸4个特征峰。通过相似度分析发现,川牛膝的不同产地、不同部位及混淆品样品均存在一定的差异,CA、PCA、OPLS-DA可将62批样品根据主产地、部位、基原进行区分,通过OPLS-DA项下的投影中的变量重要性投影(variable importance in projection,VIP)各筛选出9个差异性标志物。结论建立的指纹图谱方法能准确有效区分川牛膝的不同产地、不同部位及其混淆品,为川牛膝的质量评价及鉴别提供参考。

关键词：川牛膝 UPLC指纹图谱化学模式识别相似度评价质量评价杯苋甾酮滨蒿内酯牛膝皂苷Ⅰ 牛膝皂苷Ⅱ 竹节参皂苷Ⅳa

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川牛膝初加工技术研究

时珍国医国药 2024年第2期35卷 355-359页

作者：丁刚杨秀萍李隆云重庆市中药研究院重庆400065 重庆市中药良种选育与评价工程技术研究中心重庆400065 重庆市中药资源学重点实验室重庆400065 中国中医科学院中药资源中心重庆分中心重庆400065 重庆医科大学中医药学院重庆400016

目的为了控制川牛膝初加工的质量,对其初加工进行技术研究。方法通过考察温度、加工方式、药材等级、药用部位、切片厚度,研究初加工工艺参数,确定川牛膝初加工工艺。结果初加工工艺为冲洗,除去泥、芦头,切片,厚度4~6 mm,烘干,第一阶段... 详细信息

目的为了控制川牛膝初加工的质量,对其初加工进行技术研究。方法通过考察温度、加工方式、药材等级、药用部位、切片厚度,研究初加工工艺参数,确定川牛膝初加工工艺。结果初加工工艺为冲洗,除去泥、芦头,切片,厚度4~6 mm,烘干,第一阶段,温度50℃,失水度50%,回润,时间48 h,第二阶段,温度80℃,烘至川牛膝切片颜色变为灰白色,碰撞有清楚响声时烘干完成,用内存塑料的编织袋密封包装。结论所指定的加工工艺确实可行,有利于川牛膝规模化、产业化发展。

关键词：川牛膝质量评价初加工

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基于国家药品抽检的川牛膝质量问题及建议

中国药学杂志 2024年第3期59卷 275-280页

作者：高必兴齐景梁李倩耿昭钟恋高驰邓曦王颖包小红杨蕾苟琰四川省药品检验研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室成都611731

目的基于2022年国家药品抽检工作,分析市场上不同厂家川牛膝质量差异,分析问题并提出建议,为川牛膝的质量监管及标准提高提供依据。方法针对所抽取川牛膝样品按照相应标准进行检测,出具检验报告书。针对检验中所发现的质量问题、标准... 详细信息

目的基于2022年国家药品抽检工作,分析市场上不同厂家川牛膝质量差异,分析问题并提出建议,为川牛膝的质量监管及标准提高提供依据。方法针对所抽取川牛膝样品按照相应标准进行检测,出具检验报告书。针对检验中所发现的质量问题、标准问题及前期调研发现的相关问题进行有针对性的探索性研究,进行质量评价分析,发现问题,提出建议。结果共抽取川牛膝样品334批。标准检验,2批样品性状不合格,存在用麻牛膝充当川牛膝使用的情况,同时发现标准收载含量测定方法过于复杂,且限度过低。探索性研究,27批川牛膝检出麻牛膝特有成分牛膝皂苷Ⅰ,7批超出规定限度,存在麻牛膝混用的情况;270批川牛膝检出植物生长调节剂(多效唑)。114批重金属及有害元素镉(Cd)检测超出限度。最后提升了川牛膝质量标准、建立了补充检验方法、提出风险警示。结论通过此次全国抽检发现川牛膝饮片和标准中的相关问题,提示需完善标准并加强川牛膝的质量监管。

关键词：川牛膝麻牛膝国家药品抽检质量分析多效性

川牛膝总甾酮抗类风湿关节炎的作用及其机制研究

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川牛膝总甾酮抗类风湿关节炎的作用及其机制研究

作者：黄月慧成都大学

学位级别：硕士

川牛膝(Cyathula ***)为著名川产道地药材,药用历史悠久,具有逐瘀通经,通利关节,利尿通淋的功效,临床常用于治疗关节痹痛、足痿筋挛、尿血血淋、跌扑损伤等病症。现代医学研究表明川牛膝具有增强免疫能力、抗炎、抗肿瘤、改善血液系统... 详细信息

川牛膝(Cyathula ***)为著名川产道地药材,药用历史悠久,具有逐瘀通经,通利关节,利尿通淋的功效,临床常用于治疗关节痹痛、足痿筋挛、尿血血淋、跌扑损伤等病症。现代医学研究表明川牛膝具有增强免疫能力、抗炎、抗肿瘤、改善血液系统以及治疗关节炎等广泛的药理作用。本课题前期研究发现,从川牛膝中分离纯化的不同杯苋甾酮类化合物对LPS诱导的巨噬细胞RAW 264.7中一氧化氮(NO)的释放有抑制作用,还能抑制IL-1β诱导的成纤维样滑膜细胞MH7A细胞的增殖。但川牛膝总甾酮(CES)对类风湿关节炎(RA)滑膜增殖的药效和作用机制的研究尚未见报道。本研究采用分离纯化技术结合液相色谱峰指认阐明了 CES中的主要成分,利用IL-1β诱导的MH7A细胞、佐剂性关节炎(AIA)大鼠,结合多种分子生物学手段揭示了 CES治疗RA滑膜增殖的作用机制。本研究首先将川牛膝用95%和50%乙醇进行回流提取获得醇提物。采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇对川牛膝醇提物进行萃取,获得四个不同极性的萃取馏分。正丁醇层馏分表现出明显的抗IL-1β刺激的MH7A细胞增殖作用。正丁醇层样品经大孔吸附树脂分离,得到不同浓度的乙醇洗脱馏分。活性筛选发现30%乙醇洗脱部位抗IL-1β诱导的MH7A细胞增殖作用最强。使用HPLC法,比对样品中色谱峰和对照品出峰时间以及色谱特征吸收发现,30%乙醇洗脱馏分主要含有三个甾酮类化合物分别为:cyasterone(Cya)、28-e-cyasterone(28-e-Cya)、cyathsterone C(Cya-C)。体外实验发现CES及其所含单体化合物能够浓度依赖抑制IL-1β诱导的MH7A细胞的增殖、迁移和侵袭。进一步研究发现CES及其所含单体化合物能够诱导IL-1β诱导的MH7A细胞发生铁死亡,促进细胞内丙二醛(MDA)的释放、抑制谷胱甘肽/氧化谷胱甘肽(GSH/GSSG)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。AIA大鼠实验结果表明,CES可减轻大鼠关节炎评分和足跖肿胀,改善滑膜组织病理恶化,抑制前列腺素 E2(PGE2)、NO、白介素 6(IL-6)、白介素 8(IL-8)、MMPs(MMP2、MMP9)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2)和GPX4蛋白的释放。免疫组化结果显示,CES可以抑制PI3K/AKT信号通路磷酸化发挥其抗RA的作用。综上所述,本研究首次发现CES对RA滑膜增殖具有良好的抑制作用,通过抑制炎症因子和MMPs的表达、诱导FLSs发生铁死亡、抑制PI3K/AKT信号通路磷酸化发挥抗RA滑膜增殖的药效作用。本研究为川牛膝的临床合理使用提供了科学依据,也为川牛膝的深入开发奠定了前期研究基础。

关键词：川牛膝总甾酮类风湿关节炎滑膜增生炎症

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川牛膝

中国中医药现代远程教育 2019年第16期17卷 53-53页

作者：祝之友

临床注意事项关于川牛膝也是补肝益肾之说,明清以来文献记载颇多,张廷模教授也认为:“川牛膝补肝益肾不会低于怀牛膝”现代药理学研究认为,牛膝之补肝益肾与其所含化学成分多糖、甾醇类、皂苷、氨基酸等有密切关系。而川牛膝所含相同成... 详细信息

临床注意事项关于川牛膝也是补肝益肾之说,明清以来文献记载颇多,张廷模教授也认为:“川牛膝补肝益肾不会低于怀牛膝”现代药理学研究认为,牛膝之补肝益肾与其所含化学成分多糖、甾醇类、皂苷、氨基酸等有密切关系。而川牛膝所含相同成分均高于怀牛膝,从化学物质基础亦支持川牛膝与怀牛膝同样具有补肝益肾的功效,值得作进一步研究。

关键词：补肝益肾现代药理学川牛膝怀牛膝甾醇类化学物质基础张廷模化学成分

基于网络药理学和分子对接探讨川牛膝治疗继发性闭经的作用机制

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河南中医 2024年第2期44卷 224-230页

作者：黄紫薇罗喜王希张伶俐湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学附属省直中医院湖南株洲412000 湖南中医药高等专科学校附属第一医院湖南省直中医医院湖南株洲412000

目的:基于网络药理学和分子对接技术探讨川牛膝治疗继发性闭经(secondary amenorrhea, SA)的作用机制。方法:从中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)检索川牛膝的活性成分及作用靶点,从GeneCards数据库获取SA的疾病靶点,采用R软件得到两者的交集靶点。借助STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络,通过Cytoscape 3.8.2软件进行聚类分析和拓扑分析从而筛选核心靶点。应用R软件进行基因本体(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)富集分析(P川牛膝活性成分4个,即槲皮素、β-谷甾醇、甜菜素、红苋甾酮;川牛膝作用靶点178个,SA相关靶点1 366个,两者的交集靶点56个;基于Network Analyzer插件的拓扑分析筛选得到9个核心靶点,包括丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threorine protein kinase, AKT1)、丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen activated protein kinase 1,MAPK1)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)等。GO功能分析主要涉及对类固醇激素的反应、活性氧代谢过程、上皮细胞增殖等;KEGG通路135条,主要包括HIF-1信号通路、内分泌抵抗、雌激素信号通路等。分子对接显示,活性成分(槲皮素、β-谷甾醇)与核心靶点(AKT1、MAPK1)具有较好的结合活性。结论:川牛膝治疗SA具有多成分、多靶点、多途径的特点,其可能通过槲皮素、β-谷甾醇等成分作用于AKT1、MAPK1、ESR1等靶点,调控雌激素信号通路、内分泌抵抗等通路。

关键词：继发性闭经川牛膝槲皮素 ESR1 网络药理学分子对接

基于UPLC-Triple-TOF-MS技术初步分析雅安产道地中药材川牛膝中生物碱成分

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山东化工 2024年第3期53卷 155-157,160页

作者：王悦秋王昌梁林辉梁大伟雅安职业技术学院药学与检验学院四川雅安625100 沈阳药科大学基于靶点的药物设计与研究教育部重点实验室辽宁沈阳110016

采用乙醇提取、成盐、二氯甲烷萃取等方法初步富集川牛膝总生物碱,确定最优提取分离工艺;通过超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法,采用Waters XSelect CSH-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,测试... 详细信息

采用乙醇提取、成盐、二氯甲烷萃取等方法初步富集川牛膝总生物碱,确定最优提取分离工艺;通过超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法,采用Waters XSelect CSH-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,测试波长254 nm,柱温为50℃,进样量为3μL,采用电喷雾离子源正离子模式,扫描范围为m/z 100~1500,并采用全扫描模式对样品数据进行收集,根据高分辨质谱结合二级质谱所得信息对川牛膝中生物碱类化学成分进行快速鉴定,通过对比分子离子峰和碎片离子的质荷比、Scifinder和Reaxy数据库及相关文献,推测出两种生物碱成分。研究建立的生物碱类化学成分提取与分析方法,为提高雅安产道地中药材川牛膝的质量控制水平及后续阐明药效物质基础提供了实验依据。

关键词：川牛膝生物碱提取方法超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法定性分析

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基于网络药理学探讨川牛膝治疗高血压的作用机制

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山东化工 2024年第6期53卷 171-174,178页

作者：梁林辉梁大伟章斌林浩雅安职业技术学院药学与检验学院四川雅安625000

目的:利用网络药理学分析川牛膝治疗高血压的作用机制。方法:应用中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)筛选出川牛膝的活性成分及其作用靶点,采用OMIM数据库,Drugbank数据库,TTD数据库,CTD数据库和DISGENT数据库检索与高血压相关的靶... 详细信息

目的:利用网络药理学分析川牛膝治疗高血压的作用机制。方法:应用中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)筛选出川牛膝的活性成分及其作用靶点,采用OMIM数据库,Drugbank数据库,TTD数据库,CTD数据库和DISGENT数据库检索与高血压相关的靶点基因。将川牛膝及高血压的共同靶点导入STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用分析(PPI);利用METASCAPE数据库进行核心靶点GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果:川牛膝主要化学成分为槲皮素、杯苋甾酮、红苋甾酮、β-谷甾醇、齐墩果酸等;共筛选出关键共同靶点170个,包括AKT1、IL6、VEGFA、TP53、CASP3、TNF、JUN、EGF、MAPK1、EGFR、PTGS2、STAT3等;GO富集分析得到生物学进程主要涉及炎症反应、对伤害的反应、对脂多糖的反应、活性氧代谢过程、凋亡信号通路等;KEGG富集信号通路主要包含糖尿病并发症AGE-RAGE信号路径、肿瘤的途径、乙型肝炎、TNF信号通路、肿瘤中的蛋白质多糖等。结论:川牛膝治疗高血压存在多通路、多靶点的可能,揭示了川牛膝治疗高血压的潜在分子机制。

关键词：川牛膝高血压网络药理学化学成分作用机制

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川牛膝品种与品质的灰色关联度分析研究

中国药学杂志 2014年第20期49卷 1796-1801页

作者：刘维张祎楠裴瑾康亚兰罗静陈翠平马云桐成都中医药大学、中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室成都611137 北京市药品监督管理局顺义分局北京101300

目的为了筛选川牛膝优质种源,保证川牛膝的品质。方法本实验以川牛膝主要有效成分杯苋甾酮为指标成分,采用灰色关联度分析方法,对3个道地产区的32个居群川牛膝正品及其混淆品指标成分含量与农艺性状、生态环境、根的显微特征进行关联度... 详细信息

目的为了筛选川牛膝优质种源,保证川牛膝的品质。方法本实验以川牛膝主要有效成分杯苋甾酮为指标成分,采用灰色关联度分析方法,对3个道地产区的32个居群川牛膝正品及其混淆品指标成分含量与农艺性状、生态环境、根的显微特征进行关联度分析。结果得出对川牛膝杯苋甾酮含量贡献较大的农艺性状为叶、生态环境因素为海拔和降水量、根的显微构造为栓内层厚度。结论本实验筛选出了优质的川牛膝品种,为川牛膝的品种与质量评价提供科学、可靠的依据。

关键词：川牛膝灰色关联度分析品质