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小麦纹枯病菌胞外蛋白酶的纯化与特性

植物病理学报 2006年第2期36卷 135-141页

作者：赵蕾张天宇山东农业大学植物保护学院

小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealisVanderHoeven)在以小麦细胞壁为唯一碳氮源的液体培养基中可产生多种蛋白酶,培养液经硫酸铵沉淀,SP-Sepharose Fast F low离子交换层析,Pheny l(high-sub)-Sepharose Fast F low疏水层析,SephadexG-75分子筛层析,分离纯化到分子量约40 kD的一种蛋白酶。该酶能水解胰蛋白酶专一性底物Benz-Phe-Val-A rg-NA,对凝乳弹性蛋白酶底物Suc-A la-A la-Pro-Phe-NA和枯草杆菌蛋白酶底物CBZ-G ly-G ly-Leu-NA无活性,能被胰蛋白酶抑制剂aprotinin、leupeptin和soybean trypsin inhib itor强烈抑制,丝氨酸蛋白酶抑制剂PM SF能部分抑制酶的活性,表明该蛋白酶是丝氨酸蛋白酶中的一种类胰蛋白酶。

关键词：小麦纹枯病菌胞外蛋白酶类胰蛋白酶

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小麦纹枯病菌胞外蛋白酶致病机理的研究

植物病理学报 2006年第5期36卷 454-459页

作者：赵蕾梁元存张天宇山东农业大学植物保护学院

将小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealisVanderHoeven)产生的一种类胰蛋白酶作用于小麦细胞壁,经测定酶作用后底物中的蛋白含量及产物中羟脯氨酸含量的变化,证明了该酶能够降解寄主细胞壁结构蛋白。电镜观察该酶对活体小麦组织超微结构影... 详细信息

将小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealisVanderHoeven)产生的一种类胰蛋白酶作用于小麦细胞壁,经测定酶作用后底物中的蛋白含量及产物中羟脯氨酸含量的变化,证明了该酶能够降解寄主细胞壁结构蛋白。电镜观察该酶对活体小麦组织超微结构影响的结果显示,该酶能够降解细胞中的膜蛋白。活体内蛋白酶活性检测结果表明,小麦纹枯病菌在小麦组织内还能产生类胰蛋白酶之外的其它蛋白酶。

关键词：小麦纹枯病菌胞外蛋白酶致病机理

小麦纹枯病菌对噻呋酰胺的敏感性及抗药性突变体的主要生物学性状

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农药学学报 2014年第3期16卷 271-280页

作者：齐永志李海燕苏媛甄文超河北农业大学植物保护学院河北保定071001

采用菌丝生长速率法，分别测定了采自河北、山东和河南未使用过酰胺类药剂地区的166株小麦纹枯病菌Rhizotonia cerealis Van der Hoeven对噻呋酰胺的敏感性，并对小麦纹枯病菌抗噻呋酰胺突变体的诱导方法及突变体的主要生物学性状进行... 详细信息

采用菌丝生长速率法，分别测定了采自河北、山东和河南未使用过酰胺类药剂地区的166株小麦纹枯病菌Rhizotonia cerealis Van der Hoeven对噻呋酰胺的敏感性，并对小麦纹枯病菌抗噻呋酰胺突变体的诱导方法及突变体的主要生物学性状进行了研究。结果表明：噻呋酰胺对166株小麦纹枯病菌的平均EC50值为（0.072±0.022）μg/mL，菌株频率呈连续单峰曲线分布，未发现敏感性明显下降的亚群体，因此可将该EC50值作为小麦纹枯病菌对噻呋酰胺的敏感基线。通过紫外诱导加菌落角变的方法获得了5株抗噻呋酰胺突变体，其抗药性水平介于5.5～18.9倍之间；药剂驯化未能获得抗药性突变体。突变体在PSA平板上的生长速率与亲本菌株无显著性差异，但其菌丝干重、菌核形成数量和菌核干重均明显低于亲本菌株；除突变体HD7-7 U对石新828的致病力未发生明显变化外，其他突变体对石新828和良星99的致病力均明显减弱；5株突变体的抗药性均不能稳定遗传；噻呋酰胺与戊唑醇、井冈霉素、咯菌腈、三唑酮、丙环唑和多菌灵之间无交互抗性关系。

关键词：小麦纹枯病菌噻呋酰胺敏感性抗药性突变体生物学性状

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小麦纹枯病菌毒素对小麦植株的作用

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第3期32卷 55-59页

作者：纪兆林陈景鹏徐敬友陈夕军张清霞童蕴慧扬州大学园艺与植物保护学院江苏扬州225009

利用小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)毒素,研究植物病原菌毒素对寄主植物的致病害作用。结果表明:该毒素在不同浓度下对小麦有2种截然不同的作用结果。高浓度毒素能在叶鞘上造成类似于病斑的症状;抑制幼根生长,最高抑制率可达97.9%... 详细信息

利用小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)毒素,研究植物病原菌毒素对寄主植物的致病害作用。结果表明:该毒素在不同浓度下对小麦有2种截然不同的作用结果。高浓度毒素能在叶鞘上造成类似于病斑的症状;抑制幼根生长,最高抑制率可达97.9%;损伤细胞膜,最大损伤率达54.4%;干扰植株的水分平衡,使其失水甚至萎蔫;减少植株叶绿素含量,比对照减少77.5%～93.6%;对多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和超氧化歧化酶(SOD)等防御酶活性均有明显的抑制作用,苗期叶片中酶活性比对照分别下降33.33%、45.61%、33.16%和27.37%。而低浓度毒素处理种子后,幼根长度比对照明显增加;处理植株时对PPO、POD、PAL和SOD活性有明显促进作用,叶片酶活性比对照分别增加19.04%、18.94%、15.53%和50.17%;有促进可溶性蛋白积累的作用,处理株比对照株含量增加37.69%。因此,小麦纹枯病菌毒素能干扰寄主生长代谢,是重要的致病因子,同时在低浓度时又有诱导寄主进行抗病性代谢的作用。

关键词：小麦纹枯病菌毒素致病作用诱导抗性

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小麦纹枯病菌对氟酰胺的敏感性

麦类作物学报 2013年第6期33卷 1284-1288页

作者：宋立妹张军民句容市希望生物科技有限公司江苏句容212400

为了解新型杀菌剂氟酰胺对小麦纹枯病的防治效果，采用茵丝生长速率法测定江苏省不同地区的90个小麦纹枯病菌（***）菌株对氟酰胺的敏感性，并测定对氟酰胺敏感性不同的10个菌株对戊唑醇、咯茵腈、氟环唑、烯唑醇环唑、甲基立枯磷、氟... 详细信息

为了解新型杀菌剂氟酰胺对小麦纹枯病的防治效果，采用茵丝生长速率法测定江苏省不同地区的90个小麦纹枯病菌（***）菌株对氟酰胺的敏感性，并测定对氟酰胺敏感性不同的10个菌株对戊唑醇、咯茵腈、氟环唑、烯唑醇环唑、甲基立枯磷、氟酰胺、井冈霉素A、多茵灵、氯啶菌酯和申嗪霉素等不同杀菌剂的敏感性。结果表明，小麦纹枯病菌菌株间对氟酰胺的敏感性差异较小，EC50值在0．2113～0．6690μg·mL^-1之间，平均为O．4063±0．1005μg·mL^-1；氟酰胺对***的抑菌效果优于多菌灵、氯啶菌酯和申嗪霉素，与井冈霉素相近；其抑菌效果明显低于三唑类杀菌剂和咯菌腈、甲基立枯磷。EC50值相关性分析结果表明，小麦纹枯病菌对氟酰胺与上述杀菌剂之间不存在交互抗性。

关键词：小麦纹枯病菌氟酰胺敏感性交互抗性

小麦纹枯病菌多聚半乳糖醛酸酶及其理化性质研究

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麦类作物学报 2012年第3期32卷 569-573页

作者：纪兆林郭菊张丽娜陈夕军童蕴慧徐敬友扬州大学园艺与植物保护学院江苏扬州225009

为了解小麦纹枯病菌产生的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)的理化性质,先用丙酮法提取PG粗蛋白,再经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱、Phenyl-Sepharose 6Fast Flow疏水柱和Sephadex G-75凝胶柱纯化,得到一种具有较高活性... 详细信息

为了解小麦纹枯病菌产生的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)的理化性质,先用丙酮法提取PG粗蛋白,再经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱、Phenyl-Sepharose 6Fast Flow疏水柱和Sephadex G-75凝胶柱纯化,得到一种具有较高活性的PG纯蛋白。该蛋白分子量为41.78kD;等电点为5.34;含有糖基,含糖量为9.10%;含有α氨基酸,但不含芳香族氨基酸;不含脂基。这种蛋白在pH 4～12范围内均具有活性,pH为6时活性最大;对热不稳定,100℃下水浴20min,活性完全丧失;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感,酶处理后其活性只有对照的15.7%和10.2%;对紫外线和氯仿亦敏感,处理后活性仅为对照的18.6%和14.9%。

关键词：小麦纹枯病菌多聚半乳糖醛酸酶理化性质

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小麦纹枯病菌核糖体基因内转录区序列比较

植物病理学报 2005年第1期35卷 24-29页

作者：陈怀谷方正陈厚德林玲王裕中江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014 扬州大学农学院植物保护系江苏扬州225009

对 7个从江苏省小麦纹枯病样本分离到的丝核菌菌株,进行形态学鉴定、融合群分类和致病性测定,提取病菌的DNA,采用通用引物ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和ITS4 (TCCTCCGCTTATTGATATGC),扩增病菌的rDNA内转录区(ITS),并对扩增产物进行了测... 详细信息

对 7个从江苏省小麦纹枯病样本分离到的丝核菌菌株,进行形态学鉴定、融合群分类和致病性测定,提取病菌的DNA,采用通用引物ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和ITS4 (TCCTCCGCTTATTGATATGC),扩增病菌的rDNA内转录区(ITS),并对扩增产物进行了测序。用这些序列在NCBI中进行BLAST分析,得到与这些菌株亲缘关系最近的菌株序列,并明确了这些菌株的分类地位。对以上的菌株序列进行Alignment分析,结果表明,病菌的 5. 8SrDNA序列高度保守,而ITS区的可变性则相对较高,在双核和多核丝核菌、双核丝核菌CAG1融合群和非CAG1融合群菌株间存在差异,可用于反映菌株间的进化关系和双核丝核菌种下分类。

关键词：小麦纹枯病菌核糖体基因序列比较转录双核丝核菌 rDNA序列形态学鉴定致病性测定 BLAST 融合群通用引物扩增产物 NCBI 亲缘关系分类地位 ITS区种下分类进化关系 TAT 菌株江苏省 GTA GGT CCT GCG TCC TGA 可变性

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小麦纹枯病菌对九种麦田除草剂的敏感性

麦类作物学报 2013年第6期33卷 1289-1293页

作者：侯颖徐建强孟秀利张凯杨改凤河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471023 河南科技大学林学院河南洛阳471003

为了明确麦田除草剂对小麦纹枯病发生的影响,采用菌丝生长速率法测定了小麦纹枯病菌对九种麦田除草剂的敏感性。结果表明,酰胺类除草剂对小麦纹枯病菌毒力较强,异丙甲草胺、乙草胺、丁草胺的毒力(EC50)分别为56.0、83.5和142mg·L-1,病... 详细信息

为了明确麦田除草剂对小麦纹枯病发生的影响,采用菌丝生长速率法测定了小麦纹枯病菌对九种麦田除草剂的敏感性。结果表明,酰胺类除草剂对小麦纹枯病菌毒力较强,异丙甲草胺、乙草胺、丁草胺的毒力(EC50)分别为56.0、83.5和142mg·L-1,病菌在含药培养基上易出现轮纹状菌落;二硝基苯胺类和芳氧苯氧基丙酸酯类除草剂对纹枯病菌毒力较弱,在1 000mg·L-1时抑制率尚达不到50%,前者易使菌落发生扇形突变,且菌丝稀疏,后者对菌落形态无显著影响。

关键词：小麦纹枯病菌除草剂非靶标生物毒力测定

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小麦纹枯病菌的分子检测

植物保护学报 2005年第3期32卷 261-265页

作者：陈怀谷方正陈厚德林玲王裕中江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014 扬州大学农学院植物保护系扬州225009

小麦茎基部可寄居多种真菌,并可导致发褐、坏死等症状,与小麦纹枯病相混淆。为准确诊断小麦纹枯病,根据江苏省小麦茎基部常见寄居菌禾谷丝核菌 Rhizoctonia cerealis、立枯丝核菌 Rhi-zoctonia solani、长蠕孢菌 Helminthosporium spp.... 详细信息

小麦茎基部可寄居多种真菌,并可导致发褐、坏死等症状,与小麦纹枯病相混淆。为准确诊断小麦纹枯病,根据江苏省小麦茎基部常见寄居菌禾谷丝核菌 Rhizoctonia cerealis、立枯丝核菌 Rhi-zoctonia solani、长蠕孢菌 Helminthosporium spp.、交链孢菌 Alternaria spp.、小麦全蚀病菌 Gaeumanno-myces graminis *** 和禾谷镰刀菌 Fsarium graminearum rDNA 的 ITS 区段序列差别,设计合成了2对特异性扩增引物(DNF77+DNR554,DNF81+DNR564)用于小麦纹枯病菌检测。2对引物均能从小麦纹枯病菌株扩增到特异性的分子片段,说明设计的特异性引物可以用来检测小麦纹枯病菌。采集田间具有小麦纹枯病症状、茎基部变褐及健康麦苗,进行病原菌分离,同时提取这些麦苗茎基部 DNA,利用上述2对引物进行扩增。结果表明,仅从能分离到禾谷丝核菌的麦组织中扩增到约480bp 的特异性条带。说明设计的特异性引物可以对田间小麦纹枯病进行早期、快速分子诊断。

关键词：小麦纹枯病菌分子检测 Rhizoctonia 特异性引物特异性扩增禾谷丝核菌病原菌分离小麦全蚀病菌设计合成 rDNA