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家蚕质型多角体病毒的紫外吸收定量法

中国蚕业 1982年第4期 69-69页

作者：宫岛成寿胡雪芳王裕兴

家蚕质型多角体病毒制剂的定量,通常应用半数感染剂量(ED)的分析方法(WATANABE·1966),然而这仅是一个计算有感染性病毒的定量方法,由于在病毒制剂中存在着一定数量的无感染性的病毒,因此用这种定量方法是不能计算出全部病毒总量的。象... 详细信息

家蚕质型多角体病毒制剂的定量,通常应用半数感染剂量(ED)的分析方法(WATANABE·1966),然而这仅是一个计算有感染性病毒的定量方法,由于在病毒制剂中存在着一定数量的无感染性的病毒,因此用这种定量方法是不能计算出全部病毒总量的。象烟草花叶病病毒(TMV)和水稻矮缩

关键词：家蚕质型多角体病毒吸收值 nm CPV 紫外吸收

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家蚕对马尾松毛虫质型多角体病毒的敏感性

昆虫学报 2003年第4期46卷 409-416页

作者：洪靖君段家龙赵淑玲彭辉银安徽农业大学蚕业丝绸系中国科学院武汉病毒研究所生物防治室武汉430071 中国科学院武汉病毒研究所生物防治室

用虫体克隆技术 ,对马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株 (DpCPV HN)进行了分离纯化 ,鉴定为质型多角体病毒 1型。以家蚕春蕾×镇珠杂种F1 代及自交的F2 代 4或 5日龄幼虫进行毒力测定 ,以纯化的家蚕质型多角体病毒对F1 代幼虫的毒力测定为... 详细信息

用虫体克隆技术 ,对马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株 (DpCPV HN)进行了分离纯化 ,鉴定为质型多角体病毒 1型。以家蚕春蕾×镇珠杂种F1 代及自交的F2 代 4或 5日龄幼虫进行毒力测定 ,以纯化的家蚕质型多角体病毒对F1 代幼虫的毒力测定为对照。结果表明 :家蚕品种春蕾×镇珠对家蚕质型多角体病毒敏感 ,马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株能引起其感染发病 ;马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株感染家蚕品种春蕾×镇珠F1 代幼虫和F2 代幼虫 2 8天后的半致死剂量(LD50 )分别为 885个和 18个CPB (质多角体 ) ,前者为后者的 4 9倍。马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株感染后的家蚕 ,其结茧率、化蛹率、羽化率、全茧量、茧层量和单蛾产卵数均有所下降 ,全茧量、茧层量、茧层率和单蛾产卵数与病毒感染剂量之间无显著关联。

关键词：马尾松毛虫质型多角体病毒家蚕质型多角体病毒家蚕敏感性虫体克隆

荧光定量PCR分析不同家蚕品种对质型多角体病毒(BmCPV)的感染抵抗性

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蚕业科学 2013年第2期39卷 289-294页

作者：吴萍钱荷英徐安英陈涛侯启瑞郭锡杰李龙江苏科技大学蚕业研究所江苏镇江212018 农业部蚕桑产业产品质量监督检验测试中心江苏镇江212018

根据家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的多角体蛋白基因保守序列设计特异性引物,建立家蚕质型多角体病毒的实时荧光定量PCR检测方法,并应用于检测分析该病毒在蚕体内的增殖规律和筛选抵抗性强的家蚕品种资源。运用该方法检测分析BmCPV感染不... 详细信息

根据家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的多角体蛋白基因保守序列设计特异性引物,建立家蚕质型多角体病毒的实时荧光定量PCR检测方法,并应用于检测分析该病毒在蚕体内的增殖规律和筛选抵抗性强的家蚕品种资源。运用该方法检测分析BmCPV感染不同家蚕品种4龄起蚕后的动态增殖变化:大多数品种的幼虫感染BmCPV后24 h,中肠组织中的病毒已开始复制,感染后48～96 h病毒的增殖急速上升,至96 h达到高峰,感染后120 h病毒多角体蛋白基因的表达量显著下降。基于实时荧光定量PCR的检测结果分析显示家蚕品种间对BmCPV的抵抗性差异很大,10个供试品种中,热带多化性品种7005及热带二化性品种P50的抵抗性最强,欧系一化性品种4008和4017的抵抗性最弱。

关键词：家蚕质型多角体病毒感染增殖荧光定量PCR 家蚕品种抵抗能力

从云南蚕区分离BmCPV病毒株的全基因组克隆与系统发育分析

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蚕业科学 2015年第6期41卷 1036-1043页

作者：张永红唐芬芬邵榆岚朱峰白兴荣云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所云南蒙自661100

家蚕质型多角体病毒（BmCPV）是家蚕中肠型脓病的病原物。从云南蚕区的病蚕样品中分离到一株BmCPV病毒分离株,提取纯化该病毒粒子的总RNA并合成cDNA,克隆病毒全基因组序列,研究该病毒分离株的基因组结构与系统进化。克隆得到该病毒10条d... 详细信息

家蚕质型多角体病毒（BmCPV）是家蚕中肠型脓病的病原物。从云南蚕区的病蚕样品中分离到一株BmCPV病毒分离株,提取纯化该病毒粒子的总RNA并合成cDNA,克隆病毒全基因组序列,研究该病毒分离株的基因组结构与系统进化。克隆得到该病毒10条dsRNA序列（S1~S10）并提交至NCBI数据库中。序列分析表明该病毒基因组序列全长24810bp,S1~S10片段序列都具有完整的ORF。BLAST比对发现克隆的该病毒基因组各片段编码区序列与已报道的1型BmCPV片段的相似度达88%以上,氨基酸序列相似度达90%以上;10条dsRNA基因组片段末端均有保守帽子结构5＇-AGUAA……GUUAGCC-3＇。基于S2片段RdRp基因的系统进化分析发现,该病毒与其他3个1型BmCPV分离株BmCPV1-Suzhou、BmCPV1-China、BmCPV1-Ⅰ聚为一支,基于S10片段polh基因的系统进化分析也表明该病毒为1型BmCPV新的分离株系。根据上述研究结果将该病毒定名为BmCPV1-Yunnan。

关键词：家蚕质型多角体病毒分离株基因组片段系统进化 RNA聚合酶基因多角体蛋白基因

基于MultiBac多基因表达系统的BmCPV病毒VLPs组装研究

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基于MultiBac多基因表达系统的BmCPV病毒VLPs组装研究

作者：张康迪华南农业大学

学位级别：硕士

家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori Cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)质型多角体病毒属(Cypovirus)。基于近原子分辨率的冷冻电镜三维重构可知,BmCPV衣壳是对称的正20面体,衣壳具有12个顶点,由60个非... 详细信息

家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori Cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)质型多角体病毒属(Cypovirus)。基于近原子分辨率的冷冻电镜三维重构可知,BmCPV衣壳是对称的正20面体,衣壳具有12个顶点,由60个非对称单元组成,每个非对称单元包括核衣壳蛋白(Capsid Shell Protein,CSP)、大型凸起蛋白(Large Protrusion Protein,LPP)以及塔状凸起蛋白(Turret Protein,TP)。BmCPV无囊膜,单衣壳的特性使之成为国内外冷冻电镜单颗粒三维重构研究的模式材料。本研究以BmCPV的CSP和LPP作为目标蛋白,构建转移载体pU-CSP-HismCherry及pF-LPP-His-eGFP,将转移载体pU-CSP-His-mCherry利用Cre-Loxp位点同源重组到AcMultiBac中,同时将转移载体pF-LPP-His-eGFP通过Tn7转座位点转座至AcMultiBac中,获得Ac-rSw106-inv-CSP-His-mCherry、Ac-rSw106-inv-LPP-eGFP以及Ac-rSw106-inv-CSP-mCherry-LPP-eGFP重组菌液。使用可表达侵染蛋白的AcrSw106-inv-CSP-His-mCherry、Ac-rSw106-inv-LPP-eGFP、Ac-rSw106-inv-CSPmCherry-LPP-eGFP重组菌株侵染Sf9细胞,3 d后分别观察到樱桃红色荧光、增强型绿色荧光及两种荧光的共表达。收集上清获得重组病毒Ac-CSP-His-mCherry、Ac-LPPHis-eGFP和Ac-CSP-His-mCherry-LPP-His-eGFP,Western blot检测到目的蛋白相对分子质量所对应的条带,证明CSP和LPP在Sf9细胞中成功表达。将被重组病毒AcCSP-His-mCherry、Ac-CSP-His-mCherry-LPP-His-eGFP感染的Sf9细胞超声破碎,使用蔗糖密度梯度离心纯化分离上清,获得两种不同的VLPs,CSP-VLPs和CSP-LPPVLPs,透射电子显微镜下可见两种形态良好的VLPs。通过对CPV病毒结构蛋白的理化性质分析及同源建模,为重组蛋白表达纯化提供了理论依据及参考。同时通过生物信息学分析CPV病毒结构蛋白CSP和LPP的密码子偏爱性,发现上述两种结构蛋白适用于Sf9细胞的表达,但是密码子的使用存在一定的差异性,为后续实验提高CSP和LPP的表达量提供了密码子优化方案。通过杆状多基因表达系统表达CSP-VLPs和CSP-LPP-VLPs,为深入解析单衣壳病毒结构提供了良好的理论基础;同时构建好的CSP-LPP-VLPs可以在内部和外部搭载外源分子,可以用于基因治疗投送工具、开发新型生物农药、制备新型的纳米材料、运送RNAi干扰小分子、展示表位多肽等用途,发展前景较好。

关键词：家蚕质型多角体病毒杆状病毒多基因表达系统病毒样颗粒

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BmCPV多角体蛋白对异源蛋白的包埋

蚕业科学 2011年第4期37卷 676-681页

作者：张轶岭孟祥坤朱越雄曹广力薛仁宇贡成良苏州大学基础医学与生物科学学院江苏苏州215123

为了解家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的多角体蛋白对异源蛋白的包埋作用,将BmCPV的多角体蛋白基因克隆至昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,转染家蚕卵巢培养细胞(BmN)后通过吉欧霉素(zeocin)筛选获得稳定表达多角体蛋白的细胞株。倒置荧光显微... 详细信息

为了解家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的多角体蛋白对异源蛋白的包埋作用,将BmCPV的多角体蛋白基因克隆至昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,转染家蚕卵巢培养细胞(BmN)后通过吉欧霉素(zeocin)筛选获得稳定表达多角体蛋白的细胞株。倒置荧光显微镜观察发现,转化BmN细胞有轻度的病理变化,细胞质中有呈绿色荧光的多角体蛋白结晶,但从转化BmN细胞中纯化的多角体无明显的绿色荧光。以修饰型线性化家蚕杆状病毒BmPAK6感染稳定转化BmN细胞,96 h后纯化多角体,回复感染显示多角体裂解液能感染家蚕BmN细胞,表明BmCPV多角体蛋白能包埋BmPAK6。纯化的多角体及多角体裂解液均能用X-gal显色,表明BmPAK6表达的β-半乳糖苷酶也能被BmCPV的多角体蛋白包埋。研究结果可为获得具有多角体的重组杆状病毒以及开发利用质型多角体蛋白包埋异源蛋白的功能提供新的技术途径。

关键词：家蚕质型多角体病毒多角体杆状病毒异源包埋

家蚕感染BmCPV后中肠自噬相关蛋白ATG8的表达变化

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蚕业科学 2014年第3期40卷 475-481页

作者：吴永鹏刘立群朱大鹏杨晓冰张敏娟钱永华焦锋西北农林科技大学蚕桑丝绸研究所陕西杨凌712100

家蚕质型多角体病毒（BmCPV）感染家蚕幼虫中肠上皮细胞而引起中肠型脓病,对病毒致病机理的研究有助于制定科学的预防策略。细胞自噬作为机体的一种免疫机制在抵抗微生物的感染中发挥作用。利用免疫组织化学法,检测BmCPV感染家蚕4龄幼... 详细信息

家蚕质型多角体病毒（BmCPV）感染家蚕幼虫中肠上皮细胞而引起中肠型脓病,对病毒致病机理的研究有助于制定科学的预防策略。细胞自噬作为机体的一种免疫机制在抵抗微生物的感染中发挥作用。利用免疫组织化学法,检测BmCPV感染家蚕4龄幼虫中肠组织中的细胞自噬相关蛋白ATG8（autophagy-related gene 8）的表达变化：家蚕幼虫在感染BmCPV1-8 h内,中肠ATG8蛋白的表达显著高于正常水平;感染8-35 h,中肠ATP8蛋白的表达下降至正常水平;感染51 h,该蛋白质在中肠的表达又显著升高,至99 h达到高峰,且感染后62 h可以观察到中肠上皮层柱状细胞内有病毒多角体的产生。研究结果显示BmCPV感染家蚕幼虫的过程与中肠细胞自噬存在一定的关系。

关键词：家蚕质型多角体病毒家蚕中肠组织细胞自噬 ATG8蛋白免疫组织化学法

家蚕蜕皮激素22激酶2(BmEcK2)的序列及基因表达特征分析

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蚕业科学 2016年第6期42卷 997-1003页

作者：尚梦珂高坤郭锡杰耿涛姜晓旭郭建勇侯成香覃光星江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212018 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018

前期研究发现在感染家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrovirus,Bm CPV)的家蚕幼虫中肠中,有一个下调表达的差异蛋白可能参与了家蚕对Bm CPV感染的抵抗过程。利用Blastp进行同源性比对的结果显示,该蛋白质与尺蠖(Opero... 详细信息

前期研究发现在感染家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrovirus,Bm CPV)的家蚕幼虫中肠中,有一个下调表达的差异蛋白可能参与了家蚕对Bm CPV感染的抵抗过程。利用Blastp进行同源性比对的结果显示,该蛋白质与尺蠖(Operophtera brumata)的未知蛋白质OBRU01_04785和蜕皮激素22激酶(Ecdysteroid 22-kinase)的序列相似度分别为51%、49%,进一步通过多序列比对和系统进化分析发现该蛋白质与Ecdysteroid 22-kinase蛋白的亲缘关系最近,属于蜕皮激素激酶超家族;该蛋白质与家蚕中已知的蜕皮激素22激酶1(Bm Ec K1)的序列相似度为24.4%,因此将其命名为Bm Ec K2。实时荧光定量PCR检测Bm Ec K2基因m RNA在家蚕5龄幼虫中肠组织中的转录水平最高,其次是马氏管、丝腺和卵巢,而在血淋巴、头部、精巢、脂肪体中几乎检测不到转录;家蚕5龄起蚕感染Bm CPV后24、48、72 h,中肠中Bm Ec K2基因m RNA的转录水平下调,分别是对照组家蚕中肠的0.32、0.45和0.21倍。研究结果初步提示,Bm CPV感染导致家蚕中肠中的Bm Ec K2下调表达,进而可能影响到家蚕体内激素调节水平的变化。

关键词：家蚕病毒感染家蚕质型多角体病毒蜕皮激素22激酶基因转录实时荧光定量PCR

氯溴异氰尿酸及其复配药液对家蚕主要病原体的消毒效果试验

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蚕业科学 2013年第1期39卷 76-80页

作者：李云芝刘文光石瑞常顾寅钰胡自江衣葵花朱红山东省蚕业研究所山东烟台264002

氯溴异氰尿酸是一种高效、广谱的内吸性杀菌剂。将氯溴异氰尿酸与磷酸三钠或碳酸钠复配成不同浓度药液,对家蚕主要病原体进行消毒试验。0.125 g/L氯溴异氰尿酸药液对白僵菌、黄曲霉菌可达到100%的消毒效果,但对家蚕核型多角体病毒(BmNPV... 详细信息

氯溴异氰尿酸是一种高效、广谱的内吸性杀菌剂。将氯溴异氰尿酸与磷酸三钠或碳酸钠复配成不同浓度药液,对家蚕主要病原体进行消毒试验。0.125 g/L氯溴异氰尿酸药液对白僵菌、黄曲霉菌可达到100%的消毒效果,但对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)、家蚕质型多角体病毒(BmCPV)无消毒效果;在0.125 g/L氯溴异氰尿酸药液中添加10.0 g/L磷酸三钠或碳酸钠后,对BmNPV、BmCPV可达到100%的消毒效果。将磷酸三钠或碳酸钠添加到1.0 g/L氯溴异氰尿酸溶液中,对BmNPV、BmCPV具有100%消毒效果的最低添加浓度分别为1.0、0.5 g/L和2.0、1.0 g/L。氯溴异氰尿酸药液稳定,添加磷酸三钠或碳酸钠后的复配药液稳定性差,但添加磷酸三钠的稳定性优于添加碳酸钠的稳定性。综上初步认为,氯溴异氰尿酸与磷酸三钠混合的消毒药液可以应用于家蚕真菌病、病毒病主要病原的消毒,且药液宜现配现用。

关键词：杀菌剂氯溴异氰尿酸磷酸三钠碳酸钠家蚕核型多角体病毒家蚕质型多角体病毒白僵菌曲霉菌