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聚乙二醇—聚唾液酸嵌段聚合修饰尿酸酶研究

聚乙二醇—聚唾液酸嵌段聚合修饰尿酸酶研究

作者：卢绍曾江南大学

学位级别：硕士

天然和重组蛋白类、多肽类药物在治疗疑难病症中发挥越来越重要的作用，但其稳定性差、半衰期短、免疫原性强的弱点使药效大打折扣。聚乙二醇修饰法增强了蛋白的抗酶解稳定性，显著延长血液半衰期，降低了免疫原性，但是在慢性治疗中由... 详细信息

天然和重组蛋白类、多肽类药物在治疗疑难病症中发挥越来越重要的作用，但其稳定性差、半衰期短、免疫原性强的弱点使药效大打折扣。聚乙二醇修饰法增强了蛋白的抗酶解稳定性，显著延长血液半衰期，降低了免疫原性，但是在慢性治疗中由于大分子量聚乙二醇（PEG）在体内积累，部分病人会产生针对聚乙二醇的抗体。本文以可生物降解的聚唾液酸（PSA）连接双官能团聚乙二醇修饰剂，嵌段聚合修饰尿酸酶，降低其抗原性，并望在慢性治疗中发挥重大作用。采用阴离子交换层析对粗提取的聚唾液酸进行纯化，收集目标峰测定聚唾液酸和蛋白含量，聚唾液酸回收率为79.7%，蛋白含量由1.99×10-3mg蛋白／mg PSA降低为为9.16×10-4mg蛋白／mg PSA，对样品超滤脱盐、冷冻干燥得产品。对纯化的聚唾液酸进行两步活化，先用高碘酸钠将非还原端相邻的醇羟基氧化产生活性醛基，再加入胱胺盐酸盐和二硫苏糖醇形成活性巯基，通过2,4-二硝基苯肼法检测醛基活化程度100%，埃尔曼法检测巯基活化程度38.6%±2.68%。活化的聚唾液酸和异基双功能聚乙二醇在25℃反应半小时，形成嵌段聚合物，然后于4℃下修饰尿酸酶。利用凝胶层析（TOSOH Toyopearl HW-55F）对修饰后尿酸酶进行纯化。收集相应峰进行化学法鉴定，第一流出峰检测到含量最高的聚唾液酸、聚乙二醇和蛋白，表明嵌段聚合修饰成功。通过SDS-PAGE电泳对分子量变化进行鉴定，目标峰显示45和55kDa的模糊条带。经多角度激光光散射凝胶系统测定聚唾液酸分子量为34.2kDa，尿酸酶分子量为140kDa，缀合物分子量为521.4kDa，而PEG分子量为3.5kDa。通过计算得每个四聚体连接10.08个修饰剂，则平均每个尿酸酶单体连接2.52个嵌段聚合物修饰剂。相对原始酶，修饰酶酶活保留率72.4%，体外热失活半衰期由115.5h提高到231h，交联比为12.3，氨基修饰率为10.6%，对高温、酸碱、胰蛋白酶的耐受稳定性显著提高。采用其他方法修饰尿酸酶：一种为还原胺基化修饰尿酸酶，即聚唾液酸非还原端的醇羟基氧化为醛基后，在还原剂的作用下，与尿酸酶25℃下反应48h，形成缀合物;第二为聚乙二醇修饰尿酸酶，聚乙二醇于4℃与尿酸酶反应2h，形成修饰物。采用凝胶层析对修饰物进行纯化，以化学法和SDS-PAGE进行鉴定。比较三种修饰方法，聚乙二醇修饰具有最高的修饰率，摩尔比为18.10，氨基修饰率14.1%，嵌段聚合修饰次之，聚唾液酸修饰程度最低;嵌段聚合修饰酶活保留率最高为72.4%，聚乙二醇修饰最低为53.6%;聚乙二醇修饰半衰期最长为402h，嵌段聚合修饰和聚唾液酸修饰半衰期接近。三种修饰方法较未修饰尿酸酶抗原性显著降低，嵌段聚合修饰和还原胺基化修饰抗原性接近，聚乙二醇修饰较高。

关键词：聚唾液酸聚乙二醇尿酸酶嵌段聚合抗原性

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嵌段聚合物在涂层材料中的应用进展

现代涂料与涂装 2017年第9期20卷 25-32页

作者：关广武周铭常春迪肯大学江苏荣昌新材料科技有限公司

对近年来国内外嵌段聚合物制备技术及影响聚合物结构规整的工艺与结构因素进行了系统阐述,并对嵌段聚合物的应用现状与展望进行了概叙与说明。

关键词：嵌段聚合制备应用

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聚乙二醇-聚唾液酸嵌段聚合修饰尿酸酶

生物加工过程 2015年第2期13卷 86-92页

作者：卢绍曾吴剑荣朱莉郑志永詹晓北江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

探索一种综合聚唾液酸(PSA)和聚乙二醇(PEG)优势的蛋白修饰方法。对纯化的聚唾液酸进行两步活化,先在非还原端氧化产生活性醛基,再加入胱胺形成活性巯基;活化的聚唾液酸(相对分子质量为3.4×104)和异基双功能的PEG(相对分子质量为3.5×1... 详细信息

探索一种综合聚唾液酸(PSA)和聚乙二醇(PEG)优势的蛋白修饰方法。对纯化的聚唾液酸进行两步活化,先在非还原端氧化产生活性醛基,再加入胱胺形成活性巯基;活化的聚唾液酸(相对分子质量为3.4×104)和异基双功能的PEG(相对分子质量为3.5×103)形成嵌段聚合物,然后于4℃修饰尿酸酶。利用凝胶层析(Toyopearl HW-55F)对修饰后的尿酸酶进行纯化,收集相应峰进行化学法和SDS-PAGE电泳鉴定,经多角度激光光散射凝胶系统测定缀合物相对分子质量为5.214×105;相对于原始酶,修饰酶酶活保留率72.4%,体外热失活半衰期由115.5 h提高到231 h,对高温、酸碱、胰蛋白酶的耐受稳定性显著提高。

关键词：聚乙二醇聚唾液酸嵌段聚合尿酸酶缓释

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纺织用嵌段聚合非离子表面活性剂

日用化学品科学 1983年第2期 1-7页

作者：郑还珠

市售的嵌段聚合表面活性剂已有数种,其中包括商品名为Pluronic的环氧乙烷与环氧丙烷嵌段聚合物(Poloxamer),结构式如下

关键词：非离子表面活性剂嵌段聚合物环氧丙烷环氧乙烷热稳定性纤维甲基环氧乙烷熏蒸剂氧化乙烯环氧化物热力学性质嵌段聚合聚合表面活性剂

环氧丙烷预聚体与环氧乙烷嵌段聚合反应动力学研究

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合成树脂及塑料 1986年第4期 10-14页

作者：范宏于在璋李宝芳潘祖仁浙江大学化工系浙江大学化工系

本文系统地研究了环氧丙烷预聚体与环氧乙烷嵌段聚合反应动力学,考察了催化剂浓度、单体浓度、预聚体组成和反应温度对聚合速率和聚合产物分子量的影响,建立了动力学方程,并对聚合机理进行了初步探讨。

关键词：嵌段聚合预聚体环氧丙烷反应动力学聚合速率聚氧乙烯阴离子聚合单体浓度催化剂浓度聚合机理

聚酚酞醚砜-聚硅氧烷-聚醚氨酯多嵌段聚合物

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高分子学报 1985年第2期 150-153页

作者：郑国栋韩靖刘南安冯之榴中国科学院长春应用化学研究所中国科学院长春应用化学研究所辽阳化工工厂

合成了端异氰酸酯基聚硅氧烷-聚醚氨酯嵌段预聚物和端羟基酚酞醚砜齐聚物,探索了上述预聚物与齐聚物间的活泼氢转移加成反应,对所得的多嵌段聚合物做了初步的结构形态表征。试验用单体:酚酞、4,4′-二氯二苯砜、TDL;、MDI、低分子量聚... 详细信息

合成了端异氰酸酯基聚硅氧烷-聚醚氨酯嵌段预聚物和端羟基酚酞醚砜齐聚物,探索了上述预聚物与齐聚物间的活泼氢转移加成反应,对所得的多嵌段聚合物做了初步的结构形态表征。试验用单体:酚酞、4,4′-二氯二苯砜、TDL;、MDI、低分子量聚氧化丙烯二醇N-

关键词：多嵌段聚合物酚酞酸碱指示剂嵌段聚合齐聚物低聚物溶液聚合聚硅氧烷硅酮含硅高聚物预聚物

传化股份“嵌段聚合硅氧烷整理剂”成为行业推广项目

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杭州化工 2016年第2期46卷 41-42页

中国纺织工业联合会为了进一步落实《建设纺织强国纲要（2011-2020）》,促进纺织行业科技成果向现实生产力转化,依据《纺织行业技术（成果）推广项目认定和管理办法》,确定了120项行业急需、技术成熟、有推广前景的项目列入＂2015年纺... 详细信息

中国纺织工业联合会为了进一步落实《建设纺织强国纲要（2011-2020）》,促进纺织行业科技成果向现实生产力转化,依据《纺织行业技术（成果）推广项目认定和管理办法》,确定了120项行业急需、技术成熟、有推广前景的项目列入＂2015年纺织行业新技术（成果）推广项目目录＂,以引导行业应用推广,促进全行业技术提升,传化股份柔软剂研究所的＂嵌段聚合硅氧烷整理剂＂也被列入目录,成为推广项目。

关键词：纺织行业嵌段聚合整理剂硅氧烷股份技术成熟纺织工业生产力转化

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AMA与MMA嵌段共聚物的合成与鉴定

高分子材料科学与工程 1997年第1期13卷 22-26页

作者：张洪敏候元雪程羽中北京化工大学高分子系

探讨了聚合时间对α－甲基丙烯酸烯丙酯（ＡＭＡ）α位双键选择性阴离子聚合的影响，合成了ＡＭＡ、与ＭＭＡ的双嵌段及三嵌段共聚物。结果发现，随聚合时间的延长，单体转化率提高、分子量增大、分子量分布变窄。嵌段共聚物的合成中，... 详细信息

探讨了聚合时间对α－甲基丙烯酸烯丙酯（ＡＭＡ）α位双键选择性阴离子聚合的影响，合成了ＡＭＡ、与ＭＭＡ的双嵌段及三嵌段共聚物。结果发现，随聚合时间的延长，单体转化率提高、分子量增大、分子量分布变窄。嵌段共聚物的合成中，ＭＭＡ首先聚合时，引发效率较高；当ＡＭＡ首先聚合时，分子量分布较窄。ＧＰＣ、ＮＭＲ、ＤＳＣ及ＴＧ测试结果表明，所得共聚物均具有较窄的分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ＝１．１２～１．２６）、组成比与设计值一致、ＡＭＡ段的每个重复单元上均定量带有烯丙基双键。

关键词：聚合共聚物甲基丙烯酸烯酯 MMA 嵌段聚合

环氧丙烷嵌段改性聚醚大单体合成聚羧酸减水剂及其性能研究

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环氧丙烷嵌段改性聚醚大单体合成聚羧酸减水剂及其性能研究

作者：方晨炜武汉理工大学

学位级别：硕士

本论文依托于国家“十二五”计划（2011BAJ03B03）“低成本、低能耗建筑节能关键技术集成研究与示范”的子课题，主要针对市面上使用的聚羧酸减水剂适应性差，分散性及分散保持性不稳定等问题，通过改性合成聚羧酸减水剂的原料聚醚大单... 详细信息

本论文依托于国家“十二五”计划（2011BAJ03B03）“低成本、低能耗建筑节能关键技术集成研究与示范”的子课题，主要针对市面上使用的聚羧酸减水剂适应性差，分散性及分散保持性不稳定等问题，通过改性合成聚羧酸减水剂的原料聚醚大单体来改性聚羧酸减水剂，利用对大单体红外、粘度、核磁共振、表面张力和热失重分析等测试来确定是否合成了嵌段型聚醚大单体，利用测定浆体的流动度、流变性能、减水剂吸附量、混凝土性能等试验来确定用改性的聚醚单体所合成的聚羧酸减水剂是否能够达到改性的目的。具体研究内容如下： 1通过研究自我研发的嵌段单体的红外图谱、核磁共振图谱，确定所合成的嵌段单体的可行性，从结构上确定其符合设计要求，为下一步改性减水剂母液打下基础。并且通过对改性聚醚热分析和黏度的测定来研究嵌段工艺中EO/PO对改性聚醚的影响，具体如下：通过分步加入EO、PO、EO至装有起始剂和催化剂的高压反应釜中，可制得嵌段改性聚醚。通过红外谱图显示，在丙烷嵌段改性聚醚和环氧丙烷含量不同的样品的谱图中，975cm-1处出现了吸收峰，而975cm-1谱带表示的是环氧乙烷链段与环氧丙烷链段邻接处的—CH2—摇摆振动。这表明环氧乙烷/环氧丙烷共聚物的组成是按照我们预期的分子结构设计的，聚醚的链段部分EO或PO都是集中分布的。也就是说，这两种不同的类型的单体在聚醚链是彼此各自集中分布链接起来的，并不是无规律分布的，是按照EO-PO-EO分布的。通过NMR核磁共振谱图进一步确认了所合成的聚醚符合设计的结构。EO/PO比例对嵌段改性聚醚性能的影响：随着EO/PO的增大，嵌段改性聚醚的粘度增大，表面张力增大，热失重率下降。 2通过研究用嵌段改性单体合成减水剂母液时的聚合反应温度、反应时间、单体配比和引发剂用量来确定嵌段改性聚醚聚羧酸减水剂的最佳合成工艺，结果表明：通过对聚合反应的温度、反应时间、单体配比和引发剂用量等合成工艺的讨论，用水泥净浆流动度作为性能表征，得到嵌段改性聚醚聚羧酸减水剂的最佳合成工艺即：单体配比为EPE:AA=1:3.3，其中引发剂双氧水的用量为0.5%，反应时间为5小时，反应温度为60℃。该合成工艺下合成的嵌段改性聚醚聚羧酸减水剂的净浆流动度最佳，表明该反应条件为最佳的合成工艺。 3通过对所合成的嵌段改性聚醚聚羧酸减水剂进行水泥净浆和混凝土实验，来确定改性减水剂的性能，对比传统非改性减水剂来揭示改性后的减水剂的优良性，结果表明：为了进一步研究所合成的嵌段改性聚醚聚羧酸减水剂HEPE系列的优越性，通过对HEPE系列聚羧酸减水剂及对比组HPC聚羧酸减水剂的不同浓度溶液的表面张力、饱和掺量、水泥净浆流动度经时损失、水泥浆体流变性能、混凝土性能的测定，数据表明自制的改性HEPE系列聚羧酸减水剂相较于传统非改性HPC聚羧酸减水剂具有低掺量高流动度、坍落度、抗压强度比高等优点;丙烷嵌段改性聚醚聚羧酸减水剂能够起到更好分散水泥颗粒的作用;在保证抗压强度和流动度经时损失的同时，提高了初始净浆流动度;在减水剂掺量较低的情况下，混凝土依旧能够获得较高的流动度。

关键词：聚羧酸减水剂大单体环氧丙烷嵌段聚合三元嵌段