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茶碱对聚苯胺尿酸酶电极的生物电化学活性的抑制

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物理化学学报 1997年第3期13卷 236-241页

作者：阚锦晴乔月东穆绍林李永舫扬州大学师范学院化学系扬州225002 中国科学院化学研究所北京100080

用聚苯胺尿酸酶电极研究了茶碱对固定酶的影响．结果表明，茶碱对固定尿酸酶有明显的抑制作用，但这种抑制作用是可逆的．在茶碱的存在下，pH对酶电极的响应电流影响与无茶碱存在时不同；在0．2－0．5V之间，酶电极的响应电流随电位增... 详细信息

用聚苯胺尿酸酶电极研究了茶碱对固定酶的影响．结果表明，茶碱对固定尿酸酶有明显的抑制作用，但这种抑制作用是可逆的．在茶碱的存在下，pH对酶电极的响应电流影响与无茶碱存在时不同；在0．2－0．5V之间，酶电极的响应电流随电位增加而迅速升高，当电位进一步升高时，其变化速率减慢．茶碱使尿酸酶催化反应的活化能从无抑制剂存在时的29．9kJ·mol-1提高到47．8kJ·mol-1，即抑制剂改变了尿酸酶催化反应的途径．

关键词：催化活性聚苯胺尿酸酶茶碱抑制作用

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尿酸酶产生菌的筛选、基因克隆及表达

中国药科大学学报 2005年第5期36卷 464-467页

作者：刘广桢陈建华王旻中国药科大学分子生物学教研室南京210009

目的:构建表达尿酸酶的重组基因工程菌,提高尿酸酶的表达量。方法:从12株酵母菌中筛选得到1株产尿酸酶的产朊假丝酵母Cu2357菌株,应用DNA重组技术,将野生菌尿酸酶基因克隆到表达载体pKA中,获得重组尿酸酶基因工程菌***/JM109。结果:构... 详细信息

目的:构建表达尿酸酶的重组基因工程菌,提高尿酸酶的表达量。方法:从12株酵母菌中筛选得到1株产尿酸酶的产朊假丝酵母Cu2357菌株,应用DNA重组技术,将野生菌尿酸酶基因克隆到表达载体pKA中,获得重组尿酸酶基因工程菌***/JM109。结果:构建的表达载体中的目的基因序列正确。经SDS-PAGE检测表明,表达的蛋白质相对分子质量约为34 kDa,含量占细胞可溶性蛋白的49%。优化培养条件后,发酵液尿酸酶活力可达16 U/mL,是野生菌产尿酸酶量的240多倍。结论:尿酸酶基因在***/JM109中实现了高效表达。

关键词：尿酸酶 E.coli pKU/JM109 克隆表达

尿酸酶-过氧化氢酶脂质体的特性分析及药效学研究

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中国药理学通报 2017年第9期33卷 1211-1214页

作者：杨兰周云莉李瑶晏声蕾张景勍重庆医科大学重庆高校药物工程研究中心重庆400016 重庆市人民医院药剂科重庆400039

目的考察尿酸酶-过氧化氢酶脂质体(uricase and catalase liposome,UCALP)、游离尿酸酶(uricase,UAE)的最适温度和最适pH,并探究UCALP降低高尿酸血症小鼠的尿酸水平和过氧化氢水平的能力。方法采用逆向蒸发法制备UCALP,并分别测定UCALP... 详细信息

目的考察尿酸酶-过氧化氢酶脂质体(uricase and catalase liposome,UCALP)、游离尿酸酶(uricase,UAE)的最适温度和最适pH,并探究UCALP降低高尿酸血症小鼠的尿酸水平和过氧化氢水平的能力。方法采用逆向蒸发法制备UCALP,并分别测定UCALP和UAE的最适温度和最适pH;小鼠腹腔注射尿酸建立高尿酸血症模型后,分别静脉注射UCALP和UAE,用测试盒分别测定不同时间点小鼠血清中尿酸浓度和过氧化氢的浓度。结果 UCALP和UAE的最适温度均为40℃,最适pH分别为8.0和8.5;在高尿酸血症的小鼠体内,UCALP比UAE降尿酸水平更明显,且UCALP组小鼠体内的过氧化氢浓度较UAE组低。结论UCALP能有效降低高尿酸血症小鼠的尿酸水平,且能在一定程度上降低过氧化氢的浓度。

关键词：尿酸酶过氧化氢酶脂质体高尿酸血症小鼠药效学最适温度和最适pH

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尿酸酶自组装空心纳米微球体外稳定性

食品与生物技术学报 2017年第9期36卷 933-937页

作者：邓雪胡雪原何丹晏子俊周云莉张景勍重庆医科大学药学院重庆400016

制备载尿酸酶(Uricase,UOX)聚乙二醇-透明质酸(Hyaluronic acid-graft-poly(ethylene glycol),HA-g-PEG)/羟丙基-β-环糊精(Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin,HPCD)自组装空心纳米微球(HA-g-PEG/HPCD self-assembly hollow spheres encapsulated uricase,UHPHD),并研究其体外稳定性。制备UHPHD,并测定其包封率、粒径及Zeta电位。再分别从最适温度、最适pH、热稳定性、贮存稳定性、酸碱稳定性和抗胰蛋白酶水解能力初步考察游离UOX和UHPHD的差异。结果:UHPHD的包封率为(62.17±2.94)%,粒径和Zeta电位分别为(299.60±13.05)nm和(-45.10±2.75)mV。UHPHD和UOX最适温度均为40℃,最适pH均为8.5。体外稳定性结果显示,UHPHD的体外稳定性明显高于UOX。

关键词：尿酸酶稳定性自组装空心纳米微球

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透明质酸修饰的尿酸酶脂质体的制备及特性

第二军医大学学报 2016年第9期37卷 1076-1081页

作者：谢江川何丹胡雪原周云莉晏子俊陈薇张景勍重庆医科大学药物高校工程研究中心重庆400016 重庆市中医院药剂科重庆400021

目的制备透明质酸修饰的尿酸酶脂质体(hyaluronic acid-uricase liposomes,UHLP),并对尿酸酶(uricase,UC)和UHLP的体外活性及稳定性进行研究。方法采用逆向蒸发法制备UHLP,测定UHLP的包封率、粒径与zeta电位,用透射电镜对UHLP进行观察... 详细信息

目的制备透明质酸修饰的尿酸酶脂质体(hyaluronic acid-uricase liposomes,UHLP),并对尿酸酶(uricase,UC)和UHLP的体外活性及稳定性进行研究。方法采用逆向蒸发法制备UHLP,测定UHLP的包封率、粒径与zeta电位,用透射电镜对UHLP进行观察。考察游离UC和UHLP中UC的最适温度和最适pH,还考察了其热稳定性、贮存稳定性、酸碱稳定性、抗胰蛋白酶水解能力以及抗部分金属离子和有机化合物能力,并对UHLP提高UC活性的机制进行了初步研究。结果 UHLP的平均包封率为(57.27±3.93)%(n=3),平均粒径为(322.6±8.2)nm(n=3),zeta电位为(-19.4±1.7)mV(n=3)。透射电镜下UHLP呈分布均匀的圆形或椭圆形。游离UC和UHLP中UC最适温度均为40℃;游离UC最适pH为8.5,UHLP中UC最适pH为8.0。稳定性结果显示,UHLP中UC的热稳定性、贮存稳定性、酸碱稳定性、抗胰蛋白酶水解能力以及抗部分金属离子和有机化合物能力均优于游离UC。UHLP提高UC活性机制初步研究结果表明,UC经UHLP包裹后其活性发生改变,和UC与UHLP脂质膜的相互作用有关,它们在相互作用的过程中使UC的构象发生翻转,构效发生改变,UC活性中心暴露,从而导致其活性增强。结论 UHLP不仅能提高UC在体外的活性,还能提高UC在体外的稳定性。

关键词：尿酸酶透明质酸脂质体稳定性

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尿酸酶多囊脂质体的酶学性质及其免疫原性

食品与生物技术学报 2016年第4期35卷 364-369页

作者：邓雪何丹周云莉熊华蓉张景勍重庆医科大学药学院重庆400016 重庆医科大学药物高校工程研究中心/生物化学与分子药理学重点实验室重庆400016

研究尿酸酶多囊脂质体(Uricase-multivesicular liposomes,UOMVLs)的酶学性质及其免疫原性。采用W/O/W复乳法制备UOMVLs,测定UOMVLs中尿酸酶(Uricase,UOX)的最适反应温度、最适反应p H值、热稳定性以及储存稳定性,并以其为抗原免疫SD大... 详细信息

研究尿酸酶多囊脂质体(Uricase-multivesicular liposomes,UOMVLs)的酶学性质及其免疫原性。采用W/O/W复乳法制备UOMVLs,测定UOMVLs中尿酸酶(Uricase,UOX)的最适反应温度、最适反应p H值、热稳定性以及储存稳定性,并以其为抗原免疫SD大鼠,制备抗血清,通过间接ELISA法检测血清抗体效价。UOMVLs和UOX最适反应温度均为40℃;最适反应p H值分别为8.0和8.5;UOMVLs的稳定性明显高于UOX;UOMVLs和UOX的血清抗体效价分别为1∶500和1∶8 000。因此UOMVLs的酶学性质明显优于游离UOX,免疫原性明显低于游离UOX,为该酶的临床应用提供了实验依据。

关键词：尿酸酶多囊脂质体酶学性质免疫原性

透明质酸修饰的尿酸酶多囊脂质体的体外特性及药效学过程

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第二军医大学学报 2017年第1期38卷 81-85页

作者：冯娇谢江川晏声蕾晏子俊张景勍重庆医科大学重庆高校药物工程研究中心重庆400016

目的研究透明质酸修饰的尿酸酶(UC)多囊脂质体(uricase in hyaluronic acid-uricase multivesicular liposomes,UHMVLs)的体外特性及其在大鼠体内的药效学。方法采用复乳法制备UHMVLs并测定包封率及理化特性。取12只健康雄性SD大鼠,模... 详细信息

目的研究透明质酸修饰的尿酸酶(UC)多囊脂质体(uricase in hyaluronic acid-uricase multivesicular liposomes,UHMVLs)的体外特性及其在大鼠体内的药效学。方法采用复乳法制备UHMVLs并测定包封率及理化特性。取12只健康雄性SD大鼠,模型组采用次黄嘌呤和氧嗪酸钾建立高尿酸血症大鼠模型(n=3),UHMVLs组(n=3)和UC组(n=3)分别于建模后尾静脉注射UHMVLs和游离UC,并以正常组(n=3)为对照,测定大鼠血清中尿酸水平。结果 UHMVLs的平均包封率为(62.48±3.87)%(n=3)。UHMVLs和UC最适温度均为40℃,最适pH值分别为8.0和8.5。在同一温度(20~70℃)和pH(6.5~9.5)条件下,UHMVLs中UC的活性均高于游离UC(P尿酸血症大鼠模型血清中尿酸水平的效果均较游离UC更显著(P尿酸水平的能力优于游离UC。

关键词：尿酸酶透明质酸多囊脂质体最适温度最适pH 药物效应动力学

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尿酸酶基因工程菌的构建与分泌表达

重庆医科大学学报 2018年第1期43卷 127-130页

作者：唐丽霞刘杰刘先俊蒋雪重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:将产朊假丝酵母菌尿酸酶编码基因克隆至已改造的表达载体p ET-28a中,使尿酸酶在大肠埃希菌(Escherichia coli,***)中以分泌的形式持续表达,并具有生物学活性。方法:(1)利用重组PCR技术删除p ET-28a中Lac O和Lac I序列构建表达载体;... 详细信息

目的:将产朊假丝酵母菌尿酸酶编码基因克隆至已改造的表达载体p ET-28a中,使尿酸酶在大肠埃希菌(Escherichia coli,***)中以分泌的形式持续表达,并具有生物学活性。方法:(1)利用重组PCR技术删除p ET-28a中Lac O和Lac I序列构建表达载体;(2)金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A,SPA)信号肽编码基因与尿酸酶基因N端融合成目的基因;(2)将目的基因克隆至表达载体中,再转化至*** DH5ɑ中,使之表达;(4)利用SDS-PAGE鉴定并测定表达产物生物学活性。结果:尿酸酶在***中以分泌的形式持续表达,并具有生物学活性。结论:利用肠道内正常菌群***构建可分泌、持续表达蛋白的载体p ET-28a-s UOX,可将表达的尿酸酶作用于高尿酸血症模型上,为应用于动物实验通过肠道降低尿酸水平提供依据。

关键词：尿酸酶大肠埃希菌分泌持续表达

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尿酸酶复合脂质体中尿酸酶的药动学考察

中国医院药学杂志 2014年第21期34卷 1805-1808页

作者：周云莉杨林吴建勇张永红张景勍重庆医科大学药物高校工程研究中心和生物化学与分子药理重点实验室重庆400016 重庆市食品药品检验所重庆401121

目的:研究尿酸酶(uricase,URE)和过氧化氢酶(catalase,CAE)联合制备成脂质体后尿酸酶在大鼠体内的药动学。方法:大鼠随机分成2组,静脉分别注射尿酸酶复合脂质体(uricase and catalase liposome,UCLP)和URE后,测定不同时间点大鼠血液中UR... 详细信息

目的:研究尿酸酶(uricase,URE)和过氧化氢酶(catalase,CAE)联合制备成脂质体后尿酸酶在大鼠体内的药动学。方法:大鼠随机分成2组,静脉分别注射尿酸酶复合脂质体(uricase and catalase liposome,UCLP)和URE后,测定不同时间点大鼠血液中URE的活性,计算URE的药动学参数及生物利用度。结果:UCLP和URE的主要药动学参数AUC0-t分别为(118.06±19.26)和(48.16±6.31)mU·h·ml-1,Cmax为(88.70±8.52)和(75.65±9.04)mU·ml-1,tmax为0.50 h和0.17 h;UCLP的绝对生物利用度为245.14%;UCLP和URE的达峰时间(tmax)、曲线下面积(AUC0-t)等参数具有显著性差异(P<0.05)。结论:UCLP与游离URE相比,UCLP有缓释效果;生物利用度良好;两者不具有生物等效性。

关键词：尿酸酶过氧化氢酶脂质体药动学活性