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木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶对小鼠巨噬细胞raw264.7的抗炎作用研究

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中国药房 2018年第5期29卷 602-606页

作者：刘立新邹冬玉张羽男张强张楠楠佳木斯大学药学院黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学公共卫生学院黑龙江佳木斯154007

目的:研究木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶的抗炎作用及机制。方法:以正常小鼠巨噬细胞raw264.7为对照,以脂多糖(LPS)诱导的raw264.7细胞为炎症模型,采用MTT法检测不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的木犀草素、4,4′-联吡啶和木犀草素·... 详细信息

目的:研究木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶的抗炎作用及机制。方法:以正常小鼠巨噬细胞raw264.7为对照,以脂多糖(LPS)诱导的raw264.7细胞为炎症模型,采用MTT法检测不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的木犀草素、4,4′-联吡啶和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶作用细胞2 h后的细胞活性;荧光定量聚合酶链式反应法测定40μmol/L浓度时细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达,酶联免疫吸附法测定40μmol/L浓度时细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)蛋白表达,Western blot法测定40μmol/L浓度时细胞中核转录因子p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常细胞比较,LPS诱导后raw264.7细胞活性明显降低(Praw264.7细胞活性(Praw264.7细胞活性无明显影响;40μmol/L浓度下,木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可使LPS诱导后细胞中i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),其中木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶降低效果强于木犀草素(P<0.05或P<0.01)。结论:木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可能通过下调NF-κB信号来抑制炎症相关因子产生,其抗炎作用优于木犀草素。

关键词：木犀草素 4,4′-联吡啶药物共晶小鼠巨噬细胞raw264.7 抗炎作用

黑枸杞花青素对小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡及自噬与凋亡相互作用机制的研究

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黑枸杞花青素对小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡及自噬与凋亡相互作用机...

作者：张龙飞青海大学

学位级别：硕士

黑枸杞作为青藏高原特色野生药用植物,因含有丰富的花青素,被誉为“花青素之王”,大量研究发现:青藏高原黑枸杞花青素具有抗炎、抗氧化、提高免疫力等多种生物功效。本研究拟以小鼠巨噬细胞raw264.7为研究对象,1)采用流式细胞术,扫描电... 详细信息

黑枸杞作为青藏高原特色野生药用植物,因含有丰富的花青素,被誉为“花青素之王”,大量研究发现:青藏高原黑枸杞花青素具有抗炎、抗氧化、提高免疫力等多种生物功效。本研究拟以小鼠巨噬细胞raw264.7为研究对象,1)采用流式细胞术,扫描电镜,RT-q PCR及Western Blot法检测不同浓度花青素及结合JNK通路抑制剂SP600125诱导小鼠巨噬细胞raw264.7后对细胞凋亡率、细胞形态、凋亡因子及JNK信号通路因子mRNA及蛋白表达的影响;2)采用CCK8法,测定HO诱导小鼠巨噬细胞raw264.7活力及黑枸杞花青素对HO诱导小鼠巨噬细胞raw264.7细胞凋亡机制的影响;3)探讨黑枸杞花青素结合自噬抑制剂3-MA对小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡的影响,4)研究黑枸杞花青素结合JNK凋亡通路抑制剂SP600125对小鼠巨噬细胞raw264.7自噬的影响。基于细胞水平探究黑枸杞花青素对小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡及凋亡与自噬相互作用分子机制。以期为黑枸杞花青素作为免疫增强剂的开发利用提供理论基础。主要研究内容和结果如下:1.不同浓度黑枸杞花青素对小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡的影响与对照组相比,花青素组可显著降低小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡率(P小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡且呈剂量依赖性。2.黑枸杞花青素及结合JNK通路抑制剂SP600125对小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡的影响与对照组相比,花青素组极显著降低JNK通路因子JNK mRNA及p-JNK蛋白表达量(P小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡率(P小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡率(P小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡。3.黑枸杞花青素对HO诱导的小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡的影响CCK-8结果表明,50、100、150、200、250μmol/L HO组诱导小鼠巨噬细胞raw264.7 12、24、36、48、72 h均有效降低小鼠巨噬细胞raw264.7活率,HO建立小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡模型的最佳方案为:200μmol/L HO诱导24 h。HO诱导小鼠巨噬细胞raw264.7后,花青素极显著降低小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡率(P小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡。4.黑枸杞花青素结合自噬抑制剂3-MA对小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡的影响与对照组相比,花青素组,3-MA组及花青素组+3-MA组极显著降低小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡率、Caspase-3、Bax/Bcl-2比值、JNK的mRNA及p-JNK的蛋白表达量(P小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡率、Bax、Bax/Bcl-2比值的mRNA及p-JNK的蛋白表达量(P小鼠巨噬细胞raw264.7凋亡。5.黑枸杞花青素结合JNK通路抑制剂SP600125对小鼠巨噬细胞raw264.7自噬的影响与对照组相比,花青素组、SP600125组与花青素+SP600125组极显著降低LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达量(P<0.05),极显著降低LC3-Ⅱ、Beclin-1的蛋白表达(P<0.01),与SP600125组相比,花青素组+SP600125组显著降低LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达量(P<0.05),极显著降低LC3-Ⅱ的蛋白表达(P<0.01),说明抑制

关键词：黑枸杞花青素小鼠巨噬细胞raw264.7 JNK信号通路细胞凋亡细胞自噬

野葛根多糖的提取、分离纯化、结构鉴定及对小鼠巨噬细胞raw264.7的免疫调节活性研究

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野葛根多糖的提取、分离纯化、结构鉴定及对小鼠巨噬细胞RAW264.7...

作者：董洲华南理工大学

学位级别：硕士

野葛根为豆科植物野葛藤Pueraria Lobata(willd.)Ohwi的干燥根。本文以野葛根为原料,从中分离纯化出两种水溶性活性多糖GE-1及GE-2,并分别从结构,免疫调节活性方面对其进行比较。结果表明:采用乙醇回流法除去野葛根中黄酮类物质,采用酶... 详细信息

野葛根为豆科植物野葛藤Pueraria Lobata(willd.)Ohwi的干燥根。本文以野葛根为原料,从中分离纯化出两种水溶性活性多糖GE-1及GE-2,并分别从结构,免疫调节活性方面对其进行比较。结果表明:采用乙醇回流法除去野葛根中黄酮类物质,采用酶解法除去野葛根中的淀粉及纤维素,采用Sevag法除去蛋白质,采用“水提醇沉法”获得野葛根中水溶性粗多糖,经阴离子交换柱层析DEAE-Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶柱层析Sephacryl S-200 HR分离纯化后得到GE-1和GE-2两个组分。其中GE-1为中性多糖;GE-2为酸性多糖,糖醛酸含量为1.5%。经测定,野葛根多糖GE-1的分子量为9.9kDa,GE-2分子量为12.3kDa;扫描电子显微镜显示,GE-1为网状结构,表面有细微的孔;GE-2为表面光滑无凸起的条带状结构。紫外全波段扫描显示GE-1及GE-2均不含蛋白质及核酸类物质,不属于糖蛋白。红外光谱扫描显示,GE-1及GE-2均含有多糖特征吸收峰,且只含有α型吡喃糖,不含α型呋喃糖。单糖组成分析表明GE-1及GE-2均由葡萄糖组成,不含其它种类单糖。高碘酸氧化,Smith降解及甲基化结果表明GE-1含有1,4-Glcp和1,6-Glcp糖苷键,两者之间的摩尔比为1.72:2.64。GE-2中含有1,3-Glcp,1,4-Glcp,1,3,6-Glcp及1,6-Glcp四种糖苷键,各糖苷键之间的摩尔比为1.90:5.52:1.43:2.45。一维核磁共振分析显示,GE-1是由→4)-α-D-Glc(1→和→6)-α-D-Glc(1→糖残基组成的直链结构;GE-2含有分支结构,直链由→3)-α-D-Glc(1→,→4)-α-D-Glc(1→及→3,6)-α-D-Glc(1→三种糖残基组成,支链由→6)-α-D-Glc(1→糖残基组成。GE-1及GE-2均具有免疫调节活性,均能促进小鼠巨噬细胞raw264.7分泌细胞因子NO、TNF-α和IL-6。但GE-1的促进效果非常微弱,GE-2的促进效果较强。GE-2能特异性地与小鼠巨噬细胞raw264.7细胞膜表面受体SR,GR及TLR4相互作用,激活免疫应答,从而影响细胞因子NO、TNF-α和IL-6的分泌。

关键词：野葛根多糖提取纯化结构鉴定小鼠巨噬细胞raw264.7 免疫调节活性

重楼提取液对小鼠巨噬细胞raw264.7增殖的影响

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包头医学院学报 2016年第10期32卷 1-2页

作者：刘友姜树原刘晓蕾邵国周卫华包头医学院内蒙古包头014060 吉首大学医学院

目的:观察重楼提取液对小鼠巨噬细胞raw 264.7增殖的影响。方法:采用不同浓度(0μL/m L、1μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L)的重楼提取液,作用于体外培养的小鼠巨噬细胞raw264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过四唑... 详细信息

目的:观察重楼提取液对小鼠巨噬细胞raw 264.7增殖的影响。方法:采用不同浓度(0μL/m L、1μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L)的重楼提取液,作用于体外培养的小鼠巨噬细胞raw264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过四唑盐比色法检测小鼠巨噬细胞raw264.7的增殖情况。结果:与阴性对照组相比,作用24 h后,50μL/m L、100μL/m L重楼提取液均能抑制raw264.7细胞的增殖;作用48 h后,5μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L均能抑制raw264.7细胞的增殖,并且具有时间及浓度依赖性,其抑制效果在100μL/m L作用48 h时最好。结论:高浓度重楼提取液抑制细胞增殖,细胞接触变松,密度降低,贴壁能力减弱,可见较长伪足,生长状态差。

关键词：重楼提取液小鼠巨噬细胞raw264.7 细胞增殖

乌头酸脱羧酶1对BCG诱导巨噬细胞炎症反应的调控作用研究

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1696-1706页

作者：戴帆刘占有张旭阳李武宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021 宁夏大学生命科学学院银川750021

旨在探究乌头酸脱羧酶1(aconitate decarboxylase 1,ACOD1)对减毒牛分枝杆菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)诱导的小鼠巨噬细胞raw264.7炎症反应的调控作用。基于小干扰RNA技术构建ACOD1敲减模型,采用Western blot、qRT-PCR、免疫荧光等技术检测BCG感染巨噬细胞raw264.7后细胞内ACOD1、细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、COX2、iNOS以及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白的表达变化。结果显示,BCG感染巨噬细胞raw264.7后以时间和浓度依赖性方式显著上调ACOD1及促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、COX2、iNOS的表达,下调抑炎细胞因子IL-4、TGF-β的表达(P细胞因子表达(P<0.01),同时也会下调TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白TLR4、MyD88、TRAF6、p-NF-κB p65的表达。综上,ACOD1可能通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路参与调控BCG引起的炎症反应。

关键词：乌头酸脱羧酶1 BCG 小鼠巨噬细胞raw264.7 炎症反应 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路

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新疆疏花蔷薇花的体外抗氧化活性

现代食品科技 2024年第9期40卷 153-159页

作者：冯倩倩赵文惠李安林郭瑛田莉新疆医科大学中医学院新疆乌鲁木齐830017 新疆医科大学中心实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆名医名方与特色方剂学重点实验室新疆乌鲁木齐830017

研究新疆特色植物资源疏花蔷薇花不同极性部位的体外抗氧化活性,为该药材的后续研究提供参考。制备疏花蔷薇花的石油醚(E1)、二氯甲烷(E2)、乙酸乙酯(E3)、正丁醇(E4)等不同极性部位提取物,考察其+对DPPH、ABTS和羟基自由基的清除能力... 详细信息

研究新疆特色植物资源疏花蔷薇花不同极性部位的体外抗氧化活性,为该药材的后续研究提供参考。制备疏花蔷薇花的石油醚(E1)、二氯甲烷(E2)、乙酸乙酯(E3)、正丁醇(E4)等不同极性部位提取物,考察其+对DPPH、ABTS和羟基自由基的清除能力评价体外抗氧化活性;以抗氧化活性最高的E4为研究对象,以D-半乳糖诱导小鼠巨噬细胞raw264.7建立体外氧化损伤模型,设立对照组、模型组、Vc组、E4(低、中、高剂量)组,CCK-8法测定细胞存活率,测定细胞中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乳酸脱氢酶、过氧化氢酶的活力及丙二醛含量。疏花蔷薇花不同极性部位抗氧化活性大小为E4>E3>E2>E1,其中E3、E4清除自由基能力较强,并且呈明显剂量依赖效应。当E4质量浓度为3.13~12.50μg/mL时,raw264.7细胞的存活率均≥80%,无明显毒性;各剂量组可显著促进raw264.7细胞存活率(P细胞中SOD、GSH-PX、LDH、CAT活力,降低MDA含量。结果表明疏花蔷薇花具有良好的体外抗氧化能力。

关键词：疏花蔷薇花不同极性提取部位体外抗氧化小鼠巨噬细胞raw264.7

黄酒多肽的多级分离纯化及其对小鼠巨噬细胞免疫调节的影响

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食品工业科技 2020年第13期41卷 289-295页

作者：冯瑞雪史瑛姬中伟钱肖华徐岳正毛健许正宏粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江南大学江苏无锡214122 浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司国家黄酒工程技术研究中心浙江绍兴312000

本研究以黄酒为原料,通过大孔树脂吸附、凝胶色谱等方法多级分离纯化黄酒中活性肽组分,并探究各级分离肽组分对小鼠巨噬细胞raw264.7免疫调节作用的影响。通过脂多糖LPS(1μg/mL)刺激raw264.7细胞建立体外炎症模型,以不同浓度的各级分... 详细信息

本研究以黄酒为原料,通过大孔树脂吸附、凝胶色谱等方法多级分离纯化黄酒中活性肽组分,并探究各级分离肽组分对小鼠巨噬细胞raw264.7免疫调节作用的影响。通过脂多糖LPS(1μg/mL)刺激raw264.7细胞建立体外炎症模型,以不同浓度的各级分离纯化的黄酒多肽样品进行干预,对NO释放抑制率最高的黄酒多肽组分进行结构分析。结果表明,可通过大孔树脂初步分离纯化黄酒活性多肽。对3种不同型号大孔树脂的吸附解析性能进行比较,最终选择DA201-C大孔吸附树脂富集黄酒多肽,收集洗脱液旋蒸冻干后获得黄酒多肽SJ组分。采用MTT法检测细胞活力,黄酒多肽SJ作用raw264.7细胞的安全范围为≤2.5 mg/mL。采用Griess Reagent法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,与LPS模型组相比,黄酒多肽SJ浓度为0.3、0.6、1.2、2.5 mg/mL时能明显抑制NO释放(抑制率分别为20.85%、36.42%、68.58%、95.01%)。黄酒多肽SJ经Sephadex G-15凝胶色谱柱分离得到3个组分即G1、G2、G3,分别收集这三组洗脱峰并测定其对raw264.7细胞NO分泌量的影响。研究发现G1组分活性高于其他2种组分,G1、G2、G3的NO释放半抑制浓度分别是0.68、0.86、0.75 mg/mL。对G1组分进行氨基酸组成分析得知其疏水氨基酸占比32.63%,必需氨基酸占比28.46%。研究结果证明黄酒多肽能显著抑制LPS诱导的raw264.7分泌NO,对LPS刺激的raw264.7细胞炎症具有保护作用,从而促使巨噬细胞发挥免疫作用。

关键词：黄酒多肽结构鉴定小鼠巨噬细胞raw264.7 免疫调节活性

脂肪分化相关蛋白2对BCG诱导小鼠传代巨噬细胞自噬的调控作用

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2134-2146页

作者：王崇年于嘉霖宫照乾吴晓玲邓光存宁夏大学生命科学学院银川750021 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021

本研究旨在探讨脂肪分化相关蛋白2(perilipin 2,PLIN2)在卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)感染的小鼠巨噬细胞raw264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞raw264.7中PLIN2的表达,结合BCG感染,通过免疫印迹、流式... 详细信息

本研究旨在探讨脂肪分化相关蛋白2(perilipin 2,PLIN2)在卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)感染的小鼠巨噬细胞raw264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞raw264.7中PLIN2的表达,结合BCG感染,通过免疫印迹、流式细胞术和免疫荧光等技术,检测胞内PLIN2、自噬、内质网应激及脂肪酸代谢相关因子指标的表达变化。结果显示:BCG感染显著上调巨噬细胞raw264.7中PLIN2的表达(P细胞内中性脂质的蓄积。敲减PLIN2能使BCG感染的巨噬细胞raw264.7中自噬相关蛋白ATG5(P细胞自噬率极显著降低(P细胞内中性脂质的含量(P细胞内Ca^(2+)浓度极显著降低(P巨噬细胞内自噬相关蛋白表达均无显著差异(P>0.05)。BCG感染巨噬细胞上调了PLIN2的表达,而PLIN2通过上调细胞内脂肪酸含量,进而级联激活PERK-eIF2α-ATF4-CHOP内质网应激信号通路,诱导细胞自噬发生。

关键词： PLIN2 BCG 小鼠巨噬细胞raw264.7 内质网应激细胞自噬

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茯苓多糖的抗炎效果及其对小鼠免疫功能影响的初步研究

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茯苓多糖的抗炎效果及其对小鼠免疫功能影响的初步研究

作者：赵强强华中科技大学

学位级别：硕士

茯苓（Poria cocos （Sehw.） Wolf）,又名茯灵、玉灵,属多孔菌科茯苓属。茯苓是一种在我国应用历史悠久、应用范围广泛的重要传统药材,具有益脾胃、宁心安神、渗湿利水等功效。茯苓多糖为茯苓的有效成分之一。有研究结果显示,茯苓能显... 详细信息

茯苓（Poria cocos （Sehw.） Wolf）,又名茯灵、玉灵,属多孔菌科茯苓属。茯苓是一种在我国应用历史悠久、应用范围广泛的重要传统药材,具有益脾胃、宁心安神、渗湿利水等功效。茯苓多糖为茯苓的有效成分之一。有研究结果显示,茯苓能显著地抑制炎症反应和增强机体免疫功能,具有较好的研究和药用价值。但对茯苓多糖抗炎效果和增强免疫功能作用的研究却甚少。本文以小鼠巨噬细胞raw264.7为研究材料,采用ELISA和RT-PCR方法研究了茯苓多糖PS1及PS2对炎症的影响;选择昆明小白鼠为研究材料,采用小鼠炭粒廓清法、PHA诱导T淋巴细胞转化法和脾细胞抗体形成法研究了茯苓多糖PS1及PS2对小鼠免疫功能的影响,主要的研究结果为: 1)本文采用盐提法和水提法,分别获得了盐提茯苓多糖PS1和水提茯苓多糖PS2。对PS1及PS2进行理化性质分析表明,PS1和PS2均不含蛋白质和核酸等杂质,它们的平均分子量分别为9.5×104和20.0×104,完全水解后获得的主要单糖样本组分为:PS1为半乳糖、甘露糖、葡糖糖和木糖,摩尔比为4.7:2.5:1.6:1.1;PS2为葡萄糖、半乳糖、甘露糖和木糖,摩尔比为6.5: 1.6:1.3:0.6。 2)茯苓多糖PS1及PS2均具有剂量依赖的抑制炎症反应的效果。本文通过LPS刺激raw264.7细胞产生炎症反应建立了炎症细胞模型,分别用不同浓度的PS1及PS2单独干预炎性raw264.7细胞后,用ELISA和RT-PCR法检测肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6表达量及肿瘤坏死因子-αmRNA表达量。ELISA结果显示,PS1及PS2均能显著抑制白细胞介素6和肿瘤坏死因子-α的表达;RT-PCR结果表明,PS1及PS2对肿瘤坏死因子-αmRNA的表达具有明显的抑制作用。 3)PS1及PS2对小鼠非特异性免疫和细胞免疫功能都具有明显的增强作用,但对小鼠体液免疫功能并没有明显的影响。本文采用小鼠碳粒廓清法、PHA刺激T淋巴细胞转化法和小鼠脾细胞抗体形成法,分别检验了茯苓多糖PS1及PS2对小鼠非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能的影响。实验结果显示,PS1及PS2均能明显提高廓清指数K和T淋巴细胞转化率,但对脾细胞抗体形成水平并无明显影响。综上所述,PS1及PS2均具有显著的抗炎效果,并能明显促进小鼠非特异性免疫功能和细胞免疫功能,但对小鼠体液免疫功能却无明显影响。

关键词：茯苓多糖小鼠巨噬细胞raw264.7 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α